一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，通過在生長對數(shù)期時加入一定的樹脂，使發(fā)酵產(chǎn)生的乳酸鏈球菌素吸附于樹脂，一方面減小發(fā)酵液中乳酸鏈球菌素的濃度，從而解除其對細胞生長和產(chǎn)物合成的抑制作用，另一方面有效提高乳酸鏈球菌素的發(fā)酵濃度，本發(fā)明中乳酸鏈球菌素濃度達到10000U/mL以上，顯著高于一般發(fā)酵方法中乳酸鏈球菌素的濃度。另夕卜，采用保藏編號為CGMCCN0.8090的乳酸乳球菌CQ0422作為發(fā)酵菌種，其合成乳酸鏈球菌素的產(chǎn)率至少是一般乳酸鏈球菌的4.5倍，對提高乳酸鏈球菌素的產(chǎn)率起到重要的作用。本發(fā)明具有工藝簡單、生產(chǎn)成本低、乳酸鏈球菌素濃度及產(chǎn)率局等優(yōu)點。
【專利說明】一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā) 酵工藝。

【背景技術(shù)】
[0002] 乳酸鏈球菌素既Nisin，又稱乳酸鏈菌肽或尼生素，主要是某些乳酸鏈球菌菌株 代謝產(chǎn)生的一種小分子抗菌肽，它對許多包括金黃色葡萄球菌、溶血球菌、肉毒梭菌、嗜熱 脂肪芽孢桿菌、李斯特菌在內(nèi)的多種革蘭氏陽性食物腐敗菌和病原菌都有強烈的抑殺作 用。目前，我國食品添加劑標準化委員會批準使用的微生物防腐劑只有Nisin和納他霉素。 1990年，我國將其列為國標GB2760-86品種，可用于罐藏食品、植物蛋白食品、乳制品和肉 制品生產(chǎn)中。Nisin對熱穩(wěn)定，使用后在消化道內(nèi)很快被蛋白水解酶消化成氨基酸，不會產(chǎn) 生抗性和過敏反應(yīng)，其作為一種理想的天然防腐劑已獲得越來越廣泛的應(yīng)用。乳酸鏈球菌 素是目前國際上允許商業(yè)化生產(chǎn)的最重要的天然防腐劑，并且隨著下游產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展， 乳酸鏈球菌素的可使用量將十分巨大，其產(chǎn)業(yè)發(fā)展存在巨大的空間。
[0003] 目前乳酸鏈球菌素的生產(chǎn)主要為微生物發(fā)酵法，然而在微生物發(fā)酵生產(chǎn)乳酸鏈球 菌素過程中，乳酸鏈球菌素對細胞生長特別是產(chǎn)物合成具有顯著的抑制作用，從而抑制了 乳酸鏈球菌素產(chǎn)率的提高，另外，發(fā)酵所用菌種的產(chǎn)乳酸鏈球菌素的水平也直接制約乳酸 鏈球菌素的產(chǎn)率，因此解除乳酸鏈球菌素對細胞生長和產(chǎn)物合成的抑制，及使用高產(chǎn)優(yōu)良 的菌株，將大幅度提高乳酸鏈球菌素的發(fā)酵水平，降低生產(chǎn)成本，提高乳酸鏈球菌素的產(chǎn)業(yè) 化生產(chǎn)效率。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，通過使用 有利于發(fā)酵菌種生長及乳酸鏈球菌素產(chǎn)生的發(fā)酵培養(yǎng)基，并通過在到達生長對數(shù)期時向 發(fā)酵培養(yǎng)物中加入對乳酸鏈球菌素有選擇性吸附的樹脂，使發(fā)酵產(chǎn)生的乳酸鏈球菌素吸附 于樹脂，一方面減小發(fā)酵液中乳酸鏈球菌素的濃度，從而解除對細胞生長和產(chǎn)物合成的抑 制作用，另一方面有效提高乳酸鏈球菌素的發(fā)酵濃度。
[0005] 本發(fā)明的另一個目的是，通過使用經(jīng)微波誘變并篩選得到的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的 乳酸乳球菌CQ0422作為發(fā)酵菌種，有效提高乳酸鏈球菌素的產(chǎn)率。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案為：
[0007] -種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，其中，
[0008] 將產(chǎn)乳酸鏈球菌素的菌種接種發(fā)酵培養(yǎng)基進行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)至生長對數(shù)期時加 入發(fā)酵培養(yǎng)物體積2-5%的樹脂，總發(fā)酵時間24_72h后得到含有乳酸鏈球菌素的發(fā)酵產(chǎn) 物；
[0009] 其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包含以下重量份的組分：蔗糖2. 5-3. 0,蛋白胨0. 8-1. 2,酵 母膏 0· 4-0. 5，Na2HP04 L 8-2. 0，MgS04 0· 01-0. 03,蒸餾水 90-100 ;所述發(fā)酵培養(yǎng)基的 pH 值 為 6· 5-7. 5。
[0010] 優(yōu)選的是，所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，所述產(chǎn)乳酸鏈 球菌素的菌種為保藏編號為CGMCC NO. 8090的乳酸乳球菌CQ0422。
