一種重組人源膠原蛋白面膜及其制備方法
【專利說明】-種重組人源膠原蛋白面膜及其制備方法
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技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明設(shè)及一種重組人源膠原蛋白面膜及其制備方法。
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【背景技術(shù)】
[0004] 都市女性經(jīng)常面對(duì)工作和生活的巨大壓力，再加上環(huán)境的嚴(yán)重污染，皮膚遭受到 很大的傷害，表現(xiàn)為面部皮膚暗淡無光、毛孔粗大、易生青春痘，細(xì)紋增多，加快衰老，給廣 大愛美人±帶來了很大的困擾。面膜是日用化妝品中的一種，其是通過短暫時(shí)間貼附在面 部，暫時(shí)隔絕外界的空氣和污染物，為肌膚提供大量的營養(yǎng)和水分，使皮膚變得柔軟亮麗， 富有彈性。
[0005] 為了使面膜具有更多的功能，常常需要添加各種活性物質(zhì)使面膜達(dá)到更好的美 白、保濕、抗衰老、桂痘等效果。由于，膠原蛋白含有較多的氨基和徑基等親水基團(tuán)，能夠有 效實(shí)現(xiàn)鎖水、保濕的效果。同時(shí)，膠原蛋白能被肌膚吸收合成內(nèi)源性膠原，桂除皺紋，使肌膚 富有彈性。此外，膠原蛋白對(duì)紫外線損傷和青春痘有一定的修復(fù)和治療的作用，而且添加到 化妝品中表現(xiàn)出良好的配伍性、穩(wěn)定性和抗菌性等特點(diǎn)。但是，現(xiàn)有的動(dòng)物源膠原蛋白類面 膜的吸收性和安全性較差，不能夠很有效地發(fā)揮作用，并且消費(fèi)者不能放屯、使用。
[0006] 重組人源膠原蛋白是基于人III型膠原蛋白a1鏈膠原域Gly-X-Y的S膚重復(fù)序列 特征，通過分子設(shè)計(jì)與基因合成的方法成功構(gòu)建了畢赤酵母基因工程菌，進(jìn)行高密度發(fā)酵， 獲得細(xì)胞外分泌型目的蛋白，具有W下特性： (1)低免疫原性：由于重組人源膠原蛋白是根據(jù)人體膠原蛋白的基因序列特征構(gòu)建的， 并且實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)序列也進(jìn)行了特定的篩選與修飾，將易引起機(jī)體免疫反應(yīng)的色氨酸等氨 基殘基排除在外。
[0007] (2)無病毒隱患：動(dòng)物源膠原蛋白存在著一個(gè)致命的缺點(diǎn)就是存在病毒隱患，如禽 流感病毒、瘋牛病病毒、口蹄疫、支原體和衣原體等。通過基因工程法獲得的重組人源膠原 蛋白則克服了此項(xiàng)弱點(diǎn)，其表達(dá)體系為酵母菌，而且整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程為無菌操作，因此獲得的 膠原蛋白不會(huì)攜帶有外源性病毒。
[0008] (3)水溶性好：最大溶解度可達(dá)20%，易于被機(jī)體吸收。
[0009] (4)提取工藝簡單，蛋白純度高：重組人源膠原蛋白為細(xì)胞外分泌型蛋白，無需對(duì) 菌體進(jìn)行破碎處理，僅需對(duì)發(fā)酵上清液進(jìn)行分離與純化，并且細(xì)胞外分泌型蛋白的種類少， 便于獲得純度較高的目的蛋白。
[0010] (5)確定的分子結(jié)構(gòu)：能夠進(jìn)行定點(diǎn)修飾與酶切，對(duì)肌膚發(fā)揮最精確的修復(fù)作用。
[0011] 通過對(duì)RHC進(jìn)行特異性酶切作用，生成小分子膠原蛋白活性膚，有利于肌膚的吸 收和內(nèi)源性膠原蛋白的生成，減少細(xì)紋。因此，開發(fā)一種重組人源膠原蛋白面膜是本發(fā)明的 任務(wù)所在，旨在提供一種具有更強(qiáng)的桂皺、桂痘、保濕和滋養(yǎng)的功效美容化妝品。
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0013]為了克服傳統(tǒng)膠原蛋白類面膜存在的缺陷，本發(fā)明提供一種具有多重保濕效果、 有效桂除皺紋、保持肌膚彈性，桂除青春痘、安全性高、吸收性好、幾乎不會(huì)引起機(jī)體免疫反 應(yīng)、高效鎖水的重組人源膠原蛋白面膜及其制備方法。
[0014]本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案來解決上述技術(shù)問題的：一種重組人源膠原蛋白面 膜，其特征在于，其由SEQIDNO: 1所示的氨基酸序列組成，含有599個(gè)氨基酸，分子量為 55. 0kDa〇
