偵測膀胱癌的新穎表基因生物標記及其方法
【專利摘要】一種偵測膀胱癌的新穎表基因生物標記及其方法，該方法包含：提供一受測檢體；檢測該受測檢體的基因組DNA中至少一個目標基因的CpG序列甲基化狀態(tài)，該目標基因選自由ZNF671、PTPRR、SOX1、PAX1、ZNF582、AJAP1、SOX17、EDN3、ST6GAL2、ZNF614、PTGDR、SYT9、SOX8、HS3ST2、POU4F3、ADRA1D、MAGI2、EPO、NEFH、POU4F2、STC2以及THRB所組成的群組至少一個；以及根據(jù)該目標基因甲基化狀態(tài)的有無，判斷該檢體是否具有癌癥或癌前病變，或作為治療預后的指標。本發(fā)明也揭示一種偵測膀胱癌的新穎表基因的生物標記，其中該生物標記包含一目標基因的CpG位點且該位點被甲基化，可在尿液中被偵測出。
【專利說明】偵測膀脯癌的新穎表基因生物標記及其方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明關于一種偵測膀脫癌的新穎表基因生物標記及其方法，特別是指一種W甲 基化DNA作為生物標記的膀脫癌癥篩檢的方法。

【背景技術】
[0002] 膀脫癌是世界第六大常見癌癥，并在臺灣西南部的發(fā)病率特別高。約90%的膀脫 癌是泌尿道上皮癌（urothelial carcinoma, UC),又稱移行細胞癌（transitional cell carcinoma, TCC)，另外約8%的膀脫癌是鱗狀細胞癌，約2%是腺癌。雖然膀脫癌患者的死亡 率低，然而由于膀脫癌屬于高復發(fā)腫瘤性質，因此長期追蹤W及反復的膀脫鏡檢查是必要 的。對于詳細的膀脫檢查，檢測膀脫是否有異狀，須利用膀脫鏡直接經(jīng)由患者的尿道，大多 數(shù)患者須遭受該些侵入性的檢查。
[0003] 基因的缺失（genomic deletions)被認為是腫瘤形成的重要因素，長久W來，我們 都習慣了基因組中的編碼是仰賴ATCG四個堿基排列的觀念，Knudson早在1975年即提出雙 重受創(chuàng)理論（two-hit theory),指出一些同源腫瘤抑制基因伴隨的突變或缺失可能造成或 易造成癌癥的發(fā)生；然而，其他影響表現(xiàn)型（phenotype)的訊息可能存于被修飾過的堿基 5-甲基胞嚼巧巧-methylcytosine)中，5-甲基胞嚼巧被發(fā)現(xiàn)存在于哺乳類動物細胞內的 回文序列5'-CpG-3'中，在哺乳類動物細胞內除了一些被稱為"CpG島"(CpG islands，CGIs) 的區(qū)域之外，大多數(shù)的CpG雙核巧酸對都被甲基化，CpG島是指在大約1000個堿基對（1肺） 的區(qū)域內含有大量的GC- W及CpG-，通常位于基因的附近，且在廣泛表現(xiàn)的基因的啟動 子附近被發(fā)現(xiàn)。胞嚼巧的甲基化發(fā)生在DNA合成后，自一甲基捐贈者S-腺核巧甲硫胺酸 (S-adenosylmethionine，SAM)將一甲基經(jīng)酵素轉移到胞嚼巧第5個碳的位置上，該酵素反 應由DNA甲基轉移酶值NA methyltransferase，DNMTs)執(zhí)行，DNMT1是哺乳類動物主要的 甲基轉移酶，負責將半甲基化位置復制后修復（post-replicative restoration)為全甲基 化，被稱為維持甲基化（maintenance methylation);反之，DNMT3A及DNMT3B則被認為主要 負責甲基化新的位置，進行一種稱為重新甲基化（de novo met的lation)的步驟。
[0004] CpG雙核巧酸對甲基化的遺失（loss of methylation)，意即一般的低度甲基 化，是癌細胞內的第一個表基因異常（epigenetic油normality);然而，在過去幾年內 的研究卻顯示，特定位置（例如；一些腫瘤抑制基因）的高度甲基化（site-specific hypermethylation)與其功能的喪失有關，該可能會在癌癥生成時提供選擇優(yōu)勢 (selective advantages);在啟動子區(qū)域上CpG島的高度甲基化，可W借由組蛋白修飾 化istone modification)伴隨接續(xù)而來的基因默化現(xiàn)象（gene silencing),來引起染色質 改造（C虹omatin remodeling);除了染色體缺失及基因突變之外，經(jīng)由啟動子的高度甲基 化所造成腫瘤抑制基因的表基因默化現(xiàn)象（epigenetic silencing)也常見于人類癌癥中。
