一種調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2及其應(yīng)用，該轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。本發(fā)明以南林895楊初生不定根為材料，通過RACE技術(shù)克隆了PeSHR2基因。同時，采用通路克隆技術(shù)構(gòu)建其楊樹過量表達(dá)載體pH35GS-PeSHR2，該基因位于啟動子P35S之后，在啟動子P35S的驅(qū)動下，PeSHR2可在楊樹體內(nèi)高效表達(dá)，從而調(diào)控根系構(gòu)型的重塑。其中，PeSHR2基因是調(diào)控楊樹根系形態(tài)檢測的關(guān)鍵基因。本發(fā)明通過將PeSHR2基因轉(zhuǎn)入楊樹，過量表達(dá)PeSHR2的轉(zhuǎn)基因楊產(chǎn)生單一粗壯不定根，似主根，同時伴有大量次級不定根和不定芽，且該類根生不定芽可以生長發(fā)育為新植株，說明PeSHR2基因是控制楊樹根系構(gòu)型重塑的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在林木基因工程領(lǐng)域有重要應(yīng)用價值。
【專利說明】一種調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物基因工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]楊樹是林木分子生物學(xué)研究的模式物種，研究楊樹生根性狀基因表達(dá)調(diào)控模式具有重要的理論意義。不定根發(fā)生與根系響應(yīng)逆境脅迫的可塑性是植物重要的抗逆適應(yīng)機(jī)制，是植物發(fā)育與進(jìn)化生物學(xué)領(lǐng)域的前沿和熱點(diǎn)。盡管擬南芥、水稻和玉米等一年生草本植物根系發(fā)育調(diào)控的分子機(jī)理研究已經(jīng)取得了突破性進(jìn)展，許多分子調(diào)控模式和信號傳導(dǎo)途徑被揭示。但是，一年生草本植物與林木的抗逆適應(yīng)機(jī)制有著許多不同之處。因此，深入開展楊樹不定根發(fā)育調(diào)控的分子機(jī)理研究，對于揭示物種間器官發(fā)生和適應(yīng)性進(jìn)化機(jī)制的異同有重要的理論意義。
[0003]“根深葉茂”，兩者是相輔相成的。長期以來，國內(nèi)外研究者對楊樹生長發(fā)育的研究主要集中于地上部分，對生根性狀的興趣和重視程度不夠，使得楊樹根系的研究相對滯后。隨著人們對林木根系作用認(rèn)識的增強(qiáng)和技術(shù)手段的進(jìn)步，系統(tǒng)研究楊樹不定根發(fā)育調(diào)控的分子機(jī)理有其必要性和迫切性，所挖掘的特異基因資源在林木基因工程領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0004]SHORT-ROOT(SHR)和SCARECROW(SCR)蛋白都屬于GRAS轉(zhuǎn)錄因子家族，對根尖干細(xì)胞微環(huán)境(stem cell niche)的特化和維持起關(guān)鍵作用。擬南芥SHR基因在中柱(stele)內(nèi)轉(zhuǎn)錄并翻譯，SHR蛋白通過向相鄰細(xì)胞的擴(kuò)散誘導(dǎo)內(nèi)皮層的形成和SCR的表達(dá)，SCR可以通過一個正向反饋回路激活自身的轉(zhuǎn)錄，高豐度的SCR阻止SHR蛋白向相鄰細(xì)胞轉(zhuǎn)移，從而避免形成更多的內(nèi)皮層。這種反饋調(diào)節(jié)機(jī)制一方面維持了根的徑向模式(radial paterning)而形成中柱、內(nèi)皮層、皮層和表皮，另一方面也巧妙地調(diào)控根尖干細(xì)胞的不對稱分裂和分化。另有研究發(fā)現(xiàn)，PLETHORA (PLT)基因在QC和周圍干細(xì)胞區(qū)域表達(dá)，WUSCHEL-relatedhomeobox 5 (W0X5)基因也在QC區(qū)域特異性表達(dá)，它們與SHR/SCR —起組成復(fù)雜的根尖分生組織調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，對根尖干細(xì)胞微環(huán)境的特化和維持至關(guān)重要。綜上可知，SHR/SCR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路具有組織特異性，它們與相關(guān)基因及植物激素之間的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)仍不是十分清楚，在楊樹中尚未有SHR/SCR基因家族功能研究的相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的:針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2。本發(fā)明的另一目的是提供一種楊樹根系構(gòu)型調(diào)控相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2的應(yīng)用。
