本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域,尤其涉及一種中藥組合物、其用途及飼料。
背景技術(shù):
飼料中添加抗生素能促進動物生長這一現(xiàn)象是美國科學家在1945年發(fā)現(xiàn)的,后來,抗生素在全世界就逐漸地廣泛用在飼料中,對畜牧業(yè)發(fā)展起到一定的推動作用。然而,抗生素長期不合理使用的弊端日益顯現(xiàn),不僅造成畜產(chǎn)品和環(huán)境中抗生素殘留超標問題,還增加了病原菌抗藥性的產(chǎn)生頻率,使禽畜機體的免疫力下降。另外,抗生素作用于病原菌的同時也會影響體內(nèi)益生菌群的生長。
中草藥作為飼料添加劑在我國已有幾千年的歷史,因其安全有效、無殘留、無毒副作用、無污染并兼具免疫調(diào)節(jié)功能的特點正展示出其獨特的優(yōu)勢和發(fā)展前景?,F(xiàn)有技術(shù)公開了多種可替代抗生素用于飼料中的中藥組合物,如公開號為cn103355483a的中國專利文獻公開了一種替代飼用抗生素的復(fù)方中草藥的提取物,包括20%的五倍子、15%的馬齒莧、15%的大青葉、10%的野菊花、10%的魚腥草、8%的柴胡、8%的黃柏、7%的香薷和7%的生地;公開號為cn102552525a的中國專利文獻公開的替代飼用抗生素的中藥草配方包括:25%的烏梅、20%的馬齒莧、15%的大青葉、10%的野菊花、10%的魚腥草、5%的柴胡、5%的黃柏、5%的香薷和5%的生地。上述中草藥對大腸桿菌、腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等致病菌具有抑制作用,但是效果不及常用的金霉素、黃霉素等飼用抗生素。而且,上述中草藥對動物嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌等益生菌也有輕微抑制作用。
技術(shù)實現(xiàn)要素:
有鑒于此,本發(fā)明的目的在于提供一種中藥組合物、其用途及飼料,本發(fā)明提供中藥組合物對大腸桿菌、腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等致病菌具有較強的抑制作用,而且對動物嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌等益生菌有促進作用。
本發(fā)明提供了一種中藥組合物,由以下原料制成:
25wt%~35wt%的烏梅;
25wt%~35wt%的大青葉;
15wt%~25wt%的香薷;
10wt%~15wt%的野菊花;
5wt%~10wt%的柴胡。
本發(fā)明以烏梅、大青葉、香薷、野菊花和柴胡復(fù)配,不僅對大腸桿菌、腸炎沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等致病菌具有較強的抑制作用,而且對動物嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌等益生菌有促進作用。
在一個實施例中,所述中藥組合物由以下原料制成:
30wt%的烏梅;
30wt%的大青葉;
20wt%的香薷;
13wt%的野菊花;
7wt%的柴胡。
本發(fā)明提供的中藥組合物實際上為上述中藥組分的水提物,其按照以下方法提?。?/p>
取中藥粉末10g,按照1::1料液比加入100ml蒸餾水,水提浸泡1h。浸提后轉(zhuǎn)至超聲波震蕩處理20min,然后加熱至沸騰,保持沸騰狀態(tài)10min,活驢藥湯,濾渣進行二次提取,方法同前,兩次濾液合并待用。將濾液轉(zhuǎn)至60℃水浴鍋中進行濃縮,濃縮至0.5g/ml。
本發(fā)明提供的中藥組合物具有抑制致病菌、促進益生菌的作用,可以用于制備抗菌劑。
本發(fā)明提供的中藥組合物可以代替抗生素用于雞飼料的添加,不僅具有抑制致病菌、促進益生菌的作用,而且對肉雞的生長發(fā)育具有促進作用,提高肉雞免疫力,改善肉雞腸道菌群,改善雞肉品質(zhì)。
本發(fā)明還提供了一種飼料,包括:上述技術(shù)方案所述的中藥組合物。上述中藥組合物代替抗生素使用,對其添加量本發(fā)明并無特殊限制。
實驗結(jié)果表明,本發(fā)明提供的復(fù)方中草藥提取物具有以下特點:
1、具有選擇性抑菌功效:對致病菌的抑制作用優(yōu)于抗生素,而對益生菌具有促進作用。
2、對肉雞生長發(fā)育具有促進作用:可顯著提高肉雞的平均日增重,與金霉素組均無顯著差異;降低肉雞的平均日采食;降低肉雞的料重比,提高飼料轉(zhuǎn)化率。
3、可改善雞肉品質(zhì):各試驗組與空白對照組相比,胸肉硬度都有一定的上升趨勢,各劑量組顯著提高了雞胸肉的彈性,并且與金霉素組差異顯著(p<0.05);各組在膠黏性上無顯著差異(p>0.05);高劑量組的雞胸肉咀嚼性分別顯著高于空白、金霉素對照組(p<0.05)。
4、提高肉雞的免疫功能。
5、具有改善肉雞腸道菌群的作用。
具體實施方式
實施例1
分別將烏梅、大青葉、香薷、野菊花和柴胡按照以下方法進行提?。?/p>
取中藥粉末10g,按照1::1料液比加入100ml蒸餾水,水提浸泡1h。浸提后轉(zhuǎn)至超聲波震蕩處理20min,然后加熱至沸騰,保持沸騰狀態(tài)10min,活驢藥湯,濾渣進行二次提取,方法同前,兩次濾液合并待用。將濾液轉(zhuǎn)至60℃水浴鍋中進行濃縮,濃縮至0.5g/ml。
將烏梅提取物、大青葉提取物、香薷提取物、野菊花提取物和柴胡提取物按照30wt%、30wt%、20wt%、13wt%和7wt%的比例混合,得到中藥組合物。
比較例1
