本發(fā)明涉及保鮮劑領(lǐng)域，尤其是涉及一種蝦類的生物保鮮劑。

技術(shù)背景

蝦是甲殼亞門十足目游泳亞目動(dòng)物，有近2000個(gè)品種，大都生活在江湖中。都有胡須鉤鼻，背弓呈節(jié)狀，尾部有硬鱗腳多善于跳躍，大小從數(shù)米到幾毫米，平均4～8厘米。中國(guó)海域?qū)拸V、江河湖泊眾多，盛產(chǎn)海蝦和淡水蝦。海蝦是口味鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富、可制多種佳肴的海味，有菜中之"甘草"的美稱，海蝦有南極紅蝦、褐蝦、對(duì)蝦、明蝦、基圍蝦、琵琶蝦、龍蝦等；淡水蝦有青蝦、河蝦、草蝦等；還有半咸水蝦如白蝦等。蝦營(yíng)養(yǎng)豐富，且其肉質(zhì)松軟，易消化，對(duì)身體虛弱以及病后需要調(diào)養(yǎng)的人是極好的食物。蝦中含有豐富的鎂，鎂對(duì)心臟活動(dòng)具有重要的調(diào)節(jié)作用，能很好的保護(hù)心血管系統(tǒng)，它可減少血液中膽固醇含量，防止動(dòng)脈硬化，同時(shí)還能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，有利于預(yù)防高血壓及心肌梗死。蝦的通乳作用較強(qiáng)，并且富含磷、鈣、對(duì)小兒、孕婦尤有補(bǔ)益功效。不管何種蝦，都含有豐富的蛋白質(zhì)，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高，其肉質(zhì)和魚一樣松軟，易消化，而且無(wú)腥味和骨刺，同時(shí)含有豐富的礦物質(zhì)（如鈣、磷、鐵等），海蝦還富含碘質(zhì)，對(duì)人類的健康極有裨益。根據(jù)科學(xué)的分析，蝦可食部分蛋白質(zhì)占16～20%左右。

蝦類由于水分、蛋白質(zhì)含量高，極易感染微生物而腐爛變質(zhì)，難以保藏。目前，蝦類有低溫、氣調(diào)、輻照、添加保鮮劑等保鮮方法，其中保鮮劑又可分為化學(xué)合成保鮮劑和生物保鮮劑。生物保鮮劑是指從動(dòng)植物、微生物中提取的天然的或利用生物工程技術(shù)改造而獲得的對(duì)人體安全的保鮮劑。因化學(xué)保鮮劑具有殘留嚴(yán)重、潛在危害大等缺點(diǎn)，使得無(wú)殘留、可代謝、安全性高等優(yōu)點(diǎn)的生物保鮮劑成為現(xiàn)代食品保鮮的研究熱點(diǎn)。

關(guān)于蝦類的生物保鮮劑技術(shù)有很多方法，現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公眾號(hào)為

cn102389151b的中國(guó)發(fā)明專利，公開了一種用于南美白對(duì)蝦的生物保鮮劑的制備方法，該方法具有簡(jiǎn)單易行、方便控制的優(yōu)點(diǎn)，但是它僅僅對(duì)南美白對(duì)蝦有保鮮效果，并且其保鮮效果為6-7天，非常有限。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種制作簡(jiǎn)易的、保鮮范圍寬廣的蝦類生物保鮮劑及其制備方法。

本發(fā)明針對(duì)

背景技術(shù)：
中提到的問(wèn)題，采取的技術(shù)方案為：蝦類的生物保鮮劑，其組成及其重量份為：茶多酚25-30份、殼聚糖50-60份、ε-聚賴氨酸2.5-3份、乳酸鏈球菌素30-35份、功能性多肽2-3份、無(wú)菌蒸餾水900-1000份，該生物保鮮劑具有超強(qiáng)的抑菌性、抗氧化性，還能降低蝦肉中的亞硝酸鹽含量，不影響蝦的色澤和新鮮度，因此是優(yōu)良的生物保鮮劑。