[0006]技術(shù)方案:為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一種調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2，其核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示。
[0007]含有所述的調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2的載體。[0008]所述載體在PeSHR2基因的5’端組裝組成型強(qiáng)表達(dá)啟動子P35S，能使PeSHR2基因在楊樹體內(nèi)高效表達(dá)。
[0009]所述載體在PeSHR2基因的3’端組裝強(qiáng)終止子NOS，可有效終止PeSHR2基因的轉(zhuǎn)錄。
[0010]所述載體組裝HPT基因表達(dá)盒，作為轉(zhuǎn)基因楊樹的篩選標(biāo)記，用潮霉素進(jìn)行轉(zhuǎn)基因楊樹的篩選。
[0011]所述載體組裝用于促使組裝于其間的PeSHR2基因表達(dá)框架和篩選標(biāo)記基因HPT整合至楊樹受體細(xì)胞染色體中的LB和RB序列。
[0012]含有所述的楊樹根系構(gòu)型調(diào)控相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2的宿主細(xì)胞。
[0013]所述的調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2在楊樹根系生長發(fā)育中的應(yīng)用。
[0014]所述的調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2的表達(dá)蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID N0.2 所示。
[0015]本發(fā)明以南林895楊初生不定根為材料，通過RACE技術(shù)克隆了 PeSHR2基因。同時，采用通路克隆技術(shù)構(gòu)建其楊樹過量表達(dá)載體pH35GS-PeSHR2，該基因位于啟動子P35S之后，在啟動子P35S的驅(qū)動下，PeSHR2可在楊樹體內(nèi)高效表達(dá)，從而調(diào)控根系構(gòu)型的重塑。其中，PeSHR2基因是調(diào)控楊樹根系形態(tài)檢測的關(guān)鍵基因。
[0016]有益效果:與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過將PeSHR2基因轉(zhuǎn)入楊樹，過量表達(dá)PeSHR2的轉(zhuǎn)基因楊產(chǎn)生單一粗壯不定根，似主根，同時伴有大量次級不定根和不定芽，且該類根生不定芽可以生長發(fā)育為新植株，說明PeSHR2基因是控制楊樹根系構(gòu)型重塑的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在林木基因工程領(lǐng)域有重要應(yīng)用價值。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1是植物表達(dá)載體PH5GS的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖2是過量表達(dá)PeSHR2的轉(zhuǎn)基因楊分子檢測圖；
圖3是過量表達(dá)PeSHR2的轉(zhuǎn)基因楊與未轉(zhuǎn)基因楊的整體表型對比圖；圖中，左邊為未轉(zhuǎn)基因楊，右邊為轉(zhuǎn)基因楊；
圖4是過量表達(dá)PeSHR2的轉(zhuǎn)基因楊與未轉(zhuǎn)基因楊的根形態(tài)對比圖；圖中，左邊為未轉(zhuǎn)基因楊，右邊為轉(zhuǎn)基因楊。
【具體實施方式】
[0018]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。
[0019]以下實施例中，未詳細(xì)敘述的操作均為常規(guī)生物學(xué)實驗操作，可參照分子生物學(xué)實驗手冊以及現(xiàn)有公開的期刊文獻(xiàn)等進(jìn)行。
[0020]　實施例1通過RACE技術(shù)克隆PeSHR2基因