按照實施例1的方法制備中藥組合物,區(qū)別在于,組分及含量如下:
20%的五倍子、15%的馬齒莧、15%的大青葉、10%的野菊花、10%的魚腥草、8%的柴胡、8%的黃柏、7%的香薷和7%的生地。
比較例2
按照實施例1的方法制備中藥組合物,區(qū)別在于,組分及含量如下:
25%的烏梅、20%的馬齒莧、15%的大青葉、10%的野菊花、10%的魚腥草、5%的柴胡、5%的黃柏、5%的香薷和5%的生地。
應(yīng)用例1
1.1培養(yǎng)基的制備
營養(yǎng)肉湯的制備:用蒸餾水1000ml溶解蛋白胨5.0g、牛肉膏1.0g、酵母浸粉2.0g、氯化鈉5.0g,待完全溶解后調(diào)ph值為7.2,分裝121℃高壓滅菌15min,滅菌后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
普通營養(yǎng)瓊脂的制備:用蒸餾水1000ml溶解蛋白胨10g、牛肉膏3g,氯化鈉5g,校正至7.2~7.4.加入瓊脂20g,加熱煮沸,使瓊脂熔化,分裝121℃高壓滅菌15min,滅菌后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
mrs固體培養(yǎng)基的制備:用蒸餾水1000ml溶解蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母浸出物5g、葡萄糖20g、玉米漿3g、檸檬酸二胺2g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀2g、吐溫801ml、mgso4·7h2o0.2g、mnso4·4h2o0.2g、l-半胱氨酸鹽酸鹽0.4g,待完全溶解后調(diào)ph值為7.2,加入瓊脂18g加熱熬開,分裝5ml于厭氧管中,充氮氣排出氧氣,121℃高壓滅菌15min,滅菌后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
生理鹽水的制備:用蒸餾水1000ml溶解氯化鈉0.9g,分裝9ml于厭氧管中,充氮氣排出氧氣,121℃高壓滅菌15min,滅菌后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2培養(yǎng)板的制備
將培養(yǎng)皿密封包好后放入電熱恒溫干燥箱中,170℃高溫滅菌2h。滅菌后在無菌條件下將無菌營養(yǎng)瓊脂趁熱倒入培養(yǎng)皿中,每個培養(yǎng)皿約加155.0ml瓊脂,待凝固后倒扣在37℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,去除培養(yǎng)基上水分。
1.3供試菌液的配置
受試菌種:四種致病菌,包括大腸桿菌(escherichiacoli)、腸炎沙門氏菌(salmonellaenteritidis)、鼠傷寒沙門氏菌(salmonellatyphimurium)、金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus);兩種益生菌,包括動物嗜酸乳桿菌(lactobacillusacidophilus)和雙歧桿菌(bifudobacterium)。
致病菌菌液的制備:無菌條件下,挑取2~3環(huán)菌種接種到10ml營養(yǎng)肉湯中,37℃活化培養(yǎng)24h,活化后在4支無菌試管中將菌液吸濕,制成含菌量為105~106cfu/ml的菌懸液,置于4℃下冷藏保存;
益生菌菌液的制備:無菌條件下,取2ml藥液(濃度為0.5g/ml)注入含有8mlmrs基礎(chǔ)培養(yǎng)基的厭氧管中,充氮氣加蓋密封,115℃滅菌20min,待冷卻后加入已活化完全的菌液0.05ml,混勻后置于37℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)17h。
1.4致病菌藥物敏感性實驗
實驗采用牛津杯法:在無菌條件下,用棉棒蘸取目標菌液并均勻涂抹于營養(yǎng)瓊脂表面,牛津杯輕放在培養(yǎng)基上,使其與培養(yǎng)基接觸無空隙。向牛津杯中輕輕注入無菌藥液200μl,置于37℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18~24h;平板取出后,觀察孔周圍是否有透明圈,若有,測量其大小,若沒有,表明藥液對菌沒有抑制作用。
1.5益生菌藥物敏感性實驗
采用亨蓋特厭氧滾管技術(shù)法:無菌條件下,用無菌注射器吸取1ml混合均勻的藥菌液樣品,加入裝有生理鹽水的厭氧管中,用振蕩器將其混合均勻,制成10-1稀釋液。用無菌注射器吸取1ml稀釋液至另一裝有9ml生理鹽水的厭氧管中,制成10-2稀釋液,依次稀釋至10-7。動物嗜酸乳桿菌選取10-4、10-5和10-6三個稀釋度,雙歧桿菌選取10-5、10-6和10-7三個稀釋度進行滾管計數(shù)。將無氧無菌的mrs瓊脂培養(yǎng)基在沸水浴中熔化后,置于46~50℃恒溫水浴鍋中待用,用無菌注射器分別吸取兩種菌液不同稀釋梯度各0.1ml,分別注入待用的試管中,然后將其平放于盛有冰水的磁盤中迅速滾動,帶菌的熔化瓊脂在試管內(nèi)壁會立即形成凝固層。將厭氧管斜放于恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)48h,取出后記錄菌落數(shù)量。
1.6結(jié)果與分析
1.6.1致病菌敏感性實驗結(jié)果
結(jié)果參見表1。
表1對致病菌的抑菌圈直徑
注:與實施例比較,*p<0.05,**p<0.01
