一種用發(fā)芽糙米富集γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用發(fā)芽糙米富集γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法。該發(fā)明以糙米為原料，將糙米放在33℃下浸泡14-16h,然后移至溫度為32℃的發(fā)芽裝置中培充成發(fā)芽糙米,加入PBS緩沖液提取GAD，得到的溶液通過甲殼素為載體加入戊二醛固化GAD，再加入MSG、CaCl2、維生素B6的谷氨酸或谷氨酸鈉得到GABA反應(yīng)液，離心取上清液加入乙酸室溫靜置,再離心后加入無水乙醇,最后離心得到上清液，超濾后得到高濃度GABA溶液。本方法富集的GABA含量高，可以充分利用發(fā)芽糙米的價值，得到高濃度的GABA溶液可以用于食品以及添加劑的生產(chǎn)加工。
【專利說明】一種用發(fā)芽糙米富集Y-氨基丁酸的生產(chǎn)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
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[0001]本發(fā)明涉及一種γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法，尤其涉及一種用發(fā)芽糙米富集γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法。

【背景技術(shù)】
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[0002]γ_氨基丁酸(γ-aminobutytricacid，簡稱GABA)，一種非蛋白質(zhì)氨基酸，產(chǎn)生于植物，微生物，哺乳類動物由谷氨酸經(jīng)谷氨酸脫羧酶催化轉(zhuǎn)化而來，氨基丁酸是一種生理活性成分，能降血壓，改善腦機能，促進長期記憶，促進生長激素分泌，具有活化腎功能、肝功能等功能。植物組織中GABA的含量通常在0.332.5mol/g之間。人們從天然食物中攝取的GABA，尚不能滿足人體生理需要需要對食品原料采用一定的技術(shù)處理以達到富集GABA的目的。
[0003]目前GABA在我國主要是化學(xué)合成方法生產(chǎn)，用于醫(yī)藥原料，不適合在功能食品或者營養(yǎng)補充集中應(yīng)用。但是植物中天然存在的GAD是生產(chǎn)食品用GABA的良好酶源。
[0004]糖米在低氧逆境條件下發(fā)芽后，GABA含量大幅度提尚。運用發(fā)芽糖米制備GABA具有極高的經(jīng)濟價值。
[0005]在制備GABA時，MSG作為GAD專一底物可促進GABA的生成，Ca2+作為GAD的激活因子已得到廣泛證實，VB6是GAD的輔基一 PLP的前體物質(zhì)，有激活GAD達到富集GABA的作用，VB6較PLP廉價，在生產(chǎn)上更具有現(xiàn)實意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對現(xiàn)有技術(shù)合成GABA安全性以及產(chǎn)量都低，本發(fā)明的目的在于提供一種用發(fā)芽糙米富集γ_氨基丁酸的生產(chǎn)方法，本方法富集的GABA含量高，可以充分利用發(fā)芽糙米的價值，得到高濃度的GABA溶液可以用于食品以及添加劑的生產(chǎn)加工。
[0007]本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案:
[0008]一種用發(fā)芽糙米富集γ -氨基丁酸的生產(chǎn)方法:
[0009]以糙米為原料，將糙米放在33°C下浸泡14_16h，然后移至溫度為32°C的發(fā)芽裝置中培充成發(fā)芽糙米，加入PBS緩沖液提取GAD，得到的溶液通過甲殼素為載體加入戊二醛固化GAD，再加入添加了 MSG、CaCl2、維生素B6 (VB6)等組分的谷氨酸或谷氨酸鈉得到GABA反應(yīng)液，離心取上清液加入乙酸室溫靜置，再離心后加入無水乙醇，最后離心得到上清液，超濾后得到高濃度GABA溶液。
