一株石油烴降解菌dl8-7及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一株石油烴降解菌DL8-7及其應(yīng)用，涉及環(huán)境石油污染生物處理。石油烴降解菌(Polaribacter?sp.)DL8-7，登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC?No.9011。所述石油烴降解菌(Polaribacter?sp.)DL8-7在降解石油烴類化合物中的應(yīng)用。所述石油烴類化合物為多環(huán)芳烴類化合物，所述多環(huán)芳烴類化合物包括但不限于柴油、液態(tài)烷烴等烴類化合物。石油烴降解菌(Polaribacter?sp.)DL8-7能夠利用石油∶柴油＝1∶1作為能源和碳源生長繁殖，該菌6天能將無機(jī)鹽培養(yǎng)基中的5g/L的石油∶柴油＝1∶1(體積比)降解41.53％。
【專利說明】—株石油烴降解菌DL8-7及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及環(huán)境石油污染生物處理，尤其是涉及一株石油烴降解菌DL8-7及其應(yīng)
用。
【背景技術(shù)】
[0002]2010年7月16日，大連新港附近中石油輸油管道起火爆炸，導(dǎo)致1500噸原油進(jìn)入海洋，約430平方千米海域受到污染，其中重度污染海域約為12平方千米(宋維玲，王曉惠，王占坤.大連新港溢油事故對(duì)海洋經(jīng)濟(jì)的影響分析[J].海洋開發(fā)與管理.2010，27 (008):38-40.;唐少曼，沈婷婷.大連新港漏油事件[J].海洋世界.2010，(008):12-14.)。由于原油中含有不穩(wěn)定的碳?xì)浠衔?，包括多環(huán)芳烴、甲苯、乙苯和二甲苯，這些有害物質(zhì)可以通過呼吸、皮膚吸收和眼球進(jìn)入人體內(nèi)的血管中，有可能引起惡心、頭痛、頭暈等不適的感覺，甚至致癌，所以這次溢油事件對(duì)于附近居民的健康存在很大的威脅。溢油污染事故還會(huì)引起大面積海域嚴(yán)重缺氧，破壞海洋生產(chǎn)力，致使大量魚、蝦、貝類和海鳥死亡，造成局部“海洋荒漠化”;浮油被海浪沖到海岸，粘污海灘，造成海灘荒蕪，破壞海產(chǎn)養(yǎng)殖和鹽田生產(chǎn)，污染或毀壞濱海旅游區(qū)，降低海洋生態(tài)系統(tǒng)的服務(wù)功能和價(jià)值。石油污染物的生物富集作用不僅對(duì)海洋生物有毒害作用，可以通過食物鏈最終富集在人體內(nèi)，從而對(duì)人類健康造成嚴(yán)重的危害(徐衛(wèi)東.海洋石油開發(fā)中含油污水處理與溢油防治技術(shù)[J].油氣田環(huán)境保護(hù).1999,26:6.;卓誠裕.海洋油污染防治技術(shù)[M]:國防工業(yè)出版社,1996.) ο
[0003]目前，常用的海洋石油污染的治理方法主要有物理修復(fù)、化學(xué)修復(fù)和生物修復(fù)。與化學(xué)、物理方法相比，生物修復(fù)對(duì)人和環(huán)境造成的影響小，且修復(fù)費(fèi)用僅為傳統(tǒng)物理、化學(xué)修復(fù)的30%~50%。生物修復(fù)以其投入小，無二次污染的優(yōu)勢被視為最有前途的環(huán)境治理手段(Head IM, Swannell RP.Bioremediation of petroleum hydrocarboncontaminants in marine habitats[J].CurrOpinBiotechnol.1999,10(3):234-239.)。海洋石油烴降解菌早在一個(gè)世紀(jì)前就已經(jīng)被分離到。目前，大概有有79個(gè)細(xì)菌屬、9個(gè)藍(lán)細(xì)菌屬、103個(gè)真菌屬以及12個(gè)藍(lán)藻屬能利用烴類物質(zhì)做為唯一的碳源和能源(Head IM, Jones DM, Roling WF.Marine microorganisms make a meal of oil[J].Nat RevMicrobiol.2006,4(3):173-182.) o在這些種類繁多的烴類降解細(xì)菌中，大概只有1/4(19個(gè)屬)的細(xì)菌類降解者是海洋專屬的烴類降解者(Yakimov MM, Timmis KN, GolyshinPN.0bligate oil-degrading marine bacteria[J].Current opinion in biotechnology.2007，18(3):257-266.)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一株石油烴降解菌(Polaribacter sp.)DL8_7。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供石油烴降解菌(Polaribacter sp.)DL8-7在降解各種有機(jī)化合物中的應(yīng)用。[0006]所述石油經(jīng)降解菌(Polaribacter sp.)DL8-7,已于2014年04月03日在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，保藏地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼:100101，登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC N0.9011。所述石油烴降解菌(Polaribacter sp.)DL8_7來源于大連新港溢油事件發(fā)生地的表層海水,經(jīng)人工富集培養(yǎng)、分離純化得到。該菌是革蘭氏染色陰性的極地桿菌屬(Polaribacter sp.)的菌株DL8-7，生物學(xué)特性為非發(fā)酵型，專性需氧，菌體形態(tài)為無芽孢桿菌，菌落呈圓形，黃色不透明，表面光滑濕潤，邊緣規(guī)則，無暈環(huán)，中央凸起，直徑2~3_。該菌的最適生長條件為:pH = 7.0 ~8.5，溫度 25 ~28°C。
[0007]所述石油烴降解菌(Polaribacter sp.)DL8-7在降解石油烴類化合物中的應(yīng)用。