[0005] 因此，一個敏感的和非侵入性的檢測法，對于膀脫癌患者是迫切需要的，而DNA甲 基化是一種用于癌癥檢測理想的生物標志物。由于遺傳與環(huán)境交互作用的特性，腫瘤抑制 基因甲基化程度因不同的基因及不同的族群而異，不同的疾病也會有不同的甲基化表現(xiàn)型 (methylator地enotypes);然而，膀脫癌中有何特定的基因會被甲基化，W及需要多少基 因方可達到臨床應用的需求，該些問題仍是未來需要被確認的議題。
[0006] 上述現(xiàn)有的膀脫癌篩檢方法仍有諸多缺失，確實不是好的方法，而急待加W改良。


【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明的目的即在于提供一種偵測膀脫癌的新穎表基因生物標記及其方法，該方 法包含：提供一受測檢體；檢測該受測檢體的基因組DNA中至少一個目標基因的CpG序列 甲基化狀態(tài)，該目標基因選自由 ZNF671、PTPRR、S0X1、PAX1、ZNF582、AJAP1、S0X17、EDN3、 ST6GAL2、ZNF614、PTGDR、SYT9、S0X8、服3ST2、P0U4F3、ADRA1D、MAGI2、EP0、肥即、P0U4F2、 STC2 W及THRB所組成的群組中的至少一個；W及根據(jù)該目標基因甲基化狀態(tài)的有無，判斷 該檢體是否具有癌癥或癌前病變，或作為治療預后的指標。
[0008] 為達成前述發(fā)明目的，其中該目標基因為ZNF671與另一目標基因選自由PTPRR、 S0X1、PAX1、ZNF582、AJAP1、S0X17、邸N3、ST6GAL2、ZNF614、PTGDR、SYT9、S0X8、服3ST2、 P0U4F3、ADRA1D、MAGI2、EP0、肥即、P0U4F2、STC2 W及 THRB 所組成的群組中的至少一個。
[0009] 為達成前述發(fā)明目的，其中該受測檢體包含尿液、糞便、血液、腹水、姨、口腔黏膜 細胞、胃液、膽汁、或手術后的膀脫癌組織離體樣本。
[0010] 為達成前述發(fā)明目的，其中該目標基因的CpG序列甲基化狀態(tài)檢測方法包含甲基 化特異性聚合酶連鎖反應（methylation-specific PCR，MSP)、定量甲基化特異性聚合酶 連鎖反應（quantitative methylation-specific PCR, QMSP)、亞硫酸鹽定序 〇3isulfite sequencing, BS)、微數(shù)組（microarrays)、質譜儀分析（mass spectrometer)、變性高效液 相色譜（denaturing hi曲-performance liquid C虹omatography，DHPLC)、及焦磯酸定序 (pyrosequencing)中的至少一者。
[0011] 為達成前述發(fā)明目的，其中該目標基因甲基化的狀態(tài)由引子對序列所偵測，各個 目標基因的引子對分別為；ZNF671引子對為SEQ ID No ;1-2、PTPRR引子對為SEQ ID No : 3-4、S0X1 引子對為 SEQ ID No ;5-6、PAX1 引子對為 SEQ ID No ;7-8、ZNF582 引子對為 SEQ ID No ;9-10、AJAP1 引子對為 SEQ ID No S0X17 引子對為 SEQ ID No ;13-14、邸N3 引子對為569 10齡；15-16、5166412引子對為569 10齡；17-18、2^614引子對為569 10 No ;19-20、PTGDR 引子對為 SEQ ID No ;21-22、SYT9 引子對為 SEQ ID No ;23-24、S0X8 引子 對為 SEQ ID No ;25-26、HS3ST2 引子對為 SEQ ID No ;27-28、P0U4F3 引子對為 SEQ ID No : 29-30、ADRAlD 引子對為 SEQ ID No ;31-32、MAGI2 引子對為 SEQ ID No ;33-34、EP0 引子對 為 SEQ ID No ;35-36、肥閒引子對為 SEQ ID No ;37-38、P0U4巧引子對為 SEQ ID No ; 39-40、 STC2引子對為SEQ ID No ;41-42、THRB引子對為SEQ ID No ;43-44 ;其中該引子包含至少 有50%的序列同一性、互補性或至少連續(xù)十個核巧酸相同的序列。
