一種副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基及其鑒定計(jì)數(shù)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種采用海水選擇性顯色培養(yǎng)基對(duì)海洋環(huán)境中副溶血弧菌進(jìn)行快速的分離、鑒定和計(jì)數(shù)分析的方法。所涉及的步驟具體包括：a、配制副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板；b、取一定量海水樣品，0.22μm濾膜過濾；c、將濾膜用無菌鑷子平移貼于步驟a中制備好的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板中，在28℃下進(jìn)行培養(yǎng)；d、將出現(xiàn)紫紅色的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)。該方法解決了目前海洋環(huán)境中病原菌副溶血弧菌在快速鑒定、計(jì)數(shù)中的空白，該方法無需進(jìn)行增菌培養(yǎng)，檢測(cè)時(shí)間短、結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
【專利說明】一種副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基及其鑒定計(jì)數(shù)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基及其鑒定計(jì)數(shù)方法。

【背景技術(shù)】
[0002]副溶血弧菌(Vibr1 parahaemolyticus, VP),是一種常見的病原菌。具體來說，它是一種革蘭氏陰性菌，屬于弧菌屬，廣泛存在于河口、海水、海底沉積物等海洋環(huán)境以及魚貝類等海產(chǎn)品中，可以以水和水生動(dòng)物為媒介感染。它不僅嚴(yán)重危害海水養(yǎng)殖業(yè)，還能引發(fā)人類胃腸炎等食物中毒病，是一種重要的病原菌。近年來，由于誤食受副溶血弧菌污染或加工不當(dāng)?shù)暮．a(chǎn)品而的食物中毒事件層出不窮，在我國部分沿海地區(qū)細(xì)菌性食物中毒中毒居首位。副溶血弧菌感染的癥狀主要有惡心、嘔吐、腹瀉以及發(fā)熱等，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)霈F(xiàn)脫水、休克昏迷甚至死亡。此外，副溶血弧菌還可能引發(fā)傷口感染，嚴(yán)重的可導(dǎo)致敗血癥進(jìn)而導(dǎo)致或者死亡。
[0003]副溶血弧菌可以以水為媒介感染進(jìn)而感染人，當(dāng)傷口接觸含有該菌的海水，可能會(huì)引發(fā)傷口感染，嚴(yán)重時(shí)可以引起敗血癥甚至死亡，嚴(yán)重威脅人類的健康和安全，是海洋環(huán)境安全的一個(gè)潛在的威脅。因此，在海洋環(huán)境特別是浴場(chǎng)環(huán)境中關(guān)于副溶血弧菌的檢測(cè)和計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)，對(duì)于浴場(chǎng)安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)評(píng)估具有重要的意義。目前，在副溶血弧菌的鑒定方面主要有傳統(tǒng)的檢測(cè)方法、分子生物學(xué)檢測(cè)方法、色譜法、免疫學(xué)檢測(cè)方法等，然而這些方法均不能夠進(jìn)行計(jì)數(shù)的統(tǒng)計(jì)分析。此外，在浴場(chǎng)環(huán)境下副溶血弧菌的鑒定和計(jì)數(shù)方面，屬空白領(lǐng)域。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)缺陷，而提供一種副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基，同時(shí)還提供了應(yīng)用該海水選擇性顯色培養(yǎng)基對(duì)副溶血弧菌進(jìn)行鑒定計(jì)數(shù)方法。
[0005]為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的所采用的技術(shù)方案是:
