一種肉蓯蓉多肽提取物、制備方法及其用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種從肉蓯蓉中提取肉蓯蓉多肽提取物的方法，及其由此方法獲得的肉蓯蓉多肽提取物和該肉蓯蓉多肽提取物的用途。本發(fā)明利用肉蓯蓉渣，經(jīng)烘干粉碎，再經(jīng)過堿溶酸沉法處理、酶解、超濾純化，最終得到的分子量為500-10000道爾頓的肉蓯蓉多肽，并對(duì)肉蓯蓉多肽治療癌癥及癌癥化療引起的腹瀉的功效進(jìn)行研究。本發(fā)明提高了珍稀瀕危藥材肉從蓉的利用率，使其產(chǎn)生更高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，同時(shí)為廣大腫瘤患者提供了一種高效低毒、價(jià)格低廉，易于推廣的可用于減輕癌癥化療相關(guān)性腹瀉并起化療增效作用的藥物。
【專利說明】一種肉蓯蓉多肽提取物、制備方法及其用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種從肉蓯蓉中提取肉蓯蓉多肽提取物的方 法，及其由此方法獲得的肉蓯蓉多肽提取物和該肉蓯蓉多肽提取物的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 肉灰蓉（Cistanche deserticola Y. C. Ma)是列當(dāng)科（Orobanchaeceae)肉灰蓉 屬（Cistanche)植物肉灰蓉干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖，叉名精輿、縱蓉、肉松蓉、地精、大蕓，有 "沙漠人參"之美譽(yù)，始記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，是常用中藥之一，具有補(bǔ)腎壯陽、填 精補(bǔ)髓、養(yǎng)血潤(rùn)燥、悅色延年等功效。本屬植物全球約18個(gè)種，我國(guó)約4個(gè)種1個(gè)變種，分 別為肉蓯蓉、鹽生肉蓯蓉、管花肉蓯蓉、白花鹽肉蓯蓉及沙蓯蓉，除沙蓯蓉外，其他4種主產(chǎn) 于我國(guó)西北各省區(qū)。
[0003] 20世紀(jì)80年代初日本學(xué)者開始研究肉蓯蓉的化學(xué)成分。到20世紀(jì)80年代后 期，國(guó)內(nèi)學(xué)者開始研究我國(guó)產(chǎn)出的肉蓯蓉的化學(xué)成分。隨著提取分離和檢測(cè)技術(shù)的飛速發(fā) 展，已分離得到苯乙醇苷類、環(huán)烯醚萜類、揮發(fā)性成分、木脂素類、多糖、生物堿等多種化學(xué) 成分。
[0004] 現(xiàn)代藥理學(xué)研究也證明肉蓯蓉除具有補(bǔ)腎壯陽、潤(rùn)腸通便作用外，還具有抗衰老 的作用，并且沒有發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)。近年來肉蓯蓉廣泛應(yīng)用于各類藥品及保健品中。
[0005] 肉從蓉傳統(tǒng)的初加工方法有晾曬法、鹽漬法、窖藏法等，這些方法費(fèi)工費(fèi)時(shí)，受自 然條件的影響，且質(zhì)量不穩(wěn)定，嚴(yán)重影響藥材的利用率及療效；并且，傳統(tǒng)的初加工方法己 遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足產(chǎn)地大量藥材初加工的需要。因此，如何提高珍稀瀕危藥材肉從蓉的利用率， 使其產(chǎn)生更高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，是巫待解決的關(guān)鍵問題。