[0015]本發(fā)明還提供一種重組人源膠原蛋白面膜的制備方法，其特征在于，其包括W下 步驟：重組人源膠原蛋白面膜由載體和面膜基質(zhì)溶液組成，面膜基質(zhì)溶液由下述重量百分 比的原料制成：小分子重組人源膠原蛋白膚0. 02~2份、金縷梅提取物1~3份、透明質(zhì)酸 0. 01~0. 5份、神經(jīng)酷胺0. 01~1份、甜菜堿0. 5~2份、泛醇1~2份、銀耳提取物0. 05~ 0. 2份、丙締酸（醋）類/C10-30燒醇丙締酸醋交聯(lián)聚合物0. 1~1份、黃原膠0. 1~1份、 甘油3~5份、下二醇1~3份、徑苯甲醋0. 1~0. 2份、EDTA二鋼0. 03~0. 05份、氨氧化 鋼0. 04~0. 4份、陽G-40氨化藍(lán)麻油0. 5~1份、去離子水75~80份；在GMP生產(chǎn)環(huán)境 條件下，所述面膜制備方法按照下述工藝步驟進(jìn)行：將丙締酸（醋）類/C10-30燒醇丙締酸 醋交聯(lián)聚合物、銀耳提取物、金縷梅提取物、神經(jīng)酷胺、黃原膠、透明質(zhì)酸、去離子水、甘油和 下二醇攬拌分散完全后，充分溶脹12h，向體系內(nèi)加入徑苯甲醋、甜菜堿、小分子重組人源膠 原蛋白膚、邸TA二鋼，攬拌分散完全，加熱至50°C，真空下保溫30分鐘；向上述溶液內(nèi)加入 氨氧化鋼，調(diào)節(jié)抑值，之后加入PEG-40氨化藍(lán)麻油，攬拌分散完全；待溶液溫度降至20°C 時(shí)，加入泛醇，真空攬拌分散均勻；將所得的物料送檢，按地/T2872標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)合格后300目 過濾后裝袋出樣。
[0016]優(yōu)選地，所述小分子重組人源膠原蛋白膚的制備方法如下：WSEQIDNO: 1所示 的冊(cè)C為原料，配制成10~20g/L的蛋白溶液，邊攬拌邊加入1M化OH溶液調(diào)節(jié)溶液的抑 至8~9, 50°C水浴加熱，加入0. 1~2%的復(fù)合蛋白酶作用2~5h，酶切完成后將溫度升 高至90°C，維持15min，在高速離屯、條件下進(jìn)行分離，收集上清液，即為分子量為204~2729 化的小分子RHC蛋白膚溶液，真空冷凍干燥獲得成品。
[0017]優(yōu)選地，所述復(fù)合蛋白酶為蛋白酶K與膜蛋白酶按質(zhì)量比為1: 5~15的比例進(jìn) 行復(fù)合。
[0018]優(yōu)選地，所述載體的材質(zhì)為無紡布、蠶絲或生物纖維中的一種。
[0019]本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于：本發(fā)明有效抗衰老，桂除皺紋、增加皮膚彈性，保持 肌膚的年輕態(tài)。本發(fā)明有效桂痘，補(bǔ)充膠原蛋白，修復(fù)損傷肌膚，消除輕微瘤痕。本發(fā)明強(qiáng)效 保濕，緊致肌膚。本發(fā)明安全性高，極少引起過敏反應(yīng)。本發(fā)明的載體材質(zhì)為無紡布、蠶絲 或生物纖維中，生產(chǎn)環(huán)境為GMP10萬級(jí)，局部萬級(jí)，藥品級(jí)的生產(chǎn)條件，安全性高、污染少、 可放屯、使用。
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【具體實(shí)施方式】
[0021] 通過W下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更具體的說明，但本發(fā)明不受運(yùn)些實(shí)施例的限制。
[0022] 所述重組人源膠原蛋白（RecombinantHuman-sourceCollagen,RHC)由沈QID NO: 1所示的氨基酸序列組成，含有599個(gè)氨基酸，分子量為55.0kDa。本發(fā)明首先對(duì)RHC 進(jìn)行定點(diǎn)酶切，形成小分子重組人源膠原蛋白膚。本發(fā)明所述的面膜由載體和面膜基質(zhì)溶 液組成，所述面膜基質(zhì)溶液含有W下組份：去離子水、甘油、下二醇、透明質(zhì)酸、小分子重組 人源膠原蛋白膚、神經(jīng)酷胺、泛醇、北美金縷梅提取物、銀耳提取物、甜菜堿、黃原膠、丙締酸 (醋）類/C10-30燒醇丙締酸醋交聯(lián)聚合物、徑苯甲醋、EDTA二鋼、氨氧化鋼、PEG-40氨化 藍(lán)麻油。該種面膜能夠補(bǔ)充內(nèi)源性膠原蛋白，長效發(fā)揮鎖水保濕功效，使肌膚清透、水潤、細(xì) 嫩，同時(shí)有效桂除青春痘。
[0023] 實(shí)施例1 :蛋白酶K聯(lián)合膜蛋白酶對(duì)重組人源膠原蛋白進(jìn)行酶切 實(shí)施方法：將重組人源膠原蛋白配制成lOg/L的溶液，調(diào)節(jié)抑至9. 0后，溫度50°C，加 入蛋白酶K量為0.1%，膜蛋白酶量為1%，水解化。反應(yīng)過程中，通過滴加1M化0H溶液來 維持pH值。反應(yīng)完成后將溫度升高至90°C，維持15min的滅酶反應(yīng)，冷卻后在高速離屯、條 件下進(jìn)行分離，收集上清液進(jìn)行真空冷凍干燥。通過對(duì)樣品進(jìn)行HPLC檢測(cè)，確定酶切后得 到的膠原蛋白膚的分子量范圍為204-2729Da。
[0024] 實(shí)施例2 :重組人源膠原蛋白面膜的制備方法 重組人源膠原蛋白面膜由載體和面膜基質(zhì)溶液組成，面膜基質(zhì)溶液由下述重量百分比 的原料制成：小分子重組人源膠原蛋白膚2份、金縷梅提取物3份、透明質(zhì)酸0. 5份、神經(jīng) 酷胺1份、甜菜堿2份、泛醇1份、銀耳提取物0. 2份、丙締酸（醋）類/C10-30燒醇丙締酸 醋交聯(lián)聚合物1份