一種米曲霉活力強(qiáng)化劑及其培養(yǎng)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種滬釀3.042米曲霉活力強(qiáng)化劑及其培養(yǎng)方法，該強(qiáng)化劑按培養(yǎng)基重量的添加量為0.1‰～2‰的魔芋低聚糖、0.05‰～2‰的牛磺酸、0.02‰～0.05‰的硫酸亞鐵、0.002‰～0.005‰的亞硒酸鈉。經(jīng)過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)72h可使發(fā)酵曲料中的米曲霉蛋白酶活達(dá)20kU/g，比不添加復(fù)合強(qiáng)化劑及單個(gè)強(qiáng)化劑的曲料酶活都大福度提高。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種米曲霉活力強(qiáng)化劑及其培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及滬釀3.042米曲霉蛋白酶活的增強(qiáng)劑及其培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]米曲霉，曲霉屬真菌中的一個(gè)常見(jiàn)種，它牛長(zhǎng)怏，分布廣，豐要在糧食、發(fā)酵食品、腐敗有機(jī)物和土隻等處，是我國(guó)傳統(tǒng)釀造食品醬和m的生產(chǎn)直赴，可生產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、果膠酶和曲酸等。
[0003]蛋白酶是用途最廣的酶制劑之一，全球蛋白酶的銷(xiāo)售額占酶制劑市場(chǎng)的60%，主要用于洗滌劑、制革、毛皮、蛋白水解物、釀酒、醬油、紡織、醫(yī)藥品、化妝品等。
[0004]2005年，我國(guó)(外資合資企業(yè)不計(jì))微生物酶制劑總銷(xiāo)售額約20億人民幣，其中蛋白酶銷(xiāo)售額近9億人民幣。目前，微生物的產(chǎn)酶能力通過(guò)各種遺傳育種手段已得到大幅度提高，據(jù)雀巢公司的專(zhuān)利報(bào)導(dǎo)，利用基因工程技術(shù)可將米曲霉肽酶和蛋白酶活性提高了兩倍以上?；蚬こ谈牧季N是當(dāng)前最熱衷的課題，雖工業(yè)用酶的80%已是用基因改良菌種生產(chǎn)的，但作為食品添加劑用酶在歐盟、日本還是遭拒絕的。
[0005]研究工作者根據(jù)上述存在的問(wèn)題，開(kāi)發(fā)出類(lèi)目繁多的解決方法。例如:中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?01110308330.3 “發(fā)酵用米曲霉菌種的工業(yè)化生產(chǎn)方法”和中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?00680023996.1 “生產(chǎn)液體曲的方法”均提供了米曲霉的擴(kuò)大培養(yǎng)技術(shù)及提高其蛋白酶活的方法。但是，在曲料中添加復(fù)合強(qiáng)化劑來(lái)增強(qiáng)米曲霉活力尚未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明目的在于提供一種高效、營(yíng)養(yǎng)的米曲霉活力增強(qiáng)方法。該復(fù)合活力強(qiáng)化劑由?；撬帷⒛в蟮途厶?、亞硫酸鐵和亞硒酸鈉混合而成，將活力強(qiáng)化劑添加于米曲霉各級(jí)培養(yǎng)基中，使成曲中蛋白酶活高達(dá)20kU/g。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明人通過(guò)大量試驗(yàn)研究和不懈探索，最終獲得了如下技術(shù)方案:
一種滬釀3.042米曲霉活力強(qiáng)化劑，其特征在于:所述的強(qiáng)化劑由魔芋低聚糖、?；撬帷⒘蛩醽嗚F和亞硒酸鈉組成，按培養(yǎng)基重量的添加量為:0.1%。~2%。的魔芋低聚糖、
0.05%。~2%。的?；撬帷?.02%。~0.05%。的硫酸亞鐵、0.002%。~0.005%。的亞硒酸鈉。
[0008]一種滬釀3.042米曲霉的培養(yǎng)方法，其特征在于:該方法包括在滬釀3.042米曲霉的各級(jí)培養(yǎng)基中均添加了由魔芋低聚糖、?；撬帷⒘蛩醽嗚F和亞硒酸鈉組成的活力強(qiáng)化劑，按培養(yǎng)基重量的添加量為:0.1%。~2%。的魔芋低聚糖、0.05%。~2%。的?；撬?、0.02%。~
0.05%。的硫酸亞鐵、0.002%。~0.005%。的亞硒酸鈉。
[0009]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明涉及的米曲霉酶活強(qiáng)化劑具有如下優(yōu)點(diǎn)和顯著的進(jìn)步:
(I)本發(fā)明首次使用?；撬帷⒛в蟮途厶?、硫酸亞鐵、亞硒酸鈉作為曲料成分，生產(chǎn)發(fā)酵豆制品，具有良好的生理功能，如提高神經(jīng)傳導(dǎo)和視覺(jué)機(jī)能，改善記憶的功能，補(bǔ)鈣，排毒，防治糖尿病等，使所得曲料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值提高。
[0010](2)本發(fā)明通過(guò)加入牛磺酸，營(yíng)造出一個(gè)抗缺氧的環(huán)境，使得米曲霉在含氧量不足的情況下正常生長(zhǎng)，加入魔芋低聚糖可以促進(jìn)米曲霉的生長(zhǎng)，加入硫酸亞鐵和亞硒酸鹽培養(yǎng)基富鐵富硒，也能促進(jìn)米曲霉的生長(zhǎng)，促使米曲霉孢子和蛋白酶活都大幅度提高。
[0011](3)發(fā)酵培養(yǎng)基中添加?；撬幔@著延長(zhǎng)了米曲霉生長(zhǎng)過(guò)程中進(jìn)入衰亡期的時(shí)間，米曲霉平板培養(yǎng)5天，添加復(fù)合強(qiáng)化劑的米曲霉孢子呈深綠色，不添加復(fù)合強(qiáng)化劑的孢子進(jìn)入衰亡期呈黃綠色(如圖1所示)。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0012]圖1為添加復(fù)合活力強(qiáng)化劑察氏培養(yǎng)基與察氏培養(yǎng)基各平板培養(yǎng)5天后米曲霉的生長(zhǎng)情況。注:圖上側(cè)三個(gè)平板為平行的添加復(fù)合強(qiáng)化劑的米曲霉培養(yǎng)5天的生長(zhǎng)狀況，顏色呈深綠色，保持成熟狀態(tài)，健康生長(zhǎng)；圖下側(cè)三個(gè)平板為平行的不添加復(fù)合強(qiáng)化劑的米曲霉培養(yǎng)5天的生長(zhǎng)狀況，顏色呈黃綠色，已經(jīng)進(jìn)入了衰亡期。
【具體實(shí)施方式】
[0013]以下是本發(fā)明的具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步作描述，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于這些實(shí)施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0014]實(shí)施例1
(1)配制察氏培養(yǎng)基及制作平板、斜板培養(yǎng)基:培養(yǎng)基配方為硝酸鈉3g，氯化鉀0.5g，硫酸亞鐵0.01g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0.5g，蔗糖20g，瓊脂20g，水IL ;