[0006]一種副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于，海水選擇性顯色培養(yǎng)基中每1000mL含有牛肉膏3-10g、蛋白胨5-15g、硫代硫酸鈉5_15g、檸檬酸鈉3_10g、膽堿3-10g、β-葡萄糖苷0.Ι-lg、蔗糖10-20g和瓊脂15-22g，余量為海水，自然pH。
[0007]優(yōu)選的，上述海水選擇性顯色培養(yǎng)基中每1000mL含有牛肉膏3g、蛋白胨6g、硫代硫酸鈉8g、檸檬酸鈉10g、膽堿8g、β -葡萄糖苷0.3g、蔗糖20g和瓊脂20g，余量為海水，自然pH。
[0008]應(yīng)用上述海水選擇性顯色培養(yǎng)基對(duì)副溶血弧菌進(jìn)行鑒定計(jì)數(shù)的方法，其特征在于包括以下步驟:
[0009](1)制備海水選擇性顯色培養(yǎng)平板:將海水選擇性顯色培養(yǎng)基加熱煮沸滅菌，待冷卻至50?60。。,倒平板，備用；
[0010](2)海水水樣的過濾:采用無菌取樣瓶采集新鮮海水水樣10?100mL，用0.22 μ m的濾膜對(duì)海水水樣進(jìn)行過濾；
[0011](3)貼膜培養(yǎng):采用無菌鑷子將步驟(2)中過濾后的濾膜取下，平移貼至步驟(1)中制備好的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板的表面上使濾膜與平板之間緊貼無氣泡；
[0012](4)將步驟(3)中貼膜后的培養(yǎng)基置于28°C條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為18-20h ；
[0013](5)對(duì)步驟(4)培養(yǎng)后的平板上出現(xiàn)的紫紅色菌落進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)，得到每百毫升海水樣中副溶血弧菌的個(gè)數(shù)。
[0014]所述步驟(1)海水選擇性顯色培養(yǎng)基的每1000mL中含有牛肉膏3_10g、蛋白胨5-15g、硫代硫酸鈉5-15g、朽1檬酸鈉3-10g、膽堿3_10g、β -葡萄糖苷0.Ι-lg、鹿糖10_20g和瓊脂15-22g，余量為海水，自然pH。
[0015]優(yōu)選的，所述步驟(1)海水選擇性顯色培養(yǎng)基的每1000mL中含有牛肉膏3g、蛋白胨6g、硫代硫酸鈉8g、檸檬酸鈉10g、膽堿8g、β -葡萄糖苷0.3g、蔗糖20g和瓊脂20g，余量為海水，自然pH。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:
[0017](1)以顯色培養(yǎng)基代替?zhèn)鹘y(tǒng)的分離鑒定方法，通過顯色反應(yīng)可以直接對(duì)副溶血弧菌進(jìn)行鑒定，方便快捷；
[0018](2)以海水進(jìn)行培養(yǎng)基的配制，可以促進(jìn)海水中弧菌的快速的生長(zhǎng)；
[0019](3)鑒定和計(jì)數(shù)步驟簡(jiǎn)單，從取樣到結(jié)果只需20-24小時(shí)即可完成，節(jié)省了大量的時(shí)間和操作步驟，不需要使用復(fù)雜的儀器，鑒定和計(jì)數(shù)成本底，有利于在基層檢測(cè)部門進(jìn)行推廣和應(yīng)用，大幅提聞檢測(cè)的準(zhǔn)確度和效率。

【具體實(shí)施方式】
[0020]以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0021]實(shí)施例1:
[0022]特異性實(shí)驗(yàn):海洋環(huán)境中副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基的配制:每1000mL培養(yǎng)基含有牛肉膏l(xiāng)og、蛋白胨5g、硫代硫酸鈉15g、檸檬酸鈉3g、膽堿10g、β-葡萄糖苷0.lg、蔗糖20g、瓊脂15g，海水1000mL，自然pH，將培養(yǎng)基加熱煮沸滅菌，待冷卻至50_60°C，倒平板，備用。
[0023]接種:將副溶血弧菌、霍亂弧菌、創(chuàng)傷弧菌、陰溝腸桿菌、大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌混合后進(jìn)行梯度稀釋，取102-105不同濃度的菌液涂布于步驟1中所制備的平板上，恒溫28°C培養(yǎng)18h后觀察。
