本發(fā)明涉及動(dòng)物養(yǎng)殖飼料技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及酵母培養(yǎng)物在制備提高母豬繁殖性能、改善母豬便秘的飼料中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

目前，我國(guó)母豬生產(chǎn)力水平較為低下。據(jù)有關(guān)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，在我國(guó)規(guī)?；鲌?chǎng)中，每頭母豬每年可提供斷奶仔豬僅約15～18頭，而2008年美國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家就已經(jīng)達(dá)到20～25頭。造成我國(guó)母豬生產(chǎn)力低下的主要因素有母豬奶水不足、便秘嚴(yán)重、管理水平低下和疾病等。

酵母培養(yǎng)物(yeast culture，YC)是指在一定的工藝條件下酵母菌在特定培養(yǎng)基經(jīng)過深度發(fā)酵而得到復(fù)雜發(fā)酵產(chǎn)物，它包括細(xì)胞代謝產(chǎn)物(含多肽、有機(jī)酸、氨基酸、核酸、酶類、未知生長(zhǎng)因子等)、變性培養(yǎng)基(含寡糖、多肽等)和酵母細(xì)胞本身(蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸、細(xì)胞壁多糖等)，營(yíng)養(yǎng)成分十分豐富，可為動(dòng)物腸道內(nèi)共生菌提供“全價(jià)營(yíng)養(yǎng)底物”，最大限度維持體內(nèi)腸道各菌系之間的平衡，促進(jìn)腸道功能正常，提高飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收率，從而改善動(dòng)物生產(chǎn)性能。

但是，現(xiàn)有技術(shù)中，酵母培養(yǎng)物的研究多是在改善動(dòng)物飼料轉(zhuǎn)化率、促進(jìn)畜禽機(jī)體免疫功能、降低死亡率及改善環(huán)境等的研究，而對(duì)母豬繁殖性能和母豬便秘影響的研究較少，因此，將酵母培養(yǎng)物作為母豬飼料添加成分，對(duì)提高母豬繁殖性能、改善母豬便秘具有重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種酵母培養(yǎng)物在制備提高母豬繁殖性能、改善母豬便秘的飼料中的應(yīng)用。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

酵母培養(yǎng)物在制備提高母豬繁殖性能、改善母豬便秘的飼料中的應(yīng)用，其中的酵母培養(yǎng)物是按照包括如下步驟的方法制備得到的：將保藏號(hào)為CGMCC No.2.399的釀酒酵母，經(jīng)斜面菌種活化后，得到的酵母菌種繼續(xù)接種制備種子液，將種子液依次進(jìn)行液體有氧發(fā)酵，固體厭氧發(fā)酵，將得到的固體發(fā)酵產(chǎn)物通過干燥及粉碎得到酵母培養(yǎng)物。

作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，斜面菌種活化包括如下步驟：將冷凍保藏的保藏號(hào)為CGMCC No.2.399的釀酒酵母接種到斜面培養(yǎng)基上，靜置恒溫28～35℃，培養(yǎng)40～70h，得到活化后的酵母菌種。

斜面培養(yǎng)基為固體麥芽汁培養(yǎng)基，包括麥芽膏粉、氯霉素、瓊脂；各成分含量?jī)?yōu)選為麥芽膏粉130g/L、氯霉素0.1g/L，瓊脂2％。

上述種子液的制備包括如下步驟：將酵母菌種接種至液體培養(yǎng)基中，在28～35℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速120～200r/min；培養(yǎng)18～30h。

作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，液體有氧發(fā)酵包括如下步驟：將種子液以10％～20％接種量接種到裝有新的液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，控制通氣量為1～5L/min，溫度為28～35℃，發(fā)酵時(shí)間為20～35h；得到擴(kuò)大培養(yǎng)的液體菌種液。

液體培養(yǎng)基為麥芽汁培養(yǎng)基，包括麥芽膏粉、氯霉素，兩者含量?jī)?yōu)選為麥芽膏粉130g/L、氯霉素0.1g/L；pH值為5.6～6.5。

作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，固體厭氧發(fā)酵包括如下步驟：將液體菌種液以20％～30％的接種量接種至無菌固體培養(yǎng)基中，于雙層可控溫隔離干燥設(shè)備中進(jìn)行固體厭氧發(fā)酵，控制水分含量為35％～70％，發(fā)酵溫度為28～35℃，發(fā)酵時(shí)間18～50h；得到固體發(fā)酵產(chǎn)物。

