專利名稱：多聚酶鏈反應(yīng)檢測試劑盒Taq酶固相載體單人份檢測管的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測試劑盒及生產(chǎn)技術(shù)，具體地是一種多聚酶鏈反應(yīng)檢測試劑盒Taq酶固相載體單人份檢測管及生產(chǎn)方法。
PCR技術(shù)的發(fā)明使當(dāng)今世界分子生物技術(shù)的發(fā)展日新月異，令世人矚目，在實際應(yīng)用中為使操作更方便、實用，將檢測試劑分裝成單人份檢測管已成發(fā)展趨勢和定局，但現(xiàn)在單人份檢測管仍使用Taq酶液相分裝，這種方法對生產(chǎn)技術(shù)人員要求極高，費時費力，而且檢測管間差異大，由于Taq酶被稀釋成較低濃度，使試劑不易長期保存，而且Taq酶消耗大。
本發(fā)明目的旨在克服現(xiàn)有單人份檢測管生產(chǎn)技術(shù)存在的不足，提供一種使試劑盒質(zhì)量達到與未實行單人份檢測管技術(shù)前的技術(shù)指標，使試劑盒穩(wěn)定性和保存期都得到改善的多聚酶鏈反應(yīng)檢測試劑盒Taq酶固相載體單人份檢測管生產(chǎn)方法。
本發(fā)明的目的是以下述方式實現(xiàn)的一種多聚酶鏈反應(yīng)檢測試劑盒Taq酶固相載體單人份檢測管，由附著Taq酶的固相載體將固相載體與擴增反應(yīng)液分開的隔離相和擴增反應(yīng)液組成。所述的固相載體為對Taq酶無抑制作用；對Taq酶的吸附作用不會影響擴增反應(yīng)；對擴增物無降解、水解作用；顆粒較均勻的固相物質(zhì)，如玻璃珠、瓷珠等；所述的隔離相為對Taq酶無抑制作用；不影響擴增反應(yīng)；對擴增反應(yīng)液的各種成份及產(chǎn)物無降解、水解作用的物質(zhì)，如固態(tài)、半固態(tài)或液態(tài)礦物油、瓊脂糖等。其生產(chǎn)方法是使Taq酶著在固相載體上。
本發(fā)明用顆粒均勻的小玻璃珠等為固相載體，使附著的Taq酶量較一致，因而檢測管間差異小，因為固相載體上附著的為高濃度酶，且加入了隔離相將其與擴增反應(yīng)液分開，使Taq酶在檢測試驗前保持原始的未稀釋狀態(tài)(不易失活)，易長期保存，減少Taq酶的消耗，使試劑盒的質(zhì)量達到與未實行單人份檢測管技術(shù)前的技術(shù)指標，且生產(chǎn)方法簡單易學(xué)。
實施例一1、將直徑1mm的玻璃珠用1％鹽酸浸泡過夜，用清水洗凈、干燥后備用；2、將處理過的玻璃珠按每個珠0.2μTaq酶的比例與5μ/μl Taq酶充分混合；3、每個檢測管(0.2ml EP管)中依次加吸附了Taq酶的玻璃珠1～2粒于管底，加入固體礦物油20μl，凝固后再加擴增反應(yīng)液(含Tris-HCL緩沖液、mg+、dNTP、primer等)20μl。在其上再加20μl液態(tài)礦物油，該單人份檢測管底層為著Taq酶的固相載體，第二層為隔離相，第三層為擴增反應(yīng)液，第四層為液態(tài)隔離層。
實施例二1、將直徑1.5mm的瓷珠用1％鹽酸浸泡16小時，用清水洗凈、干燥備用；2、將備用的瓷珠按每個珠0.2μTaq酶的比例與5μ/μl Taq酶充分混合；3、每個檢測管(0.5ml EP管)中依次加入25μl擴增反應(yīng)液、25μl半固體礦物油和1～2粒吸附了Taq酶的瓷珠，該檢測管底層為擴增反應(yīng)液，第二層為隔離層，第三層為固相載體。
權(quán)利要求
1.一種多聚酶鏈反應(yīng)檢測試劑盒Taq酶固相載體單人份檢測管，其特征在于所述檢測管由吸附著Taq酶的固相載體，將固相載體與擴增反應(yīng)液分開的隔離相和擴增反應(yīng)液組成，所述的固相載體為對Taq酶無抑制作用；對Taq酶的吸附作用不會影響擴增反應(yīng)；對擴增物無降解、水解作用；顆粒較均勻的固相物質(zhì)；所述的隔離相為對Taq酶無抑制作用；不影響擴增反應(yīng)；對擴增反應(yīng)液的各種成份及產(chǎn)物無降解、水解作用的物質(zhì)。
2.生產(chǎn)如權(quán)利要求1所述的Taq酶固相載體單人份檢測管生產(chǎn)方法，其特征在于使Taq酶附著在固相載體上，放入單人份檢測管中，再加入隔離相、擴增反應(yīng)液，或在單人檢測管中先加入擴增反應(yīng)液，再依次加入隔離相和使Taq酶吸附其上的固相載體。
全文摘要
一種多聚酶鏈反應(yīng)檢測試劑盒Taq酶固相載體單人份檢測管及生產(chǎn)方法,是在單人份檢測管中,采用固相載體,使高濃度的Taq酶按一定量附著其上,加入隔離相將其與擴增反應(yīng)液水相分開,使Taq酶在檢測實驗前保持原始未稀釋的狀態(tài),使試劑盒中Taq酶的穩(wěn)定性達到與未實行單人份檢測管技術(shù)前的技術(shù)指標,試劑盒穩(wěn)定性和保存期都得到改善。
文檔編號C12N11/00GK1221797SQ9710935
公開日1999年7月7日 申請日期1997年12月30日 優(yōu)先權(quán)日1997年12月30日
發(fā)明者曾真, 吳旗, 詹群珊 申請人:曾真