專(zhuān)利名稱(chēng)：測(cè)定脂肪酶的改進(jìn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于測(cè)定生物體液中脂肪酶的方法和試劑，以及一種低分子N-取代的羧酸酰胺衍生物在消除酶測(cè)定中的非特異性反應(yīng)中的應(yīng)用。特別是，現(xiàn)已證明，當(dāng)N-(1，2-二羧基乙基)-N-烷基-磺基琥珀酰胺或N-(1，2-二羧基乙基)-N-烷芳基-磺基琥珀酰胺衍生物以大約0．001％-2．0％(w／v)的濃度存在時(shí)是有利的。
長(zhǎng)期以來(lái)，測(cè)定脂肪酶，特別是人胰腺脂肪酶(E．C．3．1．1．3)，對(duì)胰腺疾病的診斷和病程檢定具有無(wú)可置疑的重要性(W．Steinberg etal，Annals of Internal Medicine 102(1985)，576；M．Panteghini et al，Clin．Biochem．24(1991)，497，N．W．Tietz and D．F．Shuey，Clin．Chem．39／5(1993)，746)。例如，在急性胰腺炎時(shí)，血清中脂肪酶有時(shí)在幾小時(shí)內(nèi)發(fā)生非常巨大的增加。
在體內(nèi)，脂肪酶的功能主要是優(yōu)先斷開(kāi)三酸甘油酯的α酯鍵，此三酸甘油酯含有長(zhǎng)鏈脂肪酸酯，被斷開(kāi)成為二酸甘油酯部分和游離脂肪酸。然后再轉(zhuǎn)化成單酸甘油酯，但此過(guò)程相當(dāng)緩慢。
通常，酶催化反應(yīng)在水相中進(jìn)行，但是，由于其生理學(xué)的重要性，脂肪酶僅在油／水界面發(fā)揮作用。在這方面，脂肪酶顯著不同于酯酶。而且，脂肪酶只能附著在被未變性膽汁酸乳化的界面上，并在共脂肪酶的幫助下斷開(kāi)三酸甘油酯。由于這個(gè)原因，其反應(yīng)動(dòng)力學(xué)除了受化學(xué)參數(shù)影響外，還主要是受提供給酶的界面性質(zhì)的影響。
目前，已知有多種方法可用于測(cè)定脂肪酶。這些方法主要是基于滴定分析，濁定分析和免疫學(xué)試驗(yàn)原理。在滴定法測(cè)定中，首先要加入過(guò)量的脂肪酶底物，例如橄欖油，然后通過(guò)用指示劑，以堿進(jìn)行滴定，或者通過(guò)萃取相應(yīng)的銅鹽，檢測(cè)由脂肪酶從它釋放出的脂肪酸量。滴定法目前在常規(guī)臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中僅偶爾采用，因?yàn)橛袝r(shí)很難掌握，并且需要很長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間和大量的樣品(W．Junge in Methods ofEnzymatic Analysis，Weinheim VCH．U．Bergmeyer ed．vol．4(1984)，15)。
借助于光度計(jì)檢測(cè)三酸甘油酯／水乳濁液濁度澄清的濁度法脂肪酶測(cè)定，是目前在常規(guī)臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中普遍采用的方法(W．Rick andM．Hockeburn，J．Clin．Chem．Biochem．20(1982)，735；J．Ziegenhorn et al，“Medica Sonderheft”11(1980)。濁度測(cè)定法的問(wèn)題是，個(gè)別血清樣品并不顯示光度計(jì)檢測(cè)窗內(nèi)檢測(cè)信號(hào)線性地減弱，而是甚至顯示出濁度增加。這種測(cè)定方法的另一個(gè)困難是，難以重復(fù)地產(chǎn)生總是可靠地具有相同大小微粒的乳濁液。
免疫學(xué)方法的一個(gè)具體的缺點(diǎn)是，在此方法中測(cè)定的是質(zhì)量，而不是酶活性(W．UhL et al，Internat，J．Pancreatology 12／3(1992)，253，G．E．Hoffann et al，_rztl．Lab．30(1984)，193，H．Herden and K．Walter，Klin．Lab，38(1992)，89)。