固體培養(yǎng)基包括按質(zhì)量份數(shù)計(jì)的秸稈4～7份、玉米粉3～5份、麩皮1～3份或酒糟3～5份的任三種或四種；培養(yǎng)基碳氮比為(2～7)∶1，通過添加尿素進(jìn)行控制。

作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，干燥包括如下步驟：將固體發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行干燥，干燥方式真空干燥，干燥溫度25℃～45℃，優(yōu)選30℃，得到酵母培養(yǎng)物初產(chǎn)品。

作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，粉碎包括如下步驟：將酵母培養(yǎng)物初產(chǎn)品進(jìn)行粉碎，粉碎過篩40～60目，得到酵母培養(yǎng)物產(chǎn)品。

作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，酵母培養(yǎng)物的添加量的質(zhì)量百分含量為基礎(chǔ)日糧的0.1～0.5％。

作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，妊娠期母豬的飼料的日投飼次數(shù)為2～3次，妊娠前期日飼喂量為1.8～2.2kg，妊娠中期日飼喂量為2.3～2.6kg，妊娠后期日飼喂量為2.8～3.2kg；哺乳期母豬的飼料的日投飼次數(shù)為2～3次，母豬分娩后前三天每日飼喂量從0kg逐漸增加至4kg，第四天后母豬自由采食，自由采食階段保持食槽內(nèi)飼料略有剩余。

作為進(jìn)一步的技術(shù)方案，基礎(chǔ)日糧的主要營(yíng)養(yǎng)成分包括粗蛋白質(zhì)、鈣、有效磷、總賴氨酸、總蛋氨酸、半胖氨酸、總蘇氨酸和總色氨酸，基礎(chǔ)日糧的消化能為12～15(MJ/kg)。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明通過在母豬妊娠期和哺乳期的飼料中添加不同濃度的酵母培養(yǎng)物，來研究酵母培養(yǎng)物對(duì)母豬繁殖性能和母豬便秘的影響，為酵母培養(yǎng)物在母豬飼料中的應(yīng)用提供基礎(chǔ)；試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，在母豬妊娠期和哺乳期的飼料中添加酵母培養(yǎng)物，能明顯緩解母豬妊娠后期和哺乳期的便秘，顯著提高母豬健仔數(shù)、仔豬斷奶頭數(shù)和斷奶窩重，減少母豬分娩時(shí)死胎數(shù)，縮短斷奶至母豬發(fā)情的間隔，進(jìn)而改善母豬的生產(chǎn)性能。

具體實(shí)施方式

下面對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步說明。在此需要說明的是，對(duì)于這些實(shí)施方式的說明用于幫助理解本發(fā)明，但并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限定。此外，下面所描述的本發(fā)明各個(gè)實(shí)施方式中所涉及的技術(shù)特征只要彼此之間未構(gòu)成沖突就可以相互組合。

下述實(shí)施例中所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

下述實(shí)施例中所使用的試驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

下述實(shí)施例中所使用的菌株的詳細(xì)信息如下：

釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)：CGMCC編號(hào)為2.399；該釀酒酵母已在申請(qǐng)?zhí)枮镃N201410629012.0，專利名稱為一種黃水醋飲的生產(chǎn)方法的發(fā)明授權(quán)專利中公開。

下述實(shí)施例中所使用的母豬由河北某養(yǎng)殖有限公司提供。

實(shí)施例1，酵母培養(yǎng)物的制備

1、斜面菌種活化：將冷凍保藏的保藏號(hào)為CGMCC No.2.399的釀酒酵母接種到含有麥芽膏粉130g/L、氯霉素0.1g/L，瓊脂2％的斜面培養(yǎng)基上，靜置恒溫30℃，培養(yǎng)48h，得到活化后的酵母菌種。

2、種子液的制備：將活化后的酵母菌種用1環(huán)接種至含有麥芽膏粉130g/L、氯霉素0.1g/L；pH值為6.5的液體培養(yǎng)基中，在30℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速160r/min；培養(yǎng)24h。

3、液體有氧發(fā)酵：將制備好的種子液以20％接種量接種到裝有新的含有麥芽膏粉130g/L、氯霉素0.1g/L；pH值為5.6的液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，控制通氣量為2L/min，溫度為30℃，發(fā)酵時(shí)間為28h；得到擴(kuò)大培養(yǎng)的液體菌種液。

