水稻轉(zhuǎn)錄因子Os08g32085.1基因CDS序列的應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及水稻轉(zhuǎn)錄因子Os08g32085.1基因CDS序列的應(yīng)用，其是利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64與水稻轉(zhuǎn)錄因子Os08g32085.1基因CDS序列融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子，并轉(zhuǎn)化到農(nóng)作物如水稻中，從而改良水稻籽粒性狀，如增加水稻籽粒長(zhǎng)度。對(duì)于詳細(xì)闡明調(diào)控種子發(fā)育機(jī)理具有重要的理論價(jià)值，并且可以通過(guò)轉(zhuǎn)基因手段，改良水稻的粒型，因此在生產(chǎn)實(shí)踐中也具有重要意義。
【專(zhuān)利說(shuō)明】水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因CDS序列的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因⑶S 序列的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 水稻（OryzasativaL.)是我國(guó)和全世界最重要的三大糧食作物之一，是世界一 半以上人口的主食，也是一個(gè)重要的功能基因研究的模式植物。與其相關(guān)的遺傳學(xué)和分子 生物學(xué)研究一直倍受研究者的重視，轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控是基因表達(dá)調(diào)控的重要方式。當(dāng)前水 稻增產(chǎn)的研究較依賴(lài)于有限的水稻種質(zhì)資源，傳統(tǒng)的雜交育種優(yōu)勢(shì)正在逐漸減弱，而水稻 轉(zhuǎn)基因技術(shù)有可能發(fā)掘水稻進(jìn)一步增產(chǎn)的潛力。
[0003] 在植物界中，能形成種子的植物約占植物總數(shù)的三分之二以上，作為重要的繁殖 器官，種子同時(shí)也為人們提供食物來(lái)源，水稻就是其中的重要代表，種子來(lái)源于受精后的胚 珠。從分子生物學(xué)的角度來(lái)說(shuō)，種子的發(fā)育和萌發(fā)是一個(gè)有次序的、選擇性的基因表達(dá)過(guò) 程。而轉(zhuǎn)錄因子在基因表達(dá)的精確調(diào)控中起到了關(guān)鍵性的作用。
[0004] 近些年，有關(guān)籽粒大小性狀的分子遺傳調(diào)控機(jī)制研究，已取得了一定進(jìn)展，如：研 究者們利用QTL定位了一些籽粒大小相關(guān)基因，其中GS3編碼一個(gè)膜蛋白，是籽粒大小和 器官大小的負(fù)調(diào)控因子；張啟發(fā)等（YiboLi,ChuchuanFan,QIfaZhang,etal. (2011) NaturalvariationinGS5playsanimportantroleinregulatinggrainsizeand yieldinrice.NatureGennetics)研究發(fā)現(xiàn)GS5編碼一個(gè)調(diào)節(jié)籽粒大小的絲氨酸羧肽酶， 是控制籽粒大小的正調(diào)節(jié)因子，過(guò)表達(dá)GS5可使水稻籽粒明顯變大；轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控籽粒 大小方面起著非常重要的作用，0sWRKY78可以調(diào)節(jié)水稻莖的伸長(zhǎng)和種子的發(fā)育，0sWRKY78 突變體可以使莖桿變矮化影響籽粒發(fā)育；螺旋-環(huán)-螺旋蛋白（bHLH)類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子能通過(guò)調(diào) 控外稃和內(nèi)稃細(xì)胞的長(zhǎng)度影響谷粒的大?。籔GLl堿性螺旋-環(huán)-螺旋蛋白（bHLH)異源二 聚體作為結(jié)合DNA的bHLH的抑制子過(guò)表達(dá)后可增加籽粒長(zhǎng)度和重量。
[0005] VP64是4個(gè)VP16功能域基序融合在一起組成的，是一類(lèi)增強(qiáng)子。VP16最早在動(dòng) 物病毒基因中發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用到植物中，主要用于植物基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究中。轉(zhuǎn) 錄因子在體內(nèi)的作用大體上可以分成兩種：一種為轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子，另一種為轉(zhuǎn)錄抑制子。當(dāng)轉(zhuǎn) 錄因子和VP16功能域基序融合之后，它就會(huì)增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子的功能，從而在轉(zhuǎn)基因植株中出 現(xiàn)更明顯的表型變化。