[0006] 中國(guó)專利CN102349650A公開了 一種提高肉蓯蓉有效成分溶出率的方法，該發(fā)明 主要通過新鮮的肉蓯蓉經(jīng)過快速清洗，然后切分、檸檬酸液浸泡、微波滅酶后，加入淀粉酶 和果膠酶進(jìn)行酶解，然后加入助濾劑，對(duì)酶解液進(jìn)行分離。該專利解決的技術(shù)問題是提高出 汁率，使出汁率由54%提高到65%，從而提高了肉蓯蓉有效成分的溶出率，該專利沒有給出 本發(fā)明肉蓯蓉多肽及其制備方法的技術(shù)啟示。
[0007] 本專利采用塔克拉瑪干沙漠優(yōu)質(zhì)肉蓯蓉為原料，對(duì)其鮮藥材進(jìn)行剝皮處理，所得 的肉蓯蓉皮進(jìn)行干燥再采用乙醇進(jìn)行提取，可以得到傳統(tǒng)的化學(xué)成分；對(duì)果肉采用榨汁機(jī) 進(jìn)行榨汁，得到水提取物；對(duì)榨汁后所得到的肉蓯蓉渣進(jìn)行烘干處理，粉碎成粉，再經(jīng)過堿 溶酸沉法處理、酶解、超濾純化，最終得到的分子量為500-10000道爾頓的多肽，并進(jìn)行治 療癌癥及癌癥化療引起的腹瀉功效的研究，以及與中國(guó)專利CN103585546A公開的中藥組 合物配伍使用的研究。
[0008] 目前癌癥已成為人類面臨的一大殺手，死亡率僅次于心血管疾病，而且呈逐年上 升的趨勢(shì)。腫瘤患者進(jìn)行化療，雖然有一定的療效，但化療后大部分患者會(huì)出現(xiàn)不同程度的 副作用，其中化療藥單用或聯(lián)合用均會(huì)引起患者腹瀉等毒副反應(yīng)，腫瘤化療后腹瀉又叫化 療相關(guān)性腹瀉。近年來隨著化療藥物如5-氟尿嘧啶、紫杉烷類、羥基喜樹堿、伊立替康、希 羅達(dá)等的面世及推廣應(yīng)用，化療相關(guān)性腹瀉的發(fā)生率逐年提高，而且若不進(jìn)行積極治療，易 導(dǎo)致患者脫水、營(yíng)養(yǎng)不良、血清電解質(zhì)紊亂、酸堿平衡失調(diào)等，不僅對(duì)機(jī)體的康復(fù)帶來極大 的不利，也給周期性化療帶來一定的困難，因此對(duì)化療相關(guān)性腹瀉的有效治療已成為腫瘤 患者整體治療的重要組成部分。
[0009]目前尚無對(duì)抗癌癥化療具有減輕腹瀉及增效作用的中成藥，中國(guó)專利 CN103585546A公開的中藥組合物在治療癌癥化療引起的腹瀉的作用機(jī)理不明確，藥效不明 顯，因此在此中藥組合物的輔助下，研發(fā)一種高效低毒、價(jià)格低廉，易于推廣的可用于減輕 癌癥化療相關(guān)性腹瀉并起化療增效作用的藥物組合物顯得尤其重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供肉蓯蓉多肽提取物、制 備方法及其用途。本發(fā)明提供的一種從肉蓯蓉粉中制備肉蓯蓉多肽提取物的方法，包括以 下步驟： (1) 往肉蓯蓉粉加入NaOH溶液至pH值為8-10,在45-55°C下浸提時(shí)間40-60min，然后 離心處理，即得肉蓯蓉蛋白； (2) 使用步驟（1)得到的肉蓯蓉蛋白配置底物濃度5-9%的肉蓯蓉蛋白反應(yīng)體系，調(diào)節(jié) 肉蓯蓉蛋白反應(yīng)體系的pH值至6. 0-7. 0,控制溫度60-70°C，加入酶底比3. 0-4. 0%的酶解 蛋白酶，恒溫?cái)嚢杳附?，酶解時(shí)間為3. 0-4. 0h，即得酶解液，所述的酶解蛋白酶為堿性蛋白 酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、果膠酶和淀粉酶中的至少一種； (3) 對(duì)步驟（2)得到的酶解液進(jìn)行12-17min的煮沸滅酶處理，冷卻后使用2 mol/L的 HCL溶液調(diào)至pH值至中性，然后離心除去沉淀，取上清液，上清液含有肉蓯蓉蛋白肽； (4) 將步驟（3)所得到的含有肉蓯蓉蛋白肽的上清液，在溫度為40-50°C，pH值 為7.0-9. 0,壓力為0.7-0. 9MPa下，選擇500Da和IOOOODa的超濾膜對(duì)肉蓯蓉蛋白肽中 500-10000Da分子量的肉蓯蓉多肽進(jìn)行分離，獲得分離液，60°C下濃縮得到相對(duì)密度為 1. 20的浸膏，即為肉蓯蓉多肽提取物。