[0010]發(fā)芽糙米的原料制備工藝特征為:糙米經(jīng)篩選除雜后放在33°C下浸泡14_16h，然后移至溫度為32°C的發(fā)芽裝置中培充成發(fā)芽糙米；選用經(jīng)低氧、低溫高濕脅迫發(fā)芽的糙米，要求芽體均勻、芽長達到0.8-1.8_。
[0011]發(fā)芽糙米GAD粗提工藝特征為:取發(fā)芽糙米250g，40°C加入pH5.5提取液，水浴保溫富集。
[0012]提取液含有70-80mmol/L PBS, 30-40mmol/L檸檬酸一檸檬酸三鈉(CBS)、40-50mmol/L 醋酸-醋酸鈉(ABs)。
[0013]發(fā)芽糙米GAD固定化工藝:甲殼素100g置于1-2L 0.lmol/LNa2HP04以及0.05mol/L檸檬酸緩沖液(pH5.6)中，加入糙米GAD粗酶液攪拌均勻，加入8_25ml的戊二醛水溶液(1.5% )。磁力攪拌3.5-5.5h后取出，4°C靜置12h，過濾后用緩沖液洗滌至洗滌液檢測不到戊二醛和游離酶為止，至于通風(fēng)處干燥后，即為固化GAD。
[0014]GABA提純工藝特征為:將固化的6八0裝柱，不斷加入含有1^6、0&(:12和￥86的2-4%的谷氨酸或者谷氨酸鈉溶液，收集反應(yīng)液，離心取上清液，加入上清液體積70-85%體積的乙醇，沉淀12h，離心取上清。采用50nm的無極陶瓷膜在0.3Mpa壓力下進行超濾，得到高濃度GABA溶液。
[0015]谷氨酸或者谷氨酸鈉溶液中含有MSG 50-55mmol/L, CaCl2l.2-1.5mmol/L,VB60.4-0.7mmol/Lo
[0016]本發(fā)明的有益效果在于:提供一種用發(fā)芽糙米富集γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法，得到GABA產(chǎn)量及效率高，安全性高，本方法可以充分利用發(fā)芽糙米的價值，得到高濃度的GABA溶液可以用于食品以及添加劑的生產(chǎn)加工。

【具體實施方式】
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[0017]為了加深對本發(fā)明的理解，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步詳述，該實施例僅用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明保護范圍的限定。
[0018]實施例1
[0019]一種用發(fā)芽糙米富集γ -氨基丁酸的生產(chǎn)方法:
[0020]以糙米為原料，將糙米放在33°C下浸泡14h，然后移至溫度為32°C的發(fā)芽裝置中培充成發(fā)芽糙米，加入PBS緩沖液提取GAD，得到的溶液通過甲殼素為載體加入戊二醛固化GAD,再加入MSG、CaCl2、維生素B6 (VB6)的谷氨酸或谷氨酸鈉得到GABA反應(yīng)液，離心取上清液加入乙酸室溫靜置，再離心后加入無水乙醇，最后離心得到上清液，超濾后得到高濃度GABA溶液。
[0021]發(fā)芽糙米的原料制備工藝特征為:糙米經(jīng)篩選除雜后放在33°C下浸泡14_16h，然后移至溫度為32°C的發(fā)芽裝置中培充成發(fā)芽糙米；選用經(jīng)低氧、低溫高濕脅迫發(fā)芽的糙米，要求芽體均勻、芽長達到0.8_。
[0022]發(fā)芽糙米GAD粗提工藝特征為:取發(fā)芽糙米250g，40°C加入pH5.5提取液，水浴保溫富集。
[0023]提取液含有70mmol/L PBS，30mmol/L檸檬酸一檸檬酸三鈉(CBS)、40mmol/L醋酸-醋酸鈉(ABs)。
[0024]發(fā)芽糙米GAD固定化工藝:甲殼素100g置于1L 0.lmol/L Na2HP04以及0.05mol/L檸檬酸緩沖液(pH5.6)中，加入糙米GAD粗酶液攪拌均勻，加入8ml的戊二醛水溶液(1.5% )。磁力攪拌3.5h后取出，4°C靜置12h，過濾后用緩沖液洗滌至洗滌液檢測不到戊二醛和游離酶為止，至于通風(fēng)處干燥后，即為固化GAD。
[0025]GABA提純工藝特征為:將固化的GAD裝柱，不斷加入含有MSG、CaCljP VB 6的2%的谷氨酸或者谷氨酸鈉溶液，收集反應(yīng)液，離心取上清液，加入上清液體積70%體積的乙醇，沉淀12h，離心取上清。采用50nm的無極陶瓷膜在0.3Mpa壓力下進行超濾，得到高濃度GABA溶液。
