本發(fā)明屬于魷魚中甲醛含量測量
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種消除秘魯魷魚中甲醛的方法。
背景技術(shù)：
：秘魯魷魚是美洲大赤魷的俗稱，屬于真魷科，美洲大赤魷屬。該魷魚體型較大，成長迅速，為大洋性淺海種，分布于太平洋中部的以東海域，范圍廣，秘魯魷魚也是迄今為止發(fā)現(xiàn)的個體最大、資源最豐富的魷魚品種之一。由于其豐富的資源、低廉的價格、且營養(yǎng)價值極高，而成為魷魚絲生產(chǎn)的主要原料，但近年來，由其生產(chǎn)的魷魚制品中甲醛超標問題屢見不鮮，這對很多海產(chǎn)品企業(yè)的魷魚制品加工、銷售產(chǎn)生了很大的負面影響。甲醛又稱蟻醛，微帶酸性，具有強烈的刺激性氣味，是細胞原漿毒物，對人體細胞功能損害較大，可引起肺水腫、肝、腎充血及血管周圍水腫，甚至致癌。世界衛(wèi)生組織已將甲醛確定為致癌、致畸物質(zhì)和公認的變態(tài)反應(yīng)源，我國也已明令禁止在食品中添加甲醛。但在長期監(jiān)測中水產(chǎn)品中非外源性甲醛含量也比較高，尤其是秘魯魷魚。研究表明，魷魚等水產(chǎn)品在貯藏加工中會產(chǎn)生內(nèi)源性甲醛，這主要是酶催化和高溫非酶分解而成。為了保證以魷魚為原料的魷魚制品的質(zhì)量，有效降低魷魚原料中甲醛的含量十分必要。目前，在水產(chǎn)品甲醛控制方法中，大多采用改善生產(chǎn)工藝條件和在生產(chǎn)過程中添加甲醛捕捉劑(如茶多酚、明膠、氨基酸等)等方法，添加甲醛捕捉劑去除甲醛的方法，不僅增加了去除甲醛的成本，并且操作過程復(fù)雜，不適合大型的工業(yè)應(yīng)用。并且，目前直接降低魷魚原料中甲醛含量的方法還鮮有報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對上述問題，本發(fā)明提供一種消除秘魯魷魚中甲醛的方法，所述方法不需要添加甲醛捕捉劑，能夠通過超聲波處理直接消除秘魯魷魚原料中的甲醛，并且能夠控制甲醛消除率高于95％。本發(fā)明直接降低原料中甲醛含量從而降低魷魚產(chǎn)品中甲醛含量的方法，具有十分重要的意義。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：一種消除秘魯魷魚中甲醛的方法，所述方法用于消除秘魯魷魚原料中的甲醛，降低秘魯魷魚的甲醛含量；所述方法包括秘魯魷魚原料預(yù)處理、超聲波處理、第一次清洗、浸泡和第二次清洗步驟，所述方法能夠通過超聲波處理直接消除秘魯魷魚原料中的甲醛，能夠控制甲醛消除率高于95％。進一步地，所述秘魯魷魚原料預(yù)處理的步驟具體為：將秘魯魷魚去皮、去內(nèi)臟，然后將秘魯魷魚原料進行切片，獲得秘魯魷魚片，控制每個所述秘魯魷魚片的厚度為0.5cm，質(zhì)量為10g；最后使用刀具在所述秘魯魷魚片的表面進行切割，使所述秘魯魷魚片的表面布滿深度為0.1-0.3cm切割溝槽，控制彼此相鄰的兩條切割溝槽之間的距離為0.1-0.5cm，獲得預(yù)處理后的秘魯魷魚原料。進一步地，所述超聲波步驟具體為：將預(yù)處理后的秘魯魷魚原料置于容器中，并在容器中加入去離子水，控制去離子水與預(yù)處理后秘魯魷魚原料的比例為100ml:5-10g；超聲條件為：超聲功率100-200w，超聲時間30min，控制超聲溫度低于30℃，超聲過程中，需要每隔10min向超聲波儀器中加入冰塊。