[0006] Homeoboxes(同源結(jié)構(gòu)域蛋白）HB家族轉(zhuǎn)錄因子在動(dòng)物界首先在果蠅中，植物在 擬南芥中首次被發(fā)現(xiàn)。HB家族有300多個(gè)成員，參與了生物的生長(zhǎng)發(fā)育多個(gè)方面。從結(jié)構(gòu) 上分析，Homeoboxes擁有DNA識(shí)別位點(diǎn)，包括TATA等一系列和DNA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。目前HB 家族轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1對(duì)種子大小形狀調(diào)控機(jī)制的研究及認(rèn)識(shí)很少，因此該轉(zhuǎn)錄因 子的研究在理論上為進(jìn)一步理解植物種子和器官發(fā)育調(diào)控的分子機(jī)理提供了新的線(xiàn)索；在 實(shí)踐上也將為作物高產(chǎn)育種提供理論基礎(chǔ)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因⑶S序列的應(yīng)用。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明首先提供了一種組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子，即融合蛋 白（VP16)4-Linker-0s08g32085.1。
[0009] 其中，VP16為來(lái)自單純皰疹病毒的VP16蛋白，將4個(gè)VP16功能域基序融合在一 起可構(gòu)成一類(lèi)增強(qiáng)子，增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子的功能，從而在轉(zhuǎn)基因植株中出現(xiàn)更明顯的表型變化。 上述融合蛋白中涉及的（VP16)4，即VP64是由4個(gè)VP16蛋白的氨基酸序列以Gly-Ser為間 隔形成的融合蛋白，其氨基酸序列和核苷酸序列分別如SEQIDNo. 10和4所示。
[0010] 上述融合蛋白中涉及的Linker由39個(gè)柔性氨基酸串聯(lián)而成，其序列如SEQID No. 9所示，其核苷酸序列如SEQIDNo. 3所示
[0011] 上述融合蛋白中涉及的水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1的⑶S序列的氨基酸序列如 SEQIDNo. 2所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸形成的具有同等功能的 氨基酸序列。
[0012] 本發(fā)明還提供含有編碼所述融合蛋白的基因的載體。
[0013] 所述載體的構(gòu)建方法如下：
[0014] (1)在植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫(kù)（http://rice,plantbiology.msu.edu/analyses_ search_locus.shtml)中找到0s08g32085. 1基因，根據(jù)其序列設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增引物對(duì)，其為正 向引物F:5' -CAAAAAAGCAGGCTTCATGGATCCCGGCCGC-3' 和反向引物R:5'-CAAGAAAGCTGGGTCG CTCCAGAACCAGGCGG-3，；
[0015] (2)以野生日本晴水稻總cDNA為模板，進(jìn)行PCR獲得0s08g32085. 1全序列；
[0016] (3)將PCR產(chǎn)物克隆到連接pDONER克隆載體上，經(jīng)測(cè)序鑒定得到與目的基因完全 相同的序列；
[0017] (4)以雙元表達(dá)載體左右邊界包含的序列為骨架序列，通過(guò)體外重組，將ubi promoter-VP64_Gateway表達(dá)單兀、35Spromoter-asRED表達(dá)單兀和 35Spromoter-hyg表 達(dá)單元與之融合構(gòu)建，得到載體nVP64-hyg-asRED的全序列如SEQIDNo. 5所示；
[0018] (5)通過(guò)LR反應(yīng)將0s08g32085. 1構(gòu)建到其目地基因的N端融合了VP64標(biāo)簽的 植物表達(dá)載體nVP64-hyg-asRED上，獲得載體ubi:VP64-0s08g32085. 1，載體全序列如SEQ IDNo. 6 所示。
[0019] 攜帶有編碼所述融合蛋白的基因的表達(dá)載體可通過(guò)使用Ti質(zhì)粒、植物病毒載體、 直接DNA轉(zhuǎn)化、微注射、電穿孔等常規(guī)生物技術(shù)方法導(dǎo)入植物細(xì)胞中（Weissbach，1998， MethodforPlantMolecularBiologyVIII，AcademyPress，NewYork，第 411-463 頁(yè)； Geiserson和Corey, 1998,PlantMolecularBiology,2ndEdition)。
[0020] 本發(fā)明還提供含有編碼所述融合蛋白的基因的工程菌。