以南林895楊初生不定根為材料，采用常規(guī)方法符合使用要求的提取cDNA、RNA。使用Oligo 6設(shè)計特異性引物擴(kuò)增PeSHR2基因短片段，其中，PeSHR2短片段正向引物為:5’ -CTCAAACTAGCCATACATC-3’，PeSHR2 短片段反向引物為:5’ -AATATAGTGTATAACACCTC-3’。高保真 PCR 反應(yīng)體系:10XLA PCR Buffer (Mg2+ free) 5.0 μ L ；2.5mM dNTP Mixture8.Ομ L ；25mM Mg2+ 5.0 μ L ；LA Taq DNA Polymerase (5U/μ L) 0.5 μ L ;正向引物(10 μ Μ)2yL;反向引物(10μΜ)2μ? ;模板(895楊cDNA) I μ L ;加無菌ddH20補(bǔ)足50 μ L。反應(yīng)程序:預(yù)變性 94°C，3min ;94°C，40s，55°C，30s，72°C，lmin，35 個循環(huán)；72°C, IOmin0 對產(chǎn)物測序，獲得的PeSHR2基因短片段序列如SEQ ID N0.3所示。
[0021]依據(jù)上述PeSHR2基因短片段序列設(shè)計3’末端的RACE引物，進(jìn)行3’RACE，獲得3’cDNA末端片段，克隆入T-載體，對插入片段進(jìn)行PCR篩選后進(jìn)行測序，Blast確認(rèn)上述片段與其它植物相關(guān)的基因同源。以相同的方法，根據(jù)獲得的正確的3’ cDNA末端片段序列設(shè)計5’末端的RACE引物，進(jìn)行5’ RACE，獲得5’ cDNA末端片段，克隆入T-載體，對插入片段進(jìn)行PCR篩選后進(jìn)行測序。
[0022]3，RACE 正向引物:3，RACE gene specific outer primer:5'-TGAAACTGTGAGAATAAGGAAAC-3’， 3' RACE gene specific innerprimer:5'-TGGTTCTGTTGGTGATGCAAATG-3J ； 3' RACE Outer Primer:5’-TGATTTTACTAGCTCAAGATA-3’，3’ RACE Inner Primer:5'-GGAATGTTCAAGGAACATAGTTAGGGT-3’ ； 5’ RACE Outer Primer:5’-TGAGCATAGAGATGGTGTTCT-3’，5’ RACE InnerPrimer:5’-CAGGTTCCTCTTTCCATGTTAAGTAAAT-3’； 5’ RACE gene-specific outer primer:5’-ACACCAGAGGTTTGCTCCACTTC-3’，5’ RACE gene specific inner primer:5'-TTGCACCACCACTAGCTTGTGCCTGTTG-3’。
[0023](1)3，RACE 反應(yīng)
I)反轉(zhuǎn)錄，將以下成分加入到一個置于冰上的RNase-free的小離心管中:lyg TotalRNA,4μ L dNTP Μ?χ,2μ L 3’ RACE Adapter,2y L 10X RT Buffer, I μ L RNase Inhibitor,IuL M-MLV Reverse Transcriptase, Nuclease-free Water 補(bǔ)齊 20μ?。輕輕混勻，短暫離心，42°C溫育Ih ;進(jìn)入PCR步驟，或_20°C保存反應(yīng)物。
[0024]2)3’ RACE 巢式 PCR
反應(yīng)體系:0uter 3，RACE Component:5.0 μ L 10XLA PCR BufferCMg2+ Free), 5.0uLMgCl2C25mM), 8.0uL dNTP MixtureCeach 2.5mM), 2.0 μ L 3’ RACE gene-specific outerprimer,2.0 μ L 3' RACE Outer Primer (10 μ M),I μ L RT reaction product,0.5 μ LTakaRa LA Taq (5U/ μ L), 26.5 μ L Nuclease-free Water, Total volume50liLo Inner 3’RACE Component:5.0μ L 10XLA PCR Buffer (Mg2+ Free), 5.0μ L MgCl2 (25mM),8.0μ LdNTP Mixture (each 2.5mM),2.0 μ L 3' RACE gene specific inner primer,2.0 μ L 3'RACE Inner Primer (10 μ M),I μ L Outer 3’ RACE PCR product,0.5 μ L TakaRa LA Taq(5U/ μ L), 26.5 μ L Nuclease-free Water, Total volume50uL。
