專利名稱：核酸純化裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及生物樣品提取領(lǐng)域，尤其涉及一種可用于負(fù)壓方法和離心方法的核酸純化裝置。
背景技術(shù)：
在生物學(xué)領(lǐng)域，經(jīng)常需要對樣品進行過濾和純化。尤其是在分子生物學(xué)領(lǐng)域，經(jīng)常需要提取生物樣品中的DNA、RNA等大分子物質(zhì)，并對這些大分子物質(zhì)進行分離純化。高效率地分離純化核酸物質(zhì)成為分子生物學(xué)領(lǐng)域的關(guān)鍵技術(shù)。利用純化裝置從生物樣品中分離和提取核酸已經(jīng)成為分子生物學(xué)領(lǐng)域常用的手段。通常的純化裝置為一個圓形的管狀結(jié)構(gòu)，包括圓形管柱體，柱體的一端帶有密封蓋，另一端填充有多孔篩板或膜，在多空篩板上添加了能吸附核酸等生物物質(zhì)的材料。常采用負(fù)壓法和離心法提取核酸。采用負(fù)壓法時，首先將純化裝置插到負(fù)壓裝置的插口上，用核酸結(jié)合緩沖液溶解需要分離的樣品，如PCR產(chǎn)物、酶切、酶標(biāo)或測序產(chǎn)物并轉(zhuǎn)移至純化裝置中，開啟并調(diào)節(jié)負(fù)壓至-25-30英寸汞柱，緩慢吸走管中溶液。保持負(fù)壓，加入洗滌液對管中的殘留物進行洗滌后，將純化裝置置于新離心管中，在純化裝置膜中央加洗脫液或去離子水，室溫靜置Imin后12，000 Xg離心Imin洗脫核酸。采用離心法時，用核酸結(jié)合緩沖液溶解需要分離的樣品，如PCR產(chǎn)物、酶切、酶標(biāo)或測序產(chǎn)物，混勻后轉(zhuǎn)移到純化裝置中，將純化裝置置于離心管中，12，OOOXg離心Imin,棄濾液。將純化裝置置回新的離心管，加洗滌液，12，000 Xg離心lmin，棄濾液。再次將純化裝置置于潔凈的離心管中，在純化裝置膜中央加一定量的洗脫液或去離子水，室溫靜置Imin后12，OOOXg離心Imin洗脫得到核酸?，F(xiàn)有的核酸提取技術(shù)中受到純化裝置本身結(jié)構(gòu)的影響，每經(jīng)過一次洗脫或離心，純化裝置都要重新置于新的離心管中，因此不同樣本之間的轉(zhuǎn)化步驟復(fù)雜?，F(xiàn)有的純化裝置相互之間是不能相互組合使用，因此不能滿足核酸提取的連續(xù)性操作。

實用新型內(nèi)容為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本實用新型的目的在于提供了一種核酸純化裝置，包括本體，所述本體的上部具有加樣口，本體的下部具有出樣管嘴，在出樣管嘴的外周還包括固定框。優(yōu)選的，出樣管嘴包括出口端，所述出口端暴露在固定框外。優(yōu)選的，在加樣口的上部設(shè)置有一保持部件。優(yōu)選的，所述保持部件的內(nèi)徑與固定框的外徑相同。優(yōu)選的，保持部件與本體的連接處還包括支撐面，所述支撐面的結(jié)構(gòu)為一水平結(jié)構(gòu)或具有一定角度的斜面。優(yōu)選的，還包括密封蓋。優(yōu)選的，本體內(nèi)還包括隔板。優(yōu)選的，隔板上放置有硅膠膜。[0011]本實用新型的有益效果是:由于純化裝置的出樣管嘴的外周還包括固定框，當(dāng)兩個純化裝置需要相互連接在一起時，固定框就可以起到與另一個純化裝置相互扣合的作用。在現(xiàn)有技術(shù)中純化裝置的出樣管嘴都是比較小的，出樣管嘴不能起到緊密卡扣在另一個純化裝置中的作用，而本實用新型所設(shè)置的固定框就是起到固定的作用。另一方面由于在純化裝置的上部具有保持部件，并且保持部件的內(nèi)部直徑被設(shè)計成與相同類型純化裝置的下部外徑相同，或者比其大的不同類型的純化裝置的固定框的外徑相同。當(dāng)需要進行連續(xù)性操作時，其中一個純化裝置的下部或固定框就可以緊密的扣合在另一個純化裝置的保持部件中，實現(xiàn)了將多個純化裝置疊加的方式。更優(yōu)的方式是純化裝置還包括一個支撐面，由于支撐面對插入其中的另一個純化裝置下部或純化裝置固定框的抵擋作用，進一步保證了兩個純化裝置扣合的穩(wěn)固性。從而實現(xiàn)同類型純化裝置之間或不同類型純化裝置之間的相互疊加，滿足了實驗的連續(xù)性操作要求。純化裝置之間的相互疊加，可以減少離心管去雜質(zhì)的步驟，使生物樣品提取和純化的操作連續(xù)性更強。減少中間的操作步驟，可以減少提取過程的產(chǎn)物對環(huán)境和操作人員的污染和危害，也可避免過多步驟的操作會增加提取樣品污染的幾率。另外離心管的使用量也可大大減少，節(jié)約成本。

