蜜蜂抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物發(fā)酵領(lǐng)域，涉及蜜蜂抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝，通過技術(shù)革新利用枯草芽孢桿菌表達(dá)蜜蜂抗菌肽產(chǎn)品，選用優(yōu)化發(fā)酵配方和工藝，提供了一種高含量蜜蜂抗菌肽產(chǎn)品發(fā)酵生產(chǎn)工藝，使蜜蜂抗菌肽發(fā)酵液含量達(dá)到100-120μg/mL，干燥后產(chǎn)品抗菌肽含量達(dá)到0.9-1.0mg/g。該發(fā)酵工藝簡便、質(zhì)量穩(wěn)定，可規(guī)?；a(chǎn)，優(yōu)化養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境，生產(chǎn)周期短且成本低廉。
【專利說明】蜜蜂抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物發(fā)酵領(lǐng)域，更具體地說是關(guān)于蜜蜂抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來養(yǎng)殖業(yè)濫用抗生素的現(xiàn)象引起了越來越廣泛的關(guān)注，濫用抗生素導(dǎo)致其在 畜產(chǎn)品中殘留以及細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生，嚴(yán)重威脅人類健康。蜜蜂抗菌肽是指一類來源于昆 蟲富含脯氨酸，長度為18-20個氨基酸的抗菌肽，是目前已知的最大抗菌肽家族，專對革蘭 氏陰性菌有抑菌作用。蜜蜂抗菌肽能夠進(jìn)入大腸桿菌和沙門氏菌，與目標(biāo)蛋白DnaK結(jié)合， 明顯抑制DnaK的ATPase活性；并降低DnaK蛋白分子伴侶的作用從而顯著抑制胞內(nèi)β -半 乳糖苷酶和堿性磷酸酶等蛋白活性，最終抑制細(xì)菌細(xì)胞正常代謝而死亡，并且對機(jī)體無毒 無害無殘留。這使得其成為抗生素替代物的絕佳選擇之一，對畜牧業(yè)健康和可持續(xù)發(fā)展有 重要意義。
[0003] 但是天然蜜蜂抗菌肽很難得到，化學(xué)合成蜜蜂抗菌肽成本太高，因此發(fā)酵工程成 為了令人矚目的大規(guī)模生產(chǎn)蜜蜂抗菌肽方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 1.本發(fā)明通過技術(shù)革新利用枯草芽孢桿菌表達(dá)蜜蜂抗菌肽產(chǎn)品，選用優(yōu)化發(fā)酵配 方和工藝，提供了一種高含量蜜蜂抗菌肽產(chǎn)品發(fā)酵生產(chǎn)工藝。
[0005] 2.制備蜜蜂抗菌肽工藝按以下步驟實(shí)現(xiàn)：
[0006] 1)工藝流程：配料一發(fā)酵一雙效濃縮一噴霧干燥一成品。
[0007] 2)優(yōu)選的發(fā)酵培養(yǎng)基配方：玉米粉10-40g，豆柏10-40g，木薯10-20g，蛋白胨 5_20g，葡萄糖（或蔗糖）2-20g，再少量加入其他營養(yǎng)成分如：酵母粉，硫酸銨，硝酸銨，硫酸 鎂，硫酸猛，磷酸鹽等，水l〇〇〇mL。
[0008] 3)所述發(fā)酵培養(yǎng)基加氫氧化鈉調(diào)節(jié)初始pH :7. 0-8. 0
[0009] 4)接種：接種量1-10%。
[0010] 5)發(fā)酵：溫度 30-37°C，發(fā)酵 24-32h。
[0011] 6)噴霧干燥：進(jìn)風(fēng)溫度：140-180°C，出風(fēng)：80-100°C。
[0012] 3.本發(fā)明以玉米、大豆、木薯加工品為原料，附加一些營養(yǎng)物，進(jìn)行發(fā)酵，原料低 廉，抗菌肽發(fā)酵液含量達(dá)到100-120 μ g/mL，干燥后產(chǎn)品抗菌肽含量達(dá)到0. 9-1. Omg/g。

【具體實(shí)施方式】
[0013] 實(shí)施例1
[0014] 發(fā)酵規(guī)模：10m3。1L發(fā)酵培養(yǎng)液含：玉米粉15g，豆柏15g，木薯10g，蛋白胨5g，葡萄 糖5g，硫酸銨5g，硫酸鎂0. 8g。用氫氧化鈉調(diào)pH7. 5。培養(yǎng)液經(jīng)溫度121°C，罐壓0. 08Mpa， 維持時間30min滅菌。枯草芽孢桿菌菌種接種量為5X 106CFU/mL。發(fā)酵培養(yǎng)溫度：34°C，通 氣量：600m3/h，攪拌速度：120r/min，pH7. 0。發(fā)酵培養(yǎng)時間：32h。
【權(quán)利要求】
