一種高效的體外培養(yǎng)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)體系的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種高效的體外培養(yǎng)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)體系的用途，所述的無血清培養(yǎng)體系包含以下各成分：基礎(chǔ)培養(yǎng)基a-MEM、細(xì)胞因子、激素與蛋白、不飽和脂肪酸、抗氧化物、能量物質(zhì)、氨基酸添加物、維生素、金屬添加物。本發(fā)明的無血清培養(yǎng)體系成分簡(jiǎn)單清晰，無病原體的危害；無批次之間的差異，重復(fù)性好；可在短時(shí)間獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，且傳代穩(wěn)定性高，因此可應(yīng)用于科學(xué)研究，還可作為細(xì)胞治療中的配套體系，為細(xì)胞治療提供高純度和有活力的細(xì)胞。
【專利說明】一種高效的體外培養(yǎng)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)體系的用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物培養(yǎng)基的用途，具體地說，涉及一種高效的體外培養(yǎng)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)體系的用途。

【背景技術(shù)】
[0002]近年來，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)已從單純的實(shí)驗(yàn)操作領(lǐng)域擴(kuò)展到研究和商業(yè)利用等多個(gè)方面。許多生物技術(shù)研究和產(chǎn)品都離不開細(xì)胞培養(yǎng)。在細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)展史中，培養(yǎng)基的發(fā)展占有重要位置。間充質(zhì)干細(xì)胞是來源于中胚層的具有高度自我更新能力和多向分化潛能的成體干細(xì)胞，廣泛存在于全身結(jié)締組織和器官間質(zhì)中。大量實(shí)驗(yàn)證明，長(zhǎng)期培養(yǎng)后的間充質(zhì)干細(xì)胞具有廣泛的分化潛能，形成的終末組織包括腦、視網(wǎng)膜、肝、腸、脾、骨髓、血液、皮膚、軟骨等。說明間充質(zhì)干細(xì)胞具有跨胚層分化的能力，且在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)環(huán)境下，能誘導(dǎo)多種細(xì)胞分化。
[0003]對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)，目前還沒有統(tǒng)一的方案。程范軍等采用低糖DMEM培養(yǎng)基，根據(jù)添加胎牛血清濃度的不同而分為2%和10%血清組，得出的結(jié)論是采用低濃度血清培養(yǎng)體系可有效避免間充質(zhì)干細(xì)胞喪失增殖分化潛力?？傊?不同培養(yǎng)基、不同批次的血清、不同的PH值、不同的種植密度都會(huì)影響間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)。
[0004]目前，間充質(zhì)干細(xì)胞的常規(guī)培養(yǎng)體系中均加入了一定比例的動(dòng)物血清，常用的是胎牛血清(FBS)。血清在細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系中是必不可少的，它雖能提供生長(zhǎng)因子、結(jié)合蛋白、激素，并起一定的保護(hù)作用，但其具有以下缺陷:①成分復(fù)雜，且含有一些不利于細(xì)胞生長(zhǎng)的因子或毒性物質(zhì)，可能會(huì)影響研究結(jié)果還可能存在病原體，對(duì)臨床應(yīng)用構(gòu)成威脅；③不同批次之間存在差異，導(dǎo)致培養(yǎng)結(jié)果出現(xiàn)差異。
[0005]盡管目前已有很多無血清培養(yǎng)基，但還是含有少量的動(dòng)物血清。市場(chǎng)上可以購(gòu)買到少數(shù)幾種人間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，但基本都為國(guó)外進(jìn)口，其價(jià)格昂貴(>6元/mL)，培養(yǎng)效果不理想，且僅供研究應(yīng)用，不能用于人的診斷及治療。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN201210350602.0，
【公開日】2012.12.19，公開了一種間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，其必要組成為MDM、L-谷氨酰胺、碳酸氫鈉、Hepes,重組人胰島素、重組人轉(zhuǎn)鐵蛋白、重組人白蛋白、2-巰基乙醇、原兒茶酸、脂質(zhì)、氨基酸、維生素、微量元素、氫化可的松、維生素C、粘接胺或重組人纖連蛋白、黃體酮、腐胺、肝素、血清素、EGF、b-FGF、roGF-BB、IGF-1。該發(fā)明所述無血清培養(yǎng)基化學(xué)成分明確、無動(dòng)物源、無血清，培養(yǎng)細(xì)胞安全、理想，避免了摻雜動(dòng)物成分和批次的不穩(wěn)定性，培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞結(jié)果顯示其細(xì)胞總數(shù)、細(xì)胞表型和分泌細(xì)胞因子均正常。然而，一方面，上述培養(yǎng)基成分較多，氨基酸包含L-精氨酸、L-胱氨酸、L-組氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-纈氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸；維生素包含泛酸鈣、氯化膽堿、葉酸、內(nèi)消旋肌醇、煙酰胺、鹽酸吡哆醛、核黃素、鹽酸硫胺；脂質(zhì)包含花生四烯酸、膽固醇、DL-α生育酚乙酸酯、亞油酸、亞麻酸、肉豆蘧酸、油酸、棕櫚油酸、棕櫚酸、硬脂酸；微量元素包含 Cu、Zn、Se、Fe、Sn、N1、Ag、Al、Cr、Ge、Zr、Rb、Co、Cd、
Ba、K，成分過于復(fù)雜，造成制備上的不便；另一方面，培養(yǎng)基要能夠保證細(xì)胞傳代的穩(wěn)定性，以滿足科研的需要，關(guān)于上述培養(yǎng)基傳代的穩(wěn)定性尚不清楚。
[0006]綜上所述，亟需一種成分簡(jiǎn)明、傳代穩(wěn)定性好的間質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種高效的體外培養(yǎng)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的無血清培養(yǎng)體系的用途。
[0008]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
一種無血清培養(yǎng)體系用于體外培養(yǎng)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的用途,所述的無血清培養(yǎng)體系包含以下質(zhì)量比的各成分:

【權(quán)利要求】
1.一種無血清培養(yǎng)體系用于體外培養(yǎng)人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的用途，其特征在于，所述的無血清培養(yǎng)體系包含以下質(zhì)量比的各成分:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的無血清培養(yǎng)體系包含以下質(zhì)量比的各成分:
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述的無血清培養(yǎng)體系包含以下質(zhì)量比的各成分:
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的用途，其特征在于，所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基a-MEM為OriCe11? MEM極限必需培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的用途，其特征在于，所述的非必需氨基酸的成分為:
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述的非必需氨基酸的成分為:
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的用途，其特征在于，所述的無血清培養(yǎng)體系pH:7.0-7.4 ;滲透壓:260-320m0sm/kg ;細(xì)菌、真菌檢測(cè):陰性；衣原體、支原體檢測(cè):陰性；內(nèi)毒素:〈0.5EU/mL。
【文檔編號(hào)】C12N5/0775GK104164404SQ201410394545
【公開日】2014年11月26日 申請(qǐng)日期:2014年8月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月12日
【發(fā)明者】鄭敦武, 莫筱縈, 羅晴燕, 梁心田, 楊燕燕, 胡紅, 姜莎莎, 徐文靜 申請(qǐng)人:賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司