一種雙峰甘露聚糖酶及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種雙峰甘露聚糖酶及其制備方法，屬于甘露聚糖酶的制備【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明采用白地霉對(duì)特定組成的料液進(jìn)行發(fā)酵能夠獲得作用適宜pH范圍為1.0-8.5，且能在pH2.5和pH6.5產(chǎn)生兩個(gè)活性高峰的雙峰甘露聚糖酶；克服了由真菌制備的甘露聚糖酶多為酸性，其作用適宜的pH范圍為2.4-5.0，pH高于8之后喪失活性的問題。本發(fā)明的雙峰甘露聚糖酶，其制備所采用的料液的重量組成為100份水、5份玉米粉、1份豆粕、0.6份魔芋粉、0.2份酵母膏、0.5份尿素、0.5份磷酸二氫鉀和0.05份淀粉酶。
【專利說明】一種雙峰甘露聚糖酶及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種雙峰甘露聚糖酶及其制備方法，屬于甘露聚糖酶的制備【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]甘露聚糖酶(endo-1, 4_β -mannanase)是一種新型的酶制劑,屬于一種半纖維素酶類，它除具有一般非淀粉多糖(NSP)酶類的作用——降解NSP，降低腸道粘度，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收外；近來很多研究表明，甘露聚糖酶還是一種多功能的促生長(zhǎng)劑，它可促進(jìn)類胰島素生長(zhǎng)因子IGF-1的分泌，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，提高瘦肉率；同時(shí)，它還可消除豆類中富含的β_甘露聚糖對(duì)葡萄糖吸收的干擾，極大提高餅柏尤其是豆柏的能量消化率。實(shí)際使用中還可看出，添加了甘露聚糖酶后動(dòng)物的抵抗力及整齊度都有提高。實(shí)踐證明，甘露聚糖酶已超脫了傳統(tǒng)酶制劑的作用，成為一種新型的促生長(zhǎng)飼料添加劑。
[0003]甘露聚糖酶可以分解玉米-豆柏型飼糧中的甘露聚糖為甘露寡糖。甘露寡糖作為一種生物化學(xué)益生素，可以改善腸道微生物組成，形成以雙歧桿菌和乳酸菌為優(yōu)勢(shì)的腸道菌群。據(jù)報(bào)道，甘露寡糖可作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被雙歧桿菌和乳酸桿菌選擇性發(fā)酵利用，并促進(jìn)其生長(zhǎng)繁殖。但大腸桿菌、沙門氏菌等致病性菌卻因無法利用而導(dǎo)致饑餓死亡。除此之外，甘露寡糖可與病原菌細(xì)胞壁上的受體結(jié)合，從而阻止細(xì)菌與動(dòng)物腸黏膜上的糖基結(jié)合，保護(hù)腸黏膜結(jié)構(gòu)和功能的完整，又由于甘露寡糖為非消化性物質(zhì)，這種復(fù)合物就順利通過胃腸道被排出體外，因而起到吸附腸道病原菌，對(duì)動(dòng)物具有保健的作用。甘露寡糖不僅能連接到細(xì)菌上，而且能連接在毒素、病毒、真核生物上，結(jié)合后甘露寡糖可作為這些外源性抗原的助劑，緩解抗原的吸收，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫。甘露寡糖不僅直接參與免疫調(diào)節(jié)而部分替代抗生素，在其與抗生素共用中，還能起到降低機(jī)體組織抗生素殘留的作用。
[0004]在飼料加工過程和動(dòng)物采食后，酶制劑一般要經(jīng)受高溫高濕制粒的破壞，胃酸和胃蛋白酶的損害，能夠到達(dá)動(dòng)物體內(nèi)作用`位點(diǎn)依然存留活性的那部分酶活稱為有效酶活。這要求相應(yīng)酶種具有良好耐熱耐酸性能、抗胃蛋白酶、胰蛋白酶特性等等。良好的飼料酶有較寬的溫度作用范圍，保證既能在動(dòng)物體溫的溫度下表現(xiàn)有較高的酶活，又能對(duì)飼料高溫高濕制粒過程中表現(xiàn)出較好的耐受性；既能耐受胃酸的損害，在胃的酸性環(huán)境及小腸的中性環(huán)境下也能具有較高的酶活表現(xiàn)。