[0011] 優(yōu)選的是，所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，所述樹脂為 Dl 13樹脂或NKA-II樹脂。
[0012] 優(yōu)選的是，所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，所述D113樹 脂或NKA-II樹脂在加入發(fā)酵培養(yǎng)物之前經(jīng)過預(yù)處理，所述預(yù)處理的方法為：將樹脂置于 95-100%乙醇中浸泡至少2h,浸泡結(jié)束后用蒸饋水進行沖洗至少3次。
[0013] 優(yōu)選的是，所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，所述乳酸乳球 菌CQ0422接種發(fā)酵培養(yǎng)基之前進行活化和種子培養(yǎng)，包括以下步驟：
[0014] 步驟一、種子活化，挑取乳酸乳球菌CQ0422的單菌落接種于液體種子培養(yǎng)基中， 于28-30°C靜止培養(yǎng)7-8h，得到活化后菌液；
[0015] 步驟二、種子培養(yǎng)，將活化后菌液按照1-2%的比例接種另一液體種子培養(yǎng)基中， 于28-30°C靜止培養(yǎng)7-8h，得到種子培養(yǎng)液。
[0016] 優(yōu)選的是，所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，所述種子培 養(yǎng)基包括以下重量份的組分：蛋白陳0. 5-1. 0,豆胨0. 5-1. 0,酵母膏0. 25-0. 5,牛肉膏 0· 5-1. 0,乳糖 0· 5-1. 0,抗壞血酸 0· 05-0. 10，β -磷酸甘油二鈉 L 9-2. 5, MgSO4 · 7H20 0· 025-0. 05,蒸餾水90-100 ;所述種子培養(yǎng)基的pH值為6. 5-7. 0。
[0017] 優(yōu)選的是，所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，將乳酸乳球菌 CQ0422的種子培養(yǎng)液接種發(fā)酵培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，接種量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5-8%，發(fā)酵 培養(yǎng)溫度為28-30°C，pH值為6. 0-6. 5,轉(zhuǎn)速為200-400轉(zhuǎn)/min。
[0018] 優(yōu)選的是，所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，所述乳酸乳球 菌CQ0422經(jīng)過微波誘變并采用瓊脂擴算法篩選得到。
[0019] 本發(fā)明具有以下有益效果：通過使用有利于發(fā)酵菌種生長及乳酸鏈球菌素產(chǎn)生的 發(fā)酵培養(yǎng)基，并通過在到達生長對數(shù)期時向發(fā)酵培養(yǎng)物中加入對乳酸鏈球菌素有選擇性吸 附的樹脂，使發(fā)酵產(chǎn)生的乳酸鏈球菌素吸附于樹脂，一方面減小發(fā)酵液中乳酸鏈球菌素的 濃度，從而解除對細胞生長和產(chǎn)物合成的抑制作用，另一方面有效提高乳酸鏈球菌素的發(fā) 酵濃度，本發(fā)明中乳酸鏈球菌素濃度達到lOOOOU/mL以上，顯著高于一般發(fā)酵方法中乳酸 鏈球菌素的濃度。同時，由于樹脂具有良好的脫色效果，通過添加樹脂在起到吸附作用的 同時，對發(fā)酵產(chǎn)物起到很好的脫色作用，使發(fā)酵產(chǎn)物的顏色較淺，有利于后期的產(chǎn)物分離純 化,降低生產(chǎn)成本。
[0020] 另外，本發(fā)明使用了經(jīng)微波誘變并篩選得到的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的乳酸乳球 菌CQ0422作為發(fā)酵菌種，該菌的保藏編號為CGMCC NO. 8090,經(jīng)過試驗檢測，乳酸乳球菌 CQ0422合成乳酸鏈球菌素的產(chǎn)率是一般乳酸鏈球菌產(chǎn)率的至少4. 5倍，對提高乳酸鏈球菌 素的產(chǎn)率起到重要的作用。
[0021] 本發(fā)明具有生產(chǎn)工藝簡單、生產(chǎn)成本低、過程易控制且無污染、乳酸鏈球菌素濃度 及產(chǎn)率高等優(yōu)點，適合乳酸鏈球菌素的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0022] 圖1為所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝的流程圖。

【具體實施方式】
[0023] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做詳細說明，以令本領(lǐng)域普通技術(shù)人員參閱本說明書后能 夠據(jù)以實施。
