一種油茶籽多肽的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種油茶籽多肽的制備方法，具體如下：油茶籽蛋白經(jīng)粉碎，過(guò)80~100目篩后按質(zhì)量體積比3:100~120加水制成懸浮液，所述懸浮液于90~95℃熱處理10~20min，降溫后調(diào)pH值至中性，按4300~4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53~54℃酶解3.5~4.5h，酶解結(jié)束后滅酶，離心得上清液，所述上清液經(jīng)過(guò)脫鹽、柱層析后洗脫液再次離心得上清液，所述上清液經(jīng)過(guò)冷凍干燥得油茶籽多肽。本發(fā)明的提取工藝條件溫和，制得的油茶籽粕蛋白形態(tài)、色澤佳，油茶籽蛋白再經(jīng)過(guò)中性蛋白酶的酶解、脫鹽和柱層析，柱層析的洗脫液經(jīng)過(guò)冷凍干燥獲得油茶籽粕多肽，該多肽雜質(zhì)含量低，氨基酸含量豐富，可以廣泛應(yīng)用于食品添加劑。
【專利說(shuō)明】一種油茶籽多肽的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種多肽的制備方法，具體的說(shuō)是涉及一種油茶籽多肽的制備方法。【背景技術(shù)】
[0002]油茶屬于常綠小喬木，是茶科山茶屬，是我國(guó)南方的一種優(yōu)良的木本油料植物。我國(guó)油茶資源十分豐富，僅油茶林的種植面積就達(dá)400萬(wàn)hm2，是世界上油茶品種最多、分布最廣、油茶籽產(chǎn)量最高的國(guó)家，年產(chǎn)油茶籽約54.98萬(wàn)噸、茶油15萬(wàn)噸、油茶籽副產(chǎn)品一油茶籽柏的年平均產(chǎn)量約為39.71萬(wàn)噸。油茶籽柏中蛋白質(zhì)含量約為12%~15%，其氨基酸組成為17種，其中8種為人體必需氨基酸。油茶籽柏的利用率相當(dāng)?shù)?，造成資源的極大浪費(fèi)，植物蛋白質(zhì)在生物酶法條件下，水解生成的多肽及氨基酸等物質(zhì)，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與功能特性，因此該法已成為研究熱點(diǎn)。很多種植物蛋白質(zhì)酶解后產(chǎn)生的多肽除了具有易被人體消化吸收的特性外，還具有很強(qiáng)的抗氧化、降低膽固醇等功能特性。到目前為止，未見國(guó)內(nèi)外有關(guān)油茶籽多肽的研究報(bào)道，因此，開展對(duì)油茶籽多肽保健功能活性的研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種一種油茶籽多肽的制備方法。
[0004]本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是:
[0005]一種油茶籽多肽的制備方法，所述制備方法具體如下:
[0006]油茶籽蛋白經(jīng)粉碎，過(guò)80~100目篩后按質(zhì)量體積比3:100~120加水制成懸浮液，所述懸浮液于90~95°C熱處理10~20min，降溫后調(diào)pH值至中性，按4300~4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，`于53~54°C酶解3.5~4.5h，酶解結(jié)束后滅酶，離心得上清液，所述上清液經(jīng)過(guò)脫鹽、柱層析后洗脫液再次離心得上清液，所述上清液經(jīng)過(guò)冷凍干燥得油茶籽多肽。
[0007]作為優(yōu)選，中性蛋白酶的加酶量為4364u/g底物，酶解溫度為53.5°C，酶解時(shí)間為4小時(shí)。
[0008]作為優(yōu)選，所述油茶籽蛋白的制備方法如下:
[0009](I)酶解:將粉碎后過(guò)80~100目篩的油茶籽柏粉按料液比1:6~7與水混合均勻，調(diào)pH值至7.25~7.30，加入油茶籽柏粉質(zhì)量0.04~0.05%的復(fù)合植物水解酶，于65~70°C酶解3~3.5h，酶解結(jié)束后滅酶，然后離心獲得油茶籽柏殘?jiān)?br> [0010](2)超聲輔助堿提:將步驟(1)獲得的油茶籽柏殘?jiān)c適量水混合均勻，調(diào)pH值至