[0005]不同來源的甘露聚糖酶，其性質(zhì)、應(yīng)用范圍和價(jià)值不盡相同。國(guó)內(nèi)外研究和報(bào)道較多的細(xì)菌產(chǎn)甘露聚糖酶多為中性或堿性酶。而真菌來源的甘露聚糖酶多為酸性，其作用適宜的pH范圍為2.4-5.0。盡管有些甘露聚糖酶的作用范圍能夠達(dá)到pH8.0，但是，高于pH8.0后不再有活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明通過研究實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用白地霉對(duì)特定組成的料液進(jìn)行發(fā)酵能夠獲得作用適宜pH范圍較寬，且能在pH2.5和pH6.5產(chǎn)生兩個(gè)活性高峰的雙峰甘露聚糖酶。[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案
一種雙峰甘露聚糖酶的制備方法，用白地霉對(duì)下述料液進(jìn)行發(fā)酵；所述料液的重量組成為100份水、5份玉米粉、1份豆柏、0.6份魔芋粉、0.2份酵母膏、0.5份尿素、0.5份磷酸二氫鉀和0.05份淀粉酶；
所述淀粉酶的活性為2000u/g。
[0008]所用白地霉(拉丁學(xué)名:Geotrichumcandidum Link & Magazin)。
[0009]具體發(fā)酵產(chǎn)生過程為:
白地霉用PDA培養(yǎng)基于300C培養(yǎng)24h，然后將獲得的白地霉接入搖瓶；再向搖瓶中加入料液，于30°C、150rpm搖瓶發(fā)酵72h ;即得雙峰甘露聚糖酶。所得的雙峰甘露聚糖酶是一種雙峰甘露聚糖酶液。
[0010]經(jīng)檢測(cè)，采用上述方法所獲取的雙峰甘露聚糖酶液中，含甘露聚糖酶1000U / ml(檢測(cè)方法為:采用分光光度法);能在PH2.5和pH6.5產(chǎn)生兩個(gè)活性高峰；能適用的pH范圍為1.0-8.5，適用于酸、中、堿性環(huán)境。
[0011]所獲取的雙峰甘露聚糖酶在不同pH條件的酶活如下表:
【權(quán)利要求】
1.一種雙峰甘露聚糖酶的制備方法，其特征在于，用白地霉對(duì)下述料液進(jìn)行發(fā)酵；所述料液的重量組成為100份水、5份玉米粉、1份豆柏、0.6份魔芋粉、0.2份酵母膏、0.5份尿素、0.5份磷酸二氫鉀和0.05份淀粉酶； 所述淀粉酶的活性為2000u/g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于， 白地霉用PDA培養(yǎng)基于30 V培養(yǎng)24h，然后將獲得的白地霉接入搖瓶；再向搖瓶中加入料液；于30°C、150rpm搖瓶發(fā)酵72h ;即得雙峰甘露聚糖酶。
3.—種雙 峰甘露聚糖酶，其特征在于，根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法制備而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙峰甘露聚糖酶，其特征在于，能在pH2.5和pH6.5產(chǎn)生兩個(gè)活性高峰。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙峰甘露聚糖酶，其特征在于，其在pHl.0的酶活為727u/ml，在 pH8.5 的酶活為 919u/ml。
【文檔編號(hào)】C12N9/42GK103820421SQ201410063635
【公開日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年2月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月25日
【發(fā)明者】吳秀玉, 劉自陽, 宋迪 申請(qǐng)人:濟(jì)南天天香有限公司