用于高質(zhì)量蛋白質(zhì)濃縮物的基于微生物的方法
【專利摘要】本發(fā)明描述了通過經(jīng)由有氧溫育轉(zhuǎn)化植物來源的纖維素為生物可利用的蛋白質(zhì)，產(chǎn)生高質(zhì)量蛋白質(zhì)濃縮物(HQPC)的基于生物的方法，包括如此產(chǎn)生的此類HQPC作為營養(yǎng)物的用途，包括在水產(chǎn)養(yǎng)殖食物中作為魚粉代替物的用途。
NRRL 50792
2012.11.30

NRRL 50793
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NRRL 50795
2012.11.30
【專利說明】用于高質(zhì)量蛋白質(zhì)濃縮物的基于微生物的方法
[0001] 發(fā)明背景
[0002] 這項研究以來自國家科學(xué)基金會（National Science Foundation)根據(jù)合同 DBI-1005068的政府支持進行。政府對本發(fā)明具有一定的權(quán)利。
[0003] 相關(guān)申請的交叉參考
[0004] 根據(jù)35 U.S.C. § 119(e)，本申請要求申請日為2011年12月2日的美國臨時申請 號61/566, 487,及申請日為2011年12月2日的美國臨時申請?zhí)?1/566, 557的權(quán)益，其各 自通過在此引用其全文被并入。 發(fā)明領(lǐng)域
[0005] 本發(fā)明一般涉及溫育方法，具體地涉及產(chǎn)生高質(zhì)量蛋白質(zhì)濃縮物的基于微生物的 有氧溫育方法，包括由其制成的產(chǎn)物和此類產(chǎn)物在營養(yǎng)物飼料的制備中的用途。
[0006] 背景信息
[0007] 在2008年，約28%的世界野生、海洋魚類資源被過度開發(fā)，且52%被完全開發(fā)，正 如隨著增加的人口，人均魚類和貝類產(chǎn)物消耗的需求增加。隨著野生魚類資源的減少，為了 努力滿足此需求的增加，商業(yè)水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)急劇增加。然而，用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的飲食制劑的 主要成分之一，魚粉蛋白質(zhì)，也是來源于野生捕撈漁業(yè)。據(jù)估計，到2012年將需要至少有 6. 7mmt的魚粉以支持商業(yè)水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)。這顯然是不可持續(xù)的趨勢。
[0008] 較低成本、更可持續(xù)的植物來源的蛋白質(zhì)已用于在水產(chǎn)養(yǎng)殖食物中部分代替魚 粉。脫脂大豆粉（SBM，42-48%的蛋白質(zhì)）已普遍被用以在幾個物種的生長食物中代替多 達總蛋白質(zhì)的20%，而大豆蛋白質(zhì)濃縮物（SPC，65%的蛋白）在較高的總蛋白質(zhì)代替水平 已被成功地測試，很大程度上由物種的營養(yǎng)狀態(tài)制約。這些大豆產(chǎn)物提供高蛋白質(zhì)和相對 良好的氨基酸譜，但仍然缺乏由肉食性海洋魚類所需的一些關(guān)鍵氨基酸（如?；撬幔?。SPC 可在相比大豆粉較高的水平使用，主要因為用于產(chǎn)生SPC的溶劑提取方法除去了抗營養(yǎng)因 子（如低聚糖），且從而提高了蛋白質(zhì)的生物利用度。此外，熱步驟已被用于滅活熱不穩(wěn)定 的抗原因子。當前的溶劑提取方法的主要限制是其成本、缺乏在該工序中除去的低聚糖的 使用、和質(zhì)量問題，常常限制內(nèi)含物至食物中總蛋白質(zhì)的50%。此外，從大豆材料向大豆粉 或大豆蛋白質(zhì)濃縮物的加工可造成環(huán)境問題（例如，與處置用己烷提取相關(guān)的化學(xué)廢物的 問題）。
[0009] 玉米副產(chǎn)物，包括干酒糟及可溶物（distiller's dried grain with solubles, DDGS)，也已在水產(chǎn)養(yǎng)殖食物中以高達20%的魚粉代替水平被評價。DDGS具有比大豆產(chǎn)物 低的蛋白質(zhì)（28-32%)，及更多的纖維，但售價典型為脫脂大豆粉價值的?50%。一些乙 醇工廠已經(jīng)合并了干法分饋（dry fractionation)方法以在轉(zhuǎn)化方法之前除去部分纖維和 油，產(chǎn)生高達42%蛋白質(zhì)的干餾（(1巧-打&(3)0065。雖然這種產(chǎn)物在水產(chǎn)養(yǎng)殖食物中已被用 來代替20-40 %的魚粉，仍需要更高的蛋白質(zhì)、更易消化的DDGS水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料產(chǎn)物。如果蛋 白質(zhì)組分有較高水平的關(guān)鍵氨基酸，如?；撬帷①嚢彼?、甲硫氨酸和半胱氨酸，這樣的產(chǎn)物 將是特別有吸引力的。