圖1是第一種核酸純化裝置結(jié)構(gòu)示意圖。圖2是兩個第一種核酸純化裝置疊加在一起的結(jié)構(gòu)示意圖。圖3是圖2A的局部放大圖。圖4是第二種核酸純化裝置結(jié)構(gòu)示意圖。圖5是第一種核酸純化裝置和第二種核酸純化裝置疊加在一起的結(jié)構(gòu)示意圖。圖6圖5B的局部放大圖。圖7是核酸純化裝置俯視圖，包括內(nèi)部隔板結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施方式
下面結(jié)合具體附圖對本實用新型進行詳細(xì)的說明。這些具體的實施例僅僅是在不違背本實用新型精神下的有限列舉，并不排除本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員把現(xiàn)有技術(shù)和本實用新型結(jié)合而產(chǎn)生的其他具體的實施方案。如圖1所示的核酸純化裝置I包括中空的本體2，所述本體2的上部具有加樣口 3，本體的下部具有出樣管嘴4，在加樣口的上部設(shè)置有一保持部件5。保持部件用于容納另一個純化裝置插入其中，并能緊緊地卡住插入其中的另一個純化裝置，從而能夠?qū)蓚€純化裝置疊加在一起使用。保持部件5的內(nèi)部直徑可以根據(jù)插入其中的純化裝置外徑的不同而不同。若相互疊加的純化裝置是同種類型的，則保持部件5的內(nèi)部直徑與純化裝置本體的外徑相同。若相互疊加的純化裝置是同種類型，但該純化裝置的本體是上大下小或上小下大的圓錐體，則純化裝置的保持部件與該純化裝置疊加部分即純化裝置下部的外徑相同。若相互疊加的純化裝置是不同類型的，則保持部件5內(nèi)部直徑與插入其中的另一款不同型號的純化裝置的下部外徑相同。優(yōu)選的方案中保持部件5與本體2的連接處還包括支撐面6，支撐面6可以是一個水平的結(jié)構(gòu)并將保持部件5和本體相互連接。支撐面也可以是具有一定角度的斜面結(jié)構(gòu)將保持部件5和本體相互連接。支撐面的斜面斜度可以與本體底部7的斜面斜度相同。在一個實施方案中純化裝置還包括密封蓋8，密封蓋8通過連接臂9與本體2連接。在一個優(yōu)選的方案中，純化裝置的底部與出樣管嘴4之間還可以包括隔板10。如圖7所示的隔板10結(jié)構(gòu)為多孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。如圖2所示是兩個大小相同的同種類型的核酸純化裝置疊加在一起的實施例。在該實施例中，下面的純化裝置I的保持部件5的內(nèi)徑與上面的純化裝置I下部外壁直徑相同，使得居于上面的純化裝置能夠插入到下面的純化裝置中，并被下面的純化裝置的保持部件緊緊卡住。圖3是圖2A部分的局部放大圖，居于上面的純化裝置的本體底部7的一部分正好靠在居于下面的純化裝置的支撐面6上，從而進一步鞏固了兩個純化裝置之間的扣合力，兩個純化裝置被牢固的疊加在一起。如圖4所示的本實用新型的另一種核酸純化裝置11包括具有空腔的本體2，所述本體2的上部具有加樣口 3，本體的下部具有出樣管嘴4，在加樣口的上部設(shè)置有一保持部件5，保持部件5的內(nèi)部直徑可以根據(jù)插入其中的純化裝置外徑的不同而不同。保持部件5與本體2的連接處還包括支撐面6，支撐面6可以是一個水平的結(jié)構(gòu)或具有一定斜度的斜面。在出樣管嘴4的外周還包括固定框12，固定框12的一端連接在本體的底部7上。在一個優(yōu)選的方案中，出樣管嘴的出口端伸出固定框12，即出樣管嘴4出口端暴露在固定框12夕卜。由于出口端伸出了固定框外，不被固定框包圍，因此在生物樣品提取時，從出口端出來的物質(zhì)不會噴射到固定框上，保證了提取的純度。