進一步地，所述第一次清洗的步驟具體為：將超聲處理后的秘魯魷魚原料用去離子水以清水流的方式?jīng)_洗10-60s；所述第二次清洗的步驟與所述第一次清洗的步驟相同。進一步地，所述浸泡具體為：將第一次清洗后秘魯魷魚原料置于去離子水中浸泡20-40min。進一步地，甲醛消除率的計算具體為：甲醛消除率＝(n0-n)/n0ⅹ100％(1)公式中：n0為進行消除甲醛處理前的魷魚原料樣品中甲醛含量，單位為mg/kg；n為進行消除甲醛處理后的魷魚原料樣品中甲醛含量，單位為mg/kg。進一步地，將消除甲醛處理前魷魚原料樣品以及消除甲醛處理后魷魚原料樣品統(tǒng)稱為待測魷魚樣品，在所述待測魷魚樣品中甲醛含量的測定過程中，用高效液相色譜法校正乙酰丙酮分光光度法，以提高測定甲醛的準確度。本發(fā)明的有益技術(shù)效果：本發(fā)明所提供的甲醛消除方法操作簡單、效果明顯、且不需要魷魚原料中添加任何物質(zhì)、成本低。由于超聲波是人耳聽不見頻率超過20khz，可在氣體、液體、固溶體等介質(zhì)中傳播。在液體中傳播時，可在界面上產(chǎn)生強烈的沖擊和空化現(xiàn)象。其力學(xué)效應(yīng)賦予溶劑對細胞膜更大的滲透力，并強化細胞內(nèi)外的質(zhì)量傳輸。它的另一個作用在于破壞細胞壁使細胞內(nèi)含物更易釋放。超聲波形成的微流效應(yīng)也能促進物質(zhì)的運動。所以超聲波在消除魷魚中的甲醛的同時，還能起到對魷魚更好的清洗和嫩化作用。附圖說明圖1為甲醛乙酰丙酮分光光度法標準曲線。具體實施方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細描述。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實施例僅僅用于解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。相反，本發(fā)明涵蓋任何由權(quán)利要求定義的在本發(fā)明的精髓和范圍上做的替代、修改、等效方法以及方案。進一步，為了使公眾對本發(fā)明有更好的了解，在下文對本發(fā)明的細節(jié)描述中，詳盡描述了一些特定的細節(jié)部分。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說沒有這些細節(jié)部分的描述也可以完全理解本發(fā)明。實施例1本實施例提供一種消除秘魯魷魚中甲醛的方法。1.材料與方法1.1材料秘魯魷魚1.2主要儀器與試劑1.2.1主要儀器：數(shù)控超聲波清洗儀(型號：kqs-200da；昆山市超聲儀器有限公司；功率0-200w；頻率40khz)；雙光束可見紫外分光光度計(型號：tu-1901，北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；電子天平(型號：fa200，上海恒平科學(xué)儀器有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(型號：dk-s22，上海實驗儀器有限公司)離心機(型號)；移液槍；具塞三角瓶；容量瓶等；高效液相色譜法所用儀器：高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)。