一種hiv-1多表位重組蛋白及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種HIV-1多表位重組蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的蛋白是如下a)或b)或c)：a)由序列1的第13-164位所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；b)由序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；c)將a)或b)限定的蛋白經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加，得到的且與抗HIV-1相關(guān)的蛋白質(zhì)。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所提供的HIV-1多表位重組蛋白具有很好的免疫原性，是一種具有應(yīng)用前景的用于HIV-1預(yù)防和治療的免疫活性蛋白。
【專利說明】—種HIV-1多表位重組蛋白及其編碼基因與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種Hiv-1多表位重組蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]艾滋病是由人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染所致的獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)。自1981年世界報(bào)道首例艾滋病(AIDS)病例以來，短短30余年，艾滋病迅速在全球范圍內(nèi)蔓延擴(kuò)散，成為當(dāng)今全球最大的健康危機(jī)，也是影響我國(guó)公眾健康的重要公共衛(wèi)生問題。近年來，艾滋病感染在我國(guó)出現(xiàn)新的流行態(tài)勢(shì)，即發(fā)病率逐年增加，感染對(duì)象覆蓋不同人群，性傳播比例增多，尤其是男-男同性戀病人上升顯著，變異重組病毒在流行分離株中所占比例增多。如何有效防治HIV感染，降低發(fā)病率和病死率是我國(guó)面臨的緊迫任務(wù)。疫苗是控制HIV感染的有效手段，雖然在HIV疫苗研發(fā)方面取得了重要的進(jìn)展，一種能夠同時(shí)誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫的HIV疫苗RV144的臨床III期試驗(yàn)表明，該疫苗能夠在一定程度上降低HIV的感染從而降低艾滋病的發(fā)生，但仍然沒有有效的疫苗應(yīng)用于人群。應(yīng)用HIV-1疫苗預(yù)防和治療HIV-1感染仍然是HIV研究的重要課題。
[0003]一種有效的HIV疫苗應(yīng)該能誘導(dǎo)針對(duì)不同流行株、適用于不同人群，由于我國(guó)流行的HIV病毒與其它國(guó)家和地區(qū)不同，人群MHC限制性不同，在疫苗設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)該選擇針對(duì)不同流行株和中國(guó)主要HLA亞型的HIV保護(hù)性表位，以期誘導(dǎo)有效的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。重組蛋白疫苗與核酸疫苗及活病毒載體疫苗相比具有更好的安全性，更加適于將來臨床應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種HIV-1多表位重組蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明所提供的HIV-1多表位重組蛋白，包含在中國(guó)主要HIV-1流行株中高度保守、且為中國(guó)主要HLA亞型MHC限制性的12個(gè)HIV-1 T細(xì)胞表位，將該蛋白命名為HIV-MEPl，具體可為如下(a)或(b)或(c)所述的蛋白質(zhì):
[0006](a)由序列表中序列I的第13-164位所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0007](b)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0008](c)將序列表中序列I的第13-164位所示的氨基酸序列，或序列表中序列I所示的氨基酸序列，經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加，得到的且與抗HIV-1相關(guān)的由(a)或(b)衍生的蛋白質(zhì)。