在一個實施方案中純化裝置11還包括密封蓋8，密封蓋8通過連接臂9與本體連接。在一個優(yōu)選的方案中，純化裝置11的底部與出樣管嘴4之間還可以包括隔板10。如圖5所示是兩個不相同類型的核酸純化裝置疊加在一起的實施例。在該實施例中，居于下面的是小體積純化裝置1，居于上面的為大體積純化裝置11。其中小體積純化裝置的保持部件5的內(nèi)壁直徑與插入其中的大體積純化裝置出樣管嘴外周的固定框外壁直徑相同，使得居于上面的大體積純化裝置11能夠插入到居于下面的小體積純化裝置中，并被小體積純化裝置的保持部件緊緊的扣合住。圖6是圖5A部分的局部放大圖，在優(yōu)選的方案中，居于上面的大體積純化裝置11出樣管嘴固定框12的一部分正好抵靠在居于下面的小體積純化裝置I的支撐面6上，由于支撐面的支撐，進一步保證了兩個純化裝置相互疊加的穩(wěn)定性。實用新型所述的核酸純化裝置，可以用于提取核酸如DNA、RNA，蛋白質(zhì)等生物物質(zhì)，可以用于除去生物樣品預(yù)處理時的雜質(zhì)等。該核酸純化裝置用于提取核酸時，在本實用新型所述的純化裝置本體內(nèi)部裝入核酸吸附性多孔膜，例如硅膠膜、玻璃纖維膜、二氧化硅納米材料、石墨烯、二氧化鈦晶體薄膜等。這些材料耐受酸堿，能特異性的吸附核酸，而對其他生物材料基本不吸附，可以保障最大程度地回收樣品中的DNA或RNA，同時去除其他雜質(zhì)。在pH為5.0到6.5，含有4M的鹽酸胍的高鹽環(huán)境下，硅膠膜會選擇性的吸附DNA、RNA。當(dāng)處于低鹽高pH環(huán)境下時，吸附在該硅膠膜上的DNA、RNA會釋放出來從而達(dá)到純化的目的。這些多孔膜的孔徑為0.1微米至5微米，優(yōu)選的為I微米。多孔膜的厚度為0.1毫米到2毫米，優(yōu)選I毫米的厚度。本實用新型所述的純化裝置的材質(zhì)為醫(yī)療級的聚丙烯，生產(chǎn)過程嚴(yán)格控制，無DNA> Dnase> Rnase 等污染。[0028]本實用新型的核酸純化裝置可用于負(fù)壓方法或離心方法提取核酸。實施例1高純度質(zhì)粒DNA大量提取1.材料與試劑小體積純化裝置，該裝置直徑適合用于15mL的離心管);大體積純化裝置，該裝置直徑適合用于50mL的離心管);硅膠膜:能特異性吸附核酸；過濾膜:該過濾膜不會與質(zhì)粒DNA發(fā)生特異性結(jié)合，其孔徑能使質(zhì)粒DNA順利通過，而蛋白、菌體等物質(zhì)不能通過該過濾膜；離心管。溶液1:細(xì)菌懸浮液，包括 2mmol/L KH2PO4,1OmmoI/L Na2HPO4,137mmol/L NaCl,
2.7mmol/L KCl, I % Tween20, pH6.0-8.0,加入 RNase A 后，混合均勻，4°C貯存;溶液I1:細(xì)菌裂解液，包括0.1-2.5mol/L NaOH,0.05% ~1% SDS室溫密閉貯存；溶液II1:中和液，包括 0.1-0.5moI/L(NH4)2HPO4.NH4H2PO4,0.5_3mol/L KCl，ρΗ4.5 ；溶液IV:洗滌液，包括 200mmol/L Tri s，2mol/L EDTA, 1.5mol/LNaCl, 3mol/LGuHCl，室溫密閉貯存；溶液V:去鹽液，包括50-100%無水乙醇；洗脫液:2.5m mol/L Tris-HCl, ρΗ8.5，室溫密閉貯存；RNase A。2.步驟I)取30ml在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜的高拷貝數(shù)質(zhì)粒菌液，或IOOml過夜培養(yǎng)的低拷貝質(zhì)粒/Cosmid菌液(若使用豐富培養(yǎng)基，菌液體積應(yīng)減半或更少)，> 3，OOOXg離心8min，棄上清。將離心管倒置于紙巾上數(shù)分鐘，除盡上清。2)加4.5ml的溶液I (細(xì)菌懸浮液，已加入RNase A)懸浮細(xì)菌沉淀，懸浮需均勻，不應(yīng)留有小的菌塊。3)加4.5ml溶液II (細(xì)菌裂解液)，溫和并充分地上下翻轉(zhuǎn)6_8次混合均勻使菌體充分裂解，直至形成透亮的溶液；此步驟不宜超過5min。