[0024] 如圖1所示，一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，其中，
[0025] 將產(chǎn)乳酸鏈球菌素的菌種接種發(fā)酵培養(yǎng)基進行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)至生長對數(shù)期時， 加入發(fā)酵培養(yǎng)物體積2-5 %的樹脂，根據(jù)多次試驗得出，一般從發(fā)酵后12小時開始根據(jù)菌 種生長情況逐步以直接從接種口倒入發(fā)酵罐中的方式向發(fā)酵培養(yǎng)物中添加樹脂，并控制樹 脂的總加入量為發(fā)酵體積的2-5%。從發(fā)酵開始算起，總發(fā)酵時間24-72h，得到含有乳酸鏈 球菌素的發(fā)酵產(chǎn)物；其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包含以下重量份的組分：蔗糖2. 5-3.0,蛋白胨 0· 8-L 2,酵母膏 0· 4-0. 5, Na2HPO4 L 8-2. 0, MgSO4 0· 01-0. 03,蒸餾水 90-100 ;所述發(fā)酵培 養(yǎng)基的pH值為6. 5-7. 5。
[0026] 所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，所述樹脂為D113樹脂或 NKA-II樹脂；所述Dl 13樹脂或NKA-II樹脂在加入發(fā)酵培養(yǎng)物之前經(jīng)過預(yù)處理，所述預(yù)處 理的方法為：將樹脂置于95-100 %乙醇中浸泡至少2h，浸泡結(jié)束后用蒸餾水進行沖洗至少 3次，直到預(yù)處理后的樹脂沒有乙醇味道為止。由于本發(fā)明所用樹脂對乳酸鏈球菌素具有選 擇性吸附作用，可將大部分發(fā)酵產(chǎn)生的乳酸鏈球菌素吸附于樹脂，一方面減小發(fā)酵液中乳 酸鏈球菌素的濃度，從而解除或降低乳酸鏈球菌素對細胞生長和產(chǎn)物合成的抑制作用，另 一方面有效提高乳酸鏈球菌素的發(fā)酵濃度，本發(fā)明中乳酸鏈球菌素濃度達到lOOOOU/mL以 上，顯著高于一般發(fā)酵方法中乳酸鏈球菌素的濃度。同時，由于樹脂具有良好的脫色效果， 通過添加樹脂在起到吸附作用的同時，對發(fā)酵產(chǎn)物起到很好的脫色作用，使發(fā)酵產(chǎn)物的顏 色較淺，有利于后期的產(chǎn)物分離純化。
[0027] 所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，所述產(chǎn)乳酸鏈球菌素的 菌種沒有采用常用的乳酸鏈球菌，而是采用了保藏編號為CGMCC NO. 8090的乳酸乳球菌 CQ0422,分類命名：Lactococcus lactis，保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心，地址在北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期2013年8月30日。該菌株以 從北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院購買的乳酸乳球菌CICC23610為出發(fā)菌株，經(jīng)過微波誘 變并采用瓊脂擴算法篩選得到，合成乳酸鏈球菌素的能力為一般乳酸鏈球菌的4. 5倍，對 提高乳酸鏈球菌素的產(chǎn)率具有重要的意義。
[0028] 所述乳酸乳球菌CQ0422的微波誘變方法為：將出發(fā)菌株擴大培養(yǎng)后，以10%的 接種量接種到裝有20ml種子培養(yǎng)基的50ml容量瓶中，30°C培養(yǎng)到對數(shù)生長期，放入微波 中以高強度微波處理，誘變獲得菌株采用瓊脂擴算法篩選獲得高產(chǎn)乳酸鏈球菌素突變菌株 CQ0422。
[0029] 所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，所述乳酸乳球菌CQ0422 接種發(fā)酵培養(yǎng)基之前進行活化和種子培養(yǎng)，包括以下步驟：
[0030] 步驟一、種子活化，將冷凍保藏的菌種通過平板劃線分離單菌落，平板培養(yǎng)基采用 固體種子培養(yǎng)基，是在液體種子培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入1. 5-2%的瓊脂制得。挑取乳酸乳球菌 CQ0422的單菌落接種于液體種子培養(yǎng)基中，于28-30°C靜止培養(yǎng)7-8h，得到活化后菌液；
[0031] 步驟二、種子培養(yǎng)，將活化后菌液按照1-2%的比例接種另一液體種子培養(yǎng)基中， 于28-30°C靜止培養(yǎng)7-8h，得到種子培養(yǎng)液。