[0012] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種偵測膀脫癌的新穎表基因的生物標記，其中該 生物標記系包含一目標基因的CpG位點且該位點被甲基化；其中該目標基因的CpG位點 序列選自由 ZNF671 (SEQ ID No ;1-2)、PTPRR(SEQ ID No ;3-4)、S0X1 (SEQ ID No ;5-6)、 PAXKSEQ ID No ：7-8). ZNF582(SEQ ID No ：9-10). AJAP1(SEQ ID No ： 11-12). S0X17 (SEQ IDNo;13-14)、邸N3(SEQIDNo;15-l的、ST6GAL2(SEQIDNo;17-18)、ZNF614(沈QIDNo: 19-20)、PTGDR(沈Q ID No;21-22)、SYT9(SEQ ID N〇;23-24)、SOX8(沈Q ID No;25-26)、 HS3ST2(SEQ ID No ：27-28). P0U4F3 (SEQ ID No ：29-30). ADRAID (SEQ ID No ：31-32). MAGI2(SEQ ID N〇;33-：M)、EPO(沈Q ID No;35-36)、肥即（SEQ ID N〇;37-38)、POU4F2GEQ ID N〇;39-40)、STC2(SEQ ID No;41-42) W及 THRB(SEQ ID No;43-44)所組成的群組中的 至少一個。
[001引為達成前述發(fā)明目的，其中該目標基因的CpG位點序列為ZNF67USEQ ID No : 1-2)與另一目標基因的CpG位點序列選自由PTPRR(SEQ ID N0;3-4)、SOX1(SEQ ID No: 5-6)、PAXl(SEQ ID No;7-8)、ZNF582(SEQ ID N0;9-10)、AJAP1(SEQ ID No;ll-12)、 S0X17(SEQIDNo;13-14)、抓N3(SEQIDNo;15-16)、ST6GAL2(SEQIDNo;17-18)、 ZNF614(沈Q ID N0;19-20)、PTGDR(沈Q ID No;21-22)、SYT9(SEQ ID N0;23-24)、SOX8(沈Q 10齡；25-26)、服3512(569 10齡；27-28)、？0則。3(沈9 10齡；29-30)、40^10 669 10 No;31-32)、MAGI2(SEQ ID N0;33-：M)、EPO(沈Q ID No;35-36)、肥即（SEQ ID No;37-38)、 P0U4F2(SEQ ID No ;39-40)、STC2(SEQ ID No ;41-42) W及THRB(SEQ ID No ;43-44)所組成 的群組中的至少一個。
[0014] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種目標基因在制備用于膀脫癌癥篩檢試劑中的用 途，其為受測檢體內目標基因組中DNA中CpG序列甲基化的狀態(tài)，其中該目標基因系選自 由 ZNF671、PTPRR、SOX 1、PAX 1、ZNF582、AJAP1、SOX 17、EDN3、ST6GAL2、ZNF614、PTGDR、SYT9、 S0X8、服3ST2、P0U4F3、ADRAID、MAGI2、EPO、肥即、P0U4F2、STC2 W及 THRB 所組成的群組中 的至少一個。