[0010] 因此，對植物來源的蛋白質(zhì)來源存在需求，其是成本效益和"綠色"的，且足夠高質(zhì) 量以完全或?qū)嵸|(zhì)上在水產(chǎn)養(yǎng)殖食物中代替更多魚粉。
[0011] 發(fā)明概述
[0012] 本公開內(nèi)容涉及有機、基于微生物的系統(tǒng)，以轉(zhuǎn)化植物材料為高度可消化的、濃縮 的蛋白質(zhì)來源，其還包含微生物膠狀物（胞外多糖）的粘合劑，包括適合用作用于人類消耗 的動物的飼料的這種濃縮的來源。
[0013] 在實施方案中，公開了含有基于非動物的蛋白質(zhì)濃縮物的組合物，其中基于干物 質(zhì)，組合物含有至少55%的蛋白質(zhì)含量，且沒有可檢測的水蘇糖或棉子糖。在一個方面中， 組合物包含出芽短梗霉菌（Aureobasidium pullulans)的保藏菌株NRRL編號50792、NRRL 編號50793、NRRL編號50794、及NRRL編號50795、或其組合。
[0014] 在一個方面，基于非動物的蛋白質(zhì)濃縮物是從谷物及油料種子植物材料中分離 的，所述植物材料包括但不限于，大豆、花生、油菜籽、油菜、芝麻、大麥、棉籽、棕櫚仁、葡 萄籽、橄欖、紅花、向日葵、椰子核（copra)、玉米、椰子、亞麻籽、榛子、小麥、水稻、馬鈴薯、 木薯（cassava)、豆科植物、亞麻芥籽（camelina seed)、芥菜籽（mustard seed)、胚芽粉 (germ meal)、玉米蛋白粉（corn gluten meal)、蒸饋/釀酒副產(chǎn)物（distillery/brewery by-product)，其部分和組合。
[0015] 在另一個方面，組合物的蛋白質(zhì)含量在基于干物質(zhì)的從約56%至約90%的范圍， 所述組合物通過包括以下的方法產(chǎn)生：在高于室溫的溫度擠壓植物材料，以形成糊狀物； 添加一種或多種纖維素解構(gòu)酶以釋放糖到糊狀物中；以至少一種微生物接種酶處理的糊狀 物，該微生物轉(zhuǎn)化釋放的糖為蛋白質(zhì)和胞外多糖；以乙醇或絮凝劑沉淀得到的蛋白質(zhì)、微生 物、及胞外多糖；經(jīng)由水動力回收沉淀的材料；及干燥所述沉淀的材料。
[0016] 在相關(guān)的方面，至少一種微生物包括，但不限于，出芽短梗霉菌、硬葡聚糖小核菌 (Sclerotium glucanicum)、少動鞘月旨單胞菌（Sphingomonas paucimobilis)、Ralstonia eutropha、深紅紅螺菌（Rhodospirillum rubrum)、克魯維酵母（Kluyveromyces spp)、畢赤 酵母（Pichia spp)、里氏木霉（Trichoderma reesei)、糖皮側(cè)耳（Pleurotus ostreatus)、 根霉（Rhizopus spp)，及其組合。
[0017] 在一個方面，植物材料以大豆薄片或大豆粉的形式來自大豆。在另一個方面，植物 材料來自油料種子或它們的脫油粉。在另一個方面，植物材料來自干酒糟及可溶物（DDGS)。
[0018] 在一個方面，蛋白質(zhì)濃縮物包括至少0. Ig羥賴氨酸/IOOg濃縮物。
[0019] 在一個實施方案中，公開了包括基于非動物的蛋白質(zhì)濃縮物的動物飼料，其中組 合物包括至少約1. 25克脂類/IOOg組合物，其中基于干物質(zhì)，組合物不包含可檢測的水蘇 糖或棉子糖，且包含至少55%的蛋白質(zhì)含量，且其中組合物構(gòu)成所述動物飼料重量的至少 35%。
