專利名稱：一種保持肌膚彈性的膠原蛋白制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種膠原蛋白制備方法，尤其涉及一種保持肌膚彈性的膠原蛋白制備方法。
背景技術(shù)：
彈性蛋白具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，施加外力時(shí)，彈性蛋白變形；當(dāng)外力消退后，彈性蛋白回復(fù)原狀，由于此種特性，彈性蛋白被用于護(hù)膚化妝品中，但現(xiàn)有的彈性蛋白生產(chǎn)方式存在幾種問題一是有雜色，添加到護(hù)膚品中直接影響產(chǎn)品的外觀；二是蛋白質(zhì)濃度和氨基酸含量低，不能直接應(yīng)用到護(hù)膚化妝品中，必須經(jīng)過再加工，這樣直接提高了護(hù)膚化妝品的價(jià)格。發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明的目的是提供一種保持肌膚彈性的膠原蛋白制備方法。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)手段是一種保持肌膚彈性的膠原蛋白制備方法，其步驟包括一、預(yù)處理將新鮮骨頭去除脂肪、筋膜后，于-15°C冷凍硬化后取出，用手術(shù)刀刮去骨頭表面的殘余筋膜，然后沿著纖維方向切成O. 5mm X0. 5mm的薄片，薄片稱重，用O. 5g/L 碳酸鈉溶液浸泡Ih后棄液體，薄片用蒸餾水漂洗3次，置于不銹鋼絲網(wǎng)上浙去水分，晾干備用；二、提取將晾干的薄片置于容器中，用2 3倍O.5%的乙酸溶液在O 4°C下攪拌提取48-72h，然后用冷凍離心機(jī)以3000r/min的速度離心8min ，收集上清液，即為膠原蛋白溶脹提取液；三、除雜在膠原蛋白溶脹提取液中加入其體積O.5%的雙氧水，混合均勻后靜置5h，接下來用80g/L檸檬酸三鈉溶液調(diào)節(jié)pH值等于5，靜置片刻后過濾，棄沉淀物，獲得除去部分雜蛋白的溶脹提取液；四、鹽析脫鹽在攪拌下向該溶脹提取液中加入適量氯化鈉，緩慢攪拌，IOmin后在 4°C下靜置24h后離心，收集鹽析沉淀物，用pH值為7. O的Tris緩沖液在4°C下浸泡24h， 再次離心，收集沉淀物，裝入透析袋中，用質(zhì)量濃度為1. 2%的乙酸溶液透析18h后，再用蒸餾水透析48h，最后得到的是純度較高的膠原蛋白水溶脹液，測定其中蛋白質(zhì)含量后備用；五、酶水解將獲得的高純度膠原蛋白水溶脹液中加入4倍體積的軟水，在攪拌下升溫至55°C，然后用乙酸調(diào)節(jié)溶液pH值為5，加入木瓜蛋白酶進(jìn)行酶水解2 4h，木瓜蛋白酶用量為膠原蛋白水溶脹液蛋白質(zhì)質(zhì)量的1% 2%，獲得水解膠原蛋白液，也可以用彈性蛋白酶進(jìn)行水解，彈性蛋白酶用量為O. 05 %，pH值為2 3，溫度為40°C ；六、濃縮將水解液進(jìn)行真空減壓濃縮，制備成膠原蛋白液，真空減壓濃縮的溫度為 60 70°C，真空度為-O. 05 -O. 04MPa。 進(jìn)一步的，所述步驟六中所得膠原蛋白液為透明無色液體，蛋白質(zhì)濃度> 6. 95%，氨基酸含量> 2. 32%。
本發(fā)明的有益效果在于通過本方法制備的高純度、能用于保持肌膚彈性的膠原蛋白，為透明無色液體，蛋白質(zhì)濃度> 6. 95%,氨基酸含量> 2. 32%，可以直接作為化妝品應(yīng)用，且制備方法簡便，利于規(guī)模生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，以助于理解本發(fā)明的內(nèi)容。