[0011] 進(jìn)一步地，本發(fā)明提高了一種最優(yōu)的從肉蓯蓉粉中制備肉蓯蓉多肽提取物的方 法，包含以下步驟： (1) 往肉蓯蓉粉加入NaOH溶液至pH值為9,在50°C下浸提時(shí)間50min，然后離心處理， 即得肉蓯蓉蛋白； (2) 使用步驟（1)得到的肉蓯蓉蛋白配置底物濃度7%的肉蓯蓉蛋白反應(yīng)體系，調(diào)節(jié)肉 蓯蓉蛋白反應(yīng)體系的pH值至6. 5,控制溫度65°C，加入酶底比3. 5%的酶解蛋白酶，恒溫?cái)?拌酶解，酶解時(shí)間為3. 5h，即得酶解液，所述的酶解蛋白酶為木瓜蛋白酶； (3) 對(duì)步驟（2)得到的酶解液進(jìn)行15min的煮沸滅酶處理，冷卻后使用2 mol/L的HCL 溶液調(diào)至pH值至中性，然后離心除去沉淀，取上清液，上清液含有肉蓯蓉蛋白肽； (4) 將步驟（3)所得到的含有肉蓯蓉蛋白肽的上清液，在溫度為45°C，pH值為8. 0,壓 力為0. 8MPa下，選擇500Da和IOOOODa的超濾膜對(duì)肉蓯蓉蛋白肽中500-10000Da分子量的 肉蓯蓉多肽進(jìn)行分離，獲得分離液，60°C下濃縮得到相對(duì)密度為1.20的浸膏，即為肉蓯蓉 多肽提取物。
[0012] 經(jīng)過檢測(cè)，上述方法獲得的肉蓯蓉多肽提取中的活性多肽的含量為99%，活性多肽 的分子量范圍在500-10000道爾頓之間。
[0013] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種按照上述方法從肉蓯蓉粉獲得的肉蓯蓉多肽提 取物，肉蓯蓉多肽提取物中含有肉蓯蓉多肽99%，并且肉蓯蓉多肽的分子量在500-10000 道爾頓之間。
[0014] 本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供肉蓯蓉多肽提取物在用于制備治療癌癥藥物中的 用途。
[0015] 本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供肉蓯蓉多肽提取物在用于制備治療癌癥化療引起 的腹瀉的藥物中的用途。
[0016] 進(jìn)一步的，所述的藥物為由如下重量份的原料組成的組合物：肉蓯蓉多肽提取物 5-16份、山楂7-9份、紅曲5-8份、萊菔子6-14份、黃連3-9份、絞股藍(lán)5-9份、桂花5-12 份、三七5-14份、丹參8-12份、黃芪9-15份、砂仁6-14份、黃芩4-6份、飛仙藤6-12份、薔 薇根5-12份、干姜5-9份和蓽拔6-10份。
[0017] 再進(jìn)一步的，所述的藥物的制備方法包含下述步驟：取處方量的上述藥材碎成細(xì) 粉，肉蓯蓉多肽提取物除外，按照粗粉總重量的5-8倍加入體積濃度為75-90%的乙醇溶液， 回流提取三次，回流時(shí)間為2-4h，過濾，所得的濾液中加入肉蓯蓉水提取物，60°C下濃縮得 到相對(duì)密度為1. 20的浸膏，即得到本發(fā)明藥物浸膏。
[0018] 再進(jìn)一步的，所述的藥物為散劑、水劑、片劑或膠囊劑。