[001引為達成前述發(fā)明目的，其中該目標基因為ZNF671與另一目標基因選自由ZNF671、 PTPRR、S0X1、PAX1、ZNF582、AJAP1、S0X17、EDN3、ST6GAL2、ZNF614、PTGDR、SYT9、S0X8、 服3512、？0則。3、40^10、祖612、6?0、肥即、？0則。2、51'〔2^及了皿8所組成的群組中的至少 一個。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 請參閱W下有關本發(fā)明一優(yōu)選實施例的詳細說明及其附圖，將可進一步了解本發(fā) 明的技術內容及其目的功效；有關該實施例的附圖為：
[0017] 圖1為利用qMSP分析膀脫癌與正常人尿液樣本ZNF671基因甲基化程度。
[0018] 圖2為利用qMSP分析膀脫癌與正常人尿液樣本PTPRRR、S0X1、PAX1與ZNF582基 因甲基化程度。
[001引 圖3為利用qMSP分析膀脫癌與正常人尿液樣本AJAPUS0X17、邸N3與ST6GAL2基 因甲基化程度。
[0020] 圖4為利用qMSP分析膀脫癌與正常人尿液樣本ZNF614、PTGDR、SYT9與S0X8基因 甲基化程度。
[0021] 圖5為利用qMSP分析膀脫癌與正常人尿液樣本服3ST2、P0U4F3、ADRA1D與MAGI2 基因甲基化程度。
[0022] 圖6為利用qMSP分析膀脫癌與正常人尿液樣本EP0、肥FH與P0U4巧基因甲基化 程度。
[0023] 圖7為利用qMSP分析膀脫癌與正常人尿液樣本STC2與THRB基因甲基化程度。
[0024] 圖8為利用qMSP分析膀脫癌與正常人尿液樣本H0XB3基因甲基化程度。

【具體實施方式】
[0025] 本發(fā)明為一種偵測膀脫癌的新穎表基因生物標記及其方法，該方法包含；提供一 受測檢體；檢測該受測檢體的基因組DNA中至少一個目標基因的CpG序列甲基化狀態(tài)，該目 標基因選自由 ZNF671、PTPRR、S0X1、PAX1、ZNF582、AJAP1、S0X17、EDN3、ST6GAL2、ZNF614、 PTGDR、SYT9、S0X8、服3ST2、P0U4F3、ADRA1D、MAGI2、EP0、肥即、P0U4F2、STC2 U及 THRB 所 組成的群組中的至少一個；W及根據(jù)該目標基因甲基化狀態(tài)的有無，判斷該檢體是否具有 癌癥或癌前病變，或作為治療預后的指標。
[0026] 本發(fā)明也掲示一種偵測膀脫癌的新穎表基因的生物標記，其中該生物標記包含一 目標基因的CpG位點且該位點被甲基化。
[0027] 本說明書中所述的所有技術性及科學術語，除非另外有所定義，都為該所屬領域 的技術人員可共同了解的意義。
[0028] 術語"偵測"、"篩檢"并非確定性診斷方法，根據(jù)現(xiàn)有技術中的醫(yī)學知識和本專利 申請公開的通過檢測目標基因在各類檢體CpG序列甲基化的狀態(tài)所獲得的信息本身，并不 能夠直接得出診斷結果或健康狀況，即是否患有癌癥的診斷結果，而只是屬于"對已經(jīng)脫離 人體或動物體的組織、體液或排泄物進行處理或檢測W獲取作為中間結果的信息的方法， 或處理該信息的方法"，為"不屬于診斷方法的發(fā)明"。依本領域具通常知識者（例如；醫(yī)生、 醫(yī)學研究人員）皆了解，要診斷是否患癌一定要進行病理切片檢查。易言之，本發(fā)明應作為 一種膀脫癌偵測、篩檢的方法，而非確定性診斷方法。因此本發(fā)明并非法定不予專利的診斷 方法。
[0029] 術語"受測檢體"指離體的受測樣本，該樣本包括前述的腹水、血液、尿液、糞便、 姨、口腔黏膜細胞、胃液、膽汁、或手術后的癌癥組織等離體的檢體樣本。本發(fā)明的癌癥篩檢 方法用于檢測該些離體樣本中目標基因甲基化的狀態(tài)，W作為各類癌癥的篩檢指標。本發(fā) 明所提供的癌癥篩檢方法及其篩檢指標，可供檢測研究人員于實驗室中進行檢測。
[0030] 術語"治療"、"治療中"及其類術語指延緩、改善、減少或逆轉目前正折磨著患者的 該病癥或該病癥相關的任何癥狀的方法W及預防該病癥或其任何正出現(xiàn)的癥狀的方法。
[0031] 本發(fā)明W下面的實施例予W示范闡明，但本發(fā)明不受下述實施例所限制。本發(fā)明 所用的藥物、生物材料都易于取得，下列僅為示例可取得的管道。
[0032] 本發(fā)明W下面的實施例予W示范闡明，但本發(fā)明不受下述實施例所限制。
[003引細胞株的信息