[0032] 所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，所述種子培養(yǎng)基包括以 下重量份的組分：蛋白陳〇. 5-1. 0,豆胨0. 5-1. 0,酵母膏0. 25-0. 5,牛肉膏0. 5-1. 0,乳糖 0· 5-L 0,抗壞血酸 0· 05-0. 10，β -磷酸甘油二鈉 L 9-2. 5, MgSO4 · 7Η20 (λ 025-0. 05,蒸餾 水90-100 ;所述種子培養(yǎng)基的pH值為6. 5-7. 0。
[0033] 所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝中，將乳酸乳球菌CQ0422的 種子培養(yǎng)液接種發(fā)酵培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，接種量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的5-8%，發(fā)酵培養(yǎng)溫度為 28-30°C，pH 值為 6. 0-6. 5,轉(zhuǎn)速為 200-400 轉(zhuǎn) /min。
[0034] 實施例一
[0035] 從平板培養(yǎng)基中挑取一環(huán)菌種接于液體種子培養(yǎng)基中，30°C活化8h，再以1%的 接種量接入另一液體種子培養(yǎng)基中，30°C靜止培養(yǎng)8h，作為發(fā)酵的種子培養(yǎng)液。
[0036] 發(fā)酵培養(yǎng)基：蔗糖2. 9%，蛋白胨1.0%，酵母膏0.4%，Na2HPO4 1.8%，MgSO4 0.02%，pH值7. 5。將種子培養(yǎng)液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為5%，培養(yǎng)溫度為30°C，pH 值為6. 1，轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/min，發(fā)酵5. 5h加入2%的D113樹脂，發(fā)酵時間為24h結(jié)束，乳酸 鏈球菌素的發(fā)酵濃度為11325U/mL。
[0037] 實施例二
[0038] 從平板培養(yǎng)基中挑取一環(huán)菌種接于液體種子培養(yǎng)基中，30°C活化8h，再以1%的 接種量接入另一液體種子培養(yǎng)基中，30°C靜止培養(yǎng)8h，作為發(fā)酵的種子培養(yǎng)液。
[0039] 發(fā)酵培養(yǎng)基：蔗糖2. 5%，蛋白胨0.8%，酵母膏0.4%，Na2HPO4 1.8%，MgSO4 0. 04%，pH值7. 5。將種子培養(yǎng)液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為6%，培養(yǎng)溫度為30°C，pH 值為6. 2,轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/min，發(fā)酵5. 5h加入3%的D113樹脂，發(fā)酵時間為24h結(jié)束，乳酸 鏈球菌素的發(fā)酵濃度為12085U/mL。
[0040] 實施例三
[0041] 從平板培養(yǎng)基中挑取一環(huán)接于液體種子培養(yǎng)基中，30°C活化8h，再以1 %的接種 量接入另一液體種子培養(yǎng)基中，30 °C靜止培養(yǎng)8h，作為發(fā)酵的種子培養(yǎng)液。
[0042] 發(fā)酵培養(yǎng)基：蔗糖3.0%，蛋白胨1.2%，酵母膏0.5%，Na2HPO 4 2.0%，MgSO4 0.03%，pH值7. 5。將種子培養(yǎng)液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為5%，培養(yǎng)溫度為30°C，pH 值為6. 3,轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/min，發(fā)酵5. 5h加入5%的NKA-II樹脂，發(fā)酵時間為24h結(jié)束，乳 酸鏈球菌素的發(fā)酵濃度為11450U/mL。
[0043] 實施例四
[0044] 從平板培養(yǎng)基中挑取一環(huán)接于液體種子培養(yǎng)基中，30°C活化8h，再以1 %的接種 量接入另一液體種子培養(yǎng)基中，30 °C靜止培養(yǎng)8h，作為發(fā)酵的種子培養(yǎng)液。
[0045] 發(fā)酵培養(yǎng)基：蔗糖2. 6%，蛋白胨1.1%，酵母膏0.5%，Na2HPO4 1.9%，MgSO4 0.02%，pH值7. 5。將種子培養(yǎng)液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為5%，培養(yǎng)溫度為30°C，pH 值為6. 5,轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/min，發(fā)酵5. 5h加入4%的NKA-II樹脂，發(fā)酵時間為24h結(jié)束，乳 酸鏈球菌素的發(fā)酵濃度為11089U/mL。