從而發(fā)展了基于顯色的測(cè)定法，是目前主要采用的方法。例如，用1，2-二酸甘油酯作底物，它被脂肪酶降解成2-單酸甘油酯，并隨后被對(duì)試樣加入的2-單酸甘油酯脂肪酶斷開(kāi)成甘油。按此方式形成的游離甘油，借助于磷酸甘油氧化酶，降解形成二羥基丙酮和過(guò)氧化氫(H2O2)。可借助適當(dāng)?shù)娘@色指示系統(tǒng)，測(cè)定所形成的H2O2(P．Fossatiet al．Clin．Chem．38／2(1992)，211)。
現(xiàn)在還可能直接轉(zhuǎn)化生色底物用于脂肪酶測(cè)定(EP 0207252)。在此方法中，由于人胰脂肪酶的活性，從該底物直接釋放出可光度測(cè)定的染料，從而避免了為產(chǎn)生染料的復(fù)雜酶級(jí)聯(lián)過(guò)程。
而且，長(zhǎng)時(shí)間以來(lái)已知道，所用生色底物的酯鍵，由于非特異性水解可能產(chǎn)生過(guò)高的信號(hào)。例如，生色底物乙酸對(duì)一硝基苯酯被白蛋白和r-球蛋白水解就很成問(wèn)題(W．Downey and P．Andrews，Biochem．J．96(1965)21)。這類(lèi)反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生虛假的測(cè)定值，特別在用血清樣品的情況下，可能導(dǎo)致臨床誤診。
因此，本發(fā)明的目的是消除脂肪酶測(cè)定中的非特異性反應(yīng)，從而提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。
通過(guò)加入脂肪酶生色底物和一種低分子N-取代羧酸酰胺衍生物，然后用光度法測(cè)定從底物釋放的染料，借助于這種方法測(cè)定脂肪酶，從而達(dá)到了目的。已證明，具有通式(I)或(Ia)結(jié)構(gòu)的化合物根據(jù)本發(fā)明特別適合于作為這種羧酸酰胺衍生物。
其中R1和R2互相獨(dú)立地代表氫，或者一個(gè)飽和或不飽和的、被取代或未被取代的、被任意羧化的、具有2-24個(gè)碳原子的烴殘基，Z代表一個(gè)飽和或不飽和的、被取代或未被取代的、環(huán)型或直鏈的、具有1-10個(gè)碳原子的烴殘基，X代表一個(gè)帶有正電荷的原子或原子團(tuán)，n是1-3的數(shù)字。
根據(jù)本發(fā)明，通式(I)或(Ia)的羧酸酰胺化合物是優(yōu)選的，其中Z是由1-10個(gè)C原子組成的亞甲基和／或1，2-亞乙基，其任選地被如下吸電子基團(tuán)取代羧基、磺?；?、磷酸酯基、膦酸酯基、硝基、亞硝酸酯基或硝酸酯基，鹵素或烷氧基，R1和R2相互獨(dú)立地代表氫，被任意取代的直鏈或支鏈、飽和或不飽和的烷基、芳基、烷芳基或亞烷基，其由3-24個(gè)碳原子組成，其中由2-24個(gè)碳原子組成的羧烷基或二羧烷基殘基是特別優(yōu)選的。
已證明X代表一個(gè)帶正電荷的原子或原子團(tuán)，n代表數(shù)字1或2是適合的。
本發(fā)明特別考慮的那些化合物中，殘基Z攜有羧基和／或磺?；?，但是也包括其中R1或R2殘基之一代表如下低級(jí)烷基的化合物甲基，乙基，丙基，丁基，戊基，乙烯基或丙烯基，或者C10-C18烷基。可按照已知的方法，任選地實(shí)現(xiàn)適當(dāng)?shù)耐榛騺喭榛〈?。而且已證明如下情況是有利的，例如如果R1代表一個(gè)基于丙二酸，戊二酸，己二酸，庚二酸，壬二酸和癸二酸，特別是基于琥珀酸的二羧酸殘基?？捎糜诒景l(fā)明的化合物優(yōu)選地具有大約200-1000道爾頓的分子量，但是，已證明，直至3000道爾頓的化合物也是適合的。已證明十分有利的是具有至少二個(gè)酸式基團(tuán)的化合物或鹽，例如基于帶有低級(jí)烷基(1-6個(gè)C原子)和／或帶有高級(jí)烷基(12-18個(gè)C原子)的N-(1，2-二羧基-乙基)-N-烷基-磺基琥珀酰胺的，或者基于N-(1，2-二羧基乙基)-N-烷芳基-磺基琥珀酰胺或由它得到的衍生物和相應(yīng)混合物的四鈉鹽。
