一種改性果膠的制備工藝及其抗腫瘤作用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種改性果膠（MCP）的制備工藝及應(yīng)用，尤其涉及一種不同分子量范圍的降解果膠的制備工藝及其在抗腫瘤領(lǐng)域的應(yīng)用。所公開改性果膠的制備工藝包括如下步驟：將果膠用水溶解和溶脹，紫外燈下滅菌10h，用NaOH溶液調(diào)節(jié)溶液至堿性（NaOH濃度：0.01~0.05mol/L），一定溫度（30~70°C）下降解一段時間（1~4h）后用3mol/LHCl調(diào)節(jié)至pH=3，室溫下反應(yīng)22h，產(chǎn)物經(jīng)膜透析、脫鹽、濃縮、冷凍干燥獲得改性果膠。本發(fā)明所述工藝利于獲得不同分子量分布的改性果膠。MCP具有抗胰腺癌的活性，能較好地抑制腫瘤細胞的增殖，具有較高的醫(yī)用價值。
【專利說明】一種改性果膠的制備工藝及其抗腫瘤作用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種改性果膠的制備工藝及應(yīng)用，尤其涉及一種不同分子量范圍的改 性果膠的制備工藝及其在抗腫瘤領(lǐng)域的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 果膠是從植物中提取的一種酸性多糖類高分子化合物，具有天然、綠色、營養(yǎng)、健 康等特征，經(jīng)聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織和世界衛(wèi)生組織（FA0/WH0)聯(lián)合專家委員會共同確認 的無 ADI (每日允許攝入量）限制的食品配料。目前，果膠已被廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、化 工、紡織、醫(yī)藥等領(lǐng)域，對改善人們的生活發(fā)揮了重大作用。在食品和醫(yī)藥行業(yè)，果膠具有抗 菌、止血、解毒、抗輻射、降低血糖預(yù)防糖尿病、降低膽固醇水平、防止結(jié)腸癌和前列腺癌、防 止肥胖以及抑制腸內(nèi)致病菌的繁殖的等功效，被稱為"人體健康的平衡素"。
[0003] 天然果膠的分子量較大，不能被消化吸收，從而限制了其生物學功能等多方面的 應(yīng)用。據(jù)美國癌癥研究中心和世界癌癥研究基金會統(tǒng)計，世界上約3(Γ40%的癌癥都可以通 過膳食的方式預(yù)防，而果膠作為一種天然的膳食成分，在癌癥研究領(lǐng)域引起了廣泛的關(guān)注。 目前，針對提高生物活性和生物利用度的果膠改性已成為近年來果膠應(yīng)用的趨勢，尤其是 在抗癌藥物的開發(fā)領(lǐng)域。
[0004] 對果膠改性可以通過降低果膠分子量、改變其甲酯基含量或分布、添加基團等， 尤其是降低分子量和酯化度，可使果膠在血液和小腸中被吸收，提高在體內(nèi)存留時間。改 性果膠的末端半乳糖殘基可能是通過與腫瘤表面表達的半乳糖凝集素-3 (galectin-3, Gal-3)進行識別，從而引起抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用。目前，已商品化的改性果膠作為抗腫瘤轉(zhuǎn) 移（Metastasis)輔助候選藥的有GlycoGensys公司的GCS-100、EcoNugenics公司的 PectaSol、Centrax Int.公司的改性柑橘果膠（MCP)。Platt D.及 Raz A. [Platt D·， Raz A. Modulation of the Lung Colonization of B16-F1 Melanoma Cells by Citrus Pectin[J], J. Natl. Cancer Inst·, 1992，84(6): 438-442·]報道，注射 MCP 可明顯 減少小鼠植入B16-F1黑色素瘤細胞后的肺部集落。Chang Y.等[Chang Y.，Sasak V.