[0020] 在相關(guān)的方面，組合物是對魚飼料中基于動物的魚粉的完全代替物。在進一步 相關(guān)方面，魚飼料被配制用于的魚，包括但不限于，西伯利亞鱘（Siberian sturgeon)、小 體鱘（Sterlet sturgeon)、閃光鱘（Starry sturgeon)、白鱘（White sturgeon)、巨骨舌 魚（Arapaima)、日本獲（Japanese eel)、美洲獲（American eel)、短鰭獲（Short-finned eel)、長鰭獲（Long-finned eel)、歐洲獲（European eel)、遮目魚（Chanos chanos)、遮目 魚（Milkfish)、藍觸太陽魚（Bluegill sunfish)、藍綠鱗觸太陽魚（Green sunfish)、白莓魚盧 (White crappie)、黑莓S盧（Black crappie)、Asp、卡特拉紕（Catla)、金魚（Goldfish)、鯽魚(Crucian carp)、駿魚（Mud carp)、麥瑞加拉駿魚（Mrigal carp)、草魚（Grass carp)、鯉魚 (Common carp)、鏈魚（Silver carp)、纏魚（Bighead carp)、Orangefin Iabeo^Roho labeo、 紅萬鯉魚（Hoven's carp)、武昌魚（Wuchang bream)、青魚（Black carp)、金體美洲鳊 (Golden shiner)、Nilem carp、白阿穆爾魚扁魚（White amur bream)、泰銀魚比（Thai silver barb)、Java、斜齒鳊（Roach)、丁鯛（Tench)、池塘泥鰍（Pond loach)、Bocachico、金頭鯛 (Dorada)、Cachama、Cachama Blanca、Paco、黑魚回（Black bullhead)、斑點叉尾魚回（Channel catfish)、鰭科鯰魚（Bagrid catfish)、藍鯰魚（Blue catfish)、六須鯰魚（Weis catfish)、巨 It (Pangasius(Swai，Tra，Basa)catfish)、條紋It魚（Striped catfish)、泥嫩（Mudfish)、菲 律賓餘魚（Philippine catfish)、香港It魚（Hong Kong catfish)、北非It魚（North African catfish)、大頭It魚（Bighead catfish)、Sampa、南美It魚（South American catfish)、Atipa、 白斑狗魚（Northern pike)、香魚（Ayu sweetfish)、白蹲（Vendace)、白鮭（Whitefish)、粉 紅娃（Pink salmon)、大馬哈魚（Chum salmon)、銀大馬哈魚（Coho salmon)、樓娃（Masu salmon)、虹蹲魚（Rainbow trout)、紅大馬哈魚（Sockeye salmon)、大鱗大馬哈魚（Chinook salmon)、大西洋鮭魚（Atlantic salmon)、海蹲（Sea trout)、北極紅點鮭（Arctic char)、 溪紅點鮭（Brook trout)、湖紅點鮭（Lake trout)、大西洋鱈魚（Atlantic cod)、銀漢魚 (Pejerrey)、Lai、鍋蓋魚（Common snook)、澳洲肺魚/亞洲海S盧魚（Barramundi/Asian sea bass)、尼羅河S盧魚（Nile perch)、蟲紋石斑魚（Murray cod)、金S盧魚（Golden perch)、條 紋魚盧魚（Striped bass)、白魚盧（White bass)、歐洲魚盧魚（European seabass)、香港石斑魚 (Hong Kong grouper)、寶石石斑魚（Areolate grouper)、魚盧滑石斑魚（Greasy grouper)、 斑點東星斑（Spotted coralgrouper)、銀魚盧（Silver perch)、白魚盧（White perch)、寶 石魚盧（Jade perch)、大口黑隹盧（Largemouth bass)、小口黑隹盧（Smallmouth bass)、歐 洲魚盧（European perch)、梭S盧（Zander，Pike-perch)、黃S盧（Yellow Perch)、加拿大梭 魚盧（Sauger)、大眼梭S盧（Walleye)、竹莢魚（Bluefish)、紅酣（Greater amber jack)、青 酣滕（Japanese amberjack)、卵形鯧錄（Snubnose pompano)、佛羅里達州鯧（Florida pompano)、谷氏鯧（Palometa pompano)、日本竹莢魚（Japanese jack mackerel)、軍曹 魚（Cobia)、紅樹林紅鯛魚（Mangrove red snapper)、黃尾笛鯛（Yellowtail snapper)、 黑鯛（Dark seabream)、白鯛魚（White seabream)、深紅鯛魚（Crimson seabream)、紅鯛 魚（Red seabream)、真鯛（Red porgy)、金絲鯛（Goldlined seabream)、金頭鯛（Gilthead seabream)、紅鼓魚（Red drum)、綠寶_魚（Green