[0026]谷氨酸或者谷氨酸鈉溶液中含有MSG 50mmol/L, CaCl2l.2mmol/L，VB60.4mmol/L。
[0027]實施例2
[0028]一種用發(fā)芽糙米富集γ -氨基丁酸的生產(chǎn)方法:
[0029]以糙米為原料，將糙米放在33°C下浸泡15h，然后移至溫度為32°C的發(fā)芽裝置中培充成發(fā)芽糙米，加入PBS緩沖液提取GAD，得到的溶液通過甲殼素為載體加入戊二醛固化GAD,再加入MSG、CaCl2、維生素B6的谷氨酸或谷氨酸鈉得到GABA反應(yīng)液，離心取上清液加入乙酸室溫靜置，再離心后加入無水乙醇，最后離心得到上清液，超濾后得到高濃度GABA溶液。
[0030]發(fā)芽糙米的原料制備工藝特征為:糙米經(jīng)篩選除雜后放在33°C下浸泡15h，然后移至溫度為32°C的發(fā)芽裝置中培充成發(fā)芽糙米；選用經(jīng)低氧、低溫高濕脅迫發(fā)芽的糙米，要求芽體均勻、芽長達到1.3_。
[0031]發(fā)芽糙米GAD粗提工藝特征為:取發(fā)芽糙米250g，40°C加入pH5.5提取液，水浴保溫富集。
[0032]提取液含有75mmol/L PBS，35mmol/L檸檬酸一檸檬酸三鈉(CBS)、45mmol/L醋酸-醋酸鈉(ABs)。
[0033]發(fā)芽糙米GAD固定化工藝:甲殼素100g置于1.5L 0.lmol/LNa2HP04以及0.05mol/L檸檬酸緩沖液(pH5.6)中，加入糙米GAD粗酶液攪拌均勻，加入17ml的戊二醛水溶液(1.5% )。磁力攪拌3.5-5.5h后取出，4°C靜置12h，過濾后用緩沖液洗滌至洗滌液檢測不到戊二醛和游離酶為止，至于通風(fēng)處干燥后，即為固化GAD。
[0034]GABA提純工藝特征為:將固化的GAD裝柱，不斷加入含有MSG、CaCljP VB 6的3%的谷氨酸或者谷氨酸鈉溶液，收集反應(yīng)液，離心取上清液，加入上清液體積78%體積的乙醇，沉淀12h，離心取上清。采用50nm的無極陶瓷膜在0.3Mpa壓力下進行超濾，得到高濃度GABA溶液。
[0035]谷氨酸或者谷氨酸鈉溶液中含有MSG 52mmol/L，CaCl2l.3mmol/L，VB60.5mmol/L。
[0036]實施例3
[0037]一種用發(fā)芽糙米富集γ -氨基丁酸的生產(chǎn)方法:
[0038]以糙米為原料，將糙米放在33°C下浸泡16h，然后移至溫度為32°C的發(fā)芽裝置中培充成發(fā)芽糙米，加入PBS緩沖液提取GAD，得到的溶液通過甲殼素為載體加入戊二醛固化GAD,再加入MSG、CaCl2、維生素B6的谷氨酸或谷氨酸鈉得到GABA反應(yīng)液，離心取上清液加入乙酸室溫靜置，再離心后加入無水乙醇，最后離心得到上清液，超濾后得到高濃度GABA溶液。
[0039]發(fā)芽糙米的原料制備工藝特征為:糙米經(jīng)篩選除雜后放在33°C下浸泡16h，然后移至溫度為32°C的發(fā)芽裝置中培充成發(fā)芽糙米；選用經(jīng)低氧、低溫高濕脅迫發(fā)芽的糙米，要求芽體均勻、芽長達到1.8_。
[0040]發(fā)芽糙米GAD粗提工藝特征為:取發(fā)芽糙米250g，40°C加入pH5.5提取液，水浴保溫富集。
[0041]提取液含有80mmol/L PBS，40mmol/L檸檬酸一檸檬酸三鈉(CBS)、50mmol/L醋酸-醋酸鈉(ABs)。
[0042]發(fā)芽糙米GAD固定化工藝:甲殼素100g置于2L 0.lmol/L Na2HP04以及0.05mol/L檸檬酸緩沖液(pH5.6)中，加入糙米GAD粗酶液攪拌均勻，加入25ml的戊二醛水溶液(1.5% )。磁力攪拌5.5h后取出，4°C靜置12h，過濾后用緩沖液洗滌至洗滌液檢測不到戊二醛和游離酶為止，至于通風(fēng)處干燥后，即為固化GAD。
[0043]GABA提純工藝特征為:將固化的GAD裝柱，不斷加入含有MSG、CaCljP VB 6的4%的谷氨酸或者谷氨酸鈉溶液，收集反應(yīng)液，離心取上清液，加入上清液體積85%體積的乙醇，沉淀12h，離心取上清。采用50nm的無極陶瓷膜在0.3Mpa壓力下進行超濾，得到高濃度GABA溶液。