1.2.2主要試劑10％三氯乙酸溶液：(tca分析純，天津市光復(fù)精細化工研究所)準確稱取10.00g三氯乙酸，溶于適量去離子水中，定容100ml，配成10％的三氯乙酸溶液。乙酰丙酮溶液：(分析純，天津市光復(fù)精細化工研究所)準確稱取乙酸銨25g溶于100ml去離子水中，加冰乙酸3ml和乙酰丙酮0.4ml，混勻，貯存于棕色瓶中。甲醛標準溶液：(100mg/ml，國家環(huán)?？偩?用移液槍吸取5μl甲醛標準溶液，定容100ml，配成5μg/ml甲醛標準溶液。磷酸二氫鉀(分析純)、鹽酸羥胺(分析純)；實驗用水為蒸餾水或去離子水，所用試劑均為分析純。1.3方法與原理一種消除秘魯魷魚中甲醛的方法，所述方法的原理為：由于超聲波是人耳聽不見頻率超過20khz，可在氣體、液體、固溶體等介質(zhì)中傳播。在液體中傳播時，可在界面上產(chǎn)生強烈的沖擊和空化現(xiàn)象。其力學(xué)效應(yīng)賦予溶劑對細胞膜更大的滲透力，并強化細胞內(nèi)外的質(zhì)量傳輸。它的另一個作用在于破壞細胞壁使細胞內(nèi)含物更易釋放。超聲波形成的微流效應(yīng)也能促進物質(zhì)的運動。功率超聲波能夠增大溶劑向原料細胞的滲透量并強化傳質(zhì)，故它可以明顯地加速動植物體內(nèi)有機物成分的提取過程?；诖耍暡梢杂行У南滛~體內(nèi)的甲醛。所述方法用于消除秘魯魷魚原料中的甲醛，降低秘魯魷魚的甲醛含量；所述方法包括秘魯魷魚原料預(yù)處理、超聲波處理、第一次清洗、浸泡和第二次清洗步驟，所述方法能夠通過超聲波處理直接消除秘魯魷魚原料中的甲醛，能夠控制甲醛消除率高于95％。所述秘魯魷魚原料預(yù)處理的步驟具體為：將秘魯魷魚去皮、去內(nèi)臟，然后將秘魯魷魚原料進行切片，獲得秘魯魷魚片，控制每個所述秘魯魷魚片的厚度為0.5cm，質(zhì)量為10g；最后使用刀具在所述秘魯魷魚片的表面進行切割，使所述秘魯魷魚片的表面布滿深度為0.1-0.3cm切割溝槽，控制彼此相鄰的兩條切割溝槽之間的距離為0.1-0.5cm，獲得預(yù)處理后的秘魯魷魚原料。上述魷魚原料預(yù)處理的步驟中，通過在秘魯魷魚片表面切割溝槽，能夠增大秘魯魷魚片的表面積，在后續(xù)超聲波處理過程中，大的表面積能夠提高甲醛的去除率。所述超聲波步驟具體為：將預(yù)處理后的秘魯魷魚原料置于容器中，并在容器中加入去離子水，控制去離子水與預(yù)處理后秘魯魷魚原料的比例為100ml:5-10g；超聲條件為：超聲功率100-200w，超聲時間30min，控制超聲溫度低于30℃，超聲過程中，需要每隔10min向超聲波中補充一定量的冰塊。其中，超聲溫度需要控制在30℃，原因為：防止超聲過程中，溫度升高，影響魷魚的質(zhì)量；通過控制超聲溫度，可以避免超聲過程中魷魚變質(zhì)。以下為對秘魯魷魚片的厚度、質(zhì)量、以及超聲時間三個因素所進行的優(yōu)化實驗：秘魯魷魚片的厚度的優(yōu)化：設(shè)置3組實驗，每組實驗的超聲時間均為30min，樣品質(zhì)量均為10.0g，樣品厚度分別為：0.5cm、1cm、2cm，計算魷魚中甲醛的消除率，結(jié)果如表1所示，在樣品厚度為0.5cm時，魷魚中甲醛的消除率最大，為最佳厚度。表1在不同樣品厚度下樣品魷魚中甲醛的消除率秘魯魷魚片厚度(cm)0.512魷魚中甲醛消除率(％)64.4241.3120.35超聲時間優(yōu)化：設(shè)置3組實驗，每組實驗樣品厚度均為0.5cm，樣品質(zhì)量均為10.0g，超聲時間分別為10.0min、20.0min、30.0min，計算甲醛的消除率，結(jié)果如表2所示，在超聲時間30.0min時，魷魚中甲醛的消除率最大，因此，超聲時間30.0min為最佳超聲時間。