， Composition and Users of Galectin Antagonists, US Patent W02004/091634A1, 2004. ]，GCS-100可用于移除淋巴瘤細胞，主要是通過GCS-100與細胞外表具有保護作用的 Gal-3相互作用。一旦Gal-3被移除，化療藥物便能有效作用于淋巴瘤細胞，使得淋巴瘤細 胞凋亡。此外，張文博等[張文博，劉長忠，高林.改性柑橘果膠的制備、表征及抗癌活 性.高等學?；瘜W學報，2010，31 (5) : 964-969.]研究了的MCP對肝癌和宮頸癌有較強 的抑制作用，其分子量為2ΚΚΚΓ66000 Da，酯化度為2. 13%，分支結(jié)構(gòu)中含有鼠李糖、木糖和 半乳糖；據(jù)作者分析，果膠毛發(fā)區(qū)為鼠李糖半乳糖醛酸聚糖（RG- I )及與其相連的含末端 半乳糖的分支結(jié)構(gòu)可能是MCP抗腫瘤活性的關(guān)鍵位點。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于公開一種制備改性果膠的方法。
[0006] 本發(fā)明的目的還在于提供一種改性果膠的應(yīng)用方法。
[0007] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案包括：為了制備改性柑橘果膠(modified citrus pectin, MCP)，原料市售柑橘果膠（citrus pectin, CP)在室溫下用水溶解和溶脹， 在紫外燈下滅菌10 h，用NaOH溶液調(diào)節(jié)溶液至堿性，使NaOH濃度為0. 01?0. 05 mol/L，在 合適溫度下降解一段時間后用3 mol/L HCl調(diào)節(jié)至pH=3,室溫下反應(yīng)22小時，產(chǎn)物用透析 袋透析(截留分子量為3500Da)脫鹽，濃縮，冷凍干燥獲得改性果膠MCP。
[0008] 為了控制MCP的分子量，同時為了得到高純度、安全的產(chǎn)品，采取酸堿降解的工 藝。在酸堿降解的過程中首先控制堿的濃度在〇.〇1~〇. 05 mol/L，堿處理時間1~4 h，堿處 理溫度為3(T70 °C。堿處理后調(diào)節(jié)溶液至酸性，以降低產(chǎn)物酯化度，使其具有抗腫瘤活性。
[0009] -種由上述方法制得的具有抗腫瘤功效的降解果膠產(chǎn)品。
[0010] 本發(fā)明的有益效果是： 一、本發(fā)明將市售柑橘果膠經(jīng)酸堿處理后制備成分子量較低的果膠產(chǎn)品（市售柑橘果 膠和酸堿處理前后分子量分布見附圖1~4,分子量對比如表1所示)，可達到人體不同部位， 粘附腫瘤細胞，從而抑制腫瘤細胞的增殖，具有較高的醫(yī)用價值。
[0011] 表一市售柑橘果膠酸堿處理前后分子量對比(單位：Da)

【權(quán)利要求】
1. 一種制備具有抗腫瘤作用的改性果膠的工藝，其特征在于包括以下步驟：（1)在1份 果膠中加入150份水，混合溶解并溶脹4~16 h，紫外滅菌10 h ; (2)用NaOH溶液調(diào)節(jié)溶液 NaOH濃度在0. 01?0. 05 mol/L之間，一定溫度（3(T70°C)下降解1?4 h;(3)上述溶液用3 mol/L HC1調(diào)節(jié)至pH=3,室溫下反應(yīng)22小時；（4)產(chǎn)物經(jīng)膜透析、脫鹽、濃縮、冷凍干燥獲得 改性果膠MCP。
2. 權(quán)利要求1所述膜透析，其特征在于使用透析膜濾除小分子部分，膜的截留分子量 為 3500 Da。
3. 權(quán)利要求1所述果膠原料為柑橘果膠，也可以是蘋果、檸檬、柚子或向日葵來源的果 膠。
4. 權(quán)利要求1所述的改性果膠MCP，其特征在于控制堿降解條件獲得具有不同分子量 分布的產(chǎn)品，酸處理后酯化度降低。
5. -種由權(quán)利要求1制得的具有抗腫瘤作用的改性果膠產(chǎn)品。
【文檔編號】A23L1/09GK104371040SQ201410698032
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月28日
【發(fā)明者】張玲芝, 丁侃, 姜猛 申請人:賽珂睿德生物醫(yī)藥科技(上海)有限公司