一種脂質(zhì)代謝型肥胖基因體質(zhì)評(píng)估的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種脂質(zhì)代謝型肥胖基因體質(zhì)評(píng)估方法，其特征在于，通過同時(shí)檢測(cè)分析個(gè)體的ABCA1基因、LPL基因、PPARG基因、ADRB3基因SNPs位點(diǎn)基因攜帶型為所有的受檢者提供脂質(zhì)代謝型肥胖體質(zhì)評(píng)估，可以讓受檢者在考慮以飲食和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行瘦身之前，先了解自身基因體質(zhì)情況，了解個(gè)人的肥胖潛能成因，選擇最適合的個(gè)體化營(yíng)養(yǎng)及運(yùn)動(dòng)瘦身方式，將各種肥胖基因表現(xiàn)的型態(tài)一一擊破，達(dá)到最有效健康的減重效果。
【專利說明】一種脂質(zhì)代謝型肥胖基因體質(zhì)評(píng)估的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)代謝型肥胖基因體質(zhì)評(píng)估方法，可用于評(píng)估脂質(zhì)代謝型肥胖基因體質(zhì)情況，針對(duì)性的提示受檢者根據(jù)遺傳體質(zhì)選擇不同的減肥策略，屬于分子生物學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]肥胖癥是一種熱量代謝障礙，攝入熱量超過消耗的熱量，引起體內(nèi)脂肪積聚過多所致。一般認(rèn)為超過按身高所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)體重20%即可成為肥胖。肥胖癥是一種與遺傳因素及生活方式密切相關(guān)的慢性疾病，它會(huì)引發(fā)血脂升高，容易造成脂肪肝、動(dòng)脈血管病變、心臟病、糖尿病，肥胖的兒童還會(huì)引發(fā)性功能發(fā)育不良并導(dǎo)致成人期各種疾病發(fā)病率和死亡率上升。因此，若通過有效的方法來預(yù)防，就能避免過早地出現(xiàn)高血壓、冠心病、糖尿病、腦血管病等疾患，從而提聞人們的生存質(zhì)量。
[0003]由于至少有40%軀體脂肪量的差異是由遺傳因素引起的，所以很容易明確遺傳對(duì)肥胖有很大影響。遺傳體質(zhì)不同的人在患肥胖癥時(shí)應(yīng)采取不同的減肥策略，利用現(xiàn)代科學(xué)研究成果，開發(fā)一項(xiàng)基于分子遺傳基礎(chǔ)的體重管理分子檢測(cè)產(chǎn)品會(huì)對(duì)減肥者的減肥計(jì)劃提供基因減肥概念的個(gè)性化體重管理建議，具有較強(qiáng)的社會(huì)意義和市場(chǎng)前景。目前肥胖癥的臨床治療方法主要是飲食和運(yùn)動(dòng)療法，但存在著碳水化合物、脂肪以及蛋白質(zhì)攝入量控制“一刀切”和盲目采用減肥藥物的非個(gè)體化治療方式。原因主要在于無法明確地將患者區(qū)分成為不同的減重體質(zhì)，從而對(duì)不同患者是否需要嚴(yán)格控制碳水化合物的攝入，是否需要控制脂肪的攝入，是否需要使用減肥藥物，以及應(yīng)該使用哪類減肥藥物的治療措施選擇上沒有明確指導(dǎo)。
[0004]脂類物質(zhì)具有重要的生物功能，脂肪是體內(nèi)的一種主要能量來源，但脂肪攝入過量而運(yùn)動(dòng)量又過少將產(chǎn)生肥胖，并導(dǎo)致一些慢性病的發(fā)生；膳食脂肪總量增加，還會(huì)增大某些癌癥的發(fā)生幾率。因此有意識(shí)地控制脂肪攝入和積極從事體力或體育活動(dòng)，以消耗攝入多余的熱量，避免過多的脂肪在體內(nèi)積存。
[0005]研究發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)代謝型肥胖相關(guān)基因變異會(huì)導(dǎo)致脂肪細(xì)胞增大增多、內(nèi)臟脂肪組織的脂肪分解減少，皮下脂肪含量變多，造成臟器脂肪含量增高，體重易上升，基礎(chǔ)代謝率低，易形成高血壓，葡萄糖的耐受性高，內(nèi)臟脂肪組織的脂肪分解減少，導(dǎo)致臟器肥胖。因此應(yīng)有意識(shí)地控制脂肪攝入和積極從事體力或體育活動(dòng)，以消耗攝入多余的熱量，避免過多的脂肪在體內(nèi)積存。