[0008]所述石油烴類化合物為多環(huán)芳烴類化合物，所述多環(huán)芳烴類化合物包括但不限于柴油、液態(tài)烷烴等烴類化合物。
[0009]實(shí)驗(yàn)證明，石油烴降解菌(Polaribacter sp.)DL8_7能夠利用石油:柴油=1:1作為能源和碳源生長繁殖，該菌6天能將無機(jī)鹽培養(yǎng)基中的5g/L的石油:柴油=I: 1(體積比)降解41.53%。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為DL8-7在石油:柴油=I: 1、柴油以及液態(tài)烷烴中的降解圖。在圖1中，標(biāo)記a為原油:柴油，b為柴油，c為液態(tài)燒烴。
[0011]圖2:DL8_7在PAH中的降解圖。
【具體實(shí)施方式】
[0012]實(shí)例一:Polaribacter sp.DL8-7 的分離與鑒定
[0013]現(xiàn)場采集大連新港溢油地區(qū)表層海水，采用海水培養(yǎng)基加入I %石油:柴油=I: I在28°C 180r/min條件下進(jìn)行富集培養(yǎng)。一周后，在固體培養(yǎng)基(M2)中稀釋涂布平板，得到多株純菌，純菌經(jīng)過接種至液體培養(yǎng)基中驗(yàn)證其降解石油烴的能力，最后得到一株石油烴的高效降解菌DL8-7，該菌經(jīng)16S rDNA鑒定為極地桿菌屬(Polaribacter sp.);選取其中相似序列，用MEGA5.0計(jì)算出序列的系統(tǒng)進(jìn)化距離，構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。進(jìn)化樹顯示，與其相似度最高的菌株都為Polaribacter sp.菌株。結(jié)合菌株的16S rDNA的測定結(jié)果，將其歸屬于極地桿菌屬(Polaribacter sp.)。固體培養(yǎng)基(M2)的成分:乙酸鈉5g/L,檸檬酸鈉0.05g/L,普通肉湯培養(yǎng)基0.5g/L，蛋白胨0.lg/L，酵母粉0.lg/L，蘋果酸0.05g/L,葡萄糖lg/L,鹿糖0.5g/L,硝酸銨lg/L,氯化銨0.2g/L,酒石酸鈉0.05g/L,可溶性淀粉0.5g/L,瓊脂粉15g/L，加海水至1L，調(diào)pH7.5，115°C高壓蒸汽滅菌30min后補(bǔ)加I %體積已滅菌的KH2PO4 溶液(10g/L, ρΗ6.7)及 0.1%體積 0.22 μ m 濾膜除菌的 FeSO4 (0.4g/L)。
[0014]將極地桿菌屬(Polaribacter sp.)的菌株DL8-7接種至含I %石油:柴油=I: I的人工海水培養(yǎng)基(MMC)中，在180r/min、28°C搖床中培養(yǎng)一周后(圖1)，利用重量法測定該菌對(duì)于石油烴的講解能力，經(jīng)過測定得到，該菌對(duì)石油:柴油=I: I的降解率為 41.53% ο 人工海水培養(yǎng)基(MMC):NaC124g/L, MgSO4.7H207g/L, NH4NO3lg/L, KC10.7g/L, KH2P042g/L, Na2HP043g/L, pH7.4。滅菌后補(bǔ)加適量微量元素混合液,微量元素經(jīng)0.22 μ M濾膜過濾除菌。MMC 微量元素混合液:CaCl2，2mg/L ；FeCl3.6H20, 50mg/L ；CuSO4, 0.5mg/L ；MnCl2.4H20, 0.5mg/L ；ZnSO4.7H20, 10mg/L。
[0015]實(shí)例二:Polaribacter sp.DL8-7的石油烴降解能力測試
[0016]將Polaribacter sp.DL8-7接種至含1%石油:柴油=I: I的人工海水培養(yǎng)基(MMC)中，在180r/min、28°C搖床中避光培養(yǎng)，每隔一天分別取樣利用重量法測定培養(yǎng)液中石油烴的降解率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。由圖1可以看出Polaribacter sp.DL8-7在第3~6天之間對(duì)于石油:柴油=I: I的降解較快，而在第I和第2天對(duì)于石油:柴油=1:1的降解緩慢。
[0017]實(shí)例三:Polaribacter sp.DL8-7的底物降解實(shí)驗(yàn)
[0018]將極地桿菌屬(Polaribacter sp.)的菌株DL8-7接種至不同碳源(液態(tài)燒烴、固態(tài)烷烴、PAH以及柴油)的人工海水培養(yǎng)基(MMC)中，同時(shí)設(shè)置底空白對(duì)照(只加底物不加菌)，在180r/min、28°C搖床避光培養(yǎng)，每隔一天分別取樣利用重量法測定培養(yǎng)液中底物的降解率。Polaribacter sp.DL8-7對(duì)于柴油以及液態(tài)燒烴的降解實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1 ;Polaribacter sp.DL8-7 在 PAH 中微弱生長，Polaribacter sp.DL8-7 在 PAH 的降解實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2。
【權(quán)利要求】
1.石油烴降解菌(Polaribactersp.)DL8_7,已于2014年04月03日在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC N0.9011。
2.如權(quán)利要求1所述石油烴降解菌(Polaribactersp.) DL8-7在降解石油烴類化合物中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述應(yīng)用，所述石油烴類化合物為多環(huán)芳烴類化合物。
4.如權(quán)利要求3所述應(yīng)用，所述多環(huán)芳烴類化合物包括但不限于柴油、液態(tài)烷烴。
【文檔編號(hào)】C12R1/01GK104004682SQ201410247866
【公開日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年6月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月6日
【發(fā)明者】邵宗澤, 王萬鵬, 張榮秋, 單大鵬 申請(qǐng)人:國家海洋局第三海洋研究所