一種生產(chǎn)脂肪酶的新方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
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[0001]本發(fā)明涉及一種采用含石油烴廢水培養(yǎng)細(xì)菌生產(chǎn)脂肪酶的新方法。
【背景技術(shù)】
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[0002]脂肪酶(lipase,triacylglycreol acylhydrolases, EC 3.1.1.3)即三?；视王；饷?，是工業(yè)酶制劑中最重要的酶類之一，能夠在油水界面催化天然底物油脂水解，生成脂肪酸、甘油和甘油單脂或二脂，同時(shí)脂肪酶還能催化酯交換、轉(zhuǎn)脂、脂合成、醇解、酸解、氨解等多種化學(xué)反應(yīng)，且催化效率高，催化條件簡單，因此，它被廣泛應(yīng)用于如洗滌劑、皮革、油脂加工、造紙、日化等工業(yè)。
[0003]在石油生產(chǎn)、加工過程中會(huì)產(chǎn)生大量的含石油烴廢水，物理、化學(xué)和生物等多種方法被用于處理含油廢水，其中活性污泥法或接觸氧化法常用于生物法處理工藝，這些工藝在處理含石油烴廢水時(shí)，消耗大量能源，同時(shí)導(dǎo)致大量的芳香烴物質(zhì)揮發(fā)，造成環(huán)境污染，沒有產(chǎn)生適當(dāng)?shù)慕?jīng)濟(jì)價(jià)值。
[0004]本發(fā)明的基本思想是利用含石油烴廢水作為培養(yǎng)基生產(chǎn)脂肪酶。本發(fā)明首先從油田含油廢水中富集高效嗜油細(xì)菌，經(jīng)過多次分離純化和篩選得到高效嗜油菌株，隨后篩選脂肪酶高產(chǎn)菌株，采用脂肪酶產(chǎn)率高的菌株用于含油廢水生產(chǎn)脂肪酶。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是用采油廢水(100mg/L?500mg/L)生產(chǎn)脂肪酶。
[0006]本發(fā)明的上述目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
[0007]采用無機(jī)鹽培養(yǎng)基從含油土壤中富集微生物，并對其石油烴利用率進(jìn)行評價(jià)，隨后篩選石油烴利用效率和脂肪酶產(chǎn)率較高的菌株，采用含油廢水培養(yǎng)菌株從而生產(chǎn)脂肪酶。
[0008]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0009]本發(fā)明運(yùn)用石油烴含量達(dá)100mg/L的含油廢水培養(yǎng)細(xì)菌生產(chǎn)脂肪酶，產(chǎn)率為25yg/mL。本發(fā)明采用含石油烴廢水培養(yǎng)細(xì)菌生產(chǎn)脂肪酶，既降低了工廠處理含油廢水的工業(yè)成本、改善了人類生存的環(huán)境，又具有“變廢為寶”的創(chuàng)新意義和極大的應(yīng)用價(jià)值。
[0010]
【具體實(shí)施方式】
[0011]下面是結(jié)合【具體實(shí)施方式】對本專利進(jìn)行詳細(xì)的說明。
[0012](I)獲得具利用石油烴產(chǎn)脂肪酶細(xì)菌:將I克含油土壤加入10mL無機(jī)鹽培養(yǎng)基，在37°C條件下培養(yǎng)7天后，轉(zhuǎn)接I次，如此重復(fù)7次后將獲得具有石油烴降解能力的細(xì)菌。隨后對獲得細(xì)菌菌株脂肪酶產(chǎn)率進(jìn)行檢測，篩選脂肪酶產(chǎn)率高的菌株。
[0013](2)利用含石油烴廢水培養(yǎng)細(xì)菌生產(chǎn)脂肪酶:將上述獲得的高效嗜油菌按5%接種量加入石油烴含量為100mg/L的采油廢水，從含石油烴廢水中分離脂肪酶，并檢測其含量和活性。
[0014](3)采用硫酸銨沉淀法和離子交換層析獲得粗酶液，測定發(fā)酵后脂肪酶的產(chǎn)率為 25 μ g/mL，測定其脂脂肪酶的活性為10U/mL。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.權(quán)利要求1運(yùn)用含油廢水培養(yǎng)細(xì)菌生產(chǎn)耐高溫脂肪酶，其產(chǎn)率達(dá)25μ g/mL。
2.權(quán)利要求2權(quán)利要求1所述的含油廢水為石油加工廢水。
3.權(quán)利要求3權(quán)利要求1所述的細(xì)菌為自然界分離獲得可以利用石油烴并且生產(chǎn)脂肪酶的細(xì)菌。
4.權(quán)利要求1權(quán)利要求1所用的細(xì)菌保藏形式為斜面試管、干燥保藏和冷凍保藏三種形式。
5.權(quán)利要求4權(quán)利要求1所用細(xì)菌的投加方式為液體或者干粉形式。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種采用含石油烴廢水生產(chǎn)脂肪酶新方法。采用LB培養(yǎng)基培養(yǎng)具有石油烴降解能力的細(xì)菌，按1％接種量加入含有0.5％原油的無機(jī)鹽培養(yǎng)基中馴化3次(7天/次)，隨后將馴化后的細(xì)菌按5％接種量加入含100mg/L石油烴的廢水中，發(fā)酵24h后廢水中脂肪酶活性10U/mL，脂肪酶含量為25克/噸。
【IPC分類】C12N9-20
【公開號】CN104830818
【申請?zhí)枴緾N201510211575
【發(fā)明人】羅明志, 閆筱, 鄧林紅, 邱國華, 周歡, 張治國, 石曉灝, 劉楊, 王悅
【申請人】常州大學(xué)
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年4月26日