4、固體厭氧發(fā)酵：將液體菌種液以30％的接種量接種至質(zhì)量份數(shù)為秸稈6份、玉米粉5份、麩皮2份和酒糟3份的無菌固體培養(yǎng)基中，添加尿素控制碳氮比為3∶1，于雙層可控溫隔離干燥設(shè)備中進(jìn)行固體厭氧發(fā)酵，控制水分含量為55％，發(fā)酵溫度為30℃，發(fā)酵時(shí)間42h；得到固體發(fā)酵產(chǎn)物。

5、酵母培養(yǎng)物的獲得

將所述固體發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行干燥，干燥方式真空干燥，干燥溫度25℃～45℃，優(yōu)選30℃，得到酵母培養(yǎng)物初產(chǎn)品。再將所屬酵母培養(yǎng)物初產(chǎn)品進(jìn)行粉碎，粉碎過篩40～60目，即可得到酵母培養(yǎng)物產(chǎn)品。經(jīng)檢測(cè)得到，該產(chǎn)品粗蛋白質(zhì)含量為15.4％，甘露聚糖含量為1.5％，β-葡聚糖含量為4.2％，灰分含量為5.6％。

實(shí)施例2，母豬繁殖性能及母豬便秘的影響試驗(yàn)

1，飼料的制備

本試驗(yàn)所選用的基礎(chǔ)日糧包括玉米、豆粕、麥麩、大豆油、氯化鈉、50％氯化膽堿、石粉、磷酸氫鈣、78％L-賴氨酸、98％DL-蛋氨酸、預(yù)混料，其中，預(yù)混料為每千克日糧提供維生素A，10500IU；維生素D₃，1500IU；維生素E，15IU；維生素K₃，1.6mg；維生素B₁，1.5mg；維生素B₂，3.0mg；維生素B₆，1.5mg；維生素B₁₂，0.015mg；尼克酸，22.5mg；泛酸，15mg；生物素，40mg；葉酸，2.5mg；錳(MnSO₄·H₂O)，40mg；鐵(FeSO₄·H₂O)，85mg；鋅(ZnSO₄·H₂O)，75mg；銅(CuSO₄·5H₂O)，1.5mg；碘(Ca(IO₃)₂)，0.09mg；硒(Na₂SeO₃)，0.03mg的混合料。

上述基礎(chǔ)日糧各組成的添加量見下表1。

2，試驗(yàn)過程

本試驗(yàn)采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取60頭妊娠的“長(zhǎng)×大”經(jīng)產(chǎn)母豬(3～5胎)，根據(jù)胎次、體況相近原則隨機(jī)分為3個(gè)組，每組20個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭母豬，單欄飼養(yǎng)，分別喂料；以喂料為基礎(chǔ)日糧作為對(duì)照組；喂料為在基礎(chǔ)日糧中添加實(shí)施例1制備的酵母培養(yǎng)物的飼料，其中加入實(shí)施例1中的酵母培養(yǎng)物的質(zhì)量百分含量為0.25％、0.5％，作為試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2。

上述3組妊娠母豬從妊娠第1d開始分別飼喂對(duì)照組日糧和添加酵母培養(yǎng)的日糧。從母豬配種后第1d～妊娠85d飼喂妊娠母豬料，妊娠85d～哺乳21d試驗(yàn)結(jié)束則飼喂哺乳母豬料。日糧是參考NRC(1998)標(biāo)準(zhǔn)和《中國(guó)豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(2004版)配制成的玉米-豆粕型日糧。母豬妊娠期和哺乳期的基礎(chǔ)日糧配方和營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 妊娠期和哺乳期母豬的基礎(chǔ)日糧各組成及營(yíng)養(yǎng)水平含量表(飼喂基礎(chǔ))

