專利名稱：實(shí)體腫瘤組織消化液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于將實(shí)體腫瘤組織分散成單細(xì)胞懸液的組織消化液。
背景技術(shù)：
在對(duì)實(shí)體腫瘤組織的細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行分析研究(如細(xì)胞放射敏感性檢測(cè)等)時(shí)，需先將樣品組織塊制備成分散的單細(xì)胞懸液。只有當(dāng)樣品組織中的各種細(xì)胞成分處在單細(xì)胞狀態(tài)下，才能有效地對(duì)其進(jìn)行各種細(xì)胞效應(yīng)的檢測(cè)分析，而細(xì)胞懸液質(zhì)量的好壞與消化液配方和消化方法密切相關(guān)?，F(xiàn)有技術(shù)中的各消化液對(duì)腫瘤組織的消化效果尚有待改進(jìn)
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種能有效、快速地將實(shí)體腫瘤樣品分散為單細(xì)胞懸液的組織消化液。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種實(shí)體腫瘤組織消化液，其特征在于，其包括以下5種組分膠原酶I 型(collagenase, typel) 25 重量份；蛋白激酶I 型(pronase, typel) 50 重量份；纖維素酶(celIulase) 75重量份；透明質(zhì)酸酶(hyaluronidase) 15重量份；PVP-40 (聚乙烯比咯烷酮)50重量份；將上述各組分按照2. 15mg/mL的重量/體積比加入到PBS (磷酸鹽緩沖液)中混勻后，即得所述實(shí)體腫瘤組織消化液。如上所述的實(shí)體腫瘤組織消化液在消化實(shí)體腫瘤組織中的應(yīng)用，其特征在于，步驟如下(I)取實(shí)體腫瘤組織樣品，用生理鹽水洗凈后，將其剪碎成糜狀；(2)將剪碎后的實(shí)體腫瘤組織樣品移入玻璃離心管內(nèi)，并加入所述實(shí)體腫瘤組織消化液，充分吹打混勻；(3)在35_40°C下水浴消化30-60分鐘；(4)消化后的組織經(jīng)200目尼龍濾膜過(guò)濾，即得到實(shí)體腫瘤組織的單細(xì)胞懸液。如上所述的應(yīng)用，優(yōu)選地，步驟(2)中所述實(shí)體腫瘤組織消化液的加入量為剪碎后的實(shí)體腫瘤組織樣品的體積的O. 5-2倍。如上所述的應(yīng)用，優(yōu)選地，步驟(3)中所述的水浴消化是在38_39°C下水浴消化。如上所述的應(yīng)用，優(yōu)選地，步驟(3)中所述的水浴消化持續(xù)30-40分鐘，在消化期間吹打1-2次。如上所述的應(yīng)用，更優(yōu)選地，步驟(3)中所述的水浴消化持續(xù)30分鐘。如上所述的應(yīng)用，優(yōu)選地，所述的實(shí)體腫瘤組織是腫瘤鱗癌組織。
如上所述的應(yīng)用，優(yōu)選地，所述的實(shí)體腫瘤組織是腫瘤腺癌組織。如上所述的應(yīng)用，優(yōu)選地，所述的實(shí)體腫瘤組織是腫瘤未分化癌組織。本發(fā)明的有益效果為本發(fā)明提供了一種組織消化液的配方。經(jīng)多年實(shí)驗(yàn)和改進(jìn)后形成的本發(fā)明消化液，具有能有效分解腫瘤組織塊內(nèi)細(xì)胞間連接成分的功效。組織塊經(jīng)本發(fā)明消化液消化分解后，細(xì)胞膜損傷小、細(xì)胞懸液分散度好，且操作方便、效果穩(wěn)定。


圖1為鼻咽癌樣品組織塊照片，箭頭處為鼻咽癌樣品組織塊。
圖2為鼻咽癌樣品組織剪碎后的狀態(tài)照片，箭頭處為剪碎成糜狀的鼻咽癌樣品組織。圖3為鼻咽癌樣品經(jīng)本發(fā)明消化液消化后的單細(xì)胞懸液，經(jīng)熒光染色后在顯微鏡下4倍放大的照片。圖4為鼻咽癌樣品經(jīng)本發(fā)明消化液消化后的單細(xì)胞懸液，經(jīng)熒光染色后在顯微鏡下10倍放大的照片。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明提供了一種實(shí)體腫瘤組織消化液，本實(shí)施例中，其配制方法為(I)按以下配方取各組分膠原酶I 型(collagenase, typel) 25mg ；蛋白激酶I 型(pronase, typel) 50mg ；纖維素酶(cellulase)75mg ;透明質(zhì)酸酶(hyaluronidase)l5mg ;PVP-40 (聚乙烯比咯烷酮)50mg。