本發(fā)明方法用到的菌種及其所購(gòu)買企業(yè)為：乳酸鏈球菌，上海夏祥生物科技有限公司。

作為優(yōu)選，蝦類的生物保鮮劑，其制備方法包括：發(fā)酵、粗提純、純化、復(fù)合，具體包括以下步驟：

發(fā)酵：稱取蔗糖10-11g、棉籽粉10-12g、八種必須氨基酸各1-2g、五種維生素各2-3g、磷酸氫二鉀13-15g、磷酸氫二鈉13-15g、七水硫酸鎂5-7g、吐溫-802-3g、蒸餾水900-1000ml，以磷酸調(diào)節(jié)恒定ph為5.8-6.5，112-114℃滅菌25-30分鐘即得發(fā)酵培養(yǎng)基；按培養(yǎng)液的2.5-3%接入乳酸鏈球菌，分別在發(fā)酵開始后1/3與2/3時(shí)間補(bǔ)充蔗糖10-11g，在30-32℃溫度下無(wú)氧培養(yǎng)20-24小時(shí)即得發(fā)酵液，通過(guò)發(fā)酵制備的乳酸鏈球菌素可以阻礙革蘭氏陽(yáng)性菌中主要功能性基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制細(xì)菌的繁殖，有效的延長(zhǎng)蝦類的保存期限；

粗提純：量取體積比為0.8-1.2:0.8-1.2:1的二氯甲烷、乙醇與乳酸鏈球菌發(fā)酵液置于分液漏斗中混合均勻，在3500-3700r/min離心分層，靜止5-8分鐘后取中間層褐色沉淀加入等量無(wú)菌蒸餾水混合均勻后留用，二氯甲烷與乙醇的復(fù)配溶液能有效的提純?nèi)樗徭溓蚓?，所得粗提液為進(jìn)一步純化做準(zhǔn)備；

純化：選用sephadex-g50（1-30kda）葡萄糖凝膠對(duì)粗提液進(jìn)行凝膠層析，先將葡萄糖凝膠用蒸餾水浸泡45-48小時(shí)使其充分溶脹并除去漂浮凝膠顆粒，應(yīng)用已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品乳酸菌肽（3.354kda）和胰島素（5.778kda）的混合物來(lái)獲取洗脫時(shí)間與分子量的關(guān)系，將預(yù)處理后的粗提液上柱，收集分子量為3-5kda的組分，即得乳酸鏈球菌素溶液，將純化的乳酸鏈球菌素溶液在真空度0.1-0.2kpa，溫度為65-70℃條件下進(jìn)行真空濃縮干燥，即得乳酸鏈球菌素固體，通過(guò)純化，乳酸鏈球菌素的含量大大提高，不僅增強(qiáng)了終產(chǎn)物保鮮劑的保鮮效果，還能節(jié)約成本與工效；

復(fù)合：稱取茶多酚25-30份、殼聚糖25-30份、ε-聚賴氨酸2.5-3份、乳酸鏈球菌素30-35份、功能性多肽2-3份、無(wú)菌蒸餾水900-1000份，在30-35℃溫度下均勻攪拌混合10-15分鐘即得微生物保鮮劑，功能性多肽通過(guò)干擾細(xì)胞v膜的正常功能，造成細(xì)胞膜的滲透，養(yǎng)分流失和膜電位下降，使細(xì)胞自溶從而導(dǎo)致致病菌和腐敗菌細(xì)胞的死亡，該功能性多肽的氨基酸序列為：scasrcksrcrarrcrarrcgcrarryvsvfrc。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：1）生物保鮮劑可作用的蝦種類很多，無(wú)論是對(duì)蝦、褐蝦、龍蝦、明蝦、河蝦、草蝦等都有優(yōu)良的保鮮效果；2）保鮮劑主要物質(zhì)乳酸鏈球菌素與功能性多肽進(jìn)入人體后在人體的生理ph條件和α-胰凝乳蛋白酶作用下很快水解成氨基酸，無(wú)毒副作用；3）保鮮效果強(qiáng)勁，可使蝦類的保存期限由2天延長(zhǎng)至50-55天，是一種高效、無(wú)毒、安全、無(wú)副作用的天然蝦類生物保鮮劑。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方案作進(jìn)一步說(shuō)明：

實(shí)施例1：

蝦類的生物保鮮劑，其組成及其重量份為：茶多酚25份、殼聚糖50份、ε-聚賴氨酸2.5份、乳酸鏈球菌素30份、功能性多肽2份、無(wú)菌蒸餾水900份，它的制備包括以下步驟：