[0025]反應(yīng)程序:94°C，3min ；94 °C，30sec，60 °C，30sec, 72 °C，lmin, 35cycles ；72 °C,7min。
[0026]3)純化片段與克隆載體的連接反應(yīng):采用TaKaRa公司的pMD19_T simple Vetor克隆目的DNA分子，參考說明書，連接反應(yīng)體系與程序稍有改進(jìn)。反應(yīng)體系(5 μ L):2.2 μ L純化回收的 PCR 產(chǎn)物，0.3μ L pMD-19 Simple Vector, 2.5μ L Solution I。反應(yīng)條件:16 °C30min ;4°C 過夜。
[0027]4)大腸桿菌轉(zhuǎn)化:將新鮮制備或_70°C凍存的大腸桿菌T0P10感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化；取5 μ L純化片段與克隆載體的連接產(chǎn)物，加入到100 μ L感受態(tài)細(xì)胞中，并輕輕混勻，冰浴30min左右；42°C水浴中熱擊90sec，迅速置于冰上3_5min ;加入800 μ L LB液體培養(yǎng)基，37°C &100rmp搖菌Ih ；4000rmp離心3min，吸掉上層800 μ L培養(yǎng)基，混勻剩余菌液；將菌液涂抹于含有Amp的LB篩選培養(yǎng)板上，37 °C倒置培養(yǎng)過夜。
[0028]5)陽性克隆篩選及測序分析:從篩選培養(yǎng)板上挑選單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基中，37°C&250rmp搖菌過夜；直接以培養(yǎng)過夜的菌液為模板進(jìn)行重組轉(zhuǎn)化子的PCR檢測。反應(yīng)體系(20.0yL): 2.0yL 10XPCR Buffer (Mg2+free)，1.5 μ L MgCl2 (25mM), 1.3μ LdNTP Mixture (each 2.5 mM),1.0 μ L 3’ RACE gene specific inner primer (10 μ M),l.0yL 3’ RACE Inner Primer (10 μ M)，0.1 μ L 菌液，1.0 μ L rTaq, 12.1 μ L Mill1-QWater0 反應(yīng)程序:94°C，3min ；94°C，30sec, 60°C，30sec, 72°C, lmin, 28cycles ；72°C, 7min。菌液PCR檢測為陽性的克隆送英駿生物技術(shù)公司(上海)測序鑒定。
[0029](2)5，RACE 反應(yīng)
1) RNA 處理(RNA Processing)
CIP反應(yīng)，將如下成分加入到RNase-free的小離心管中:10 μ g Total RNA, 2 μ LIOX CIP buffer,2 μ L Calf Intestine Alkaline Phosphatase (CIP), Nuclease-freeWater補(bǔ)齊20 μ L。輕混勻，短暫離心；37°C溫育lh。加入以下試劑到CIP反應(yīng)離心管:15 μ L Ammonium Acetate Solution,115 μ L Nuclease-free Water,150 μ L acidphenol: chloroform。充分潤旋，室溫高速離心(蘭10000 g) 5min。轉(zhuǎn)移上層水相到一個新的離心管中，加入150yL氯仿，充分渦旋，室溫高速離心(蘭10000 g) 5min。轉(zhuǎn)移上層水相到一個新的離心管中，加入150 μ L異丙醇，充分潤旋,冰浴lOmin。最大轉(zhuǎn)速離心20min,用0.5ml預(yù)冷的70%乙醇沖洗沉淀,最大轉(zhuǎn)速離心5min,小心棄乙醇,氣干沉淀。以
11μ LNuclease-free Water重懸沉淀，即得CIP’ RNA,冰上放置進(jìn)一步用于TAP反應(yīng)，或者-20°C保存。TAP反應(yīng)，把以下成分加入到一個RNase-free的小離心管中:5 μ L CIP’ dRNA (from f above),I μ L 10X TAP buffer,2 μ L Tobacco Acid Pyrophosphatase(TAP),2 μ L Nuclease-free Water。輕輕混勻，短暫離心，37 °C溫育 lh,即得 CIP/TAP-treatedRNA ;進(jìn)入接頭連接步驟，或_20°C保存反應(yīng)物。5’ RACE接頭連接，把以下成分加入到一個RNase-free 的小離心管中:2 μ L CIP/TAP-treated RNA, I μ L 5，RACE Adapter, I μ L 10XRNA Ligase Buffer, 2 μ L T4 RNA Ligase (2.5U/ μ L), 4 μ L Nuclease-free Water0 輕輕混勻，短暫離心，37°C溫育Ih,即得Ligated RNA ;進(jìn)入反轉(zhuǎn)錄步驟,或_20°C保存反應(yīng)物。