[0024]結(jié)果及分析:副溶血弧菌在培養(yǎng)基中呈現(xiàn)紫紅色菌落，其余菌呈現(xiàn)藍(lán)色、綠色、白色菌落或者不生長(zhǎng)，表明該培養(yǎng)基對(duì)副溶血弧菌具有特異性，不受其它菌的影響。
[0025]實(shí)施例2:
[0026]1、一種海洋環(huán)境中中副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基的配制:每1000mL培養(yǎng)基含有牛肉膏l(xiāng)og、蛋白胨5g、硫代硫酸鈉15g、檸檬酸鈉3g、膽堿10g、β-葡萄糖苷0.lg、蔗糖20g、瓊脂15g，海水lOOOmL，自然pH ;將培養(yǎng)基加熱煮沸滅菌，待冷卻至50-60°C，倒平板，備用。
[0027]2、水樣的濾膜過濾:2014年8月用無菌取樣瓶采集秦皇島北戴河老虎石浴場(chǎng)水面以下0.5m新鮮海水100mL，0.22 μ m濾膜對(duì)水樣進(jìn)行過濾；
[0028]3、貼膜培養(yǎng):采用無菌鑷子將步驟2中過濾后濾膜取下，平移貼至步驟1中制備好的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板的表面上使濾膜與平板之間緊貼無氣泡；
[0029]4、將步驟3中貼膜后的培養(yǎng)基置于28°C條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為18_20h ；
[0030]5、對(duì)步驟4培養(yǎng)后的平板上出現(xiàn)的紫紅色菌落進(jìn)行結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)，得到海水樣中副溶血弧菌的個(gè)數(shù)。
[0031]實(shí)施例2的鑒定和計(jì)數(shù)結(jié)果:通過鑒定發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)平板上出現(xiàn)紫紅色、綠色、黃色、白色菌落，統(tǒng)計(jì)紫紅色菌落個(gè)數(shù)為123個(gè)，因此得到每升浴場(chǎng)海水中副溶血弧菌個(gè)數(shù)為1230個(gè)。本實(shí)施例由于氣候、浴場(chǎng)人數(shù)以及海水水質(zhì)的不同最終結(jié)果可能存在差異。
[0032]實(shí)施例3:
[0033]1、一種海洋環(huán)境中副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基的配制:每1000mL培養(yǎng)基含有牛肉膏5g、蛋白胨10g、硫代硫酸鈉6g、朽1檬酸鈉5g、膽堿5g、β -葡萄糖苷0.3g、鹿糖15g、瓊脂20g，海水lOOOmL，自然pH，將培養(yǎng)基加熱煮沸滅菌，待冷卻至50_60°C，倒平板，備用;
[0034]2、水樣的濾膜過濾:2014年8月用無菌取樣瓶采集秦皇島北戴河老虎石浴場(chǎng)水面以下0.5m新鮮海水10mL,用0.22 μ m的濾膜對(duì)海水水樣進(jìn)行過濾；
[0035]3、貼膜培養(yǎng):采用無菌鑷子將步驟2中過濾后濾膜取下，平移貼至步驟1中制備好的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板的表面上使濾膜與平板之間緊貼無氣泡；
[0036]4、將步驟3中貼膜后的培養(yǎng)基置于28°C條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為18_20h ；
[0037]5、對(duì)步驟4培養(yǎng)后的平板上出現(xiàn)的紫紅色菌落進(jìn)行結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)，得到海水樣中副溶血弧菌的個(gè)數(shù)。
[0038]本實(shí)施例3的鑒定和計(jì)數(shù)結(jié)果:通過鑒定發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)平板上出現(xiàn)紫紅色、綠色、黃色、白色菌落，統(tǒng)計(jì)紫紅色菌落個(gè)數(shù)為15個(gè)，因此得到每升浴場(chǎng)海水中副溶血弧菌個(gè)數(shù)為1500個(gè)。本實(shí)施例由于氣候、浴場(chǎng)人數(shù)以及海水水質(zhì)的不同最終結(jié)果可能存在差異。