[0034] 人類膀脫泌尿道上皮細胞（Human urothelial cell,皿C)培養(yǎng)在尿路上皮細胞培 養(yǎng)液扣CM)中。
[00對病人檢體
[0036] 從臺灣嘉義基督教醫(yī)院膀脫癌患者，收集100位膀脫癌扣C)樣本（表一）與9位 相鄰正常區(qū)域樣本。收集27位膀脫癌患者的尿液樣本，與19位非癌癥個體的尿液樣本作 為對照組。
[0037] 表一、膀脫癌臨床樣本

【權利要求】
1. 一種偵測膀胱癌的新穎表基因生物標記及其方法，該方法包含： 提供一受測檢體； 檢測該受測檢體的基因組DNA中至少一個目標基因的CpG序列甲基化狀態(tài)，該目標基 因選自由ZNF6 71、PTPRR、SOX1、PAX1、ZNF58 2、AJAP1、SOX17、EDN3、ST6GAL2、ZNF614、PTCDR、 SYT9、S0X8、HS3ST2、P0U4F3、ADRA1D、MAGI2、EPO、NEFH、P0U4F2、STC2 以及THRB所組成的 群組至少一個；以及 根據(jù)該目標基因甲基化狀態(tài)的有無，判斷該檢體是否具有癌癥或癌前病變，或作為治 療預后的指標。
2. 如權利要求1所述的偵測膀胱癌的新穎表基因生物標記及其方法，其特征在于：其 中該目標基因為ZNF671與另一目標基因選自由PTPRR、S0X1、PAX1、ZNF582、AJAP1、S0X17、 EDN3、ST6GAL2、ZNF614、PTCDR、SYT9、S0X8、HS3ST2、P0U4F3、ADRA1D、MAGI2、EPO、NEFH、 P0U4F2、STC2以及THRB所組成的群組至少一個。
3. 如權利要求1所述的偵測膀胱癌的新穎表基因生物標記及其方法，其特征在于：其 中該受測檢體包含尿液、糞便、血液、腹水、痰、口腔黏膜細胞、胃液、膽汁、或手術后的膀胱 癌組織離體樣本。
4. 如權利要求1所述的偵測膀胱癌的新穎表基因生物標記及其方法，其特征在于： 其中該目標基因的CpG序列甲基化狀態(tài)檢測方法包含甲基化特異性聚合酶連鎖反應 (methylation-specific PCR，MSP)、定量甲基化特異性聚合酶連鎖反應（quantitative methylation-specific PCR，QMSP)、亞硫酸鹽定序（bisulfite sequencing，BS)、微數(shù) 組（microarrays)、質譜儀分析（mass spectrometer)、變性高效液相色譜（denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC)、及焦憐酸定序（pyrosequencing)中 至少一者。
5. 如權利要求1或2所述的偵測膀胱癌的新穎表基因生物標記及其方法，其特征在 于：其中該目標基因甲基化的狀態(tài)由引子對序列所偵測，各個目標基因的引子對分別為： ZNF671 引子對為 SEQ ID No :1-2、PTPRR 引子對為 SEQ ID No :3-4、S0X1 引子對為 SEQ ID No :5-6、PAX1 引子對為 SEQ ID No :7-8、ZNF582 引子對為 SEQ ID No :9-10、AJAP1 引子對 為 SEQ ID N〇:11-12、SOX17 引子對為 SEQ ID No:13-14、EDN3 引子對為 SEQ ID No:15-16、 ST6GAL2 引子對為 SEQ ID No :17-18、ZNF614 引子對為 SEQ ID No :19-20、PTCDR 引子對 為 SEQ ID No :21-22、SYT9 引子對為 SEQ ID No :23-24、S0X8 引子對為 SEQ ID No :25-26、 HS3ST2 引子對為 SEQ ID N〇:27-28、POU4F3 引子對為 SEQ ID N〇:29-30、ADRA1D 引子對 為 SEQ ID No :31-32、MAGI2 引子對為 SEQ ID No :33-34、EP0 引子對為 SEQ ID No :35-36、 NEH1 引子對為 SEQ ID No :37-38、P0U4F2 引子對為 SEQ ID No :39-40、STC2 引子對為 SEQ ID No:41-42、THRB引子對為SEQ ID No:43-44;其中該引子包含至少有50%的序列同一性、 互補性或至少連續(xù)十個核苷酸相同的序列。