(2)添加純種的米曲霉菌液0.1mL于上述平板培養(yǎng)基中用于篩選出單菌落的米曲霉，挑取米曲霉的單菌落在斜面培養(yǎng)基上保藏?cái)U(kuò)大培養(yǎng)，溫度控制在30°C培養(yǎng)3天后收集孢子粉；
(3)按孢子粉與培養(yǎng)基0.4%的重量比稱取孢子粉，與發(fā)酵培養(yǎng)基(70g麩皮，IOg米粉，IOg黃豆粉，90ml水)混勻，每瓶曲料40g。發(fā)酵起始~20h培養(yǎng)溫度控制在34°C，20h~72h溫度控制在30°C，72h培養(yǎng)結(jié)束。
[0015](4)測(cè)量曲料中米曲霉蛋白酶活為8.2kU/g。
[0016]實(shí)施例2
(O配制察氏培養(yǎng)基并按培養(yǎng)基重量添加0.05%。~2%。的?；撬?制作平板、斜板培養(yǎng)
基;
(2)添加純種的米曲霉菌液0.1mL于上述平板培養(yǎng)基中用于篩選出單菌落的米曲霉，挑取米曲霉的單菌落在斜面培養(yǎng)基上保藏?cái)U(kuò)大培養(yǎng)，溫度控制在30°C培養(yǎng)3天后收集孢子粉；
(3)按孢子粉與培養(yǎng)基0.4%的重量比稱取孢子粉，與發(fā)酵培養(yǎng)基(70g麩皮，IOg米粉，IOg黃豆粉，90ml水，并按培養(yǎng)基重量添加0.05%。~2%。的?；撬?混勻，每瓶曲料40g。發(fā)酵起始~20h培養(yǎng)溫度控制在34°C，20h~72h溫度控制在30°C，72h培養(yǎng)結(jié)束。
[0017](4)測(cè)量曲料中米曲霉蛋白酶活9.805kU/g,比不添加復(fù)合強(qiáng)化劑的空白曲料酶活有所提聞。[0018]實(shí)施例3
(O配制察氏培養(yǎng)基并按培養(yǎng)基重量添加0.1%。~2%。的魔芋低聚糖，制作平板、斜面
培養(yǎng)基；
(2)添加純種的米曲霉菌液0.1mL于上述平板培養(yǎng)基中用于篩選出單菌落的米曲霉，挑取米曲霉的單菌落在斜面培養(yǎng)基上保藏?cái)U(kuò)大培養(yǎng)，溫度控制在30°C培養(yǎng)3天后收集孢子粉；
(3)按孢子粉與培養(yǎng)基0.4%的重量比稱取孢子粉，與發(fā)酵培養(yǎng)基(70g麩皮，IOg米粉，IOg黃豆粉，90ml水，并按培養(yǎng)基重量添加0.1%。~2%。的魔芋低聚糖)混勻，每瓶曲料40g。發(fā)酵起始~20h培養(yǎng)溫度控制在34°C，20h~72h溫度控制在30°C，72h培養(yǎng)結(jié)束。
[0019](4)測(cè)量曲料中米曲霉蛋白酶活9.232kU/g，比不添加復(fù)合強(qiáng)化劑的空白曲料酶活有所提聞。
[0020]實(shí)施例4
Cl)配制察氏培養(yǎng)基并按培養(yǎng)基重量添加0.02%。~0.05%。的亞硫酸鐵，制作平板、斜面培養(yǎng)基；
(2)添加純種的米曲霉菌液0.1mL于上述平板培養(yǎng)基中用于篩選出單菌落的米曲霉，挑取米曲霉的單菌落在斜面培養(yǎng)基上保藏?cái)U(kuò)大培養(yǎng)，溫度控制在30°C培養(yǎng)3天后收集孢子粉；
(3)按孢子粉與培養(yǎng)基0.4%的重量比稱取孢子粉，與發(fā)酵培養(yǎng)基(70g麩皮，IOg米粉，IOg黃豆粉，90ml水，并按培養(yǎng)基重量添加0.02%。~0.05%。的亞硫酸鐵)混勻，每瓶曲料40g。發(fā)酵起始~20h培養(yǎng)溫度控制在34°C，20h~72h溫度控制在30°C，72h培養(yǎng)結(jié)束。
[0021](4)測(cè)量曲料中米曲霉蛋白酶活為9.662kU/g，比不添加復(fù)合強(qiáng)化劑的空白曲料的酶活有所提高。