由表1可知,本發(fā)明提供的復(fù)方中藥草對致病菌大腸桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌和金黃色沙門氏菌的抑菌圈直徑顯著大于金霉素和黃霉素,其對致病菌的抑制效果較好。
1.6.2益生菌敏感性實驗結(jié)果
結(jié)果參見表2和表3。
表2對不同稀釋濃度的動物嗜酸乳桿菌菌落數(shù)目的影響(單位:個)
注:與空白組比較,**p<0.01
由表2可知,本發(fā)明提供的復(fù)方中藥草對益生菌動物嗜酸乳桿菌不僅無抑制作用,反而具有促進作用。
表3對不同稀釋濃度的雙歧桿菌菌菌落數(shù)目的影響(單位:個)
注:與空白組比較,*p<0.05,**p<0.01
由表3可知,本發(fā)明提供的復(fù)方中藥草對益生菌雙歧桿菌不僅無抑制作用,反而具有促進作用。
應(yīng)用例2
2.1
選取1日齡健康羅斯308肉雞140只,購自保定市潯源禽業(yè)有限公司。經(jīng)常規(guī)飼養(yǎng)至7日齡備用。參照《家禽營養(yǎng)需要》(nrc,1994)標準,配制玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧。將經(jīng)預(yù)備飼養(yǎng)至7日齡的100只雛雞,隨機分為5組(空白對照,金霉素對照和低、中、高三個劑量組),每組2個重復(fù),每個重復(fù)10只雞,雌雄各半。
試驗雞采用疊層式籠養(yǎng),進雛前對雞舍及設(shè)備進行消毒。試驗舍初始溫度控制在32~34℃。1~21d喂前期料,22~42d喂后期料,每組所備料槽和水槽位數(shù)相同,自由采食和飲水,24h光照,定時清掃衛(wèi)生,定期對舍內(nèi)消毒。按常規(guī)免疫程序進行疫苗接種。
試驗期間及試驗?zāi)┢?,按常?guī)方法進行相關(guān)指標測定,結(jié)果見表4-10。
表4肉雞日增重的影響(單位:g)
注:同列肩標不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05),不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01),相同字母表示差異不顯著(p>0.05)
表5肉雞平均日采食量的影響(單位:g)
注:同列肩標不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05),不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01),相同字母表示差異不顯著(p>0.05)
表6肉雞料重比的影響(單位:g/g)
注:同列肩標不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05),不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01),相同字母表示差異不顯著(p>0.05)
由表4、表5和表6可知,本發(fā)明提供的復(fù)方中草藥提取物可顯著提高肉雞的平均日增重,與金霉素組均無顯著差異;降低肉雞的平均日采食;降低肉雞的料重比,提高飼料轉(zhuǎn)化率。
表7肉雞胸肉質(zhì)構(gòu)的影響
注:同列肩標不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05),不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01),相同字母表示差異不顯著(p>0.05)
由表7可知,本發(fā)明提供的復(fù)方中草藥可改善雞肉品質(zhì)。各試驗組與空白對照組相比,胸肉硬度都有一定的上升趨勢,各劑量組顯著提高了雞胸肉的彈性,并且與金霉素組差異顯著(p<0.05);各組在膠黏性上無顯著差異(p>0.05);高劑量組的雞胸肉咀嚼性分別顯著高于空白、金霉素對照組(p<0.05)。
表8新城疫抗體效價的影響(單位:nlog2)
注:同列肩標不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05),不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01),相同字母表示差異不顯著(p>0.05)
表9肉雞脾淋巴增值能力的影響
注:同列肩標不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05),不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01),相同字母表示差異不顯著(p>0.05)
由表8和表9可知,本發(fā)明提供的復(fù)方中草藥可提高雞只的免疫功能。
表10對肉雞腸道菌群的影響(單位:lgcfu/g)
注:同列肩標不同小寫字母表示差異顯著(p<0.05),不同大寫字母表示差異極顯著(p<0.01),相同字母表示差異不顯著(p>0.05)
由表10可知,本發(fā)明提供的復(fù)方中草藥提取物具有改善肉雞腸道菌群的作用。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式,應(yīng)當指出,對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說,在不脫離本發(fā)明原理的前提下,還可以做出若干改進和潤飾,這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。