(2)將上述各組分加入PBS (磷酸鹽緩沖液)IOOmL,并混和均勻后，置于4°C冰箱冷藏保存。上述各組分的用量可等比例放大或縮小。實(shí)施例2實(shí)施例1中制得的組織消化液，按照以下方法進(jìn)行實(shí)體腫瘤組織消化(I)取如圖1照片所示的鼻咽癌樣品組織塊，用生理鹽水洗凈后，將其剪碎成如圖2照片所示的糜狀。(2)將剪碎后的組織樣品移入5mL玻璃離心管內(nèi)，加入實(shí)施例1中制得的實(shí)體腫瘤組織消化液l_2mL，充分吹打混勻。(3)在38 39 V下水浴消化30分鐘，消化期間吹打f 2次。(4)消化后的組織經(jīng)200目尼龍濾膜過(guò)濾，即得到實(shí)體腫瘤組織的單細(xì)胞懸液。參見圖3和圖4，分別為鼻咽癌樣品經(jīng)本發(fā)明消化液消化后的單細(xì)胞懸液，經(jīng)熒光染色后在顯微鏡下4倍和10倍放大的照片。如照片所示，腫瘤組織塊已被有效地分散成為單細(xì)胞懸液，且細(xì)胞膜損傷較小，可對(duì)其進(jìn)行后續(xù)的各種細(xì)胞效應(yīng)的檢測(cè)分析。
權(quán)利要求
1.一種實(shí)體腫瘤組織消化液，用于制備單細(xì)胞懸液，其特征在于，其包括以下5種組分 膠原酶I型25重量份； 蛋白激酶I型50重量份； 纖維素酶75重量份； 透明質(zhì)酸酶15重量份； PVP-40 50重量份； 將上述各組分按照2. 15mg/mL的重量/體積比加入到PBS中混勻后，即得所述實(shí)體腫瘤組織消化液。
2.權(quán)利要求1所述的實(shí)體腫瘤組織消化液在消化實(shí)體腫瘤組織、制備單細(xì)胞懸液中的用途。
3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，步驟如下 (1)取實(shí)體腫瘤組織樣品，用生理鹽水洗凈后，將其剪碎成糜狀； (2)將剪碎后的實(shí)體腫瘤組織樣品移入玻璃離心管內(nèi)，并加入所述實(shí)體腫瘤組織消化液，充分吹打混勻； (3)在35-40°C下水浴消化30-60分鐘； (4)消化后的組織經(jīng)200目尼龍濾膜過(guò)濾，即得到實(shí)體腫瘤組織的單細(xì)胞懸液。
4.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，步驟(2)中所述實(shí)體腫瘤組織消化液的加入量為剪碎后的實(shí)體腫瘤組織樣品的體積的1. 0-3. O倍。
5.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，步驟(3)中所述的水浴消化是在38-39°C下水浴消化。
6.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，步驟(3)中所述的水浴消化持續(xù)30-40分鐘，在消化期間吹打1-2次。
7.如權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于，步驟(3)中所述的水浴消化持續(xù)30分鐘。
8.如權(quán)利要求2所述的用途，所述的實(shí)體腫瘤組織是腫瘤鱗癌組織。
9.如權(quán)利要求2所述的用途，所述的實(shí)體腫瘤組織是腫瘤腺癌組織。
10.如權(quán)利要求2所述的用途，所述的實(shí)體腫瘤組織是腫瘤未分化癌組織。
全文摘要
本發(fā)明提供一種實(shí)體腫瘤組織消化液，其配方為膠原酶1型25重量份；蛋白激酶1型50重量份；纖維素酶75重量份；透明質(zhì)酸酶15重量份；PVP-4050重量份；將上述各組分按照2.15mg/mL的重量/體積比加入到PBS中混勻后，即得所述實(shí)體腫瘤組織消化液。本發(fā)明消化液，具有能有效分解腫瘤組織塊內(nèi)細(xì)胞間連接成分的功效。組織塊經(jīng)本發(fā)明消化液消化分解后，細(xì)胞膜損傷小、細(xì)胞懸液分散度好，且操作方便、效果穩(wěn)定。
文檔編號(hào)C12N5/09GK103013924SQ20131000993
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2013年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月10日
發(fā)明者楊偉志 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院, 北京大恒圖像視覺有限公司