一種富含亞油酸的改性分離蛋白制備方法
【專利摘要】一種富含亞油酸的改性分離蛋白制備方法屬于大豆蛋白加工技術(shù)，該方法包括以下步驟：（1）將亞油酸進行一系列活化處理得到活化的亞油酸，將活化的亞油酸溶解在四氫呋喃溶液中形成活化的亞油酸溶液；（2）將大豆分離蛋白溶解在NaHCO3溶液中形成蛋白溶液；（3）將亞油酸溶液與蛋白溶液混合后進行水浴加熱并不斷攪拌；（4）向水浴加熱后的混合體系中加入甘氨酸，然后進行離心分離、真空干燥即得改性分離蛋白；本發(fā)明方法利用亞油酸?；男源蠖狗蛛x蛋白，酰化程度高達61.47%，改性后的蛋白中富含亞油酸，營養(yǎng)價值高，并且具有高乳化性，乳化活性為74.21m2/g，是未改性蛋白乳化活性的1.21倍。
【專利說明】一種富含亞油酸的改性分離蛋白制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于大豆蛋白加工【技術(shù)領(lǐng)域】，主要涉及一種富含亞油酸的改性分離蛋白制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]眾所周知，大豆蛋白具有很好的營養(yǎng)功能,大豆蛋白質(zhì)含量高達38%，尤其大豆蛋白質(zhì)中富含的氨基酸與牛奶相近，除蛋氨酸略低外，其余必需氨基酸含量均較豐富，是植物性的完全蛋白質(zhì)，大豆蛋白幾十年來已被用來作為亞洲國家的營養(yǎng)源，目前世界上生產(chǎn)的含有大豆蛋白的食品已超過了 12000多種。由于大豆分離蛋白(SPI)有乳化性、吸油性、吸水性與保水性、凝膠性和起泡性等功能特性，因此大豆分離蛋白質(zhì)被廣泛應(yīng)用于焙烤食品、乳品、肉制品及肉的代用品等食品工業(yè)領(lǐng)域，也使SPI功能特性的改善成為目前該領(lǐng)域的研究熱點大豆蛋白的保健功效近年來受到眾多科研機構(gòu)的研究，并在全世界范圍內(nèi)受到廣泛重視。但是，我國的食品企業(yè)并沒有充分利用大豆蛋白所含有的功能特性，目前中國大豆分離蛋白企業(yè)存在的問題主要是新產(chǎn)品開發(fā)滯后，品種較為單一，應(yīng)用領(lǐng)域窄，產(chǎn)品附加值低；產(chǎn)品質(zhì)量遠(yuǎn)低于國際水平，盡管價格較低，但銷量仍然無法提高，競爭能力偏弱。為此，研究大豆蛋白的功能性質(zhì)及改性就顯得十分重要。在過去的幾十年里，不同的改性技術(shù)已被用來改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，改變它的物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)，因此影響其結(jié)構(gòu)的功能特性。
[0003]到目前為止，國內(nèi)外對植物蛋白改性的研究深入而廣泛，但多集中在對親水性質(zhì)的改善上，對疏水性的改善研究相對較少，而疏水性是決定蛋白質(zhì)表面活性的主要因素之一，疏水改性是形成表面活性蛋白的主要途徑之一。蛋白質(zhì)的脂?；男跃褪怯没瘜W(xué)法或酶法使不同長度的脂肪酸(C6-C18)結(jié)合到親水性蛋白質(zhì)分子上，提高蛋白質(zhì)分子的表面疏水性，從而改善其表面活性，脂?；堑鞍踪|(zhì)最有效的疏水改性之一。
[0004]亞油酸被稱為是一種必需脂肪酸，必須從食物中獲得，自身無法合成或合成很少。醫(yī)藥上亞油酸具有降低血脂、軟化血管、降低血壓、促進微循環(huán)的作用，可預(yù)防或減少心血管病的發(fā)病率，特別是對高血壓、高血脂、心絞痛、冠心病、動脈粥樣硬化、老年性肥胖癥等的防治極為有利，能起到防止人體血清膽固醇在血管壁的沉積，有“血管清道夫”的美譽，具有防治動脈粥樣硬化及心血管疾病的保健效果。