原則上，作為底物被脂肪酶識(shí)別和轉(zhuǎn)化的所有化合物，都用于在本發(fā)明的化合物，如通式(I)或(Ia)的化合物存在下測(cè)定脂肪酶。已證明有一種測(cè)定脂肪酶的方法特別優(yōu)越，其中是將EP 0207252的化合物用作脂肪酶底物，例如，1，2-O-辛基-外消旋-甘油基-3-壬二酸，1，2-O-二癸基-外消旋-甘油基-3-庚二酸或1，2-O-二月桂基-外消旋-甘油基-3-戊二酸試鹵靈酯，或者1，2-O-二月桂基-外消旋-甘油基-3-戊二酸-(4′-或6′-甲基試鹵靈)酯。在這方面已令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的這些物質(zhì)能夠防止在含有相應(yīng)生色底物的乳濁液中發(fā)生非特異性水解，而又不會(huì)抑制脂肪酸的活性。
將本發(fā)明通式(I)或(Ia)(其R1，R2，Z，X和n具有前述含義)的化合物，或者幾種化合物的混合物，加到脂肪酶測(cè)定反應(yīng)液中，其濃度(最后濃度)大約為0．001-2．0％(w／v)，優(yōu)選地為大約0．01-1．0％(w／v)。
脂肪酶測(cè)定的更進(jìn)一步的條件和添加劑是本領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)人員熟知的，例如去垢劑(如牛黃脫氧膽酸鹽，脫氧膽酸鈉，polydocanol)，具有殺菌或殺真菌作用的物質(zhì)(疊氮鈉，甲基-異-噻唑酮等)，穩(wěn)定劑(如DMSO)，輔助因子，乳化劑(如丙醇)，激活劑，或者避免不需要的副反應(yīng)的措施。特別是已證明，在DE 2904305或EP 0207252中所述的添加劑和技術(shù)條件，對(duì)此情況是適合的。脂肪酶可在來(lái)源于人和動(dòng)物的(例如豬胰腺脂肪酶)樣品中測(cè)定，例如在血液，血清或組織中。
本發(fā)明通式(I)或(Ia)的N-取代羧酸酰胺化合物或其鹽，可通過(guò)本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員熟知的方法來(lái)制備。此外，本發(fā)明的化合物，例如N-(1，2-二羧基乙基)-N-烷基磺基琥珀酰胺四鈉(REWOPOLB 2003)可從已知的公司如Witco Surfactants GmbH Company，Steinau．購(gòu)得。
本發(fā)明的另一個(gè)主題是測(cè)定脂肪酶的試劑或試劑盒，主要由如下幾種成分組成(a)一種脂肪酶的生色底物，(b)一種適當(dāng)?shù)木彌_劑物質(zhì)，以及(c)包含在任何所需試劑部分中的成分-一種低分子N-取代羧酸酰胺衍生物，即例如一種通式(I)或(Ia)的化合物。任何能夠在本發(fā)明的試劑中將其pH值調(diào)節(jié)在6．0-10．5的已知緩沖劑，都適合作為此緩沖劑物質(zhì)。優(yōu)選的pH值范圍是7．0-9．5。適當(dāng)?shù)木彌_劑實(shí)例有二乙醇胺緩沖劑，三乙醇胺緩沖劑，Tris或酒石酸鹽緩沖劑，或者所謂的Good′s緩沖劑，如Hepes緩沖劑，N，N-二(羥乙基)甘氨酸緩沖劑，Taps緩沖劑和CHES緩沖劑(2-(環(huán)己氨基)-乙基磺酸緩沖劑)。特別優(yōu)選的是N，N-二(羥乙基)甘氨酸緩沖劑。在此情況下，該緩沖劑的濃度通常在5-200mM，優(yōu)選地在30-100mM，而特別優(yōu)選的是大約50mM。