1. 本發(fā)明通過技術(shù)革新利用枯草芽孢桿菌表達(dá)蜜蜂抗菌肽產(chǎn)品，選用優(yōu)化發(fā)酵配方和 工藝，提供了一種高含量蜜蜂抗菌肽產(chǎn)品發(fā)酵生產(chǎn)工藝，制備蜜蜂抗菌肽工藝按以下步驟 實(shí)現(xiàn)： 1) 工藝流程：配料一發(fā)酵一雙效濃縮一噴霧干燥一成品； 2) 優(yōu)選的發(fā)酵培養(yǎng)基配方：玉米粉10_40g，豆柏10-40g，木薯10-20g，蛋白胨5-20g， 葡萄糖（或蔗糖）2-20g，再少量加入其他營養(yǎng)成分如：酵母粉，硫酸銨，硝酸銨，硫酸鎂，硫 酸猛，磷酸鹽等，水lOOOmL ; 3) 所述發(fā)酵培養(yǎng)基加氫氧化鈉調(diào)節(jié)初始pH :7. 0-8. 0 ; 4) 接種：接種量1-10% ; 5) 發(fā)酵：溫度30-37°C，發(fā)酵24-32h ; 6) 噴霧干燥：進(jìn)風(fēng)溫度：140-180°C，出風(fēng)：80-100°C。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜜蜂抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：每1L發(fā)酵培養(yǎng)基含 玉米粉15g，豆柏15g，木薯10g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，硫酸銨5g，硫酸鎂0. 8g，用氫氧化鈉 調(diào)PH7. 5,培養(yǎng)液經(jīng)溫度121°C，罐壓0. 08Mpa，維持時間30min滅菌。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜜蜂抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：枯草芽孢桿菌菌 種接種量為5X106CFU/mL，發(fā)酵培養(yǎng)溫度：34°C，通氣量：600m 3/h，攪拌速度：120r/min， PH7. 0,發(fā)酵培養(yǎng)時間：32h。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜜蜂抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：每1L發(fā)酵培養(yǎng)基含 玉米粉40g，豆柏40g，20g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，硫酸銨5g，酵母粉5g，磷酸氫二鉀5g，用 氫氧化鈉調(diào)PH8. 0,培養(yǎng)液經(jīng)溫度120°C，罐壓0. 15Mpa，維持時間30分鐘滅菌。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜜蜂抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：枯草芽孢桿菌菌種 接種量為lXl〇8CFU/mL，發(fā)酵培養(yǎng)溫度：32°C，通氣量：900m 3/h，攪拌速度：150r/min，pH : 6. 5,發(fā)酵培養(yǎng)時間：24h。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜜蜂抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：每1L發(fā)酵培養(yǎng)基含 玉米粉l〇g，豆柏l〇g，蛋白胨5g，蔗糖2g，硫酸銨5g，用氫氧化鈉調(diào)pH7. 0,培養(yǎng)液經(jīng)溫度 121°C，罐壓0. lOMpa，維持時間30分鐘滅菌。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜜蜂抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：枯草芽孢桿菌菌種 接種量為lXl〇7CFU/mL，發(fā)酵培養(yǎng)溫度：37°C，通氣量：680m 3/h，攪拌速度：180r/min，pH : 6.0,發(fā)酵培養(yǎng)時間：27h。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蜜蜂抗菌肽發(fā)酵生產(chǎn)工藝，其特征在于：以玉米、大豆、木薯 加工品為原料，附加一些營養(yǎng)物，進(jìn)行發(fā)酵，原料低廉，抗菌肽發(fā)酵液含量達(dá)到100-120 μ g/ mL，干燥后產(chǎn)品抗菌肽含量達(dá)到0. 9-1. 0mg/g。
【文檔編號】C12R1/125GK104099390SQ201310120420
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2013年4月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月9日
【發(fā)明者】張魁, 樊奇 申請人:廣州市紐溢樂商貿(mào)有限公司