1）按培養(yǎng)液的2.5%接種乳酸鏈球菌，分別在發(fā)酵開始后6.5小時(shí)與13小時(shí)各補(bǔ)充蔗糖10g，在30℃溫度下無(wú)氧培養(yǎng)20小時(shí)即得發(fā)酵液，通過(guò)發(fā)酵制備的乳酸鏈球菌素可以阻礙革蘭氏陽(yáng)性菌主要功能性基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制細(xì)菌的繁殖，有效的延長(zhǎng)蝦類的保存期限；2）量取體積為80份的二氯甲烷、80份的乙醇與100份乳酸鏈球菌發(fā)酵液置于分液漏斗中混合均勻，在3500r/min離心分層，靜止5分鐘后取中間層褐色沉淀留用，二氯甲烷與乙醇的復(fù)配溶液能有效的提純?nèi)樗徭溓蚓?，所得粗提液為進(jìn)一步純化做準(zhǔn)備；3）選用葡萄糖凝膠對(duì)粗提液進(jìn)行凝膠層析，先將葡萄糖凝膠用蒸餾水浸泡45小時(shí)使其充分溶脹并除去漂浮凝膠顆粒，應(yīng)用乳酸菌肽和胰島素來(lái)獲取洗脫時(shí)間與分子量的關(guān)系，將預(yù)處理后的粗提液上柱，收集分子量為3-5kda的組分，即得乳酸鏈球菌素溶液，將純化的乳酸鏈球菌素溶液在真空度0.1kpa，溫度為65℃條件下進(jìn)行真空濃縮干燥，即得乳酸鏈球菌素固體，通過(guò)純化，乳酸鏈球菌素的含量大大提高，不僅增強(qiáng)了終產(chǎn)物保鮮劑的保鮮效果，還能節(jié)約成本與工效；4）稱取茶多酚25份、殼聚糖50份、ε-聚賴氨酸2.5份、乳酸鏈球菌素30份、功能性多肽2份、無(wú)菌蒸餾水900份，在30℃溫度下均勻攪拌混合10分鐘即得微生物保鮮劑，功能性多肽通過(guò)干擾細(xì)胞v膜的正常功能，造成細(xì)胞膜的滲透，養(yǎng)分流失和膜電位下降，使細(xì)胞自溶從而導(dǎo)致致病菌和腐敗菌細(xì)胞的死亡。

實(shí)施例2：

蝦類的生物保鮮劑，其組成及其重量份為：茶多酚30份、殼聚糖60份、ε-聚賴氨酸3份、乳酸鏈球菌素35份、功能性多肽3份、無(wú)菌蒸餾水1000份，它的制備包括以下步驟：

1）發(fā)酵：按培養(yǎng)液的3%接入乳酸鏈球菌，分別在發(fā)酵開始后8小時(shí)與16小時(shí)各補(bǔ)充蔗糖11g，在32℃溫度下無(wú)氧培養(yǎng)24小時(shí)即得發(fā)酵液，通過(guò)發(fā)酵制備的乳酸鏈球菌素可以阻礙革蘭氏陽(yáng)性菌主要功能性基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制細(xì)菌的繁殖，有效的延長(zhǎng)蝦類的保存期限；

2）粗提純：量取體積為120份的二氯甲烷、120份的乙醇與100份的乳酸鏈球菌發(fā)酵液置于分液漏斗中混合均勻，在3700r/min離心分層，靜止8分鐘后取中間層褐色沉淀留用，二氯甲烷與乙醇的復(fù)配溶液能有效的提純?nèi)樗徭溓蚓?，所得粗提液為進(jìn)一步純化做準(zhǔn)備；

3）純化：選用葡萄糖凝膠對(duì)粗提液進(jìn)行凝膠層析，先將葡萄糖凝膠用蒸餾水浸泡48小時(shí)使其充分溶脹并除去漂浮凝膠顆粒，應(yīng)用乳酸菌肽和胰島素的混合物來(lái)獲取洗脫時(shí)間與分子量的關(guān)系，將預(yù)處理后的粗提液上柱，收集分子量為3-5kda的組分，即得乳酸鏈球菌素溶液，將純化的乳酸鏈球菌素溶液在真空度0.2kpa，溫度為70℃條件下進(jìn)行真空濃縮干燥，即得乳酸鏈球菌素固體，通過(guò)純化，乳酸鏈球菌素的含量大大提高，不僅增強(qiáng)了終產(chǎn)物保鮮劑的保鮮效果，還能節(jié)約成本與工效；