6. -種偵測膀胱癌的新穎表基因的生物標記，其中該生物標記系包含一目標基因的 CpG位點且該位點被甲基化；其中該目標基因的CpG位點序列選自由ZNF671 (SEQ ID No : 1-2).PTPRR(SEQ ID No ：3-4),S0X1(SEQ ID No ：5-6),PAX1(SEQ ID No ：7-8),ZNF582(SEQ ID No ： 9-10), A JAP 1 (SEQ ID No ： 11-12), S0X17 (SEQ ID No ： 13-14), EDN3 (SEQ ID No： 15-16)、ST6GAL2(SEQIDN〇:17-18)、ZNF614(SEQIDN〇 :19-20)、PTO)R(SEQIDN〇: 21-22)、SYT9(SEQ ID No :23-24)、S0X8(SEQ ID No :25-26)、HS3ST2(SEQ ID No :27-28)、 P0U4F3(SEQ ID N〇:29-30)、ADRA1D(SEQ ID No:31-32)、MAGI2(SEQ ID N〇:33-34)、EPO(SEQ ID No ： 35-36), NEFH(SEQ ID No ： 37-38), P0U4F2 (SEQ ID No ： 39-40), STC2 (SEQ ID No： 41-42)以及THRB(SEQ ID No:43-44)所組成的群組中的至少一個。
7. 如權利要求6所述的偵測膀胱癌的新穎表基因的生物標記，其特征在于：其中該目 標基因的CpG位點序列為ZNF671 (SEQ ID No :1-2)與另一目標基因的CpG位點序列選自 由 PTPRR(SEQ ID N〇:3-4)、SOX1(SEQ ID No:5-6)、PAXl(SEQ ID No:7-8)、ZNF582(SEQ ID N〇:9-10)、AJAP1(SEQ ID N〇:11-12)、SOX17(SEQ ID No:13-14)、EDN3(SEQ ID No:15-16)、 ST6GAL2(SEQ ID No:17-18)、ZNF614(SEQ ID N〇:19-20)、PT⑶R(SEQ ID No:21-22)、 SYT9(SEQ ID N〇:23-24)、SOX8(SEQ ID No:25-26)、HS3ST2(SEQ ID N〇:27-28)、POU4F3(SEQ ID No :29-30)、ADRA1D(SEQ ID No :31-32)、MAGI2(SEQ ID No :33-34)、EP0(SEQ ID No : 35-36)、NEFH(SEQ ID N〇:37-38)、POU4F2(SEQ ID N〇:39-40)、STC2(SEQ ID No:41-42)以 及THRB(SEQ ID No :43-44)所組成的群組中的至少一個。
8. -種目標基因在制備用于膀胱癌癥篩檢試劑中的用途，其為受測檢體內目標基因 組中DNA中CpG序列甲基化的狀態(tài)，其中該目標基因選自由ZNF671、PTPRR、S0X1、PAX1、 ZNF582、AJAP1、S0X17、EDN3、ST6GAL2、ZNF614、PTCDR、SYT9、S0X8、HS3ST2、P0U4F3、ADRA1D、 MAGI2、EPO、NEH1、P0U4F2、STC2以及THRB所組成的群組中的至少一個。
9. 如權利要求8所述的目標基因在制備用于膀胱癌癥篩檢試劑中的用途，其特征在 于：其中該目標基因為ZNF671與另一目標基因選自由PTPRR、S0X1、PAX1、ZNF582、AJAP1、 S0X17、EDN3、ST6GAL2、ZNF614、PTCDR、SYT9、S0X8、HS3ST2、P0U4F3、ADRA1D、MAGI2、EP0、 NEH1、P0U4F2、STC2以及THRB所組成的群組中的至少一個。
【文檔編號】C12N15/11GK104513851SQ201310465313
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年10月8日 優(yōu)先權日:2013年10月8日
【發(fā)明者】陳永恩, 陳丕哲, 徐政達, 葉佳銘, 賴鴻政, 張德卿, 沈正煌 申請人:陳永恩, 戴德森醫(yī)療財團法人嘉義基督教醫(yī)院