[0021] 本發(fā)明還提供一種轉(zhuǎn)基因水稻植株的構(gòu)建方法，具體為，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法， 將前述載體轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中，用含誘導(dǎo)劑和農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進(jìn)行轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后的 材料經(jīng)過(guò)共培養(yǎng)-篩選-分化-生根-轉(zhuǎn)基因苗的鍛煉和移栽，篩選轉(zhuǎn)基因水稻植株。
[0022] 本發(fā)明還提供編碼所述融合蛋白的基因在改良水稻籽粒性狀(如增加水稻粒長(zhǎng)） 中的應(yīng)用。
[0023] 本發(fā)明還提供了用于擴(kuò)增水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因⑶S序列的引 物對(duì)，其為正向引物F:5'-CAAAAAAGCAGGCTTCATGGATCCCGGCCGC-3' 和反向引物R: 5'-CAAGAAAGCTGGGTCGCTCCAGAACCAGGCGG-3' 。
[0024] 本發(fā)明還進(jìn)一步提供水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因的⑶S序列在調(diào)控水稻籽 粒性狀中的應(yīng)用。
[0025] 前述的應(yīng)用，是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因的CDS序列通過(guò)Gateway系統(tǒng) 構(gòu)建到4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16的下游，轉(zhuǎn)化水稻，從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀。
[0026] 本發(fā)明首次利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64 (即4個(gè)轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP16)與水 稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因CDS序列融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子，并轉(zhuǎn)化到水稻中， 從而改良水稻籽粒性狀，如水稻籽粒長(zhǎng)度增加。對(duì)于詳細(xì)闡明調(diào)控種子發(fā)育機(jī)理具有重要 的理論價(jià)值，并且可以通過(guò)轉(zhuǎn)基因手段，改良水稻的粒型，因此在生產(chǎn)實(shí)踐中也具有重要意 義。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0027] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中nVP64-hyg_asRED載體圖譜。
[0028] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中ubi:VP64-0s08g32085. 1載體圖譜。
[0029] 圖3為PCR檢測(cè)VP64-0s08g32085. 1轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株系，其中WT為野生型水稻 'kitaake'，V2513H-08、V2513H-24 為VP64-0s08g32085. 1 轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0030] 圖4為本發(fā)明轉(zhuǎn)基因材料籽粒性狀的表型長(zhǎng)度的比較，其中WT為野生型水稻 'kitaake'，V2513H-08、V2513H-24 為轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0031] 圖5為本發(fā)明轉(zhuǎn)基因材料籽粒性狀數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，其中WT為野生型水稻 'kitaake'，V2513H-08、V2513H-24 為轉(zhuǎn)基因水稻株系。
[0032] 圖 6 為載體pCambial301-UbiN圖譜。
[0033] 圖 7 為GCS-2*FLAG+en35s-asRED-pCambial301-UbiN的構(gòu)建示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0034] 以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
[0035] 實(shí)施例10s08g32085. 1基因⑶S序列的分離和植物表達(dá)載體構(gòu)建