表1中的主要營(yíng)養(yǎng)成分為計(jì)算值，含量為重量百分?jǐn)?shù)。

試驗(yàn)于2015年12月1日至2016年4月25日在河北定州某養(yǎng)殖有限公司養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行。試驗(yàn)開始時(shí)，將配種后的母豬轉(zhuǎn)入妊娠舍的半漏縫地板限位欄中，舍內(nèi)保持清潔干燥、通風(fēng)良好、舍內(nèi)溫度保持恒定(25℃左右)。每天飼喂2次，分別在8:00和17:30投料，妊娠前期(妊娠1～30d)、中期(妊娠30～85d)和后期(妊娠85d～分娩)飼喂量分別為2.0、2.5和3.0kg/d，自由飲水；預(yù)產(chǎn)期前1周將試驗(yàn)?zāi)肛i轉(zhuǎn)入產(chǎn)房的全漏縫地板限位欄中，舍內(nèi)保持清潔干燥、通風(fēng)良好、舍內(nèi)溫度保持恒定(25℃左右)。自由飲水，臨產(chǎn)前用0.1％的高錳酸鉀水溶液將其外陰和乳房清洗消毒，并將每個(gè)乳頭疏通。

哺乳期每日8:00、13:00和18:00份3次進(jìn)行飼喂，母豬分娩后前三天每日飼喂量從0kg逐漸增加至4kg，第四天后可讓母豬自由采食。自由采食階段每天3次飼喂并保持食槽內(nèi)飼料略有剩余。哺乳仔豬采用250瓦的紅外保溫?zé)舯Ｅ?d開始教槽，每天清洗食槽。母豬分娩后仔豬在組內(nèi)交叉寄養(yǎng)，保證每窩仔豬數(shù)量基本一致(10或11頭)，其他飼養(yǎng)管理遵循豬場(chǎng)管理制度。

3，測(cè)定指標(biāo)及方法

母豬繁殖性能測(cè)定：在母豬分娩12h之內(nèi)，記錄每頭母豬的總產(chǎn)仔數(shù)、活產(chǎn)仔數(shù)、死胎數(shù)、木乃伊數(shù)、弱仔數(shù)、仔豬出生個(gè)體重、活產(chǎn)窩重以及斷奶后至發(fā)情的間隔天數(shù)。將出生重低于0.9kg或有疾病的豬劃分為弱仔。

弱仔率＝弱仔數(shù)/產(chǎn)活仔數(shù)

母豬泌乳性能測(cè)定：哺乳第21d時(shí)的每窩仔豬斷奶頭數(shù)、斷奶窩重、斷奶仔豬個(gè)體重和哺乳階段仔豬成活率。

母豬便秘率測(cè)定：試驗(yàn)開始后每天統(tǒng)計(jì)母豬的便秘情況，糞便評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)如表2。

便秘率＝(便秘母豬頭數(shù)×便秘天數(shù))/(試驗(yàn)?zāi)肛i頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù))

表2 母豬糞便評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

4，試驗(yàn)結(jié)果

4.1酵母培養(yǎng)物對(duì)母豬繁殖性能的影響

采用上述母豬繁殖性能測(cè)定方法，得到的對(duì)照組、試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組2的結(jié)果見表3。

表3 日糧中添加酵母培養(yǎng)物對(duì)母豬繁殖性能的影響數(shù)據(jù)表

上述表3中，上角標(biāo)a，b表示同列數(shù)據(jù)肩注不同字母表示差異顯著(P＜0.05)；試驗(yàn)數(shù)據(jù)用EXCEL進(jìn)行初步整理，并采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本T-test分析。以P＜0.05表示差異顯著，P＜0.10為差異趨勢(shì)性判斷標(biāo)準(zhǔn)；結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

由表3可知，與對(duì)照組相比，添加酵母培養(yǎng)物雖然不能增加母豬總產(chǎn)仔數(shù)(P＞0.05)，但顯著提高了母豬窩產(chǎn)健仔數(shù)(試驗(yàn)組1提高9.62％，試驗(yàn)組2提高10.46％，P＜0.05)，同時(shí)顯著減少了母豬分娩時(shí)的死胎數(shù)(試驗(yàn)組1降低36.55％，試驗(yàn)組239.31％，P＜0.05)和斷奶至母豬發(fā)情的間隔(試驗(yàn)組縮短138.24％，試驗(yàn)組2縮短36.76％，P＜0.05)。而且，飼喂含酵母培養(yǎng)物日糧組的母豬活產(chǎn)仔數(shù)(試驗(yàn)組1提高7.65％，試驗(yàn)組2提高8.43％，P＝0.07)和活產(chǎn)窩重(試驗(yàn)組1提高7.62％，試驗(yàn)組2提高8.44％，P＝0.07)較對(duì)照組有提高的趨勢(shì)；同時(shí)，酵母培養(yǎng)物的添加量增加，上述母豬的繁殖性能除總產(chǎn)仔數(shù)，其余各項(xiàng)指標(biāo)相應(yīng)趨于更優(yōu)的方向。