terror)、黑帶鯛（Blackbelt cichlid)、 淡水石斑魚（Jaguar guapote)、墨西哥銀自盧（Mexican mojarra)、Pearlspot、三斑羅非魚 (Three spotted tilapia)、藍羅非魚（Blue tilapia)、長鰭羅非魚（Longfin tilapia)、莫 桑比克羅非魚（Mozambique tilapia)、尼羅羅非魚（Nile tilapia)、羅非魚（Tilapia)、 荷那龍羅非魚（Wami tilapia)、黑顎羅非魚（Blackchin tilapia)、倫氏非鯽（Redbreast tilapia)、福壽魚（Redbelly tilapia)、金鑛（Golden grey mullet)、大鱗鑛（Largescale mullet)、Gold_spot mullet、Thinlip grey mullet、跳鑛（Leaping mullet)、Tade mullet、 烏鯔（Flathead grey mullet)、白鯔魚（White mullet)、梭狀鯔（Lebranche mullet)、太 平洋脂塘鱧（Pacific fat sleeper)、尖塘鱧（Marble goby)、白斑臭都魚（White-spotted spinefoot)、點藍子魚（Goldlined spinefoot)、刺藍子魚（Marbled spinefoot)、南方 黑鮪（Southern b luefin tuna)、北方黑鮪魚（Northern b luefin tuna)、攀S盧（Climbing perch)、Snakeskin gourami、接吻魚盧（Kissing gourami)、巨魚盧（Giant gourami)、黑魚 (Snakehead)、印尼黑魚（Indonesian snakehead)、斑點黑魚（Spotted snakehead)、條紋 黑魚（Striped snakehead)、大菱鲆（Turbot)、大比目魚（Bastard halibut)(日本牙蝶 (Japanese flounder))、夏日鲆（Summer Flounder)、漠斑牙鲆（Southern flounder)、北 美黃蓋蝶（Winter flounder)、大西洋大比目魚（Atlantic Halibut)、綠背鲆（Greenback flounder)、歐鰨（Common sole)、及其組合。
[0021] 在一個方面，相比包括基于動物的魚粉或大豆蛋白質(zhì)濃縮物的相當?shù)聂~飼料， 魚飼料在一個或多個性能方面產(chǎn)生更大的性能，所述性能方面包括但不限于，生長、體 重增加、蛋白質(zhì)功效比、飼料轉(zhuǎn)化率、總消耗、存活率、和弗爾頓氏豐滿系數(shù)（Fulton's condition factor)〇
[0022] 在另一個方面，魚飼料以小于或等于包括基于動物的魚粉或大豆蛋白質(zhì)濃縮物的 相當?shù)聂~飼料的蛋白質(zhì)含量的粗蛋白質(zhì)含量產(chǎn)生性能方面。
[0023] 在一個方面，動物飼料補充有賴氨酸、甲硫氨酸、脂類、生物素、膽堿、煙酸、抗壞血 酸、肌醇、泛酸、葉酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素A、維生素B12、維生素D、維生素E、維 生素K、興、磷、鉀、鈉、鎂、猛、錯、碘、鈷、鋅、鐵、硒或其組合。
[0024] 在另一個實施方案中，公開了產(chǎn)生基于非動物的蛋白質(zhì)濃縮物的方法，所述方法 包括在高于室溫的溫度擠壓植物材料，以形成糊狀物，并將所述糊狀物轉(zhuǎn)移至生物反應(yīng)器 中；添加一種或多種纖維素解構(gòu)酶以釋放糖到生物反應(yīng)器中的糊狀物中；以至少一種微生 物接種酶處理的糊狀物，該微生物轉(zhuǎn)化釋放的糖為蛋白質(zhì)和胞外多糖；以乙醇、絮凝劑、或 其組合沉淀得到的蛋白質(zhì)、微生物、及胞外多糖；經(jīng)由水動力回收沉淀的材料；及干燥沉淀 的材料。
[0025] 在相關(guān)方面，擠壓是在約50°C至約170°C之間，以約3:1的壓縮比，且在足以提供 針對筒兩側(cè)的脊形通道的剪切作用的螺桿轉(zhuǎn)速下進行。
[0026] 在另一相關(guān)方面中，方法包括混合擠壓的材料與水以達到在生物反應(yīng)器中至少約 5%的固體加載率；和任選地，高壓滅菌并冷卻稀釋的擠壓的材料，其中一種或多種纖維素 解構(gòu)酶選自以下組成的組：內(nèi)切木聚糖酶和P _木糖苷酶、糖苷水解酶、P _葡糖苷酶、半纖 維素酶活性，及其組合。