[0019] 總之，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下突出的技術(shù)優(yōu)勢(shì)： (1)本發(fā)明采用肉蓯蓉為原料，對(duì)其鮮藥材進(jìn)行剝皮處理，所得的肉蓯蓉皮進(jìn)行干燥 再采用乙醇進(jìn)行提取，可以得到傳統(tǒng)的化學(xué)成分；對(duì)果肉采用榨汁機(jī)進(jìn)行榨汁，得到水提取 物；對(duì)榨汁后所得到的肉蓯蓉渣進(jìn)行烘干處理，粉碎成粉，再經(jīng)過堿溶酸沉法處理、酶解、超 濾純化，最終得到的分子量為500-10000道爾頓的多肽，制備得到了有重大的藥物價(jià)值的 肉蓯蓉多肽提取物，提高了珍稀瀕危藥材肉從蓉的利用率，使其產(chǎn)生更高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
[0020] (2)本發(fā)明采用酶解法制備生物活性肽，并仿效人體消化道內(nèi)的正常消化條件將 肉蓯蓉蛋白切割成特定的水解片段，條件溫和，較無機(jī)酸、堿水解有較大的優(yōu)勢(shì)，避免了水 解過程中的環(huán)境污染問題。
[0021] (3)本發(fā)明利用超濾手段定向收集500-10000道爾頓內(nèi)的多肽片段，并使所得多 肽組合物中該分子量范圍內(nèi)的多肽純度高達(dá)99%，且工藝穩(wěn)定，重現(xiàn)性高。
[0022] (4)本發(fā)明還通過藥效實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明肉蓯蓉多肽提取物和本發(fā)明藥物可以顯著 抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，表明本發(fā)明的藥物對(duì)癌癥有顯著的治療作用。并且肉蓯蓉多肽提取物 和相應(yīng)的藥物用于癌癥以及癌癥化療引起的腹瀉的治療時(shí)療效確切，不良反應(yīng)和副作用均 明顯降低，其與現(xiàn)有治療癌癥化療引起的腹瀉的中藥在止瀉方面具有顯著的協(xié)同作用，并 且可以大幅度減少癌癥化療引發(fā)的腹瀉癥狀，提高癌癥病人對(duì)于化療的接受度和用藥依從 性。

【具體實(shí)施方式】
[0023] 以下通過具體實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但本發(fā)明不僅僅限于以下實(shí)施例。在本 發(fā)明的范圍內(nèi)或者在不脫離本發(fā)明的內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)，對(duì)本發(fā)明所述的肉蓯蓉多肽提 取物、制備方法和用途僅僅進(jìn)行名稱上的變更、替換，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見 的，它們都被視為包括在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
[0024] 第一部分、肉蓯蓉多肽提取物的制備 實(shí)施例1、一種從肉蓯蓉粉中制備肉蓯蓉多肽提取物的方法： (1) 往肉蓯蓉粉加入NaOH溶液至pH值為10,在45°C下浸提時(shí)間60min，然后離心處理， 即得肉蓯蓉蛋白； (2) 使用步驟（1)得到的肉蓯蓉蛋白配置底物濃度5%的肉蓯蓉蛋白反應(yīng)體系，調(diào)節(jié)肉 蓯蓉蛋白反應(yīng)體系的pH值至6. 0,控制溫度70°C，加入酶底比4. 0%的酶解蛋白酶，恒溫?cái)?拌酶解，酶解時(shí)間為4. 0h，即得酶解液，所述的酶解蛋白酶為木瓜蛋白酶； (3) 對(duì)步驟（2)得到的酶解液進(jìn)行17min的煮沸滅酶處理，冷卻后使用2 mol/L的HCL 溶液調(diào)至pH值至中性，然后離心除去沉淀，取上清液，上清液含有肉蓯蓉蛋白肽； (4) 將步驟（3)所得到的含有肉蓯蓉蛋白肽的上清液，在溫度為40°C，pH值為7. 0,壓 力為0. 7MPa下，選擇500Da和IOOOODa的超濾膜對(duì)肉蓯蓉蛋白肽中500-10000Da分子量的 肉蓯蓉多肽進(jìn)行分離，獲得分離液，60°C下濃縮得到相對(duì)密度為1.20的浸膏，即為肉蓯蓉 多肽提取物。