[0046] 盡管本發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列 運用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地 實現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限 于特定的細節(jié)和這里示出與描述的圖例。
【權(quán)利要求】
1. 一種高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，其特征在于， 將產(chǎn)乳酸鏈球菌素的菌種接種發(fā)酵培養(yǎng)基進行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)至生長對數(shù)期時加入發(fā) 酵培養(yǎng)物體積2-5%的樹脂，總發(fā)酵時間24-72h后得到含有乳酸鏈球菌素的發(fā)酵產(chǎn)物； 其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包含以下重量份的組分：蔗糖2. 5-3. 0,蛋白胨0. 8-1. 2,酵母 膏 0· 4-0. 5, Na2HPO4L 8-2. 0, MgSO4O. 01-0. 03,蒸餾水 90-100 ;所述發(fā)酵培養(yǎng)基的 pH 值為 6. 5-7· 5〇
2. 如權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，其特征在于，所 述產(chǎn)乳酸鏈球菌素的菌種為保藏編號為CGMCC NO. 8090的乳酸乳球菌CQ0422。
3. 如權(quán)利要求2所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，其特征在于，所 述樹脂為Dl 13樹脂或NKA-II樹脂。
4. 如權(quán)利要求3所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，其特征在于，所 述D113樹脂或NKA-II樹脂在加入發(fā)酵培養(yǎng)物之前經(jīng)過預(yù)處理，所述預(yù)處理的方法為：將樹 脂置于95-100%乙醇中浸泡至少2h，浸泡結(jié)束后用蒸餾水進行沖洗至少3次。
5. 如權(quán)利要求2所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，其特征在于，所 述乳酸乳球菌CQ0422接種發(fā)酵培養(yǎng)基之前進行活化和種子培養(yǎng)，包括以下步驟： 步驟一、種子活化，挑取乳酸乳球菌CQ0422的單菌落接種于液體種子培養(yǎng)基中，于 28-30°C靜止培養(yǎng)7-8h，得到活化后菌液； 步驟二、種子培養(yǎng)，將活化后菌液按照1-2%的比例接種另一液體種子培養(yǎng)基中，于 28-30°C靜止培養(yǎng)7-8h，得到種子培養(yǎng)液。
6. 如權(quán)利要求5所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，其特征在于，所 述種子培養(yǎng)基包括以下重量份的組分：蛋白陳〇. 5-1. 0,豆胨0. 5-1. 0,酵母膏0. 25-0. 5， 牛肉膏0. 5-1. 0,乳糖0. 5-1. 0,抗壞血酸0. 05-0. 10，β -磷酸甘油二鈉1. 9-2. 5， MgSO4 · 7Η200· 025-0. 05,蒸餾水90-100 ;所述種子培養(yǎng)基的pH值為6. 5-7. 0。
7. 如權(quán)利要求5所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，其特征在于，將 乳酸乳球菌CQ0422的種子培養(yǎng)液接種發(fā)酵培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，接種量為發(fā)酵培養(yǎng)基體積的 5-8%，發(fā)酵培養(yǎng)溫度為28-30°C，pH值為6. 0-6. 5,轉(zhuǎn)速為200-400轉(zhuǎn)/min。
8. 如權(quán)利要求2所述的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素的吸附分離耦合發(fā)酵工藝，其特征在于，所 述乳酸乳球菌CQ0422經(jīng)過微波誘變并采用瓊脂擴算法篩選得到。
【文檔編號】C12R1/46GK104212858SQ201410391233
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2014年8月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月6日
【發(fā)明者】張春穎, 楊旭錦 申請人:西藏天虹科技股份有限責(zé)任公司