[0030]2)反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription):將以下成分加入到一個置于冰上的RNase-free 的小離心管中；2 μ L Ligated RNA, 4 μ L dNTP Mix, 2 μ L Random Decamers,2 μ L 10X RT Buffer,I μ L RNase Inhibitor,I μ L M-MLV Reverse Transcriptase,Nuclease-free Water 補(bǔ)齊 20μ?。輕輕混勻，短暫離心；42°C 溫育 lh,即得 RT reaction ；進(jìn)入PCR步驟，或_20°C保存反應(yīng)物。
[0031]3) 5’ RACE巢式PCR:反應(yīng)體系、反應(yīng)條件與3’ RACE的巢式PCR —致。
[0032]4) PCR產(chǎn)物克隆測序，實驗操作與3’ RACE克隆一致，獲得基因序列片段。
[0033]Blast確認(rèn)上述片段與擬南芥/水稻AtSHR基因高度同源。
[0034]采用BioEdit軟件對3’ RACE和5’ RACE序列進(jìn)行比對拼接，并使用FGENESH(http://mendel.cs.rhul.ac.uk/mendel.php?topic =fgen)預(yù)測其閱讀框。根據(jù)基因全長序列設(shè)計引物(擴(kuò)增子包含起始密碼子及終止密碼子)，再次進(jìn)行PeSHR2基因的全長擴(kuò)增和測序驗證。其中，PeSHR2 ORF 正向引物為:5’ATGGACATAACTCTCTTCAGTC3’，PeSHR2 ORF 反向引物為:5’TTAGGGTTTCCATGCAGAAG3’ ；高保真PCR反應(yīng)體系如下:10XLA PCR Buffer (Mg2+free) 5.0 μ L ;2.5mM dNTP Mixture 8.0 μ L ；25mM Mg2+ 5.0 μ L ；LA Taq DNA Polymerase(5υ/μ L) 0.5μ L ;正向引物(ΙΟμΜ) 2yL;反向引物(ΙΟμΜ) 2 μ L ;模板(895 楊 cDNA)IyL;加無菌 ddH20 補(bǔ)足 50 μ L。反應(yīng)程序:預(yù)變性 94°C 3min ；94°C 40s, 55 °C 30s, 72 °C30s，35個循環(huán)；72°C IOmin0最終獲得基因全長cDNA序列為1693 bp，包含一個1326bp的完整閱讀框，命名為PeSHR2基因，序列如SEQ ID N0.1所示，其所編譯表達(dá)蛋白序列如SEQID N0.2 所示。
[0035]實施例2 PeSHR2基因植物表達(dá)載體構(gòu)建
利用通路克隆技術(shù)構(gòu)建PeSHR2基因的過量表達(dá)載體。使用特異PCR引物(實施例1的PeSHR2 ORF引物)，以cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PeSHR2基因ORF構(gòu)建到入門載體。入門載體為 pCR?8/GW/T0P0TM vector (Invitrogen)。反應(yīng)體系為:Fresh PCR product(purified) 10~20ng ;Salt solution IuL ；pCR?8/Gff/T0P0? vector I μ L ;加無菌 ddH20補(bǔ)足6yL。反應(yīng)程序為:室溫靜置30min。
[0036]從篩選培養(yǎng)板上挑取陽性克隆進(jìn)行PCR檢測及測序驗證，帶PeSHR2基因的入門載體與植物表達(dá)載體PH35GS進(jìn)行LR反應(yīng)。載體質(zhì)粒如圖1所示。反應(yīng)體系為:linearizedentry clone IOOng ；purified destination vector (IOOng/μ L) 1.5 μ L ；LR Clonase
Π enzyme mix 2yL;加 TE (pH 8.0)補(bǔ)足 IOyL ;。反應(yīng)條件:25°C lh。經(jīng) LR 反應(yīng)后PeSHR2基因?qū)胫参锉磉_(dá)載體PH35GS中，在PeSHR2基因的5’端組裝組成型強(qiáng)表達(dá)啟動子P35S，它能使PeSHR2基因在楊樹體內(nèi)高效表達(dá)；在PeSHR2基因的3’端組裝了強(qiáng)終止子N0S，可有效終止PeSHR2基因的轉(zhuǎn)錄；在載體質(zhì)粒上組裝HPT基因表達(dá)盒，作為轉(zhuǎn)基因楊樹的篩選標(biāo)記，可以用潮霉 素進(jìn)行轉(zhuǎn)基因楊樹的篩選；在載體質(zhì)粒組裝LB和RB序列，促使組裝于其間的PeSHR2基因表達(dá)框架和篩選標(biāo)記基因HPT整合至楊樹受體細(xì)胞染色體中。通過PCR檢測及測序驗證，確認(rèn)過量表達(dá)載體構(gòu)建成功，命名為pH35GS-PeSHR2，該基因位于啟動子P35S之后，在啟動子P35S的驅(qū)動下，PeSHR2可在楊樹體內(nèi)高效表達(dá)。