[0039]實(shí)施例4:
[0040]1、一種海洋環(huán)境中副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基的配制:每1000mL培養(yǎng)基含有牛肉膏3g、蛋白胨5g、硫代硫酸鈉8g、朽1檬酸鈉10g、膽堿8g、β -葡萄糖苷0.6g、鹿糖20g、瓊脂18g，海水lOOOmL，自然pH，將培養(yǎng)基加熱煮沸滅菌，待冷卻至50_60°C，倒平板，備用;
[0041]2、水樣的濾膜過濾:2014年8月用無菌取樣瓶采集秦皇島北戴河老虎石浴場(chǎng)水面以下0.5m新鮮海水100mL,用0.22 μ m的濾膜對(duì)海水水樣進(jìn)行過濾；
[0042]3、貼膜培養(yǎng):采用無菌鑷子將步驟2中過濾后濾膜取下，平移貼至步驟1中制備好的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板的表面上使濾膜與平板之間緊貼無氣泡；
[0043]4、將步驟3中貼膜后的培養(yǎng)基置于28°C條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為18_20h ；
[0044]5、對(duì)步驟4培養(yǎng)后的平板上出現(xiàn)的紫紅色菌落進(jìn)行結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)，得到海水樣中副溶血弧菌的個(gè)數(shù)。
[0045]本實(shí)施例4的鑒定和計(jì)數(shù)結(jié)果:通過鑒定發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)平板上出現(xiàn)紫紅色、綠色、黃色、白色菌落，統(tǒng)計(jì)紫紅色菌落個(gè)數(shù)為131個(gè)，因此得到每升浴場(chǎng)海水中副溶血弧菌個(gè)數(shù)為1310個(gè)。本實(shí)施例由于氣候、浴場(chǎng)人數(shù)以及海水水質(zhì)的不同最終結(jié)果可能存在差異。
[0046]實(shí)施例5:
[0047]作為最優(yōu)實(shí)施例，實(shí)施例5浴場(chǎng)水樣中副溶血弧菌的鑒定和計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)具體實(shí)施方案為:
[0048]海洋環(huán)境中副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基，每lOOOmL培養(yǎng)基含有牛肉膏3g、蛋白胨6g、硫代硫酸鈉8g、朽1檬酸鈉10g、膽堿8g、β -葡萄糖苷0.3g、鹿糖20g、瓊脂20g，海水 lOOOmL,自然 pH。
[0049]海洋環(huán)境中副溶血弧菌的快速鑒定和計(jì)數(shù)方法包括以下步驟:
[0050]1、制備海水選擇性顯色培養(yǎng)平板:將培養(yǎng)基加熱煮沸滅菌，待冷卻至50-60°C，倒平板，備用；
[0051]2、水樣的濾膜過濾:2014年8月用無菌取樣瓶采集秦皇島北戴河老虎石浴場(chǎng)水面以下0.5m新鮮海水100mL，0.22 μ m的濾膜對(duì)海水水樣進(jìn)行過濾；
[0052]3、貼膜培養(yǎng):采用無菌鑷子將步驟2中過濾后濾膜取下，平移貼至步驟1中制備好的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板的表面上使濾膜與平板之間緊貼無氣泡；
[0053]4、將步驟3中貼膜后的培養(yǎng)基置于28°C條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為18h ；
[0054]5、培養(yǎng)后平板中出現(xiàn)不同顏色的菌落，對(duì)其中出現(xiàn)的紫紅色菌落進(jìn)行結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)，得到每百毫升海水樣中副溶血弧菌的個(gè)數(shù)。