[0009]其中，序列I由164個(gè)氨基酸組成，第5-10位為6個(gè)His標(biāo)簽，第13-164位為HIV-1多表位蛋白。
[0010]所述HIV-MEPl蛋白在制備HIV-1疫苗中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0011] 活性成分為所述HIV-MEPl蛋白的HIV-1疫苗也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0012]根據(jù)需要，所述HIV-1疫苗中還含有佐劑，具體如鋁佐劑。
[0013]所述鋁佐劑即可為氫氧化鋁佐劑，也可為磷酸鋁佐劑。在本發(fā)明中，采用的所述鋁佐劑具體為2%氫氧化鋁(InvivoGen公司，其產(chǎn)品目錄號(hào)為Vac-alu_250)。
[0014]在所述HIV-1疫苗中，所述HIV-MEPl蛋白與所述鋁佐劑的質(zhì)量配比可為25:1。
[0015]編碼所述HIV-MEPl蛋白的核酸分子也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0016]所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因組DNA或重組DNA ;所述核酸分子也可以是 RNA，如 mRNA、hnRNA 或 tRNA 等。
[0017]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述核酸分子具體為編碼所述HIV-MEPl蛋白的基因(名稱為HIV-MEG1.E)，所述HIV-MEG1.E基因?yàn)槿缦?)_4)中任一所述的DNA分子:
[0018]I)序列表中序列2的第37-495位所示的DNA分子；
[0019]2)序列表中序列2的第1-495位所示的DNA分子；
[0020]3)在嚴(yán)格條件下與I)或2)所限定的DNA分子雜交且編碼所述HIV-MEPl蛋白的DNA分子；
[0021]4)與I)或2 )所限定的DNA分子至少具有90%以上同源性且編碼所述HIV-MEPl蛋白的DNA分子。
[0022]上述嚴(yán)格條件可為用6XSSC，0.5% SDS的溶液，在65°C下雜交，然后用2XSSC，
0.1 % SDS 和 I X SSC, 0.1 % SDS 各洗膜一次。
[0023]其中，序列2由499個(gè)核苷酸組成，第13_30位編碼序列I的第5_10位所示的6個(gè)His標(biāo)簽蛋白，第37-495位編碼序列I的第13-164位所示的HIV-1多表位蛋白。序列2的第1-495位編碼序列I所示的蛋白質(zhì)。
[0024]含有所述核酸分子的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0025]所述重組載體可為重組表達(dá)載體，也可為重組克隆載體。
[0026]在本發(fā)明中，所述重組表達(dá)載體中啟動(dòng)所述基因轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子具體為T5啟動(dòng)子。
[0027]更加具體的，所述重組表達(dá)載體為將序列表中序列2的第37-493位所示的DNA片段插入到PQE30載體的多克隆位點(diǎn)處得到的重組質(zhì)粒。所述多克隆位點(diǎn)具體為BamH I和Hind III。
[0028]所述核酸分子，或所述重組表達(dá)載體、表達(dá)盒或重組菌在如下任一中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍:
[0029](I)制備抗HIV-1病毒的藥物；
[0030](2)治療和/或預(yù)防艾滋病的藥物。
[0031]所述蛋白質(zhì)的制備方法也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0032]所述蛋白質(zhì)的制備方法，具體可包括如下步驟:將所述核酸分子導(dǎo)入目的大腸桿菌中，得到重組大腸桿菌，培養(yǎng)重組大腸桿菌，得到所述蛋白質(zhì)。
[0033]在所述方法中，所述目的大腸桿菌可為大腸桿菌M15。
[0034]在所述方法中，所述培養(yǎng)重組大腸桿菌的過程中，向培養(yǎng)體系中加入IPTG至終濃度為ImM，誘導(dǎo)培養(yǎng)4小時(shí)。