[0036] 在植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫(kù)中找到0s08g32085. 1基因，根據(jù)其⑶S序列設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增 引物，根據(jù)其序列設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增引物（F:5' -CAAAAAAGCAGGCTTCATGGATCCCGGCCGC-3'和反向 引物R:5' -CAAGAAAGCTGGGTCGCTCCAGAACCAGGCGG-3'）。以野生型日本晴水稻總cDNA為模 板，進(jìn)行PCR獲得0s08g32085. 1基因的CDS序列，其核苷酸序列如SEQIDNo. 1所示。
[0037] 2、植物表達(dá)載體的構(gòu)建
[0038] 將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因的CDS序列通過(guò)Gateway系統(tǒng)構(gòu)建到4個(gè)轉(zhuǎn) 錄因子激活基序VP16編碼基因（SEQIDN0.4)的下游。
[0039] 2. 1將上述PCR產(chǎn)物克隆到pDONER克隆載體上
[0040] 按照PrimeSTAR聚合酶擴(kuò)增體系和反應(yīng)程序進(jìn)行PCR。此過(guò)程中包含兩輪PCR，第 一輪PCR的引物用加部分adaptorattB接頭的基因引物（F和R)，而第二輪的模板用第一 輪的PCR產(chǎn)物，并且引物用完整的adaptorattB引物（attB5'adaptor:5'-GTGGGGACAAGTT TGTACAAAAAAGCAGGCTTC-3'，attB3'adaptor: 5' -GTGGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTC-3'） 。將PCR產(chǎn)物克隆到連接pDONER克隆載體(購(gòu)自Invitrogen)上，經(jīng)測(cè)序鑒定得到與目的基 因完全相同的序列。
[0041] 2. 2植物表達(dá)載體的構(gòu)建
[0042] 以植物雙元表達(dá)載體左右邊界包含的序列為骨架序列，通過(guò)體外重組，將Ubi promoter-VP64_Gateway表達(dá)單兀、35Spromoter-asRED表達(dá)單兀和 35Spromoter-hyg表 達(dá)單元與之融合構(gòu)建，得到載體nVP64-hyg-asRED的全序列如SEQIDNo. 5所示，載體圖譜 見(jiàn)圖1。
[0043]上述植物雙元表達(dá)載體的構(gòu)建方法為：以載體pCambial301_UbiN為骨架（圖6)， SpeI和PstI之間的序列換成了GCS-2*FLAG，將HindIII和BstEII之間的序列換成了 35s enhancer+P35s_AsRed，完成GCS-2*FLAG+en35s-AsRed-pCambial301_UbiN的構(gòu)建（圖 7)。 合成5'和3'端均帶有KpnI酶切位點(diǎn)的雙鏈DNA序列VP64-2*HA。通過(guò)KpnI位點(diǎn)將片段 VP64-2*HA插入到載體（圖 7)，最終獲得表達(dá)載體nVP64-hyg-asRED-pCambial1301-Ubi。目 的基因通過(guò)LR反應(yīng)構(gòu)建到植物表達(dá)載體上。
[0044] 表達(dá)載體均含有Gateway重組系統(tǒng)，pDONR帶有目的基因的質(zhì)粒作為入門(mén)載體 (Entery vector),通過(guò)LR反應(yīng)可完成目的基因表達(dá)載體的構(gòu)建。
[0045] LR反應(yīng)體系：
[0046] 表達(dá)載體 Ιμ? (30-50ng) 入門(mén)載體（pDONR-gene) Ιμ? ( 30-50ng ) LR Clonase Enzyme Mix Ιμ? ddH20 2μ1 總計(jì) 5μ1
[0047]25°C反應(yīng)過(guò)夜。反應(yīng)液轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，篩選陽(yáng)性克隆。
[0048] 通過(guò)LR反應(yīng)將0s08g32085. 1基因的CDS序列構(gòu)建到其目的基因的5'端連有VP64 編碼基因的植物表達(dá)載體nVP64-hyg-asRED上，獲得攜帶有編碼所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子 VP64-Linker-0s08g32085. 1 基因的表達(dá)載體ubi:VP64-0s08g32085. 1，其全序列如SEQID No. 6所示，載體圖譜見(jiàn)圖2。
[0049] 實(shí)施例2轉(zhuǎn)基因水稻植株的獲得