已證明，當(dāng)這種試劑由二部分試劑成分組成時(shí)是有利的，其中除了本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的其它添加劑之外，在第一部分中還存在本發(fā)明的羧酸酰胺衍生物，而脂肪酶生色底物包含在第二部分試劑中。在此情況下重要的是，在測(cè)定之前，本發(fā)明的羧酸酰胺化合物保存在弱堿緩沖的基質(zhì)中，脂肪酶生色底物保存在酸性pH值下。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的試劑是由二部分試劑組成，其中第一部分具有弱堿緩沖的pH值(pH7．5-9．0，優(yōu)選地約pH8．0)，并含有本發(fā)明通式(I)或(Ia)的一種或幾種羧酸酰胺化合物，以及另一些鹽，防腐劑和去垢劑。第二部分試劑含有一種基本上被緩沖在2．0-5．0pH值范圍內(nèi)的，優(yōu)選地約pH4的物質(zhì)，一種適當(dāng)?shù)闹久傅孜铮约皟?yōu)選地含有另一些輔助劑物質(zhì)。對(duì)于此第二部分試劑，已證明在借助了噴注技術(shù)的壓力下加入乳化劑例如膽酸鹽化合物和／或Thesits，是特別有利的。為此可將優(yōu)選的油相，即含有全部成分的試劑R2，通過(guò)一根非常細(xì)的導(dǎo)管?chē)娮⑦M(jìn)入被首先加入的水相中。結(jié)果，通過(guò)所述的方法，得到了一種具有改進(jìn)穩(wěn)定性的清亮，無(wú)混濁的乳液／懸液。并且，此試劑不會(huì)由于例如存在非特異性酶(非脂肪酶的酯酶)而發(fā)生不需要的副反應(yīng)。這樣一種以一致的微粒大小為特征的脂肪酶底物試劑，可在大約2-8℃貯存12-18個(gè)月而不變質(zhì)。這樣又確保使完整的試劑有適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定性。微粒最大的尺寸分布范圍優(yōu)選的是大約100nm，相當(dāng)于小于300NTU(比濁測(cè)定濁度單位)的濁度。


圖1IgG遞增濃度0-3g／dl，R1(試劑1)未加入本發(fā)明的化合物，樣品5μl，-NaCl 空白，---IgG 0，……IgG 0．5g／dl，……IgG 1．0g／dl，……IgG 1．5g／dl，-IgG 2．0g／dl，---IgG 2．5g／dl，……IgG 3．0g／dl。圖2IgG遞增濃度0-3g／dl，R1含有0．27％(w／v)N-(1，2-二羧基乙基)-N-烷基-磺基琥珀酰胺四鈉，樣品10μl，其它細(xì)節(jié)同圖1中的說(shuō)明。圖3脂肪酶，濁度的比色測(cè)定，R1／R2未加入本發(fā)明的化合物，校準(zhǔn)器Cfas(=校準(zhǔn)自動(dòng)操作系統(tǒng))。
數(shù)值對(duì)數(shù)量25-BaPa y=57．8108+1．0315*x(r=0．9828)……y=x的等同直線，x 人血清圖4脂肪酶濁度的比色測(cè)定，R1未加入，R2加入了如圖2中的本發(fā)明化合物，其它細(xì)節(jié)同對(duì)圖3的說(shuō)明，數(shù)值對(duì)數(shù)量25-BaPa y=12．6916+1．3995*x(r=0．9944)……小時(shí)Hk y=9．4818=1．4178*x---y=x的等同直線，x 人血清將通過(guò)下面的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述實(shí)施例1以各種濃度的IgG作樣品脂肪酶比色測(cè)定的試劑組成試劑1(R1)4．55mmol／l ?；敲撗跄懰猁}1．77mmol／l 脫氧膽酸鈉50．00mmol／l N，N-二(羥乙基)甘氨酸緩沖液0．98mg／l 共脂肪酶5．00mmol／l 氯化鈣防腐劑試劑2(R2)8．1mmol／l ?；敲撗跄懰猁}0．24mmol／l 生色底物(1，2-O-二月桂基-外消旋-甘油基-3-戊二酸-(6′-甲基試鹵靈)酯)1．60mmol／l 酒石酸鹽緩沖液0．10mmol／l 氯化鈣防腐劑／表面活性劑樣品含有不同濃度IgG(0-3g／l)的NaCl。在BM／Hitachi 717自動(dòng)分析儀上按照如下操作程序進(jìn)行比色測(cè)定
溫度37℃