4）復(fù)合：稱取茶多酚茶多酚30份、殼聚糖60份、ε-聚賴氨酸3份、乳酸鏈球菌素35份、功能性多肽3份、無(wú)菌蒸餾水1000份，在35℃溫度下均勻攪拌混合15分鐘即得微生物保鮮劑，功能性多肽通過(guò)干擾細(xì)胞v膜的正常功能，造成細(xì)胞膜的滲透，養(yǎng)分流失和膜電位下降，使細(xì)胞自溶從而導(dǎo)致致病菌和腐敗菌細(xì)胞的死亡。

實(shí)施例3：

蝦類的生物保鮮劑，其組成及其重量份為：茶多酚25份、殼聚糖50份、ε-聚賴氨酸2.5份、乳酸鏈球菌素35份、功能性多肽3份、無(wú)菌蒸餾水1000份，它的制備包括以下步驟：

1）發(fā)酵：稱取蔗糖10g、棉籽粉10g、八種必須氨基酸各1g、五種維生素各2g、磷酸氫二鉀13g、磷酸氫二鈉15g、七水硫酸鎂6g、吐溫-803g、蒸餾水900ml，以磷酸調(diào)節(jié)恒定ph為6.0，112℃滅菌25分鐘即得發(fā)酵培養(yǎng)基；按培養(yǎng)液的3%接入乳酸鏈球菌，分別在發(fā)酵開始后8小時(shí)與16小時(shí)各補(bǔ)充蔗糖10g，在32℃溫度下無(wú)氧培養(yǎng)24小時(shí)即得發(fā)酵液，通過(guò)發(fā)酵制備的乳酸鏈球菌素可以阻礙革蘭氏陽(yáng)性菌主要功能性基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制細(xì)菌的繁殖，有效的延長(zhǎng)蝦類的保存期限；

2）粗提純：量取體積為100份的二氯甲烷、100份的乙醇與100份的乳酸鏈球菌發(fā)酵液置于分液漏斗中混合均勻，在3500r/min離心分層，靜止5分鐘后取中間層褐色沉淀留用，二氯甲烷與乙醇的復(fù)配溶液能有效的提純?nèi)樗徭溓蚓?，所得粗提液為進(jìn)一步純化做準(zhǔn)備；

3）純化：選用sephadex-g50（1-30kda）葡萄糖凝膠對(duì)粗提液進(jìn)行凝膠層析，先將葡萄糖凝膠用蒸餾水浸泡48小時(shí)使其充分溶脹并除去漂浮凝膠顆粒，應(yīng)用已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品乳酸菌肽（3.354kda）和胰島素（5.778kda）的混合物來(lái)獲取洗脫時(shí)間與分子量的關(guān)系，將預(yù)處理后的粗提液上柱，收集分子量為3-5kda的組分，即得乳酸鏈球菌素溶液，將純化的乳酸鏈球菌素溶液在真空度0.1kpa，溫度為70℃條件下進(jìn)行真空濃縮干燥，即得乳酸鏈球菌素固體，通過(guò)純化，乳酸鏈球菌素的含量大大提高，不僅增強(qiáng)了終產(chǎn)物保鮮劑的保鮮效果，還能節(jié)約成本與工效；

4）復(fù)合：稱取茶多酚25份、殼聚糖50份、ε-聚賴氨酸2.5份、乳酸鏈球菌素35份、功能性多肽3份、無(wú)菌蒸餾水1000份，在35℃溫度下均勻攪拌混合15分鐘即得微生物保鮮劑，功能性多肽通過(guò)干擾細(xì)胞v膜的正常功能，造成細(xì)胞膜的滲透，養(yǎng)分流失和膜電位下降，使細(xì)胞自溶從而導(dǎo)致致病菌和腐敗菌細(xì)胞的死亡。

本發(fā)明的操作步驟中的常規(guī)操作為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，在此不進(jìn)行贅述。

以上所述的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，應(yīng)理解的是以上所述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則范圍內(nèi)所做的任何修改、補(bǔ)充或類似方式替代等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

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<110>浦江縣歐立生物技術(shù)有限公司

<120>蝦類的生物保鮮劑

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