表2不同超聲時間下樣品魷魚中甲醛的消除率超聲時間(min)10.020.030.0魷魚中甲醛消除率(％)66.190.2296.35樣品質(zhì)量的優(yōu)化：設(shè)置3組實驗，每組實驗樣品厚度均為0.5cm，超聲時間30.0min，樣品質(zhì)量分別為10.0g、20.0g、30.0g；計算魷魚中甲醛的消除率，結(jié)果如表3所示，樣品質(zhì)量為10.0g時，魷魚中甲醛的消除率最大。表3不同超聲時間下樣品魷魚中甲醛的消除率每個秘魯魷魚片質(zhì)量(g)10.020.030.0魷魚中甲醛消除率(％)96.3580.8649.74由以上優(yōu)化試驗可知，在上述魷魚原料預(yù)處理以及超聲波處理步驟中，秘魯魷魚片的厚度、質(zhì)量、以及超聲時間均不能夠隨意更改，否則會不利于去除甲醛，影響甲醛的消除率。所述第一次清洗的步驟具體為：將超聲處理后的秘魯魷魚原料用去離子水以清水流的方式?jīng)_洗10-60s；所述第二次清洗的步驟與所述第一次清洗的步驟相同。所述浸泡具體為：將第一次清洗后秘魯魷魚原料置于去離子水中浸泡20-40min。將本實施例中甲醛的消除方法與常用甲醛捕獲劑消除魷魚中的方法比較，見表4，由該表可見，當(dāng)本實施例所述方法，成本低、操作簡單，并且甲醛消除率可高達96.35％，與采用甲醛捕獲劑的其他方法相比，具有明顯的優(yōu)勢。表4本實施例超聲波法與常用甲醛捕獲劑消除魷魚中的方法比較超聲波法茶多酚法明膠法氨基酸法成本低較高較高高時間30min2h10h12h甲醛消除率96.35％100％59.34％57.24％操作簡單較復(fù)雜較復(fù)雜較復(fù)雜在實施例中，甲醛消除率的計算具體為：甲醛消除率＝(n0-n)/n0ⅹ100％(1)公式中：n0為進行消除甲醛處理前的魷魚原料樣品中甲醛含量，單位為mg/kg；n為進行消除甲醛處理后的魷魚原料樣品中甲醛含量，單位為mg/kg；將消除甲醛處理前魷魚原料樣品以及消除甲醛處理后魷魚原料樣品統(tǒng)稱為待測魷魚樣品，在所述待測魷魚樣品中甲醛含量的測定過程中，用高效液相色譜法校正乙酰丙酮分光光度法，以提高測定甲醛的準確度。目前，乙酰丙酮分光光度法是測定水中甲醛的國家標準方法，該方法原理為：在弱酸性條件下，甲醛能夠特異性地與乙酰丙酮結(jié)合，生成二乙?；涠谆拎?。此產(chǎn)物是一種黃色化合物，在波長412處吸光度最大，記錄不同濃度甲醛標準溶液和樣品在此處的吸光度值，做出甲醛標準曲線來定量分析甲醛。乙酰丙酮分光光度法操作簡便，但是存在分析準確度不夠、選擇性不高的缺點。利用乙酰丙酮分光光度法測定甲醛含量，由于用于檢測的樣品一般為提取液，在提取液中，往往還有其他物質(zhì)能夠在413nm處有吸收，因此直接用分光光度法測定魷魚原料中的甲醛含量會導(dǎo)致測定結(jié)果偏高。高效液相色譜法對樣品中的分析物，具有極高的分離效率而成為最有效的分離方法，該方法已經(jīng)成為從上個世紀80年代末至今分析化學(xué)研究的熱點。該方法已經(jīng)成為分析和測量復(fù)雜基質(zhì)中痕量和超痕量組分的有利工具，被廣泛研究和應(yīng)用于食品、化工、醫(yī)藥、生物醫(yī)學(xué)科學(xué)、臨床化學(xué)等領(lǐng)域。