[0050] 取水稻'kitaake'成熟種子，人工或機(jī)械脫殼，挑選飽滿(mǎn)光潔無(wú)菌斑的種子經(jīng)消毒 之后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。選擇外觀良好，生長(zhǎng)力好的水稻愈傷組織為受體 材料，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ubi:VP64-0s08g32085. 1轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中，用含有100μΜ 的乙酰丁香酮和0.D.值為0. 7的農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進(jìn)行轉(zhuǎn)化，將轉(zhuǎn)化液浸泡過(guò)的愈傷組 織置于共培養(yǎng)基上進(jìn)行共培養(yǎng)，25°C暗培養(yǎng)3d后置于篩選培養(yǎng)基上培養(yǎng)約30d，每IOd繼代 一次。然后將篩出的抗性愈傷轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上分化約20d，每IOd繼代一次。將分化出 綠色小苗的抗性愈傷轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上生根，待約7d長(zhǎng)出發(fā)達(dá)根系后煉苗，并計(jì)算轉(zhuǎn)化 所獲轉(zhuǎn)基因苗數(shù)。煉苗7d后轉(zhuǎn)移至大田生長(zhǎng)。獲30株水稻植株。
[0051] 誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：N6大量+B5微量+NB有機(jī)+鐵鹽+銅鈷母液+2. 5mg/ L2, 4D+0. 6g/L酸水解酪蛋白+2. 878g/L脯氨酸+0. 5g/L谷氨酰胺+30g/L蔗糖，以水配制， 調(diào)pH至5. 8?5. 9后加入植物凝膠4g/L。
[0052] 共培養(yǎng)基配方為：N6大量+B5微量+NB有機(jī)+鐵鹽+2. 5mg/L2, 4D+0. 5g/L谷氨酰 胺+0. 6g/L酸水解酪蛋白+10g/L葡萄糖+30g/L鹿糖，以水配制，調(diào)pH至5. 2后加入植物 凝膠4g/L。滅菌后，50°C左右加入AS(乙酰丁香酮）100?200μ8/ιΛ。
[0053] 篩選培養(yǎng)基配方為：Ν6大量+Β5微量+NB有機(jī)+鐵鹽+銅鈷母液+2. 5mg/ L2, 4D+0. 6g/L酸水解酪蛋白+2. 878g/L脯氨酸+0. 5g/L谷氨酰胺+30g/L蔗糖，以水配制， 調(diào)pH至5. 8?5. 9后加入植物凝膠4g/L。滅菌后加入35mg/L潮霉素(購(gòu)自上海紐津生物 技術(shù)有限公司）。
[0054] 分化培養(yǎng)基配方為：MS無(wú)機(jī)+MS-B5微量+MS有機(jī)+鐵鹽+MS-銅鈷母液+0. 05mg/ LNAA+2.Omg/LKinetin(激動(dòng)素）+30g/L山梨醇+2g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖，以水配 制，調(diào)pH至5. 8?5. 9后加入植物凝膠4g/L。
[0055] 實(shí)施例3轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株系的鑒定
[0056] 為檢測(cè)實(shí)施例2獲得的轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株系V2513H-08、V2513H-24中是否含有 VP64-0s08g32085. 1，在載體上設(shè)計(jì)引物（正向引物：5'-GTGGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAG GCTTC-3' 和反向引物：5' -GTGGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTC-3'）對(duì)轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株系 V2513H-08、V2513H-24和野生型水稻'kitaake'的基因組進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果V2513H-08、 V2513H-24樣品的擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳凝膠中出現(xiàn)明顯的特異性條帶，其中WT為野生型水稻 'kitaake'，V2513H-08、V2513H-24 為VP64-0s08g32085. 1 轉(zhuǎn)基因水稻株系（圖 3)。圖 3 顯 示片段大小在IOOObp以上，引物是在載體與目的基因接頭處設(shè)計(jì)的，擴(kuò)增的片段大小與目 的基因基本一致，為1050bp。
[0057] 實(shí)施例4轉(zhuǎn)基因水稻表型分析和考種分析
[0058] 將實(shí)施例2獲得的轉(zhuǎn)基因株系V2513H-08、V2513H-24和野生型水稻種子 'kitaake'進(jìn)行比較，從表型上可以明顯的看出，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因材料的籽粒明顯變長(zhǎng)（圖4)?？?種數(shù)據(jù)分析表明（圖5)，本發(fā)明獲得的轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的長(zhǎng)顯著大于野生型水稻籽粒。