實(shí)施例1一種保持肌膚彈性的膠原蛋白制備方法，其步驟包括一、預(yù)處理將新鮮骨頭15kg去除脂肪、筋膜后，于-15°C冷凍硬化后取出，用手術(shù)刀刮去骨頭表面的殘余筋膜，然后沿著纖維方向切成O. 5mm Χ0· 5mm的薄片，薄片稱重，用 O. 5g/L碳酸鈉溶液浸泡Ih后棄液體，薄片用蒸餾水漂洗3次，置于不銹鋼絲網(wǎng)上浙去水分， 晾干備用；二、提取將晾干的薄片置于容器中，用2倍O.5%的乙酸溶液在(TC下攪拌提取48h，然后用冷凍離心機(jī)以3000r/min的速度離心8min，收集上清液，即為膠原蛋白溶脹提取液；三、除雜在膠原蛋白溶脹提取液中加入其體積O.5%的雙氧水，混合均勻后靜置5h，接下來用80g/L檸檬酸三鈉溶液調(diào)節(jié)pH值等于5，靜置片刻后過濾，棄沉淀物，獲得除去部分雜蛋白的溶脹提取液；四、鹽析脫鹽在攪拌下向該溶脹提取液中加入適量氯化鈉，緩慢攪拌，IOmin后在 4°C下靜置24h后離心，收集鹽析沉淀物，用pH值為7. O的Tris緩沖液在4°C下浸泡24h， 再次離心，收集沉淀物，裝入透析袋中，用質(zhì)量濃度為1. 2%的乙酸溶液透析18h后，再用蒸餾水透析48h，最后得到的是純度較高的膠原蛋白水溶脹液，測定其中蛋白質(zhì)含量后備用；五、酶水解將獲得的高純度膠原蛋白水溶脹液中加入4倍體積的軟水，在攪拌下升溫至55°C，然后用乙酸調(diào)節(jié)溶液pH值為5，加入木瓜蛋白酶進(jìn)行酶水解2h，木瓜蛋白酶用量為膠原蛋白水溶脹液蛋白質(zhì)質(zhì)量的1%，獲得水解膠原蛋白液，也可以用彈性蛋白酶進(jìn)行水解，彈性蛋白酶用量為O. 05 %，pH值為2，溫度為40°C ；六、濃縮將水解液進(jìn)行真空減壓濃縮，制備成膠原蛋白液，真空減壓濃縮的溫度為 60°C，真空度為-O. 05MPa。
所得到的膠原蛋白液為透明無色液體，蛋白質(zhì)濃度為6.98%，氨基酸含量2.37%。
實(shí)施例2一種保持肌膚彈性的膠原蛋白制備方法，其步驟包括一、預(yù)處理將新鮮骨頭20kg去除脂肪、筋膜后，于_15°C冷凍硬化后取出，用手術(shù)刀刮去骨頭表面的殘余筋膜，然后沿著纖維方向切成O. 5mm Χ0· 5m m的薄片，薄片稱重，用 O. 5g/L碳酸鈉溶液浸泡Ih后棄液體，薄片用蒸餾水漂洗3次，置于不銹鋼絲網(wǎng)上浙去水分， 晾干備用；二、提取將晾干的薄片置于容器中，用3倍O.5%的乙酸溶液在4°C下攪拌提取72h，然后用冷凍離心機(jī)以3000r/min的速度離心8min，收集上清液，即為膠原蛋白溶脹提取液；三、除雜在膠原蛋白溶脹提取液中加入其體積O.5%的雙氧水，混合均勻后靜置5h，接下來用80g/L檸檬酸三鈉溶液調(diào)節(jié)pH值等于5，靜置片刻后過濾，棄沉淀物，獲得除去部分雜蛋白的溶脹提取液；
四、鹽析脫鹽在攪拌下向該溶脹提取液中加入適量氯化鈉，緩慢攪拌，IOmin后在4°C下靜置24h后離心，收集鹽析沉淀物，用pH值為7. O的Tris緩沖液在4°C下浸泡24h，再次離心，收集沉淀物，裝入透析袋中，用質(zhì)量濃度為1. 2%的乙酸溶液透析18h后，再用蒸餾水透析48h，最后得到的是純度較高的膠原蛋白水溶脹液，測定其中蛋白質(zhì)含量后備用；
五、酶水解將獲得的高純度膠原蛋白水溶脹液中加入4倍體積的軟水，在攪拌下升溫至55°C，然后用乙酸調(diào)節(jié)溶液pH值為5，加入木瓜蛋白酶進(jìn)行酶水解4h，木瓜蛋白酶用量為膠原蛋白水溶脹液蛋白質(zhì)質(zhì)量的2%，獲得水解膠原蛋白液，也可以用彈性蛋白酶進(jìn)行水解，彈性蛋白酶用量為O. 05 %，pH值為3，溫度為40°C ；