10.0~10.5，于40~45°C堿提80~90min，堿提過(guò)程中采用超聲波輔助，超聲波的功率為300~1000W，超聲時(shí)間為20min，堿提結(jié)束后離心分離得上清液；
[0011](3)酸沉:將步驟(2)獲得的上清液調(diào)pH值至4.6,于室溫靜置I~1.5h,然后離心得沉淀，所述沉淀經(jīng)過(guò)冷凍干燥得油茶籽柏蛋白。
[0012]本發(fā)明通過(guò)復(fù)合植物水解酶先將油茶籽柏粉中的非蛋白質(zhì)如糖類分解掉，然后再通過(guò)堿提、酸沉來(lái)獲得油茶籽柏蛋白，其中堿提通過(guò)超聲波強(qiáng)化，提取效果好，堿提的提取率高，由于本發(fā)明的提取工藝條件溫和，制得的油茶籽柏蛋白形態(tài)、色澤佳，油茶籽蛋白再經(jīng)過(guò)中性蛋白酶的酶解、脫鹽和柱層析，柱層析的洗脫液經(jīng)過(guò)冷凍干燥獲得油茶籽柏多肽，該多肽氨基酸含量豐富，可以廣泛應(yīng)用于食品添加劑。
[0013]作為優(yōu)選，步驟(1)中油茶籽柏粉的粒徑為80目，料液比為1: 6，pH值為7.28，復(fù)合植物水解酶的添加量為0.048%,酶解溫度為68°C，酶解時(shí)間為3.25h。此工藝參數(shù)系復(fù)合植物水解酶酶解的最佳工藝條件，非蛋白類雜質(zhì)去除率高，后續(xù)堿提過(guò)程中可以節(jié)省堿的用量，堿的用量減少，對(duì)油茶籽柏蛋白的破壞減少，避免了堿性太強(qiáng)引起脫氨、脫羧、肽鍵斷裂，引起“胱賴反應(yīng)”，將氨基酸轉(zhuǎn)變?yōu)橛卸净衔铩?br> [0014]作為優(yōu)選，步驟(2)中油茶籽柏殘?jiān)?以干基計(jì))與水的質(zhì)量比為1:25。
[0015]作為優(yōu)選，步驟(2)中堿提的pH值為10.0，浸提溫度為40°C，浸提時(shí)間為80min。
[0016]作為優(yōu)選，所述離心的轉(zhuǎn)速為3000~3200rpm,離心時(shí)間為10~20min。
[0017]本發(fā)明的有益效果是:
[0018](I)本發(fā)明通過(guò)復(fù)合植物水解酶先將油茶籽柏粉中的非蛋白質(zhì)如糖類分解掉，然后再通過(guò)堿提、酸沉來(lái)獲得油茶籽柏蛋白，其中堿提通過(guò)超聲波強(qiáng)化，提取效果好，堿提的提取率高，由于本發(fā)明的提取工藝條件溫和，制得的油茶籽柏蛋白形態(tài)、色澤佳，油茶籽蛋白再經(jīng)過(guò)中性蛋白酶的酶解、脫鹽和柱層析，柱層析的洗脫液經(jīng)過(guò)冷凍干燥獲得油茶籽柏多肽，該多肽雜質(zhì)含量低，氨基酸含量豐富，可以廣泛應(yīng)用于食品添加劑。
[0019](2)本發(fā)明將利用率相當(dāng)?shù)偷挠筒枳寻刂瞥捎筒枳讯嚯?，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，提高了資源的利用率，將油茶籽柏變廢為寶，增加了其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面通過(guò)具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說(shuō)明，各實(shí)施例使用的儀器設(shè)備均系市購(gòu)常規(guī)設(shè)備，各實(shí)施例所使用的試劑均系市購(gòu)常規(guī)試劑。
[0021]復(fù)合植物水解酶:諾維信公司生產(chǎn)，酶活100FBG/g。
[0022]本發(fā)明制備的油茶籽多肽的氨基酸含量由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所測(cè)試中心檢測(cè)。
[0023]實(shí)施例1
[0024]一種油茶籽多肽的制備方法，所述制備方法具體如下:
[0025](I)酶解:將粉碎后過(guò)80目篩的油茶籽柏粉按料液比1:6與水混合均勻，調(diào)pH值至7.25，加入油茶籽柏粉質(zhì)量0.04%的復(fù)合植物水解酶，于65°C酶解3.5h，酶解結(jié)束后于85°C滅酶lOmin，然后于3000rpm離心15min獲得油茶籽柏殘?jiān)?br> [0026](2)超聲輔助堿提:將步驟(1)獲得的油茶籽柏殘?jiān)?以干基計(jì))按質(zhì)量比1:25與水混合均勻，調(diào)pH值至10.0，于40°C堿提90min，堿提過(guò)程中采用超聲波輔助，超聲波的功率為300W，超聲時(shí)間為20min，堿提結(jié)束后于3000rpm離心15min分離得上清液；