[0059] 雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在 本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因 此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子，其特征在于，其為融合蛋白為（VP16)4~Linker-〇s08g32085. 1 ； 其中，VP16為來(lái)自單純皰疹病毒的VP16蛋白，（VP16)4是由4個(gè)VP16蛋白的氨基酸 序列以Gly-Ser為間隔形成的融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No. 10所示；Linker由39 個(gè)柔性氨基酸串聯(lián)而成；其氨基酸序列如SEQ ID No. 9所示；0s08g32085. 1為水稻轉(zhuǎn)錄因 子0s08g32085. 1的⑶S序列，其氨基酸序列如SEQ ID No. 2所示，或該序列經(jīng)替換、缺失或 添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
2. 編碼權(quán)利要求1所述組成型水稻轉(zhuǎn)錄因子的基因。
3. 含有權(quán)利要求2所述基因的載體。
4. 含有權(quán)利要求2所述基因的工程菌。
5. -種轉(zhuǎn)基因水稻植株的構(gòu)建方法，其特征在于，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，將權(quán)利要求 3所述的載體轉(zhuǎn)入水稻愈傷組織中，用含誘導(dǎo)劑和農(nóng)桿菌的AAM培養(yǎng)液進(jìn)行轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后的 材料經(jīng)過(guò)共培養(yǎng)-篩選-分化-生根-轉(zhuǎn)基因苗的鍛煉和移栽，篩選轉(zhuǎn)基因水稻植株。
6. 權(quán)利要求2所述的基因在改良水稻籽粒性狀中的應(yīng)用。
7. 用于擴(kuò)增水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因⑶S序列的引物對(duì)，其為正向引物F:5' -CAAAAAAGCAGGCTTCATGGATCCCGGCCG C-3' 和反向引物 R :5'-CAAGAAAGCTGGGTCGCTCCAGAAC CAGG CGG-3，； 其中，水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因的CDS序列為：SEQ ID No. 1所示的核苷酸序 列。
8. 水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因CDS序列在調(diào)控水稻籽粒性狀中的應(yīng)用，所述水稻 轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因CDS序列的核苷酸序列為：SEQ ID No. 1所示。
9. 如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，其是利用轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64與水稻轉(zhuǎn) 錄因子0s08g32085. 1的⑶S序列融合構(gòu)建得到組成型轉(zhuǎn)錄因子，并將編碼所述組成型轉(zhuǎn)錄 因子的基因轉(zhuǎn)化水稻，從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀； 其中，所述轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64的氨基酸序列如SEQ ID No. 10所示。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，其是將水稻轉(zhuǎn)錄因子0s08g32085. 1基因 的⑶S序列通過(guò)Gateway系統(tǒng)構(gòu)建到轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64編碼基因的下游，轉(zhuǎn)化水稻， 從而改良轉(zhuǎn)基因水稻籽粒的性狀； 其中，所述轉(zhuǎn)錄因子激活基序VP64編碼基因的核苷酸序列如SEQID No. 4所示。
【文檔編號(hào)】C12N15/82GK104341518SQ201310329916
【公開(kāi)日】2015年2月11日 申請(qǐng)日期:2013年7月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月31日
【發(fā)明者】趙濤, 劉斌, 趙勉萌, 劉軍, 林辰濤 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所