[0022]實(shí)施例5
Cl)配制察氏培養(yǎng)基并按培養(yǎng)基重量添加0.002%。~0.005%。亞硒酸鈉，混勻，制作平板、斜面培養(yǎng)基；
(2)添加純種的米曲霉菌液0.1mL于上述平板培養(yǎng)基中用于篩選出單菌落的米曲霉，挑取米曲霉的單菌落在斜面培養(yǎng)基上保藏?cái)U(kuò)大培養(yǎng)，溫度控制在30°C培養(yǎng)3天后收集孢子粉；
(3)按孢子粉與培養(yǎng)基0.4%的重量比稱取孢子粉，與發(fā)酵培養(yǎng)基(70g麩皮，IOg米粉，IOg黃豆粉，90ml水，并按培養(yǎng)基重量添加0.002%。~0.005%。亞硒酸鈉)混勻，每瓶曲料40g。發(fā)酵起始~20h培養(yǎng)溫度控制在34°C，20h~72h溫度控制在30°C，72h培養(yǎng)結(jié)束。
[0023](4)測(cè)量曲料中米曲霉蛋白酶活為8.874kU/g，比不添加復(fù)合強(qiáng)化劑的空白曲料的酶活有所提高。
[0024]實(shí)施例6
Cl)配制察氏培養(yǎng)基并按培養(yǎng)基重量添加0.1%。~2%。魔芋低聚糖、0.05%。~2%。牛磺酸、0.02%。~0.05%。硫酸亞鐵、0.002%。~0.005%。亞硒酸鈉，混勻；
(2)添加純種的米曲霉菌液0.1mL于上述平板培養(yǎng)基中用于篩選出單菌落的米曲霉，挑取米曲霉的單菌落在斜面培養(yǎng)基上保藏?cái)U(kuò)大培養(yǎng)，溫度控制在30°C培養(yǎng)3天后收集孢子粉；(3)按孢子粉與培養(yǎng)基0.4%的重量比稱取孢子粉，與發(fā)酵培養(yǎng)基(70g麩皮，IOg米粉，IOg黃豆粉，90ml水，并按培養(yǎng)基重量添加0.1%。~2%。的魔芋低聚糖、0.05%。~2%。的?；撬?、0.02%。~0.05%。的硫酸亞鐵、0.002%。~0.005%。的亞硒酸鈉混勻，每瓶曲料40g。發(fā)酵起始~20h培養(yǎng)溫度控制在34°C，20h~72h溫度控制在30°C，72h培養(yǎng)結(jié)束。
[0025](4)測(cè)量曲料中米曲霉蛋白酶活20kU/g，比不添加復(fù)合強(qiáng)化劑及單個(gè)強(qiáng)化劑的曲料酶活都大福度提高。
[0026]實(shí)施例1-6曲料中米曲霉蛋白酶活測(cè)量結(jié)果如下:
【權(quán)利要求】
1.一種滬釀3.042米曲霉活力強(qiáng)化劑，其特征在于:所述的強(qiáng)化劑由魔芋低聚糖、?；撬?、硫酸亞鐵和亞硒酸鈉組成，按培養(yǎng)基重量的添加量為:0.1%。~2%。的魔芋低聚糖、0.05%。~2%。的牛磺酸、0.02%。~0.05%。的硫酸亞鐵、0.002%。~0.005%。的亞硒酸鈉。
2.一種滬釀3.042米曲霉的培養(yǎng)方法，其特征在于:該方法包括在滬釀3.042米曲霉的各級(jí)培養(yǎng)基中均添加了由魔芋低聚糖、?；撬?、硫酸亞鐵和亞硒酸鈉組成的活力強(qiáng)化劑，按培養(yǎng)基重量的添加量為:0.1%。~2%。的魔芋低聚糖、0.05%。~2%。的牛磺酸、0.02%。~0.05%。的硫酸亞鐵 、0.002%。~0.005%。的亞硒酸鈉。
【文檔編號(hào)】C12N1/14GK103923872SQ201410153393
【公開(kāi)日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年4月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月17日
【發(fā)明者】汪超, 李詩(shī)雯, 李冬生, 曹約澤, 徐寧, 高冰, 胡勇, 朱于鵬 申請(qǐng)人:湖北工業(yè)大學(xué)