`[0027](3)酸沉:將步驟(2)獲得的上清液調(diào)pH值至4.6，于室溫靜置lh，然后于3000rpm離心15min得沉淀，所述沉淀經(jīng)過(guò)冷凍干燥得油茶籽柏蛋白。
[0028](4)將步驟(3)獲得的油茶籽蛋白過(guò)80目篩后按質(zhì)量體積比3:100 (g/ml)加水制成懸浮液，所述懸浮液于90°C熱處理20min，降溫后調(diào)pH值至7.0，按4300u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53°C酶解4.5h，酶解結(jié)束后于90°C滅酶lOmin，再在3000rpm轉(zhuǎn)速條件下離心20min得上清液，所述上清液經(jīng)過(guò)脫鹽、SephadexG-25柱層析后洗脫液再次在3000rpm轉(zhuǎn)速條件下離心20min得上清液，所述上清液經(jīng)過(guò)冷凍干燥得油茶籽多肽。
[0029]實(shí)施例2:
[0030]一種油茶籽多肽的制備方法，所述制備方法具體如下:
[0031](I)酶解:將粉碎后過(guò)100目篩的油茶籽柏粉按料液比1:7與水混合均勻，調(diào)pH值至7.30，加入油茶籽柏粉質(zhì)量0.05%的復(fù)合植物水解酶，于70°C酶解3h，酶解結(jié)束后于85°C滅酶15min，然后于3200rpm離心IOmin獲得油茶籽柏殘?jiān)?br> [0032](2)超聲輔助堿提:將步驟(1)獲得的油茶籽柏殘?jiān)?以干基計(jì))按質(zhì)量比1:25與水混合均勻，調(diào)pH值至10.5，于45°C堿提80min，堿提過(guò)程中采用超聲波輔助，超聲波的功率為1000W,超聲時(shí)間為20min,堿提結(jié)束后于3200rpm離心IOmin分離得上清液；
[0033](3)酸沉:將步驟(2)獲得的上清液調(diào)pH值至4.6，于室溫靜置1.5h，然后于3200rpm離心IOmin得沉淀,所述沉淀經(jīng)過(guò)冷凍干燥得油茶籽柏蛋白。
[0034](4)將步驟(3)獲得的油茶籽蛋白過(guò)100目篩后按質(zhì)量體積比3:120 (g/ml)加水制成懸浮液，所述懸浮液于95°C熱處理lOmin，降溫后調(diào)pH值至7.0，按4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于54°C酶解3.5h，酶解結(jié)束后于95°C滅酶8min，再在3200rpm轉(zhuǎn)速條件下離心15min得上清液，所述上清液經(jīng)過(guò)脫鹽、SephadexG-25柱層析后洗脫液再次在3200rpm轉(zhuǎn)速條件下離心15min得上清液,所述上清液經(jīng)過(guò)冷凍干燥得油茶籽多肽。
[0035]實(shí)施例3:
[0036]一種油茶籽多肽的制備方法，所述制備方法具體如下:
[0037](I)酶解:將粉碎后過(guò)100目篩的油茶籽柏粉按料液比1:6與水混合均勻，調(diào)pH值至7.28，加入油茶籽柏粉質(zhì)量0.048%的復(fù)合植物水解酶，于68°C酶解3.25h，酶解結(jié)束后于90°C滅酶5min，然后于3000rpm離心20min獲得油茶籽柏殘?jiān)?br> [0038](2)超聲輔助堿提:將步驟(1)獲得的油茶籽柏殘?jiān)?以干基計(jì))按質(zhì)量比1:25與水混合均勻，調(diào)pH值至10.0，于40°C堿提80min，堿提過(guò)程中采用超聲波輔助，超聲波的功率為800W,超聲時(shí)間為20min,堿提結(jié)束后于3000rpm離心20min分離得上清液；
[0039](3)酸沉:將步驟(2)獲得的上清液調(diào)pH值至4.6，于室溫靜置1.5h，然后于3000rpm離心20min得沉淀,所述沉淀經(jīng)過(guò)冷凍干燥得油茶籽柏蛋白。
