一種海洋難培養(yǎng)微生物的篩選鑒定方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種篩選難培養(yǎng)海洋微生物的方法，其主要以經(jīng)過處理的海水作為培養(yǎng)基成分，輔以多種微量元素和復(fù)合維生素，并且通過雙層平板法培養(yǎng)固體培養(yǎng)基進行平板篩選，本發(fā)明的方法能夠高效的篩選難培養(yǎng)海洋微生物。
【專利說明】-種海洋難培養(yǎng)微生物的篩選鑒定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種海洋微生物的篩選方法，尤其是一種海洋難培養(yǎng)微生物的篩選方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 海洋微生物是指適宜在高鹽高壓低溫和寡營養(yǎng)等條件下生長為特征的生長于海 洋W及海洋沉積物中的細菌和真菌等。海洋微生物種類多，在海洋生態(tài)系統(tǒng)中起著至關(guān)重 要的作用。并且人類已經(jīng)從海洋微生物中篩選到各種天然活性產(chǎn)物和各種酶，W及篩選鑒 定了數(shù)W萬計的種群。
[0003] 但是截至目前，所篩選分離鑒定到的微生物占海洋微生物總數(shù)目的不到1%，絕大 多數(shù)海洋微生物按照目前培養(yǎng)條件下屬于難培養(yǎng)微生物。目前培養(yǎng)海洋微生物主要用的培 養(yǎng)基為常規(guī)海水培養(yǎng)基W及相關(guān)的普通培養(yǎng)基，因此，尋找能夠篩選海洋難培養(yǎng)微生物的 篩選方法是目前重要的研究課題之一。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種能夠有效篩選海洋難培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)方法。
[0005] 實現(xiàn)本發(fā)明目的的一種海洋難培養(yǎng)微生物的篩選方法，包括培養(yǎng)基成分海水、微 量元素溶液和維生素溶液，W及采用雙層平板法培養(yǎng)。
[0006] 所述培養(yǎng)基海水濃度為P/TlOO%。
[0007] 所述微量元素溶液添加量為0. Iwt%?lOwt%。
[000引所述復(fù)合維生素的添加量為0. Olwt%?lwt0/0。
[0009] 所述微量元素溶液配方（mg/L):氯化鐵，200;氯化鉆，50;氯化猛，30;氯化 鋒，60;氯化媒，20;氯化銅，500;氯化餓，10;氯化錫，30;二氧化鐵，10;娃酸軸，50; 測酸，60;鋼酸軸，20;鶴酸軸，10;亞砸酸軸，10;硝酸鉛，15; 所述復(fù)合維生素配方（mg/L);維生素B1, 10;維生素B2, 20;尼克酸，30;泛 酸，100; B6，20; B12, 50;煙醜胺，30;葉酸，100;乳酸清，60;對氨基苯甲酸， 80;肌醇，40;膽堿，120;生物素，50;煙酸，30;維生素C，120;維生素D，70;維 生素E，30;維生素K，20;維生素T，10;維生素U，10。
[0010] 所述雙層平板，上層培養(yǎng)基成分為濃度為1%?100%的海水和1-1. 5%的瓊脂。下層 培養(yǎng)基成分為濃度為1%?100%的海水，0. Iwt%?lOwt%的微量元素溶液，0. Olwt%?Iwt%的復(fù) 合維生素溶液。雙層培養(yǎng)基的上層所占總培養(yǎng)基體積的20%-80%。
[0011] 本發(fā)明的一種海洋難培養(yǎng)微生物的篩選方法的有益效果如下： 本發(fā)明提供一種培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法，能夠有效培養(yǎng)難培養(yǎng)海洋微生物。
[0012]

【具體實施方式】
[0013] 實施例1 本實施例的海洋難培養(yǎng)微生物的成分及含量如下： 上層培養(yǎng)基成分；50%海水，1. 5%瓊脂 下層培養(yǎng)基成分：如下表

【權(quán)利要求】
1. 一種海洋難培養(yǎng)微生物的篩選方法，其特征在于以處理過的海水作為基本培養(yǎng)基， 添加多種微量元素和復(fù)合維生素，以及采用雙層平板法進行固體培養(yǎng)篩選。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的海洋難培養(yǎng)微生物的篩選方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基海 水濃度為1%?1〇〇%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的海洋難培養(yǎng)微生物的篩選方法，其特征在于：所述微量 元素溶液添加量為〇.Iwt°/ri0wt%，所述復(fù)合維生素的添加量為0. 01wt°/Tlwt%。
4. 微量元素溶液配方（mg/L):氯化鐵，200;氯化鈷，50;氯化錳，30;氯化鋅，60; 氯化鎳，20;氯化銅，500;氯化鍶，10;氯化錫，30;二氧化鈦，10;硅酸鈉，50;硼 酸，60;鑰酸鈉，20;鎢酸鈉，10;亞硒酸鈉，10;硝酸鉻，15; 復(fù)合維生素配方（mg/L):維生素B1，10;維生素B2，20;尼克酸，30;泛酸，100;B6，20;B12，50;煙酰胺，30;葉酸，100;乳酸清，60;對氨基苯甲酸，80;肌醇， 40;膽堿，120;生物素，50;煙酸，30;維生素C，120;維生素D，70;維生素E，30; 維生素K, 20;維生素T, 10;維生素U, 10。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的一海洋難培養(yǎng)微生物的篩選方法，其特征在于利用雙層 平板法進行固體培養(yǎng)篩選。
6. 其中上層含有1-1. 5%的瓊脂，下層含有0. 2-0. 5%的瓊脂。
7. 上層培養(yǎng)基成分為濃度為19T100%的海水和1-1. 5%的瓊脂。
8. 下層培養(yǎng)基成分為濃度為19T100%的海水，0.lwt9Tl0wt%的微量元素溶液， 0. 01wt%?lwt%的復(fù)合維生素溶液。
9. 雙層培養(yǎng)基的上層所占總培養(yǎng)基體積的20%-80%。
【文檔編號】C12N1/20GK104513800SQ201310459407
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年10月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月8日
【發(fā)明者】朱道辰, 陳焱, 謝長校, 洪好 申請人:鎮(zhèn)江拜因諾生物科技有限公司