[0037]實施例3 PeSHR2基因的遺傳轉(zhuǎn)化
通過液氮凍融法將所構(gòu)建的pH35GS-PeSHR2過量表達(dá)載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌菌株EHA105(Invitrogen),通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將PeSHR2基因轉(zhuǎn)入楊樹。實驗結(jié)果如圖4所示，圖1是植物表達(dá)載體PH35GS的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為過量表達(dá)PeSHR2的轉(zhuǎn)基因楊分子檢測圖；圖3為過量表達(dá)PeSHR2的轉(zhuǎn)基因楊與未轉(zhuǎn)基因楊的整體形態(tài)對比，圖中，左邊為未轉(zhuǎn)基因楊，右邊為轉(zhuǎn)基因楊；圖4為過量表達(dá)PeSHR2的轉(zhuǎn)基因楊與未轉(zhuǎn)基因楊根系比較，圖中，左邊為未轉(zhuǎn)基因楊，右邊為轉(zhuǎn)基因楊。從結(jié)果可以明顯得出，過量表達(dá)PeSHR2的轉(zhuǎn)基因楊產(chǎn)生單一粗壯不定根，似主根，同時伴有大量次級不定根和不定芽，且該類根生不定芽可以生長發(fā)育為新植株，說明PeSHR2基因是調(diào)控楊樹根系構(gòu)型重塑的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在林木基因工程領(lǐng)域有重要應(yīng)用價值。
【權(quán)利要求】
1.一種調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2，其核苷酸序列如SEQ ID N0.1所/Jn ο
2.含有權(quán)利要求1所述的調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2的載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的載體，其特征在于:所述載體在PeSHR2基因的5’端組裝組成型強(qiáng)表達(dá)啟動子P35S。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的載體，其特征在于:所述載體在PeSHR2基因的3’端組裝強(qiáng)終止子NOS。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的載體，其特征在于:所述載體組裝HPT基因表達(dá)盒，作為轉(zhuǎn)基因楊樹的篩選標(biāo)記，用潮霉素進(jìn)行轉(zhuǎn)基因楊樹的篩選。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的載體，其特征在于:所述載體組裝用于促使組裝于其間的PeSHR2基因表達(dá)框架和篩選標(biāo)記基因HPT整合至楊樹受體細(xì)胞染色體中的LB和RB序列。
7.含有權(quán)利要求1所述的楊樹根系構(gòu)型調(diào)控相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2的宿主細(xì)胞。
8.權(quán)利要求1所述的調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2在楊樹根系生長發(fā)育中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1所述的調(diào)控楊樹根系構(gòu)型的轉(zhuǎn)錄因子基因PeSHR2的表達(dá)蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID N0.2所示。
【文檔編號】C12N15/82GK103757031SQ201410039361
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年1月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月27日
【發(fā)明者】胥猛, 宣磊, 黃敏仁 申請人:南京林業(yè)大學(xué)