具有分析準確度高，數(shù)據(jù)可靠的優(yōu)點。但是該方法需要借助高效液相色譜儀來實現(xiàn)，該設(shè)備昂貴，分析成本遠遠高于分光光度法，不適合大批次產(chǎn)品的檢測。在本實施例中，用高效液相色譜法校正乙酰丙酮分光光度法的方法結(jié)合了以上兩種方法的優(yōu)點，檢測準確度高、能夠以低成本實現(xiàn)大批次產(chǎn)品檢測的秘魯魷魚原料中甲醛測定。用高效液相色譜法校正乙酰丙酮分光光度法具體包括以下步驟：(1)秘魯魷魚中甲醛的提?。簩⒋郎y魷魚依次進行預(yù)處理、甲醛提取、凈化，獲得凈化后的甲醛提取液；所述待測樣品測定前的處理步驟具體為：所述秘魯魷魚中甲醛的提取具體為：1)待測魷魚原料的預(yù)處理：取一定質(zhì)量的待測魷魚樣品，精確至0.01g，剪碎，置于具塞三角瓶中，加入30ml去離子水、10m10％的三氯乙酸，封緊瓶口待用；2)甲醛提?。簩⒉襟E(1)預(yù)處理后的魷魚樣品進行冰浴超聲30min，得到粗提液，超聲的功率為200w；3)凈化：將步驟(2)中得到的所述粗提液在10000轉(zhuǎn)/min條件下，離心10min，取上清液，收集離心后下層溶液加去離子水10ml，混勻后再在10000轉(zhuǎn)/min條件下，離心10min，收集上清液，合并兩次離心獲得上清液于100ml容量瓶中，并定容至刻度，得到凈化后的甲醛提取液，待用。(2)繪制甲醛高效液相色譜法標準曲線：具體為：1)配制流動相：稱取一定量的鹽酸羥胺與磷酸二氫鉀，將兩者混合，以蒸餾水為溶劑，配置獲得流動相，流動相中磷酸二氫鉀濃度為100.0mmol·l-1，鹽酸羥胺濃度為5.0mmol·l-1；用稀磷酸調(diào)節(jié)流動相ph至3.0，用0.45um濾膜過濾；2)配制甲醛標準溶液：以蒸餾水為溶劑，配置獲得濃度為0、2.0μg/ml、4.0μg/ml、6.0μg/ml、8.0μg/ml、10.0μg/ml、12.0μg/ml、14.0μg/ml、16.0μg/ml、18.0μg/ml、20μg/ml的甲醛標準溶液，用0.22um濾膜過濾；3)控制色譜條件進行檢測：檢測波長：205nm，柱溫35℃、流速0.6ml/min，進樣量10ul；4)以甲醛濃度為橫坐標，以峰面積值為縱坐標，得到甲醛高效液相色譜標準曲線線性方程：y1＝ax1+b(2)其中，y1為峰面積值，x1為甲醛濃度，a和b為常量參數(shù)，控制線性相關(guān)系數(shù)r2大于0.99；(3)繪制甲醛乙酰丙酮分光光度法標準曲線：具體為：分別吸取濃度為5μg/ml甲醛標準溶液0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml置于25ml納式比色管中，分別加入1ml乙酰丙酮溶液，混合均勻，置于沸水浴中加熱10min，取出，用流水冷卻至室溫；以空白為參比，于413nm處利用1cm比色杯進行比色，以吸光度對濃度繪制標準曲線(如圖1所示)：得到甲醛乙酰丙酮分光光度法標準曲線線性方程：y2＝cx2+d(3)其中，y2為在413nm處的吸光值，x2為甲醛濃度，c和d為常量參數(shù)，線性相關(guān)系數(shù)r2大于0.99；(4)兩種方法測定結(jié)果的線性擬合：取10份以上秘魯魷魚樣品作為校正用樣品(在本實施例中，取10份秘魯魷魚樣品測定)，經(jīng)過步驟(1)處理，獲得