酵母培養(yǎng)物中營(yíng)養(yǎng)成分，尤其是發(fā)酵后的代謝產(chǎn)物能為消化道內(nèi)微生物提供豐富的營(yíng)養(yǎng)，對(duì)畜禽的生長(zhǎng)和健康非常重要，繼而改善畜禽的生產(chǎn)性能。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)酵母培養(yǎng)物能顯著降低母豬分娩時(shí)的死胎數(shù)，提高健仔數(shù)，其原因可能與酵母培養(yǎng)物中的寡糖等成分減少有害菌對(duì)腸道的粘附，促進(jìn)有益菌的增殖和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力有關(guān)。

4.2酵母培養(yǎng)物對(duì)哺乳仔豬生長(zhǎng)性能的影響

采用上述母豬泌乳性能測(cè)定方法，得到的對(duì)照組、試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組2的結(jié)果見表4。

表4 日糧中添加酵母培養(yǎng)物對(duì)哺乳仔豬生長(zhǎng)性能的影響

上述表4中，上角標(biāo)a，b表示同列數(shù)據(jù)肩注不同字母表示差異顯著(P＜0.05)；試驗(yàn)數(shù)據(jù)用EXCEL進(jìn)行初步整理，并采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本T-test分析。以P＜0.05表示差異顯著，P＜0.10為差異趨勢(shì)性判斷標(biāo)準(zhǔn)；結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。

從表4可知，在仔豬哺乳期生長(zhǎng)發(fā)育方面，日糧中添加酵母培養(yǎng)物能夠顯著提高斷奶仔豬數(shù)(試驗(yàn)組1提高10.80％，試驗(yàn)組2提高11.69％，P＜0.05)和斷奶窩重(試驗(yàn)組1提高12.84％，試驗(yàn)組2提高13.89％，P＜0.05)，對(duì)仔豬斷奶均重(試驗(yàn)組1提高1.82％，試驗(yàn)組2提高1.98％，P＝0.09)也有提高的趨勢(shì)。母豬的泌乳性能是通過斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能來體現(xiàn)的，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)酵母培養(yǎng)物對(duì)哺乳仔豬斷奶數(shù)和斷奶窩重有顯著的改善效果，這可能與酵母培養(yǎng)物可提高母豬泌乳能力有關(guān)，也不排除酵母本身成分及其培養(yǎng)物中未知生長(zhǎng)因子的特殊作用。

4.3酵母培養(yǎng)物對(duì)母豬便秘的影響

采用上述母豬便秘性能測(cè)定方法，得到的對(duì)照組、試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組2的結(jié)果見表5。

表5 日糧中添加酵母培養(yǎng)物對(duì)母豬便秘的影響

從表5可知，在試驗(yàn)開始后的第1個(gè)月母豬便秘率較高，對(duì)照組和試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組2分別為17.75％、15.25％和15.08％。隨著試驗(yàn)期的延長(zhǎng)，對(duì)照組母豬便秘率有所下降后，第4個(gè)月明顯提高，達(dá)到19.75％，而試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組2的母豬便秘率保持下降的趨勢(shì)，第4個(gè)月的便秘率為10.50％和9.88％，明顯低于對(duì)照組(降低了9.5左右個(gè)百分點(diǎn))。母豬的便秘會(huì)直接影響母豬的胃腸道健康和對(duì)飼料的利用率，進(jìn)而影響母豬的繁殖性能，嚴(yán)重便秘甚至?xí)?dǎo)致母豬死亡。而添加酵母培養(yǎng)物后顯著能明顯降低母豬便秘率。

綜上，試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，在母豬妊娠期和哺乳期的飼料中添加酵母培養(yǎng)物，能明顯緩解母豬妊娠后期和哺乳期的便秘，顯著提高母豬健仔數(shù)、仔豬斷奶頭數(shù)和斷奶窩重，減少母豬分娩時(shí)死胎數(shù)，縮短斷奶至母豬發(fā)情的間隔，進(jìn)而改善母豬的生產(chǎn)性能。

以上對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式作了詳細(xì)說明，但本發(fā)明不限于所描述的實(shí)施方式。對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，在不脫離本發(fā)明原理和精神的情況下，對(duì)這些實(shí)施方式進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，仍落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。