向透明溶液中加4.5ml4°C預(yù)冷的溶液III (中和液)，溫和并充分地上下翻轉(zhuǎn)10次混合均勻，直至形成緊實的凝集塊；室溫放置5min。4)如圖5所示，將大體積核酸純化裝置11安裝在小體積核酸純化裝置I上，小體積純化裝置I插到負(fù)壓裝置的插口上。將步驟3中所得溶液緩慢加入大體積純化裝置中，開啟并調(diào)節(jié)負(fù)壓至-25-30英寸汞柱，緩慢吸走管中溶液。5)待步驟4中的溶液吸干后，將大體積純化裝置從小體積純化裝置中拔除，大體積純化裝置由于存在過濾膜可以截留下被裂解的菌體殘片，并讓核酸等目標(biāo)物質(zhì)順利通過進入小體積純化裝置中。繼續(xù)保持負(fù)壓，在小體積純化裝置中加5ml溶液IV (洗滌液)，吸盡小體積純化裝置中溶液。6)向小體積純化裝置中加5ml溶液V (去鹽液)，吸盡管中溶液。7)將步驟6中的小體積純化裝置置于潔凈的15ml離心管中，加0.3ml溶液V (去鹽液)，8, 000 X g 離心 5min[0051]8)將小體積純化裝置置于另一潔凈的15ml離心管中，加0.3ml洗脫液或去離子水。室溫靜置lmin。8，OOOXg離心2min收集質(zhì)粒DNA。3.檢測用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度法檢測，回收所得質(zhì)粒DNA的濃度和純度符合要求。在該實施例1中，由于大體積純化裝置包括過濾膜，該過濾膜可以截留下被裂解的菌體殘片，并讓核酸等目標(biāo)物質(zhì)順利通過進入小體積純化裝置中。大體積純化裝置的存在代替了用離心的方法除去菌體殘片的步驟。又由于大體積純化裝置是與小體積純化裝置相連的，使得去除菌體殘片和提純核酸等目標(biāo)產(chǎn)物實現(xiàn)了連續(xù)操作無縫對接。因此大大減少了操作步驟提高了效率，實現(xiàn)了自動化。
權(quán)利要求1.一種核酸純化裝置，包括本體，所述本體的上部具有加樣口，本體的下部具有出樣管嘴，其特征在于，在出樣管嘴的外周還包括固定框。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸純化裝置，其特征在于，出樣管嘴包括出口端，所述出口端暴露在固定框外。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸純化裝置，其特征在于，在加樣口的上部設(shè)置有一保持部件。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的核酸純化裝置，其特征在于，所述保持部件的內(nèi)徑與固定框的外徑相同。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的核酸純化裝置，其特征在于，保持部件與本體的連接處還包括支撐面，所述支撐面的結(jié)構(gòu)為一水平結(jié)構(gòu)或具有一定角度的斜面。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸純化裝置，其特征在于，還包括密封蓋。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸純化裝置，其特征在于，本體內(nèi)還包括隔板。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的核酸純化裝置，其特征在于，隔板上放置有硅膠膜。
專利摘要本實用新型提供了一種核酸純化裝置，包括本體，所述本體的上部具有加樣口，本體的下部具有出樣管嘴，在出樣管嘴的外周還包括固定框。當(dāng)兩個純化裝置需要相互連接在一起時，固定框就可以起到與另一個純化裝置相互扣合的作用。本實用新型所述的純化裝置可以用于連續(xù)負(fù)壓抽氣的核酸純化裝置系統(tǒng)。
文檔編號C12M1/12GK203048935SQ2013200672
公開日2013年7月10日 申請日期2013年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月5日
發(fā)明者林源吉, 呂航 申請人:杭州百邁生物技術(shù)有限公司