校正用樣品對應(yīng)的凈化后的甲醛提取液，利用該凈化后的甲醛提取液進行校正，即分別通過高效液相色譜法和乙酰丙酮分光光度法測定甲醛含量；進行線性擬合，線性方程：y3＝mx3+n(4)其中，y3為乙酰丙酮分光光度法直接測定獲得的甲醛含量，x3為高效液相色譜法測定獲得的甲醛含量，線性相關(guān)系數(shù)r2大于0.96；(5)待測樣品中甲醛含量測定：對于待測秘魯魷魚樣品，經(jīng)過步驟(1)處理，獲得的凈化后的甲醛提取液，利用乙酰丙酮分光光度法測定待測樣品中甲醛的含量，然后將結(jié)果帶入公式(4)中的y3，計算得到校正后甲醛含量x4；根據(jù)公式(4)，即可得到校正后甲醛含量x4。其中，上述步驟(4)中測定秘魯魷魚樣品以及步驟(5)中利用乙酰丙酮分光光度法測定待測樣品中甲醛的含量方法為：1)顯色反應(yīng)：取10ml按照待測魷魚原料的預(yù)處理步驟1)制備得到的所述凈化后的甲醛提取液于25ml納式比色管中，加入1ml乙酰丙酮溶液，混合均勻，置于沸水浴中加熱10min，取出，用水冷卻至室溫，得到待測魷魚內(nèi)源性甲醛提取液，待用；2)待測魷魚樣品中甲醛的含量的測定：以空白校零，將步驟(4)中所述待測魷魚內(nèi)源性甲醛提取液于413nm處利用1cm比色杯進行比色，記錄吸光度，從所述甲醛乙酰丙酮分光光度法標準曲線中查出待測魷魚樣品中甲醛提取液的甲醛濃度；乙酰丙酮分光光度法測定獲得的的所述待測魷魚樣品中甲醛的含量按下式計算：甲醛含量＝n×100÷m，單位：mg/kg；公式中，n為根據(jù)測得的吸光度從繪制的甲醛標準曲線中查出的魷魚中甲醛的濃度，單位為mg/ml；m為步驟(1)中待測魷魚樣品的質(zhì)量，單位為kg。步驟(4)中利用高效液相色譜法測定秘魯魷魚樣品，所述高效液相色譜法采用鹽酸羥胺作為衍生劑在線檢測甲醛。鹽酸羥胺與甲醛反應(yīng)產(chǎn)物為肟類化合物，在紫外區(qū)有吸收，使得可以利用高效液相色譜-紫外檢測器來檢測甲醛。這類反應(yīng)條件溫和，速度快，產(chǎn)物溶解度好，適用于在線衍生，可以簡化樣品中甲醛的測定過程，提高分析結(jié)果的精密度和準確度。步驟(4)中測定秘魯魷魚樣品，利用高效液相色譜法，測定待測樣品中甲醛的含量，具體為：1)配制流動相：稱取一定量的鹽酸羥胺與磷酸二氫鉀，將兩者混合，以蒸餾水為溶劑，配置獲得流動相，流動相中磷酸二氫鉀濃度為100.0mmol·l-1，鹽酸羥胺濃度為5.0mmol·l-1；用稀磷酸調(diào)節(jié)流動相ph至3.0，用0.45um濾膜過濾；2)待測樣品處理：取按照待測魷魚原料的預(yù)處理步驟1)制備得到的所述凈化后的甲醛提取液10ml，用蒸餾水稀釋定容100ml，用0.22um濾膜過濾，然后進行測定；3)控制色譜條件進行檢測：檢測波長：205nm，柱溫35℃、流速0.6ml/min，進樣量10ul；4)待測魷魚樣品中甲醛的含量的測定：記錄測定獲得的待測魷魚對應(yīng)的峰面積，從所述甲醛高效液相色譜法標準曲線中查出待測魷魚樣品對應(yīng)的所述凈化后的甲醛提取液中的甲醛濃度；高效液相色譜法測定獲得的的所述待測魷魚樣品中甲醛的含量按下式計算：甲醛含量＝m×100÷m，單位：mg/kg；公式中，m為根據(jù)測得的峰面積繪制的甲醛高效液相色譜法標準曲線中查出的魷魚中甲醛的濃度，單位為mg/ml；m為步驟(1)中待測魷魚樣品的質(zhì)量，單位為kg。當(dāng)前第1頁12