[0035]本發(fā)明所提供的HIV-1多表位重組蛋白(HIV-MEP1蛋白)與DNA疫苗相比，具有更好的安全性，同時(shí)具有較強(qiáng)的免疫原性，有望用于HIV的預(yù)防和治療。BALB/c小鼠體內(nèi)免疫學(xué)研究表明，HIV-MEPl蛋白單獨(dú)免疫小鼠即可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較高水平的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，鋁佐劑可以同時(shí)增強(qiáng)其誘導(dǎo)的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答；、HLAA2.1/DR1轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi)免疫學(xué)研究表明，HIV-MEPl可誘導(dǎo)人MHC限制性的特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答。說明HIV-1多表位重組蛋白(HIV-MEP1蛋白)具有很好的免疫原性，是一種具有應(yīng)用前景的用于HIV-1預(yù)防和治療的免疫活性蛋白。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0036]圖1為重組表達(dá)載體pQE30-HIV-MEPL E.coli的BamH I和Hind III酶切鑒定結(jié)果。其中，M為DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)；1為重組表達(dá)載體pQE30-HIV-MEPl.E.coli經(jīng)BamH I和Hind III酶切的結(jié)果。
[0037]圖2為HIV-1多表位重組蛋白HIV-MEPl的表達(dá)、純化與鑒定。其中，A為HIV-MEPl蛋白純化過程產(chǎn)物分析，M:蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，1:8M脲溶解包涵體溶液，2:穿柱液，3:平衡緩沖液洗脫液，4:20mM咪唑洗脫液，5:50mM咪唑洗脫液，6:300mM咪唑洗脫液。B為純化復(fù)性后的HIV-MEPl蛋白的SDS-PAGE分析結(jié)果。C為Western blot鑒定結(jié)果。
[0038]圖3為HIV-1重組蛋白HIV-MEPl在BALB/c小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的體液免疫和細(xì)胞免疫。其中，A為重組蛋白HIV-MEPl誘導(dǎo)的抗體水平及亞類分析；B為以12個(gè)HIV-1混合肽刺激小鼠脾細(xì)胞ELISP0T檢測(cè)結(jié)果。圖中，A1+HIV-MEP1即為添加了鋁佐劑的組I 表示p〈0.01 ;*** 表示 ρ〈 0.001。
[0039]圖4為HIV-1重組蛋白HIV-MEPl免疫的BALB/c小鼠不同肽激活脾細(xì)胞IFN Y ELISP0T結(jié)果。其中，P印pool為混合多肽作為刺激物，NC為陰性對(duì)照。圖中，A1+HIV-MEP1即為添加了鋁佐劑的組I。
[0040]圖5為以HIV-MEPl蛋白和混合多肽刺激免疫鋁佐劑+HIV-MEPl的人HLAA2.1/DR1轉(zhuǎn)基因小鼠和C57/B6小鼠脾細(xì)胞IFN Y ELISP0T檢測(cè)結(jié)果。圖中，A1+HIV-MEP1即為添加了鋁佐劑的免疫組。
[0041]圖6為以不同肽單獨(dú)刺激鋁佐劑+HIV-MEPl免疫人HLA A2.1/DR1轉(zhuǎn)基因小鼠和C57/B6小鼠脾細(xì)胞IFN Y ELISP0T結(jié)果比較分析。其中，A為ELISP0T代表性結(jié)果；B為每組小鼠統(tǒng)計(jì)得到的各樣本的斑點(diǎn)形成細(xì)胞(SFC)的數(shù)目。圖中，P1-P12即表示12條多肽Pepl_Pepl20

【具體實(shí)施方式】
[0042]下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0043]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0044]下述實(shí)施例中主要試劑有:
[0045]胰蛋白胨、酵母提取物(Oxoid公司)；質(zhì)粒提取試劑盒(TIANGEN公司)；限制性內(nèi)切酶、T4連接酶(TAKARA公司)；最小截留分子量為3500Da的透析袋(北京瑞達(dá)恒輝公司)；異丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、N1- NTA Resin (南京金斯瑞生物科技有限公司)；Western Blot發(fā)光試劑盒(Millipore)、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(天根生化科技有限公司)。TMB顯色液購自(萬泰生物技術(shù)有限公司。鼠抗His抗體(中杉金橋生物技術(shù)有限公司)、HRP標(biāo)記的山羊抗鼠IgG、IgGl、IgG2a (Southern B1tech公司);ELISP0T檢測(cè)用HIV-1多肽，純度95% (南京金斯瑞生物公司合成)。Mouse IFN-y ELI SPOT Set (551083),Mouse IL-4 ELI SPOT Set (551017)，顯色底物 AEC Substrate Set (BD B1science,目錄號(hào)551951);鋁佐劑(2%氫氧化鋁佐劑，InvivoGen公司，其產(chǎn)品目錄號(hào)為Vac-alu-250)。