[0055]本實(shí)施例5的鑒定和計(jì)數(shù)結(jié)果:通過鑒定發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)平板上出現(xiàn)紫紅色、綠色、黃色、白色菌落，統(tǒng)計(jì)紫紅色菌落個(gè)數(shù)為128個(gè)，因此得到每升浴場(chǎng)海水中副溶血弧菌個(gè)數(shù)為1280個(gè)。本實(shí)施例由于氣候、浴場(chǎng)人數(shù)以及海水水質(zhì)的不同最終結(jié)果可能存在差異。
[0056]實(shí)施例6:
[0057]對(duì)海水養(yǎng)殖區(qū)中的副溶血弧菌進(jìn)行鑒定和計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)
[0058]1、制備海水選擇性顯色培養(yǎng)平板:將培養(yǎng)基加熱煮沸滅菌，待冷卻至50-60°C，倒平板，備用；
[0059]2、取樣:2014年8月，無菌取樣瓶采集秦皇島近岸海域養(yǎng)殖區(qū)新鮮海水1L，立即送回實(shí)驗(yàn)室備用；
[0060]3、水樣的濾膜過濾:在無菌條件下取海水10mL，0.22 μ m濾膜過濾；
[0061]4、貼膜培養(yǎng):采用無菌鑷子將步驟2中過濾后濾膜取下，平移貼至步驟1中制備好的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板的表面上使濾膜與平板之間緊貼無氣泡；
[0062]5、將步驟3中貼膜后的培養(yǎng)基置于28°C條件下培養(yǎng)18h ；
[0063]6、結(jié)果及分析:培養(yǎng)后平板中出現(xiàn)不同顏色的菌落，其中副溶血弧菌呈現(xiàn)紫紅色，表明在所檢測(cè)的海水養(yǎng)殖區(qū)環(huán)境中存在副溶血弧菌，統(tǒng)計(jì)其中出現(xiàn)的紫紅色菌落，得到每升近岸海域養(yǎng)殖區(qū)水樣中副溶血弧菌的個(gè)數(shù)為4300個(gè)。
[0064]實(shí)施例7:
[0065]近岸海域副溶血弧菌的鑒定和計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)
[0066]1、制備海水選擇性顯色培養(yǎng)平板:將培養(yǎng)基加熱煮沸滅菌，待冷卻至50-60°C，倒平板，備用；
[0067]2、取樣:2014年8月，秦皇島近岸海域設(shè)置8個(gè)取樣站位，用無菌取樣瓶采集近岸海域每個(gè)站位新鮮海水1L，立即送回實(shí)驗(yàn)室備用；
[0068]3、水樣的濾膜過濾:在無菌條件下取海水100mL，0.22 μ m濾膜過濾；
[0069]4、貼膜培養(yǎng):采用無菌鑷子將步驟2中過濾后濾膜取下，平移貼至步驟1中制備好的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板的表面上使濾膜與平板之間緊貼無氣泡；
[0070]5、將步驟3中貼膜后的培養(yǎng)基置于28°C條件下培養(yǎng)18h ；
[0071]6、結(jié)果及分析:培養(yǎng)后所有平板中均出現(xiàn)不同顏色的菌落，其中副溶血弧菌呈現(xiàn)紫紅色，表明在所檢測(cè)的近岸海域環(huán)境中存在副溶血弧菌，統(tǒng)計(jì)其中出現(xiàn)的紫紅色菌落，得到每升近岸海域水樣中副溶血弧菌的個(gè)數(shù)為1450個(gè)。
[0072]對(duì)比例1:
[0073]自來水中副溶血弧菌的鑒定和計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)
[0074]1、制備海水選擇性顯色培養(yǎng)平板:將培養(yǎng)基加熱煮沸滅菌，待冷卻至50-60°C，倒平板，備用；
[0075]2、取樣:2014年8月，用無菌取樣瓶采集天津大學(xué)自來水1L，立即送回實(shí)驗(yàn)室備用；
[0076]3、水樣的濾膜過濾:在無菌條件下取天津大學(xué)自來水lOOmL,用0.22 μ m濾膜過濾；
[0077]4、貼膜培養(yǎng):采用無菌鑷子將步驟2中過濾后濾膜取下，平移貼至步驟1中制備好的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板的表面上使濾膜與平板之間緊貼無氣泡；
[0078]5、將步驟3中貼膜后的培養(yǎng)基置于28°C條件下培養(yǎng)18h ；
[0079]6、結(jié)果及分析:培養(yǎng)后所有平板中未有紫紅色菌落出現(xiàn)，表明自來水中不存在副溶血弧菌。
[0080]對(duì)比例2:
[0081]浴場(chǎng)中副溶血弧菌的鑒定和計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)
[0082]1、制備海水選擇性顯色培養(yǎng)平板:將培養(yǎng)基加熱煮沸滅菌，待冷卻至50-60°C，倒平板，備用；
[0083]2、取樣:2014年8月，在天津海河中用無菌取樣瓶采集水樣1L，立即送回實(shí)驗(yàn)室備用；
[0084]3、水樣的濾膜過濾:在無菌條件下取天津海河水lOOmL，用0.22 μ m的濾膜過濾；
[0085]4、貼膜培養(yǎng):采用無菌鑷子將步驟2中過濾后濾膜取下，平移貼至步驟1中制備好的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板的表面上使濾膜與平板之間緊貼無氣泡；
[0086]5、將步驟3中貼膜后的培養(yǎng)基置于28°C條件下培養(yǎng)18h ；
[0087]6、結(jié)果及分析:培養(yǎng)后所有平板中未有紫紅色菌落出現(xiàn)，表明自來水中不存在副溶血弧菌。
[0088]需要說明的是，實(shí)施例中所過濾的水樣量可根據(jù)具體水質(zhì)情況酌情增減，其目的是為了便于對(duì)副溶血弧菌進(jìn)行鑒定計(jì)數(shù)。
[0089]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于:海水選擇性顯色培養(yǎng)基中每100mL含有牛肉膏3-10g、蛋白胨5-15g、硫代硫酸鈉5_15g、檸檬酸鈉3_10g、膽堿3-10g、β-葡萄糖苷0.Ι-lg、蔗糖10-20g和瓊脂15-22g，余量為海水，自然pH。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基，其特征在于:
3.應(yīng)用權(quán)利要求1或2所述的一種副溶血弧菌的海水選擇性顯色培養(yǎng)基對(duì)副溶血弧菌進(jìn)行鑒定計(jì)數(shù)的方法，其特征在于包括以下步驟: (1)制備海水選擇性顯色培養(yǎng)平板:將海水選擇性顯色培養(yǎng)基加熱煮沸滅菌，待冷卻至50?60°C,倒平板,備用； (2)海水水樣的過濾:采用無菌取樣瓶采集新鮮海水水樣10?10mL,用0.22 μ m的濾膜對(duì)海水水樣進(jìn)行過濾； (3)貼膜培養(yǎng):采用無菌鑷子將步驟(2)中過濾后的濾膜取下，平移貼至步驟(I)中制備好的海水選擇性顯色培養(yǎng)平板的表面上，使濾膜與海水選擇性顯色培養(yǎng)平板之間緊貼無氣泡； (4)將步驟(3)中貼膜后的培養(yǎng)基置于28°C條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間為18-20h； (5)對(duì)步驟(4)培養(yǎng)后的平板上出現(xiàn)的紫紅色菌落進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)，得到每百毫升海水樣中副溶血弧菌的個(gè)數(shù)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的對(duì)副溶血弧菌進(jìn)行鑒定計(jì)數(shù)的方法，其特征在于:所述步驟(I)海水選擇性顯色培養(yǎng)基的每100mL中含有牛肉膏3-10g、蛋白胨5_15g、硫代硫酸鈉5_15g、檸檬酸鈉3-10g、膽堿3-10g、β-葡萄糖苷0.Ι-lg、蔗糖10_20g和瓊脂15_22g，余量為海水，自然pH。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的對(duì)副溶血弧菌進(jìn)行鑒定計(jì)數(shù)的方法，其特征在于:所述步驟(I)海水選擇性顯色培養(yǎng)基的每100mL中含有牛肉膏3g、蛋白胨6g、硫代硫酸鈉8g、檸檬酸鈉10g、膽堿8g、β-葡萄糖苷0.3g、蔗糖20g和瓊脂20g，余量為海水，自然pH。
【文檔編號(hào)】C12Q1/06GK104293880SQ201410589504
【公開日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年10月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月28日
【發(fā)明者】王中華 申請(qǐng)人:天津大學(xué)