[0006]研究發(fā)現(xiàn)ABCA1，LPL, PPARG, ADRB3基因與脂質(zhì)代謝型肥胖體質(zhì)有關(guān)。
[0007]ABCAl 為 ATP-binding cassette transporterAl, abcal (三憐酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al)蛋白編碼基因，它以ATP為能源，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)游離膽固醇和磷脂的流出，在膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)(RCT)和HDL生成的起始步驟中起重要作用，被稱作RCT守門人。核受體PPARs、LXRs和FXR對(duì)abcal蛋白的表達(dá)具有調(diào)控作用。ABCAl功能障礙將導(dǎo)致巨噬細(xì)胞內(nèi)大量的膽固醇沉積而成為泡沫細(xì)胞，繼而浸潤(rùn)血管壁，促進(jìn)冠心病的發(fā)生發(fā)展。[0008]ABCAl在機(jī)體中最重要的作用是對(duì)高密度脂蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)。高密度脂蛋白是機(jī)體重要的抵抗心腦血管疾病的大分子，它可以將機(jī)體多余的膽固醇從外周細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)入肝臟內(nèi)，同時(shí)也可以保護(hù)低密度脂蛋白不受氧化損傷的影響，抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞上粘性大分子的表達(dá)，組織單核分子進(jìn)入血管壁。而ABCAl對(duì)于肝臟內(nèi)和外周細(xì)胞內(nèi)的膽固醇水平可以進(jìn)行調(diào)節(jié)，主要通過將多余的膽固醇從外周細(xì)胞泵出，與乏脂蛋白apoA-1結(jié)合形成初始狀態(tài)的高密度脂蛋白，而初始狀態(tài)的高密度脂蛋白通過膽固醇磷酸?；蔀槟懽痛妓嶂闹磻?yīng)轉(zhuǎn)化為成熟的α高密度脂蛋白。決定血清內(nèi)α高密度脂蛋白含量的幾個(gè)因素包括肝臟內(nèi)ABCAl轉(zhuǎn)運(yùn)酶和apoA-1的含量以及乏脂蛋白apoA_I的含量。
[0009]LPL基因編碼脂蛋白脂酶，該酶在心臟、肌肉和脂肪組織中進(jìn)行表達(dá)。LPL以同型二聚體蛋白的形式行使功能，其分子生物學(xué)的作用包括兩部分，一部分為甘油三脂的水解酶作用，另一部分則是受體介導(dǎo)的脂蛋白內(nèi)吞作用的橋梁。LPL蛋白上的位點(diǎn)突變?cè)趪?yán)重的情況下可以導(dǎo)致I型高脂蛋白血癥，而較輕程度上則引起體內(nèi)脂蛋白代謝的紊亂，導(dǎo)致高脂蛋白血癥、糖尿病、肥胖等疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增高。
[0010]PPARG 為 peroxisome proliferative activated receptor, gamma (過氧化物酶體增生激活受體Y )編碼基因，屬于核受體過氧化物酶體增生激活受體亞家族，可以與類維生素A受體(RXR)接合形成異型二聚物，該異性二聚物可以通過與特異DNA序列的結(jié)合調(diào)控多種基因的轉(zhuǎn)錄，該特異DNA序列通常稱為過氧化物酶體增殖反應(yīng)元件，PREE。PPARG編碼的蛋白主要負(fù)責(zé)脂類的分化代謝以及糖、脂代謝等。此外，PPARG還被發(fā)現(xiàn)與多種疾病相關(guān)，包括:肥胖、糖尿病、動(dòng)脈硬化和癌癥等。PPARG突變或異常表達(dá)等都會(huì)引起過氧化物酶體增生激活受體Y活性偏高，脂肪酸吸收增加，容易造成脂肪堆積。
[0011]腎上腺素受體(ADRB3)在瘦素調(diào)節(jié)的神經(jīng)通路中扮演著重要角色，通過傳遞交感神經(jīng)信號(hào)，參與骨的重吸收和能量的代謝，對(duì)骨骼發(fā)育及體重的調(diào)節(jié)有著重要影響。ADRB3突變或異常表達(dá)等會(huì)造成 內(nèi)臟脂肪組織的脂肪分解減少，皮下脂肪含量變多，造成臟器肥胖。攜帶Arg64的同型或異性合子臟器脂肪含量特高，體重易上升，基礎(chǔ)代謝率低，易形成高血壓，葡萄糖的耐受性高，內(nèi)臟脂肪組織的脂肪分解減少，造成內(nèi)臟肥胖。