測(cè)算通過(guò)從校準(zhǔn)曲線上讀取數(shù)值進(jìn)行測(cè)算，此曲線也是在上述儀器條件下，借助了來(lái)自Boehringer Mennheim Co．的O標(biāo)準(zhǔn)和脂肪酶標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)(Cfas)測(cè)定的。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)在乳劑中不含有本發(fā)明化合物的情況下，生色底物發(fā)生水解顯然取決于加入的IgG濃度(參見(jiàn)圖1)。實(shí)施例2本發(fā)明不同濃度的添加劑(干擾消除劑)
脂肪酶比色測(cè)定的試劑組成相當(dāng)于實(shí)施例1中所述的試劑R1和R2，不同的是R1還含有0．27％具有C12-C18烷基的N-(1，2-二羧基乙基)-N-烷基-磺基琥珀酰胺四鈉混合物。
樣品含有不同濃度IgG(0-3g／l)的NaCl。
根據(jù)實(shí)施例1中所述的方法和詳細(xì)說(shuō)明，在BM／Hitachi 717自動(dòng)分析儀上進(jìn)行比色測(cè)定和測(cè)算。
結(jié)果在預(yù)定的濃度下，消除了非特異性的非酶水解作用(參見(jiàn)圖2)。實(shí)施例3完整試劑的配制試劑1同實(shí)施例1中所述。
試劑2將0．6g脂肪酶生色底物(例如1，2-O-二月桂基-外消旋-甘油基-3-戊二酸-(6′-甲基試鹵靈)酯)溶解于9ml適當(dāng)?shù)拇?，如乙醇中。?duì)此溶液加入1g乳化劑，如Brij 35或Triton X-114。將所形成的油相吸取進(jìn)注射針管中，然后高壓推擠，使之通過(guò)細(xì)導(dǎo)管(內(nèi)徑0．15-1．0mm)注入水溶液中，同時(shí)進(jìn)行攪拌。此水溶液含有例如，0．15g酒石酸緩沖劑(pH5．0)，0．009g氯化鈣，以及0．5g?；敲撗跄懰猁}，溶解于100ml水中。此外，該水溶液還可能含有一個(gè)或幾個(gè)防腐劑和另外任何輔助乳化劑成分。實(shí)施例4不加入本發(fā)明的物質(zhì)時(shí)比濁測(cè)定法和比色測(cè)定法的比較脂肪酶比色測(cè)定的試劑組成相當(dāng)于實(shí)施例1中所述的組分。
“脂肪酶比濁測(cè)定法”的試劑組成如下R119．0mmol／l 脫氧膽酸鈉26．0mmol／l Tris緩沖液3．0mg／ml共脂肪酶0．1mmol／l 氯化鈣0．30mmol／l 三油精防腐劑樣品人血清按照如下程序，在BM／Hitachi 717自動(dòng)分析儀上進(jìn)行不同的脂肪酶測(cè)定
比色測(cè)定值溫度37℃

比濁測(cè)定值溫度37℃

以類(lèi)似于實(shí)施例1的方法進(jìn)行測(cè)算。
結(jié)果方法比較表明，比色測(cè)定顯示出與坐標(biāo)軸相交(axisintercept)，這是由于生色底物被血清成分非特異性水解所致(圖3)實(shí)施例5加入本發(fā)明的物質(zhì)時(shí)比濁測(cè)定法和比色測(cè)定法的比較試劑組成和測(cè)定方法如實(shí)施例4中所述。此外，試劑1(R1)中還加入了作為本發(fā)明物質(zhì)的N-(1，2-二羧基乙基)-N-十八烷基-磺基琥珀酰胺四鈉，或者是含有這種物質(zhì)的適當(dāng)混合物，濃度為0．27％(w／v)。
樣品人血清按照實(shí)施例4中所述的方法，在BM／Hitachi 717自動(dòng)分析儀上進(jìn)行不同的脂肪酶測(cè)定。測(cè)算方法也類(lèi)似于實(shí)施例4和1。
結(jié)果由于加入本發(fā)明的物質(zhì)而清除了非特異性反應(yīng)，并因此消除了類(lèi)似于比濁測(cè)定法的與坐標(biāo)軸相交(圖4)。
權(quán)利要求
1．通過(guò)加入脂肪酶生色底物，然后對(duì)從該底物釋放的染料進(jìn)行光度測(cè)定的生物樣品中脂肪酶檢測(cè)法，其中是在存在一種低分子N-取代羧酸酰胺衍生物的情況下進(jìn)行該測(cè)定。
2．權(quán)利要求1的方法，其中是在存在如下通式(I)或(Ia)的化合物時(shí)進(jìn)行測(cè)定