[0005]目前人們對多種功能性食品或成分的要求逐漸提高，本發(fā)明從增加營養(yǎng)成并同時提高大豆蛋白的兩親性質(zhì)方面考慮，用化學(xué)方法使亞油酸與親水的大豆蛋白在堿的催化下共價交聯(lián)，制備一種富含亞油酸的大豆分離蛋白，同時改性后的蛋白乳化性顯著提高，為大豆蛋白作為食品配料和功能性食品配方的使用開拓了更好的前景。因此，對于開發(fā)一種富含亞油酸的大豆分離蛋白的制備，該研究意義重大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是通過一系列化學(xué)手段使亞油酸與大豆分離蛋白交聯(lián)，開發(fā)一種富含亞油酸的高營養(yǎng)價值蛋白產(chǎn)品，不但使蛋白里富含亞油酸同時改善蛋白功能性，改性后的蛋白營養(yǎng)價值高，乳化性好。
[0007]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的:
一種富含亞油酸的改性分離蛋白制備方法，該方法包括以下步驟:(I)將亞油酸與N-羥基琥珀酰亞胺脂(NHS)等比例混合后加入含有二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)的四氫呋喃溶液，然后置于25°C下過夜，再進行過濾處理得濾液，將濾液真空干燥得干燥物，將干燥物溶解在乙酸乙酯中，再用10%NaCl溶液洗滌，然后放入干燥塔中干燥，干燥后進行真空蒸發(fā)結(jié)晶得到活化的亞油酸，將活化的亞油酸溶解在四氫呋喃溶液中形成活化的亞油酸溶液，所述的亞油酸溶液濃度為4mg/mL ；(2)將大豆分離蛋白溶解在NaHCO3溶液中形成蛋白溶液，所述的蛋白溶液濃度為4mg/mL ;(3)將亞油酸溶液與蛋白溶液混合得混合體系，將混合體系置于25°C下進行水浴加熱，并不斷攪拌，所述的亞油酸與蛋白質(zhì)量比為1-4:1，混合體系的PH為7-10，水浴加熱時間為3-7h ； (4)向水浴加熱后的混合體系中加入甘氨酸，然后在溫度為4°C、離心力為IOOOOg下離心分離20min得上清液，將上清液真空干燥即得改性分離蛋白。
[0008]所述的水浴加熱優(yōu)選參數(shù)為:亞油酸與蛋白質(zhì)量比2.37:1，混合體系的pH 9.3，水浴加熱時間5.62h。
[0009]本發(fā)明是通過使亞油酸與分離蛋白結(jié)合，即提高蛋白營養(yǎng)價值同時提高了蛋白乳化性，為大豆蛋白的加工和應(yīng)用開拓了更好的前景，具有設(shè)計新穎合理、蛋白營養(yǎng)價值高、蛋白乳化性好等特點。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1本發(fā)明方法的工藝路線圖
圖2亞油酸與蛋白質(zhì)量比對酰化程度的影響 圖3體系pH對?；潭鹊挠绊? 圖4加熱時間對?；潭鹊挠绊?br> 圖5加熱時間與亞油酸與蛋白質(zhì)量比交互對?；潭鹊捻憫?yīng)面 圖6體系pH與加熱時間交互對?；潭鹊捻憫?yīng)面。
【具體實施方式】
[0011]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明具體實施例進行詳細(xì)描述:
一種富含亞油酸的改性分離蛋白制備方法，該方法包括以下步驟:(I)將亞油酸與N-羥基琥珀酰亞胺脂(NHS)等比例混合后加入含有二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)的四氫呋喃溶液，然后置于25V下過夜，再進行過濾處理得濾液，將濾液真空干燥得干燥物，將干燥物溶解在乙酸乙酯中，再用10%NaCl溶液洗滌，然后放入干燥塔中干燥，干燥后進行真空蒸發(fā)結(jié)晶得到活化的亞油酸，將活化的亞油酸溶解在四氫呋喃溶液中形成活化的亞油酸溶液，所述的亞油酸溶液濃度為4mg/mL ；(2)將大豆分離蛋白溶解在NaHCO3溶液中形成蛋白溶液，所述的蛋白溶液濃度為4mg/mL ;(3)將亞油酸溶液與蛋白溶液混合得混合體系，將混合體系置于25°C下進行水浴加熱，并不斷攪拌，所述的亞油酸與蛋白質(zhì)量比為1-4:1，混合體系的PH為7-10，水浴加熱時間為3-7h ； (4)向水浴加熱后的混合體系中加入甘氨酸，然后在溫度為4°C、離心力為IOOOOg下離心分離20min得上清液，將上清液真空干燥即得改性分離蛋白。
[0012]所述的水浴加熱優(yōu)選參數(shù)為:亞油酸與蛋白質(zhì)量比2.37:1，混合體系的pH 9.3，水浴加熱時間5.62h。