[0012]目前的基礎(chǔ)研究已能從理論上證明基因分型檢測(cè)可以用于判斷肥胖體質(zhì)的類型，而且檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、檢測(cè)成本在可接受程度中、檢測(cè)結(jié)果可信。因此，基因分型檢測(cè)用于評(píng)估肥胖體質(zhì)的可行性是明確的。根據(jù)基因檢測(cè)結(jié)果結(jié)合體重管理測(cè)評(píng)系統(tǒng)建立個(gè)性化體重健康評(píng)估報(bào)告，有針對(duì)的解決體重控制問題，提高人們生活質(zhì)量。因此利用現(xiàn)有科學(xué)、技術(shù)研究成果來開發(fā)這樣一個(gè)產(chǎn)品，時(shí)機(jī)是成熟的。
[0013]本發(fā)明的目的是提供一種脂質(zhì)代謝型肥胖基因體質(zhì)評(píng)估方法，可以讓受檢者在考慮以飲食和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行瘦身之前，先了解自身基因體質(zhì)情況，了解個(gè)人的肥胖潛能成因，選擇最適合的個(gè)體化營(yíng)養(yǎng)及運(yùn)動(dòng)瘦身方式，將各種肥胖基因表現(xiàn)的型態(tài)一一擊破，達(dá)到最有效健康的減重效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014]本發(fā)明的目的是提供一種脂質(zhì)代謝型肥胖基因體質(zhì)評(píng)估方法，可以讓受檢者在考慮以飲食和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行瘦身之前，先了解自身基因體質(zhì)情況，了解個(gè)人的肥胖潛能成因，選擇最適合的個(gè)體化營(yíng)養(yǎng)及運(yùn)動(dòng)瘦身方式，將各種肥胖基因表現(xiàn)的型態(tài)一一擊破，達(dá)到最有效健康的減重效果。
[0015]為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供一種脂質(zhì)代謝型肥胖基因體質(zhì)評(píng)估方法。其具體步驟為:
步驟1:檢測(cè)的樣品類型與采樣方法
用采樣拭在口腔中分別左右兩腮至少需要各上下刮40次以上，以保證采集到足量的細(xì)胞樣本；
步驟2:基因組DNA的抽提方法
采用硅膠吸附法抽提每一個(gè)口腔上皮細(xì)胞樣本的基因組DNA，時(shí)間為2小時(shí)一 2.5小時(shí)，經(jīng)電泳檢測(cè)后，用肉眼可見清晰白色條帶即可判斷獲得的DNA能進(jìn)入下一步檢測(cè)；
步驟3:熒光定量PCR反應(yīng)
將每一個(gè)被測(cè)者樣本分別放入4個(gè)反應(yīng)孔，同時(shí)檢測(cè)4個(gè)位點(diǎn)，即三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al (ABCAl) rs2230806 ;脂蛋白脂酶(LPL) rs320 ;過氧化物酶體增生激活受體Y(PPARG)rsl801282 ;腎上腺素受體(ADRB3)rs4994，另外根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要增設(shè)不含DNA模版的NTC空白對(duì)照孔； 每一個(gè)反應(yīng)孔的基因分型可以根據(jù)下表的引物和探針設(shè)計(jì)，采用TaqMan?_MGB技術(shù)，進(jìn)行檢測(cè)試劑合成；
在每一個(gè)反應(yīng)孔中加入試劑為熒光定量PCR反應(yīng)體系，總體積為10μ1,即濃度為20ng/μ? 的 DNA 模板 2μ1、?μ1 IOX 熒光定量 PCR 反應(yīng)緩沖液 ABI Taqman ? MGB、0.?μ? 25mMd NTP合成DNA的四種脫氧核苷酸底物、0.5μ1 25mM MgCl2溶液、0.02μ1 (5unitsM) TaqDNA聚合酶、去離子水4.98μ1、4個(gè)位點(diǎn)分別采用不同的正向引物(20μΜ, 0.225μ1 )、反向弓丨物(20μΜ，0.22541)、￥1(:熒光探針(1(^]\1，0.25μ1)和 FAM 熒光探針(ΙΟμΜ，0.25μ1)工具進(jìn)行檢測(cè)(探針、引物、序列如下);