[0025] 經(jīng)過檢測(cè)，上述方法獲得的肉蓯蓉多肽提取物中的活性多肽的含量為92%。
[0026] 實(shí)施例2、一種從肉蓯蓉粉中制備肉蓯蓉多肽提取物的方法： (1) 往肉蓯蓉粉加入NaOH溶液至pH值為8,在55°C下浸提時(shí)間40min，然后離心處理， 即得肉蓯蓉蛋白； (2) 使用步驟（1)得到的肉蓯蓉蛋白配置底物濃度9%的肉蓯蓉蛋白反應(yīng)體系，調(diào)節(jié)肉 蓯蓉蛋白反應(yīng)體系的pH值至7. 0,控制溫度60°C，加入酶底比3. 0%的酶解蛋白酶，恒溫?cái)?拌酶解，酶解時(shí)間為3. 0h，即得酶解液，所述的酶解蛋白酶為木瓜蛋白酶； (3) 對(duì)步驟（2)得到的酶解液進(jìn)行15min的煮沸滅酶處理，冷卻后使用2 mol/L的HCL 溶液調(diào)至pH值至中性，然后離心除去沉淀，取上清液，上清液含有肉蓯蓉蛋白肽； (4) 將步驟（3)所得到的含有肉蓯蓉蛋白肽的上清液，在溫度為50°C，pH值為9. 0,壓 力為0. 9MPa下，選擇500Da和IOOOODa的超濾膜對(duì)肉蓯蓉蛋白肽中500-10000Da分子量的 肉蓯蓉多肽進(jìn)行分離，獲得分離液，60°C下濃縮得到相對(duì)密度為1.20的浸膏，即為肉蓯蓉 多肽提取物。
[0027] 經(jīng)過檢測(cè)，上述方法獲得的肉蓯蓉多肽提取物中的活性多肽的含量在93%。
[0028] 實(shí)施例3、一種從肉蓯蓉粉中制備肉蓯蓉多肽提取物的方法： (1) 往肉蓯蓉粉加入NaOH溶液至pH值為9,在50°C下浸提時(shí)間50min，然后離心處理， 即得肉蓯蓉蛋白； (2) 使用步驟（1)得到的肉蓯蓉蛋白配置底物濃度7%的肉蓯蓉蛋白反應(yīng)體系，調(diào)節(jié)肉 蓯蓉蛋白反應(yīng)體系的pH值至6. 5,控制溫度65°C，加入酶底比3. 5%的酶解蛋白酶，恒溫?cái)?拌酶解，酶解時(shí)間為3. 5h，即得酶解液，所述的酶解蛋白酶為木瓜蛋白酶； (3) 對(duì)步驟（2)得到的酶解液進(jìn)行15min的煮沸滅酶處理，冷卻后使用2 mol/L的HCL 溶液調(diào)至pH值至中性，然后離心除去沉淀，取上清液，上清液含有肉蓯蓉蛋白肽； (4) 將步驟（3)所得到的含有肉蓯蓉蛋白肽的上清液，在溫度為45°C，pH值為8. 0,壓 力為0. 8MPa下，選擇500Da和IOOOODa的超濾膜對(duì)肉蓯蓉蛋白肽中500-10000Da分子量的 肉蓯蓉多肽進(jìn)行分離，獲得分離液，60°C下濃縮得到相對(duì)密度為1.20的浸膏，即為肉蓯蓉 多肽提取物。
[0029] 經(jīng)過檢測(cè)，上述方法獲得的肉蓯蓉多肽提取物中的活性多肽的含量在99%。
[0030] 第二部分、本發(fā)明含有肉蓯蓉多肽提取物的藥物制劑 實(shí)施例4、本發(fā)明藥物及制備工藝： 藥物組分的重量份：肉蓯蓉多肽提取物5份、山楂7份、紅曲5份、萊菔子6份、黃連3 份、絞股藍(lán)5份、桂花5份、三七5份、丹參8份、黃苗9份、砂仁6份、黃苳4份、飛仙藤6份、 薔薇根5份、干姜5份和蓽拔6份。取處方量的上述藥材碎成細(xì)粉，肉蓯蓉多肽提取物除外， 按照粗粉總重量的5倍加入體積濃度為75%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時(shí)間為3h，過 濾，所得的濾液中加入肉蓯蓉水提取物，60°C下濃縮得到相對(duì)密度為1.20的浸膏，即得到 本發(fā)明藥物浸膏。通過本領(lǐng)域常用制劑制備工藝可制備得到臨床上常用中藥藥物劑型，如 片劑或膠囊劑。