[0046]下述實(shí)施例中主要儀器有:
[0047]水平電泳儀(北京六一儀器廠)；高速低溫冷凍離心機(jī)；超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)JY92-2D(寧波新芝生物科技股份有限公司)；高速低溫離心機(jī)(HITACHI，CR22G III);垂直電泳儀、電轉(zhuǎn)儀、電泳槽(北京六一儀器廠);核酸蛋白定量分析儀NanodroplOOO (Thermo公司)；凝膠圖像分析系統(tǒng)ISlOOO (美國(guó)Alpha Ihnotech公司)；ELX_50型洗板機(jī)、ELX800型酶標(biāo)儀(美國(guó)B1-TEK公司)；ELISP0T Reader (CTL公司)。
[0048]下述實(shí)施例中主要生物材料有:
[0049]pQE30載體=QiaGen公司產(chǎn)品
[0050]大腸桿菌M15 =QiaGen公司產(chǎn)品，目錄號(hào):34210。
[0051]BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠:雌性，6_8周齡，購買于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0052]人HLA A2.1/DR1 轉(zhuǎn)基因小鼠(HLA-A2.l-/HLA-DRl-transgenic H_2 class 1-/class I1-KO mice and HLA-A2.1-transgenic H-2 class 1-KO mice):以 C57/B6 為背景的轉(zhuǎn)基因小鼠，為本發(fā)明發(fā)明人所在單位從法國(guó)十一大學(xué)引進(jìn)的小鼠(參考文獻(xiàn)PajotA, Michel ML, Fazilleau N, PancreV, Auriault C，Ojcius DM, Lemonnier FA, Lone YC.Amouse model of human adaptive immune funct1ns:HLA-A2.l-/HLA-DRl_transgenic H-2class 1-/class ΙΙ-knockout mice.Eur J Tmmunol.2004 Nov ；34(11):3060-9.
[0053]實(shí)施例1、HIV-1多表位重組蛋白HIV-MEPl的表達(dá)和純化
[0054]一、符合中國(guó)人群優(yōu)勢(shì)MHC限制性的保守表位篩選及DNA序列合成
[0055]于HIV Databases 獲取 HIV-1 中國(guó)主要流行株(CRF01_AE、CRF07_BC、CRF08_BC、B) env、gag和pol基因上全部已報(bào)道的表位，篩選出所有序列保守且符合中國(guó)人群優(yōu)勢(shì)MHC限制性的表位，進(jìn)一步將篩選的表位用連接序列GGGS串聯(lián)后經(jīng)大腸桿菌密碼子優(yōu)化，并于南京金斯瑞公司合成相應(yīng)雙鏈DNA(并且在兩端分別加上BamH I和Hind III識(shí)別序列)，如序列表中序列2的第31-499位(其中第31-36位為BamH I識(shí)別序列，第494-499位為Hind III識(shí)別序列，第493-495位為終止密碼子TAA)。將該雙鏈DNA對(duì)應(yīng)的基因命名為HIV-MEG 1.E基因。序列2的第37-495位編碼序列表中序列I的第13-164位所不的HIV-1多表位蛋白。
[0056]二、HIV-1多表位重組蛋白HIV-MEPl原核表達(dá)載體pQE30_HIV_MEPL E.coli的構(gòu)建與鑒定
[0057]利用限制性內(nèi)切酶BamH I和Hind III雙酶切步驟一合成的兩端帶有相應(yīng)酶切位點(diǎn)的雙鏈DNA (序列表中序列2的第31-499位)，膠回收后與經(jīng)過同樣雙酶切的pQE30載體(對(duì)于PQE30載體而言，在酶切位點(diǎn)BamH I的上游存在起始密碼子ATG及6個(gè)His標(biāo)簽蛋白的編碼基因)的骨架大片段相連，得到重組質(zhì)粒。