六、濃縮將水解液進(jìn)行真空減壓濃縮，制備成膠原蛋白液，真空減壓濃縮的溫度為70°C，真空度為-0.04MPa。所得到的膠原蛋白液為透明無色液體，蛋白質(zhì)濃度為
7.05%,氨基酸含量為2. 40%。本發(fā)明的實(shí)施例所表述的，并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍 內(nèi)，可輕易想到變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種保持肌膚彈性的膠原蛋白制備方法，其特征在于，步驟包括一、預(yù)處理將新鮮骨頭去除脂肪、筋膜后，于-15°C冷凍硬化后取出，用手術(shù)刀刮去骨頭表面的殘余筋膜，然后沿著纖維方向切成O. 5mm X0. 5mm的薄片，薄片稱重，用O. 5g/L 碳酸鈉溶液浸泡Ih后棄液體，薄片用蒸餾水漂洗3次，置于不銹鋼絲網(wǎng)上浙去水分，晾干備用；二、提取將晾干的薄片置于容器中，用2 3倍O.5%的乙酸溶液在O 4°C下攪拌提取48-72h，然后用冷凍離心機(jī)以3000r/min的速度離心8min，收集上清液，即為膠原蛋白溶脹提取液；三、除雜在膠原蛋白溶脹提取液中加入其體積O.5%的雙氧水，混合均勻后靜置5h，接下來用80g/L檸檬酸三鈉溶液調(diào)節(jié)pH值等于5，靜置片刻后過濾，棄沉淀物，獲得除去部分雜蛋白的溶脹提取液；四、鹽析脫鹽在攪拌下向該溶脹提取液中加入適量氯化鈉，緩慢攪拌，IOmin后在 4°C下靜置24h后離心，收集鹽析沉淀物，用pH值為7. O的Tris緩沖液在4°C下浸泡24h， 再次離心，收集沉淀物，裝入透析袋中，用質(zhì)量濃度為1. 2%的乙酸溶液透析18h后，再用蒸餾水透析48h，最后得到的是純度較高的膠原蛋白水溶脹液，測定其中蛋白質(zhì)含量后備用；五、酶水解將獲得的高純度膠原蛋白水溶脹液中加入4倍體積的軟水，在攪拌下升溫至55°C，然后用乙酸調(diào)節(jié)溶液pH值為5，加入木瓜蛋白酶進(jìn)行酶水解2 4h，木瓜蛋白酶用量為膠原蛋白水溶脹液蛋白質(zhì)質(zhì)量的1% 2%，獲得水解膠原蛋白液，也可以用彈性蛋白酶進(jìn)行水解，彈性蛋白酶用量為O. 05 %，pH值為2 3，溫度為40°C ；六、濃縮將水解液進(jìn)行真空減壓濃縮，制備成膠原蛋白液，真空減壓濃縮的溫度為 60 70°C，真空度為-O. 05 -O. 04MPa。
2.根據(jù)權(quán)力要求I所述的保持肌膚彈性的膠原蛋白制備方法，其特征在于所述步驟六中所得膠原蛋白液為透明無色液體，蛋白質(zhì)濃度> 6. 95%，氨基酸含量> 2. 32%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種保持肌膚彈性的膠原蛋白制備方法，其步驟包括一、預(yù)處理；二、提??；三、除雜；四、鹽析脫鹽；五、酶水解；六、濃縮。通過本方法制備的高純度、能用于保持肌膚彈性的膠原蛋白，為透明無色液體，蛋白質(zhì)濃度≥6.95％，氨基酸含量≥2.32％，可以直接作為化妝品應(yīng)用，且制備方法簡便，利于規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號C12P21/06GK103060412SQ20131001292
公開日2013年4月24日 申請日期2013年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月15日
發(fā)明者曹榮軍, 任憲君, 武鑫, 劉少芳, 張秋艷, 金海明, 姚秀芬, 臺文靜 申請人:青島貝爾特生物科技有限公司