[0031] 實(shí)施例5、本發(fā)明藥物及制備工藝： 藥物組分的重量份：肉蓯蓉多肽提取物16份、山楂9份、紅曲8份、萊菔子14份、黃連 9份、絞股藍(lán)9份、桂花12份、三七14份、丹參12份、黃芪15份、砂仁14份、黃芩6份、飛仙 藤12份、薔薇根12份、干姜9份和蓽拔10份。取處方量的上述藥材碎成細(xì)粉，肉蓯蓉多肽 提取物除外，按照粗粉總重量的7倍加入體積濃度為90%的乙醇溶液，回流提取三次，回流 時(shí)間為2h，過濾，所得的濾液中加入肉蓯蓉水提取物，60°C下濃縮得到相對(duì)密度為1. 20的 浸膏，即得到本發(fā)明藥物浸膏。通過本領(lǐng)域常用制劑制備工藝可制備得到臨床上常用中藥 藥物劑型，如片劑或膠囊劑。
[0032] 對(duì)比例一、一種治療癌癥化療引起的腹瀉的中藥組合物及制備工藝： 選取CN103585546A中藥組合物在制備治療癌癥化療引起的腹瀉藥物中的用途的實(shí)施 例6。
[0033] 第三部分、本發(fā)明肉蓯蓉多肽提取物的藥效學(xué)研究 實(shí)施例6、本發(fā)明藥物對(duì)S180荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用 1、造模：選取雄性SPF級(jí)KM小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，體重為20-24g，12小時(shí)光照/12小時(shí)黑 暗，自由攝取飼料和水。除正常組外，取接種7天的S180腹水小鼠，無菌條件下抽取腹水， 用生理鹽水調(diào)整細(xì)胞濃度至5 X IO6Ail。將S180細(xì)胞懸液以0. 2ml/只接種在小鼠右前肢 腋部皮下。
[0034] 2、動(dòng)物分組及給藥 接種24小時(shí)后，將小鼠分別隨機(jī)分為5組，每組10只，分別給予下述治療藥物： 對(duì)照組：生理鹽水 本發(fā)明實(shí)施例3制得的肉蓯蓉多肽提取物：20 mg/kg 本發(fā)明實(shí)施例4藥物組：50 mg/kg 本發(fā)明實(shí)施例5藥物組：50 mg/kg 上述各藥物均為腹腔注射給藥，每天1次，連續(xù)10天。末次給藥24小時(shí)后，處死小鼠， 剝?nèi)×鰤K稱重，計(jì)算每組平均值，計(jì)算抑瘤率，抑瘤率=(對(duì)照組瘤重-給藥組瘤重）/對(duì)照 組瘤重X 100%。
[0035] 表1各藥物組合物抗腫瘤藥物對(duì)腹水瘤S180體內(nèi)抑制實(shí)驗(yàn)

【權(quán)利要求】
1. 一種從肉蓯蓉粉中制備肉蓯蓉多肽提取物的方法，其特征在于，包含以下步驟： (1) 往肉蓯蓉粉加入NaOH溶液至pH值為8-10,在45-55°C下浸提時(shí)間40-60min，然后 離心處理，即得肉蓯蓉蛋白； (2) 使用步驟（1)得到的肉蓯蓉蛋白配置底物濃度5-9%的肉蓯蓉蛋白反應(yīng)體系，調(diào)節(jié) 肉蓯蓉蛋白反應(yīng)體系的pH值至6. 0-7. 0,控制溫度60-70°C，加入酶底比3. 0-4. 0%的酶解 蛋白酶，恒溫?cái)嚢杳附?，酶解時(shí)間為3. 0-4. 0h，即得酶解液，所述的酶解蛋白酶為堿性蛋白 酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、果膠酶和淀粉酶中的至少一種； (3) 對(duì)步驟（2)得到的酶解液進(jìn)行12-17min的煮沸滅酶處理，冷卻后使用2 mol/L的 HCL溶液調(diào)至pH值至中性，然后離心除去沉淀，取上清液，上清液含有肉蓯蓉蛋白肽； (4) 將步驟（3)所得到的含有肉蓯蓉蛋白肽的上清液，在溫度為40-50°C，pH值 為7. 