[0058]將經(jīng)BamH I和Hind III雙酶切初步鑒定正確的重組質(zhì)粒(得到大小約為460bp和3460bp的兩個(gè)目的條帶，如圖1所示)送樣測(cè)序。將經(jīng)測(cè)序表明將PQE30載體的酶切位點(diǎn)BamH I和Hind III之間的小片段替換為序列表中序列2的第37-493位所示DNA片段的重組質(zhì)粒命名為PQE30-HIV-MEP1.E.coli。在重組表達(dá)載體pQE30-HIV_MEPl.E.coli中，啟動(dòng)所述HIV-MEG1.E基因轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子為T5啟動(dòng)子。在T5啟動(dòng)子的下游，整個(gè)ORF如序列表中序列2的第1-495位所示(第13-30位編碼6個(gè)His標(biāo)簽蛋白)，編碼序列表中序列I所示的蛋白質(zhì)。
[0059]三、HIV-1多表位重組蛋白HIV-MEPl的誘導(dǎo)表達(dá)
[0060]將步驟二構(gòu)建并鑒定正確的重組表達(dá)載體pQE30-HIV-MEPl.E.coli轉(zhuǎn)化大腸桿菌M15感受態(tài)，將鑒定正確的單克隆接種Amp+LB培養(yǎng)基，37°C、200rpm搖菌，當(dāng)0D600為
0.4~0.6時(shí)，加入誘導(dǎo)劑IPTG至終濃度為ImM，繼續(xù)原條件搖菌4小時(shí)誘導(dǎo)蛋白表達(dá)；8000rpm離心4分鐘收菌，菌體沉淀用適量PBS重懸洗滌后8000 rpm離心并重復(fù)洗滌一次，洗滌后菌體沉淀用適量蒸餾水重懸，超聲破碎，超聲條件為:功率40%，時(shí)長(zhǎng)40分鐘，占空比為3秒:3秒；超聲完成后12000 rpm離心10分鐘，收集超聲上清，超聲沉淀依次用適量包涵體洗液I (配方:體積分?jǐn)?shù)0.5% TritoX-100,1OmmoI/LEDTA ;溶劑為水)、11 (配方:體積分?jǐn)?shù)10% TritoX-100, 1mmoI/L EDTA ;溶劑為水)重懸，每次重懸后10000 rpm離心10分鐘，棄上清，末次離心后沉淀用適量8M脲包涵體溶解緩沖液(NaH2PO4.2H20 15.6g ；Tris堿1.2g ;脲素480.5g ;去離子水定容至1L,用NaOH調(diào)pH至8.0)重懸，4°C過夜溶解。
[0061]四、HIV-1多表位重組蛋白HIV-MEPl的純化、復(fù)性與鑒定
[0062]將8M脲包涵體溶解緩沖液于12000rpm、4°C離心15分鐘，收集離心上清液，過鎳柱(GenScript)純化目的蛋白，步驟如下:
[0063]將適量柱料填入重力柱中，靜置待柱料自然沉降至柱底部，流出柱料保存液，一次用5倍柱體積的蒸餾水和平衡緩沖液(配方=NaH2PO4.2H20 15.6g ；Tris堿1.2g ;脲素480.5g ;去離子水定容至1L，用NaOH調(diào)pH至8.0)洗滌平衡柱料；將離心上清液加入重力柱中，控制流出速率為0.5-lml/min，回收流出液；向重力柱中加入5倍柱體積平衡緩沖液，控制流出速率為0.5-lml/min,回收流出液；向重力柱中加入8倍柱體積20mM咪唑洗脫液(配方:20mM咪唑溶于平衡緩沖液)，控制流出速率為0.5-lml/min，回收流出液；向重力柱中加入8倍柱體積50mM咪唑洗脫液(配方:50mM咪唑溶于平衡緩沖液)，控制流出速率為
0.5-lml/min，回收流出液；向重力柱中加入8倍柱體積300mM咪唑洗脫液(配方:300mM咪唑溶于平衡緩沖液)，控制流出速率為0.5-lml/min,回收流出液；各流出液取少量用于SDS-PAGE鑒定純化結(jié)果。
[0064]各流出液的SDS-PAGE鑒定結(jié)果如圖2中A所示，目的蛋白在300 mM咪唑洗脫液洗脫時(shí)目的蛋白純度和得率最高。
[0065]本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)一步根據(jù)各流出液的SDS-PAGE鑒定結(jié)果選擇性將僅含有目的蛋白的洗脫液(300mM咪唑洗脫液)利用不同濃度尿素逐級(jí)透析復(fù)性后進(jìn)行濃縮(利用PEG-6000濃縮法，將樣品置于最小截留分子量為3500Da的透析袋中)，并取少量最終濃縮蛋白液進(jìn)行SDS-PAGE和Western Blot鑒定。其中，Western Blot采用的一抗為鼠抗His抗體(中杉金橋生物技術(shù)有限公司，目錄號(hào):TA-02)，二抗為HRP標(biāo)記的山羊抗鼠IgG(BDB1science,目錄號(hào):554021)。
[0066]純化后復(fù)性HIV-MEPl蛋白的SDS-PAGE結(jié)果如圖2中B所示，從圖中可以看出得到了大小為16KD的單一目的條帶,無其他雜帶。Western Blot鑒定結(jié)果如圖2中C所示，從圖中可以清晰的看到目的信號(hào)，可見純化后復(fù)性HIV-MEPl蛋白保持了較好的抗原性。