三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al (ABCAI) rs2230806 帶VIC熒光A型探針 CAAaGGAGAAACT 帶FAM熒光G型探針 CAAgGGAGAAACT 正向引物 AAGTCTGTGCAATGGATCAAAA 反向引物 CTCACCAGGATTGGCTTCAG
cataaattgc aaaatagtga ggatgttgtt catctaataa aagtggttcc aggaattcag
actctggatt cctgtttgcc aaatcatgtg tcccactctt aagaaaacga gttggactct
ggatttttct ttgcaagagg gacaagagtg tgggagatac tgagttaatg caacttgcag
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taatgctttc ggaatgtgag gcttttcctt ggacagcatg actttgtttt gtagaaaagt
acggctggct gggagtttgt gatataattt agttcagtgg tattctaagt gttcttagtg
【權(quán)利要求】
1.一種脂質(zhì)代謝型肥胖基因體質(zhì)評(píng)估方法，其特征在于，具體步驟為 步驟1:檢測(cè)的樣品類型與采樣方法 用采樣拭在口腔中分別左右兩腮至少需要各上下刮40次以上，以保證采集到足量的細(xì)胞樣本； 步驟2:基因組DNA的抽提方法 采用硅膠吸附法抽提每一個(gè)口腔上皮細(xì)胞樣本的基因組DNA，時(shí)間為2小時(shí)一 2.5小時(shí)，經(jīng)電泳檢測(cè)后，用肉眼可見清晰白色條帶即可判斷獲得的DNA能進(jìn)入下一步檢測(cè)； 步驟3:熒光定量PCR反應(yīng) 將每一個(gè)被測(cè)者樣本分別放入4個(gè)反應(yīng)孔，同時(shí)檢測(cè)4個(gè)位點(diǎn)，即三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體Al (ABCAl) rs2230806 ;脂蛋白脂酶(LPL) rs320 ;過氧化物酶體增生激活受體Y(PPARG)rsl801282 ;腎上腺素受體(ADRB3)rs4994，另外根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要增設(shè)不含DNA模版的NTC空白對(duì)照孔； 每一個(gè)反應(yīng)孔的基因分型可以根據(jù)下表的引物和探針設(shè)計(jì)，采用TaqMan?_MGB技術(shù)，進(jìn)行檢測(cè)試劑合成； 在每一個(gè)反應(yīng)孔中加入試劑為熒光定量PCR反應(yīng)體系，總體積為10μ1,即濃度為20ng/μ? 的 DNA 模板 2μ1、?μ1 IOX 熒光定量 PCR 反應(yīng)緩沖液 ABI Taqman ? MGB、0.?μ? 25mMd NTP合成DNA的四種脫氧核苷酸底物、0.5μ1 25mM MgCl2溶液、0.02μ1 (5unitsM) TaqDNA聚合酶、去離子水4.98μ1、4個(gè)位點(diǎn)分別采用不同的正向引物(20μΜ, 0.225μ1 )、反向弓丨物(20μΜ，0.22541)、￥1(:熒光探針(1(^]\1，0.25μ1)和 FAM 熒光探針(ΙΟμΜ，0.25μ1)工具進(jìn)行檢測(cè)(探針、引物、序列如下);
2.權(quán)利要求書I中的所述的四個(gè)基因的組合模式。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103834739SQ201410091402
【公開日】2014年6月4日 申請(qǐng)日期:2014年3月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月13日
【發(fā)明者】毛丹丹, 王校, 傅詠南, 李曉瑩, 卞雪蓮 申請(qǐng)人:上海中優(yōu)門診部有限公司