[0013]
實施例
[0014]I材料與方法
1.1材料、試劑
脫脂ii粉哈聞科
大豆卵磷脂青島天新食品添加劑公司
亞油酸上海金伴藥業(yè)有限公司
大豆調(diào)和油金龍魚
1.2試驗設(shè)備
高速冷凍離心機日本
真空干燥機德國
超高壓設(shè)備內(nèi)蒙古包頭市文天有限責(zé)任公司
PHS-25型酸度計上海偉業(yè)儀器廠
電子分析天平梅勒特-托利多儀器(上海)有限公司
精密電動攪拌機江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司
電熱恒溫水浴鍋余姚市東方電工儀器廠
722S分光光度計上海精密科學(xué)儀器有限公司
微量取樣器上海榮泰生化工程有限公司
1.3試驗方法
1.3.1工藝流程(見圖1)
1.3.2亞油酸含量的測定
亞油酸含量通過?；潭葴y定，采用三硝基苯磺酸法(TNBS)，取濃度為0.1%的蛋白質(zhì)溶液(0.05mol/L NaCl,0.29% SDS, pH 9.0) lmL，加入 0.05mol/L Na2HPO4 lmL，0.1% 的TNBS ImL,于60°C水浴(黑暗)中反應(yīng)2h，然后迅速冷卻至室溫，再加入10%的SDS ImL,lmol/L的HCL 0.5mL，立即在335nm下比色測定OD值，相同條件下不加蛋白的樣品作為空白。以?；鞍兹芤悍磻?yīng)后測得的OD值的減少量和同濃度未?；蠖沟鞍兹芤旱腛D值之比作為?；潭取?br> [0015]1.3.3乳化性能測定
精確稱取Ig左右樣品，溶解于IOOmL磷酸鈉緩沖溶液中，室溫下1000r/min攪拌lh。取15mL蛋白溶液與5mL大豆油混合,在高速乳化均質(zhì)機下13500r/min乳化2min后倒入25mL燒杯中，分別于Omin，30min在燒杯底部取樣20uL乳狀液與5mL0.1%的SDS溶液均勻混合，在500nm處測定其吸光值。
[0016]1.3.4計算公式
【權(quán)利要求】
1.一種富含亞油酸的改性分離蛋白制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟:(1)將亞油酸與N-羥基琥珀酰亞胺脂(NHS)等比例混合后加入含有二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)的四氫呋喃溶液，然后置于25°C下過夜，再進行過濾處理得濾液，將濾液真空干燥得干燥物，將干燥物溶解在乙酸乙酯中，再用10%NaCl溶液洗滌，然后放入干燥塔中干燥，干燥后進行真空蒸發(fā)結(jié)晶得到活化的亞油酸，將活化的亞油酸溶解在四氫呋喃溶液中形成活化的亞油酸溶液，所述的亞油酸溶液濃度為4mg/mL ；(2)將大豆分離蛋白溶解在NaHCO3溶液中形成蛋白溶液，所述的蛋白溶液濃度為4mg/mL ；(3)將亞油酸溶液與蛋白溶液混合得混合體系，將混合體系置于25°C下進行水浴加熱，并不斷攪拌，所述的亞油酸與蛋白質(zhì)量比為1-4:1，混合體系的PH為7-10，水浴加熱時間為3-7h ； (4)向水浴加熱后的混合體系中加入甘氨酸，然后在溫度為4°C、離心力為IOOOOg下離心分離20min得上清液，將上清液真空干燥即得改性分離蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種富含亞油酸的改性分離蛋白制備方法，其特征在于所述的水浴加熱優(yōu)選參數(shù)為:亞油酸與蛋白質(zhì)量比2.37:1，混合體系的pH 9.3，水浴加熱時間5.62h0
【文檔編號】A23J3/16GK103636918SQ201310677057
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年12月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月13日
【發(fā)明者】江連洲, 李楊, 齊寶坤, 馮紅霞, 于殿宇, 王中江, 許晶, 隋曉楠, 趙城彬 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)