[0067]實(shí)施例2、HIV-1多表位重組蛋白HIV-MEPl在BALB/c小鼠體內(nèi)的免疫學(xué)評(píng)價(jià)
[0068]—、動(dòng)物免疫及標(biāo)本采集:
[0069]將雌性BALB/c小鼠(6_8周齡)隨機(jī)分為三組，即重組蛋白鋁佐劑組(組I)、重組蛋白單獨(dú)免疫組(組2)和PBS對(duì)照組(組3)，共免疫三次，每次免疫的時(shí)間間隔為4周，每次的免疫劑量相同。分組情況及免疫策略詳見表1。
[0070]表1動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)分組及免疫策略
[0071]

【權(quán)利要求】
1.蛋白質(zhì)，是如下(a)或(b)或(C): (a)由序列表中序列I的第13-164位所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； (b)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； (c)將序列表中序列I的第13-164位所示的氨基酸序列，或序列表中序列I所示的氨基酸序列，經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加，得到的且與抗HIV-1相關(guān)的由(a)或(b)衍生的蛋白質(zhì)。
2.權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)在制備HIV-1疫苗中的應(yīng)用。
3.HIV-1疫苗，其活性成分為權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的HIV-1疫苗，其特征在于:所述HIV-1疫苗中還含有佐劑； 所述佐劑具體為鋁佐劑。
5.編碼權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的核酸分子。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的核酸分子，其特征在于:所述核酸分子為編碼權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的基因，所述基因?yàn)槿缦?)-4)中任一所述的DNA分子: 1)序列表中序列2的第37-495位所示的DNA分子； 2)序列表中序列2的第1-495位所示的DNA分子； 3)在嚴(yán)格條件下與I)或2)所限定的DNA分子雜交且編碼權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的DNA分子； 4)與I)或2)所限定的DNA分子至少具有90%以上同源性且編碼權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的DNA分子。
7.含有權(quán)利要求5或6所述核酸分子的重組載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系或重組菌。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的重組載體，其特征在于:所述重組載體為重組表達(dá)載體或重組克隆載體； 所述重組表達(dá)載體中啟動(dòng)所述基因轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子具體為T5啟動(dòng)子。
9.權(quán)利要求5或6所述的核酸分子，或權(quán)利要求7或8所述的重組表達(dá)載體、表達(dá)盒或重組菌在如下任一中的應(yīng)用: (1)制備抗HIV-1病毒的藥物； (2)治療和/或預(yù)防艾滋病的藥物。
10.權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的制備方法，包括如下步驟:將權(quán)利要求5或6所述核酸分子導(dǎo)入目的大腸桿菌中，得到重組大腸桿菌，培養(yǎng)重組大腸桿菌，得到權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)。
【文檔編號(hào)】C12N15/49GK104163857SQ201410394686
【公開日】2014年11月26日 申請(qǐng)日期:2014年8月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月12日
【發(fā)明者】周育森, 寇志華, 楊裔, 郭彥, 于虹, 孫世惠, 趙光宇, 李軍鋒 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所