[0044]谷氨酸或者谷氨酸鈉溶液中含有MSG 55mmol/L, CaCl2l.5mmol/L, VB60.7mmol/L。
【權(quán)利要求】
1.一種用發(fā)芽糙米富集γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法，其特征在于:以糙米為原料，將糙米放在33°C下浸泡14-16h，然后移至溫度為32°C的發(fā)芽裝置中培充成發(fā)芽糙米，加入PBS緩沖液提取GAD，得到的溶液通過甲殼素為載體加入戊二醛固化GAD，再加入MSG、CaCl2、維生素B6組分的谷氨酸或谷氨酸鈉得到GABA反應(yīng)液，離心取上清液加入乙酸室溫靜置，再離心后加入無水乙醇，最后離心得到上清液，超濾后得到高濃度GABA溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用發(fā)芽糙米富集γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法，其特征在于:發(fā)芽糙米的原料制備工藝特征為:糙米經(jīng)篩選除雜后放在33°C下浸泡14-16h，然后移至溫度為32°C的發(fā)芽裝置中培充成發(fā)芽糙米；選用經(jīng)低氧、低溫高濕脅迫發(fā)芽的糙米，要求芽體均勻、芽長達到0.8-1.8mm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用發(fā)芽糙米富集γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法，其特征在于:發(fā)芽糙米GAD粗提工藝特征為:取發(fā)芽糙米250g，40°C加入pH5.5提取液，水浴保溫富集。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用發(fā)芽糙米富集γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法，其特征在于:提取液含有70-80mmol/L PBS, 30-40mmol/L檸檬酸一檸檬酸三鈉、40-50mmol/L醋酸-醋酸鈉。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用發(fā)芽糙米富集γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法，其特征在于:發(fā)芽糙米GAD固定化工藝:甲殼素10g置于1-2L0.lmol/L Na2HPO4以及0.05mol/L檸檬酸緩沖液(PH5.6)中，加入糙米GAD粗酶液攪拌均勻，加入8-25ml的戊二醛水溶液(1.5% )。磁力攪拌3.5-5.5h后取出，4°C靜置12h，過濾后用緩沖液洗滌至洗滌液檢測不到戊二醛和游離酶為止，至于通風(fēng)處干燥后，即為固化GAD。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用發(fā)芽糙米富集γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法，其特征在于:GABA提純工藝特征為:將固化的GAD裝柱，不斷加入含有MSG、CaCljP VB 6的2_4%的谷氨酸或者谷氨酸鈉溶液，收集反應(yīng)液，離心取上清液，加入上清液體積70-85%體積的乙醇，沉淀12h，離心取上清。采用50nm的無極陶瓷膜在0.3Mpa壓力下進行超濾，得到高濃度GABA溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用發(fā)芽糙米富集γ-氨基丁酸的生產(chǎn)方法，其特征在于:所述的谷氨酸或者谷氨酸鈉溶液中含有MSG50-55mmol/L，CaCl2L 2-1.5mmol/L，VB60.4-0.7mmol/Lo
【文檔編號】C12P13/00GK104498548SQ201410707425
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】金京勛 申請人:蘇州嘉禧蘿生物科技有限公司