制備含有受者干細(xì)胞的免疫惰性胎肝懸液的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物制品領(lǐng)域，特別是涉及制備含有受者干細(xì)胞的免疫惰性胎肝懸液的方法，其步驟為：1、把受者的體細(xì)胞轉(zhuǎn)化成iPS細(xì)胞；2、把iPS細(xì)胞注入免疫惰性供者的囊胚里；3、然后囊胚移植到假孕的動(dòng)物子宮中發(fā)育成胚胎；4、胚胎發(fā)育到肝臟造血旺盛期在無(wú)菌條件下取出胎肝；5、把胎肝制成單細(xì)胞懸液，添加抗凍劑在液氮中保存、本發(fā)明的胎肝懸液由于胎胚年齡幼稚，因此比來(lái)自骨髓的干細(xì)胞有更大的多向分化和增殖潛能，其中人的多能成體干細(xì)胞的遺傳背景與受者的人相同，因此，不會(huì)遭到受者免疫系統(tǒng)的排斥，由于采用免疫惰性供者，故不易與人發(fā)生超急排斥，注射后其中的動(dòng)物細(xì)胞會(huì)逐漸被人的免疫系統(tǒng)刪除殆盡。
【專利說(shuō)明】制備含有受者干細(xì)胞的免疫惰性胎肝懸液的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物制品領(lǐng)域，特別是涉及制備含有受者干細(xì)胞的免疫惰性胎肝懸液的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]胎肝含有造血干細(xì)胞、問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞等干細(xì)胞。1959年，國(guó)外已開始利用胎肝于200目的金屬網(wǎng)上研磨制成細(xì)胞懸液注入人體的臨床實(shí)驗(yàn)，但是，由于供者遺傳背景與受者不相同，大約經(jīng)過(guò)45天，供者細(xì)胞會(huì)被受者免疫系統(tǒng)逐漸刪除掉，而且用的是I~5個(gè)月的胎肝，其中的造血干細(xì)胞大部分遷移到了脾和骨髓組織中。
[0003]把動(dòng)物的器官移植到人類，首先要對(duì)動(dòng)物的基因組進(jìn)行改造，使人的免疫系統(tǒng)不會(huì)對(duì)動(dòng)物器管的血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生超急排斥，即把動(dòng)物(器管、組織或細(xì)胞的供者)的基因組中會(huì)引起人(器管、組織或細(xì)胞的受者)免疫排斥的基因“敲出”，同時(shí)插入人的基因，(以下把經(jīng)過(guò)這種基因改造的動(dòng)物簡(jiǎn)稱為“免疫惰性供者”)，這項(xiàng)技術(shù)現(xiàn)在已接近初步臨床應(yīng)用了，目前首選的動(dòng)物是豬，2011年，南京醫(yī)科大學(xué)就引進(jìn)了這種豬。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供制備含有受者干細(xì)胞的免疫惰性胎肝懸液的方法。其步驟特征為:1、把受者的體細(xì)胞傳化成iPS細(xì)胞；2、把iPS細(xì)胞注入免疫惰性供者的囊胚里；3、然后囊胚移植到假孕的動(dòng)物子宮中發(fā)育成胚胎；4、胚胎發(fā)育到肝臟造血旺盛期在無(wú)菌條件下取出胎肝；5、把胎肝制成單細(xì)胞懸液，添加抗凍劑在液氮中保存。
[0005]本發(fā)明的胎肝肝懸液由于胎肝年齡幼稚，因此比來(lái)自骨髓的干細(xì)胞有更大的多向分化和增殖潛能，其中人的多能成體干細(xì)胞的遺傳背景與受行的人相同，因此，不會(huì)遭到受者免疫系統(tǒng)的排斥，可以在受者體內(nèi)長(zhǎng)期生存和發(fā)揮作用。由于采用免疫惰性供者，故不易與人發(fā)生超急排斥，因此具有安全度較高，注射后其中的動(dòng)物細(xì)胞會(huì)逐漸被人的免疫系統(tǒng)刪除殆盡。
【具體實(shí)施方式】
[0006]下面對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0007]按此目的提供的制備含有受者干細(xì)胞的免疫惰性胎肝懸液的方法，其步驟特征為:1、把受者的體細(xì)胞轉(zhuǎn)化成iPS細(xì)胞；2、把iPS細(xì)胞注入免疫惰性供者的囊胚里；3、然后囊胚移植到假孕的動(dòng)物子宮中發(fā)育成胚胎；4、肝胎發(fā)育到肝臟造血旺盛期在無(wú)菌條件下取出胎肝。此外，羊水、臍帶血、胎盤和胚胎的其它器管組織也可以提取人的成體干細(xì)胞；5、把胎肝制成細(xì)胞懸液，添加抗凍劑在液氮中保存。
[0008]所述的受者為人；所述的免疫惰性供者為豬。
[0009]為了增加胎肝中人的干細(xì)胞數(shù)量，可以事先對(duì)免疫惰性供者的囊胚用輻射等方法進(jìn)行致弱處理或在免疫惰性供者的胎肝還沒(méi)有造血之前先切除免疫惰性供者的卵黃囊或用注射抗體交聯(lián)毒素刪除免疫惰性供者的胚胎中卵黃囊的干細(xì)胞。
[0010]在鼠胚切除卵黃囊時(shí)發(fā)現(xiàn)，雖然心跳如前，但是胎肝不能造血，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)造血干細(xì)胞，若加入卵黃囊.胎肝就會(huì)出現(xiàn)造血干細(xì)胞和恢復(fù)造血。
[0011]網(wǎng)上下載的資料:干細(xì)胞可使奶牛“返老還童”:美國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，來(lái)自于克隆牛胎肝的大湯 匙量的干細(xì)胞注射到相當(dāng)于人類80歲的年老奶牛體中，奶牛的免疫系統(tǒng)和血管的健康狀況還原到奶牛I歲前的水平。
[0012]不過(guò)，本發(fā)明只用于科研，而不用于去老化(De-aging)或治療功能受損的臟器。
[0013]本發(fā)明的各種技術(shù)是現(xiàn)成的，這里無(wú)需贅述，請(qǐng)查看相關(guān)文獻(xiàn)。
【權(quán)利要求】
1.制備含有受者干細(xì)胞的免疫惰性胎肝懸液的方法，其步驟特征為:1、把受者的體細(xì)胞轉(zhuǎn)化成iPS細(xì)胞；2、把iPS細(xì)胞注入免疫惰性供者的囊胚里；3、然后囊胚移植到假孕的動(dòng)物子宮中發(fā)育成胚胎；4、胚胎發(fā)育到肝臟造血旺盛期在無(wú)菌條件下取出胎肝；5、把胎肝制成細(xì)胞懸液，添加抗凍劑在液氮中保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備含有受者干細(xì)胞的免疫惰性胎肝懸液的方法，其特征是所述的受 為人；所述的免疫惰性供者為豬。
【文檔編號(hào)】C12N5/073GK103789256SQ201410041450
【公開日】2014年5月14日 申請(qǐng)日期:2014年1月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月20日
【發(fā)明者】黃必錄 申請(qǐng)人:黃必錄