0-9. 0,壓力為0. 7-0. 9MPa下，選擇500Da和lOOOODa的超濾膜對(duì)肉蓯蓉蛋白肽中 500-10000Da分子量的肉蓯蓉多肽進(jìn)行分離，獲得分離液，60°C下濃縮得到相對(duì)密度為 1. 20的浸膏，即為肉蓯蓉多肽提取物。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種從肉蓯蓉粉中制備肉蓯蓉多肽提取物的方法，其特征在 于，包含以下步驟： (1) 往肉蓯蓉粉加入NaOH溶液至pH值為9,在50°C下浸提時(shí)間50min，然后離心處理， 即得肉蓯蓉蛋白； (2) 使用步驟（1)得到的肉蓯蓉蛋白配置底物濃度7%的肉蓯蓉蛋白反應(yīng)體系，調(diào)節(jié)肉 蓯蓉蛋白反應(yīng)體系的pH值至6. 5,控制溫度65°C，加入酶底比3. 5%的酶解蛋白酶，恒溫?cái)?拌酶解，酶解時(shí)間為3. 5h，即得酶解液，所述的酶解蛋白酶為木瓜蛋白酶； (3) 對(duì)步驟（2)得到的酶解液進(jìn)行15min的煮沸滅酶處理，冷卻后使用2 mol/L的HCL 溶液調(diào)至pH值至中性，然后離心除去沉淀，取上清液，上清液含有肉蓯蓉蛋白肽； (4) 將步驟（3)所得到的含有肉蓯蓉蛋白肽的上清液，在溫度為45°C，pH值為8. 0,壓 力為0. 8MPa下，選擇500Da和lOOOODa的超濾膜對(duì)肉蓯蓉蛋白肽中500-10000Da分子量的 肉蓯蓉多肽進(jìn)行分離，獲得分離液，60°C下濃縮得到相對(duì)密度為1.20的浸膏，即為肉蓯蓉 多肽提取物。
3. -種用權(quán)利要求1或2所述的方法制備的肉蓯蓉多肽提取物。
4. 如權(quán)利要求3所述的肉蓯蓉多肽提取物，其特征在于，所述的肉蓯蓉多肽提取物中 含有肉蓯蓉多肽99%，肉蓯蓉多肽的分子量為500-10000Da。
5. 如權(quán)利要求3所述的肉蓯蓉多肽提取物在用于制備治療癌癥藥物中的用途。
6. 如權(quán)利要求3所述的肉蓯蓉多肽提取物在用于制備治療癌癥化療引起的腹瀉的藥 物中的用途。
7. 如權(quán)利要求5或6任一所述的用途，其特征在于，所述藥物為由如下重量份的原料組 成的組合物：肉蓯蓉多肽提取物5-16份、山楂7-9份、紅曲5-8份、萊菔子6-14份、黃連3-9 份、絞股藍(lán)5-9份、桂花5-12份、三七5-14份、丹參8-12份、黃芪9-15份、砂仁6-14份、黃 苳4-6份、飛仙藤6-12份、薔薇根5-12份、干姜5-9份和蓽拔6-10份。
8. 如權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于，所述藥物的制備方法包含下述步驟：取處方 量的上述藥材碎成細(xì)粉，肉蓯蓉多肽提取物除外，按照粗粉總重量的5-8倍加入體積濃度 為75-90%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時(shí)間為2-4h，過濾，所得的濾液中加入肉蓯蓉水 提取物，60°C下濃縮得到相對(duì)密度為1. 20的浸膏，即得到本發(fā)明藥物浸膏。
9.如權(quán)利要求7或8任一所述的用途，其特征在于，所述的藥物為散劑、水劑、片劑或膠 囊劑。
【文檔編號(hào)】C12P21/06GK104263790SQ201410548997
【公開日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年10月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月17日
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