[0040](4)將步驟(3)獲得的油茶籽蛋白過(guò)80目篩后按質(zhì)量體積比3:100 (g/ml)加水制成懸浮液，所述懸浮液于95°C熱處理lOmin，降溫后調(diào)pH值至7.0，按4364u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53.5°C酶解4h，酶解結(jié)束后于95°C滅酶8min，再在3200rpm轉(zhuǎn)速條件下離心15min得上清液，所述上清液經(jīng)過(guò)脫鹽、SephadexG-25柱層析后洗脫液再次在3200rpm轉(zhuǎn)速條件下離心15min得上清液,所述上清液經(jīng)過(guò)冷凍干燥得油茶籽多肽。
[0041]實(shí)施例1~3獲得的油茶籽多肽的感官特性指標(biāo)見表1，油茶籽多肽的質(zhì)量指標(biāo)見表2所示:
[0042]表1油茶籽柏多肽的感官特性指標(biāo)
[0043]
【權(quán)利要求】
1.一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:所述制備方法具體如下: 油茶籽蛋白經(jīng)粉碎，過(guò)80~100目篩后按質(zhì)量體積比3:100~120加水制成懸浮液，所述懸浮液于90~95°C熱處理10~20min,降溫后調(diào)pH值至中性,按4300~4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53~54°C酶解3.5~4.5h，酶解結(jié)束后滅酶，離心得上清液，所述上清液經(jīng)過(guò)脫鹽、柱層析后洗脫液再次離心得上清液，所述上清液經(jīng)過(guò)冷凍干燥得油茶籽多肽。
2.一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:所述中性蛋白酶的加酶量為4364u/g底物，酶解溫度為53.5°C，酶解時(shí)間為4小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:所述油茶籽蛋白的制備方法如下: (O酶解:將粉碎后過(guò)80~100目篩的油茶籽柏粉按料液比1:6~7與水混合均勻，調(diào)PH值至7.25~7.30，加入油茶籽柏粉質(zhì)量0.04~0.05%的復(fù)合植物水解酶，于65~70°C酶解3~3.5h，酶解結(jié)束后滅酶，然后離心獲得油茶籽柏殘?jiān)? (2)超聲輔助堿提:將步驟(1)獲得的油茶籽柏殘?jiān)c適量水混合均勻，調(diào)pH值至10.0~10.5，于40~45°C堿提80~90min，堿提過(guò)程中采用超聲波輔助，超聲波的功率為300~1000W，超聲時(shí)間為20min，堿提結(jié)束后離心分離得上清液； (3)酸沉:將步驟(2)獲得的上清液調(diào)pH值至4.6，于室溫靜置I~1.5h，然后離心得沉淀，所述沉淀經(jīng)過(guò)冷凍干燥得油茶籽柏蛋白。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:步驟(1)中油茶籽柏粉的粒徑為80目，料液比為1: 6，pH值為7.28，復(fù)合植物水解酶的添加量為0.048%，酶解溫度為68°C，酶解時(shí)間為3.25h。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:步驟(2)中油茶籽柏殘?jiān)?以干基計(jì))與水的質(zhì)量比為1:25。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:步驟(2)中堿提的pH值為10.0，浸提溫度為40°C，浸提時(shí)間為80min。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:所述離心的轉(zhuǎn)速為3000~3200rpm，離心時(shí)間為10~20min。
【文檔編號(hào)】C12P21/06GK103627765SQ201310631391
【公開日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2013年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月29日
【發(fā)明者】何東平, 胡傳榮, 雙楊, 劉京偉 申請(qǐng)人:衢州劉家香食品有限公司