結(jié)構(gòu)式中R1和R2互相獨(dú)立地代表氫，或者一個(gè)飽和或不飽和的、被取代或未被取代的具有2-24個(gè)碳原子的烴殘基，Z代表一個(gè)飽和或不飽和的、被取代或未被取代的、環(huán)型或直鏈的具有1-10個(gè)碳原子的烴殘基，X代表一個(gè)帶有正電荷的原子或原子團(tuán)，n是1-3的數(shù)字。
3．權(quán)利要求2的方法，其中R1或R2代表一個(gè)被任意取代的烷基、芳基、烷芳基或亞烷基，其由3-24個(gè)碳原子組成，Z是具有至多10個(gè)C原子的亞甲基和／或1，2-亞乙基，其任選地被一個(gè)或幾個(gè)如下基團(tuán)取代羧基、磺?；?、磷酸酯基、膦酸酯基、硝基、亞硝酸酯基或硝酸酯基、鹵素或烷氧基。
4．權(quán)利要求2或3之一的方法，其中加入通式(I)或(Ia)的化合物或其鹽，其中Z攜帶有一個(gè)羧基或磺?；?。
5．權(quán)利要求2-4之一的方法，其中R1或R2殘基之一代表甲基，乙基，丙基，丁基，戊基，乙烯基或丙烯基，或者C12-C18烷基。
6．權(quán)利要求2-5之一的方法，其中的鹽是N-(1，2-二羧基乙基)-N-烷基-磺基琥珀酰胺四鈉，N-(1，2-二羧基乙基)-N-烷芳基磺基琥珀酰胺四鈉或由它們產(chǎn)生的衍生物，或者是含有這種化合物的相應(yīng)混合物。
7．權(quán)利要求1-6之一的方法，其中的羧酸酰胺衍生物是以0．001-2．0％(w／v)的濃度存在于樣品液中。
8．上述權(quán)利要求之一的方法，其中該化合物或相應(yīng)的化合物是以0．01-1．0％(w／v)的最終濃度存在。
9．上述權(quán)利要求之一的方法，其中被測(cè)定的是人胰脂肪酶，或來(lái)自動(dòng)物的胰脂肪酶。
10．用于測(cè)定脂肪酶的試劑，含有如下成分(a)一種脂肪酶底物，(b)一種緩沖劑物質(zhì)，和(c)一種低分子N-取代羧酸酰胺衍生物。
11．權(quán)利要求10的試劑，含有如下成分(a)一種脂肪酶生色底物，(b)一種緩沖劑物質(zhì)，(c)一種通式(I)或(Ia)的化合物，
其中R1和R2互相獨(dú)立地代表氫，或者一個(gè)飽和或不飽和的、被取代或未被取代的具有2-24個(gè)碳原子的烴殘基，Z代表一個(gè)飽和或不飽和的、被取代或未被取代的、環(huán)型或直鏈的具有1-10個(gè)碳原子的烴殘基，X代表一個(gè)帶有正電荷的原子或原子團(tuán)，n是1-3的數(shù)字。
12．權(quán)利要求10或11的試劑，其中該試劑的第一部分試劑中含有pH值約7．5-9．0的緩沖劑物質(zhì)(b)，成分(c)，去垢劑和／或防腐劑，而第二部分試劑含有pH值約2．0-5．0的緩沖劑物質(zhì)(b)，成分(a)和乳化劑。
13．權(quán)利要求10、11或12之一的試劑，其中成分(c)是N-(1，2-二羧基乙基)-N-烷基磺基琥珀酰胺四鈉，N-(1，2-二羧基乙基)-N-烷芳基磺基琥珀酰胺四鈉或相應(yīng)的衍生物，或者是含有這種化合物的適當(dāng)?shù)幕旌衔铩?br> 14．一種N-取代羧酸酰胺衍生物或者如下通式(I)或(Ia)化合物在消除生物樣品材料中的脂肪酶測(cè)定的非特異性反應(yīng)中的應(yīng)用，
其中R1和R2互相獨(dú)立地代表氫，或者一個(gè)飽和或不飽和的、被取代或未被取代的具有2-24個(gè)碳原子的烴殘基，Z代表一個(gè)飽和或不飽和的、被取代或未被取代的、環(huán)型或直鏈的具有1-10個(gè)碳原子的烴殘基，X代表一個(gè)帶有正電荷的原子或原子團(tuán)，n是1-3的數(shù)字。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于在生色底物和至少一種N－取代羧酸酰胺衍生物,或者一種如右通式(Ⅰ)或(Ⅰa)的化合物存在下,用于測(cè)定脂肪酶的方法和試劑,其中R
文檔編號(hào)C12Q1/44GK1205034SQ97191263
公開(kāi)日1999年1月13日 申請(qǐng)日期1997年9月16日 優(yōu)先權(quán)日1997年9月16日
發(fā)明者L·謝龍, R·茲倫斯基, U·普林景 申請(qǐng)人:曼海姆泊靈格股份公司