[0027] 在一個相關(guān)的方面，方法包括降低酶處理的糊狀物的溫度至約30°C至約37°C 之間；以約2% (v/v)的至少一種微生物的24小時培養(yǎng)物接種冷卻的糊狀物，其中至少 一種微生物包括但不限于，出芽短梗霉菌、硬葡聚糖小核菌、少動鞘脂單胞菌、Ralstonia eutropha、深紅紅螺菌、克魯維酵母、畢赤酵母、里氏木霉、糙皮側(cè)耳、根霉，及其組合；任選 地，將所述接種的糊狀物以約〇. 〇5L/L/min充氣；且溫育至糖的利用終止，或在至少一種微 生物的存在下培養(yǎng)約96至120小時后。
[0028] 在一個方面，方法包括加入約0. 6升乙醇/L糊狀物；離心乙醇處理的糊狀物；回 收乙醇；任選地回收懸浮的細顆粒，回收離心的固體；及干燥回收的離心的固體。在另一個 方面，可干燥上清液，回收干燥的固體，且隨后將其與離心的固體混合。
[0029] 在一個實施方案中，公開了選自以下組成的組的出芽短梗霉菌菌株的生物純培養(yǎng) 物：NRRL 編號 50792、NRRL 編號 50793、NRRL 編號 50794、及 NRRL 編號 50795。
[0030] 附圖簡述
[0031] 圖1顯示了HQSPC轉(zhuǎn)化方法的流程圖。
[0032] 圖2顯示了用于水產(chǎn)飼料的HQSPC轉(zhuǎn)化方法的流程圖。
[0033] 圖3顯示了工作臺規(guī)模（bench scale)、延長的溫育試驗，以評價HQSPC組成和產(chǎn) 量。
[0034] 圖4顯示了用于水產(chǎn)飼料的HP-DDGS轉(zhuǎn)化方法的流程圖。
[0035] 圖5顯示了在100°C下HP-DDGS的擠壓后水分含量和擠壓速度對葡萄糖回收的作 用。
[0036] 發(fā)明詳述
[0037] 在描述本發(fā)明組合物、方法和方法論前，應(yīng)當理解，此發(fā)明并不局限于描述的特定 的組合物、方法和實驗條件，因為這樣的組合物、方法和條件可以變化。也是可以理解的是， 本文所使用的術(shù)語僅是為了描述特定實施方案，并非意圖限制，因為本發(fā)明的范圍將僅由 所附的權(quán)利要求書限定。
[0038] 如此說明書和所附權(quán)利要求書中使用，除非上下文另有明確規(guī)定，否則單數(shù)形式 "一（a)"、"一（an)"和"該（the)"包括復(fù)數(shù)指代對象。因此，例如，提及的"一種核酸"包 括一種或多種核酸，和/或本文所描述的該類型的組合物，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員在閱讀本 公開內(nèi)容后其將變得明顯、等等。
[0039] 除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有由本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普 通技術(shù)人員所通常理解的相同的含義。類似或等同于本文描述的方法和材料的任何方法和 材料可以在本發(fā)明的實踐或試驗中使用，因為將會理解，修改和變化都被涵蓋在本公開內(nèi) 容的精神和范圍內(nèi)。
[0040]如本文所用，"約（about) "、"大約（approximately) "、"基本上（substantially) " 和"顯著（significantly) "將由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員理解，且將會取決于它們被使用的上 下文在一定程度上變化。如果其中其被使用的上下文中對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員該術(shù)語的使 用是不清楚的，"約"和"大約"意味著對特定術(shù)語加或減〈10%，且"基本上"和"顯著"意味 著對特定術(shù)語加或減>10%。
[0041] 如本文所用，術(shù)語"動物"是指屬于動物界的任何生物體，且包括但不限于，人類、 鳥類（例如家禽）、哺乳動物（如牛、豬、目標、綿羊、貓、狗、小鼠和馬）以及水產(chǎn)養(yǎng)殖生物， 如魚（如鱒魚、鮭魚、鱸魚）、軟體動物（如蛤）和甲殼類動物（如龍蝦和蝦）。
[0042] 術(shù)語"魚"的使用包括所有脊椎動物魚，其可以是硬骨魚或軟骨魚。
[0043] 如本文所用的"基于非動物的蛋白質(zhì)"是指包括至少0. 81g粗纖維/IOOg組合物 (基于干物質(zhì)）的蛋白質(zhì)濃縮物，粗纖維是作為植物物質(zhì)的化學(xué)分析的殘渣獲得的主要是 纖維素和木質(zhì)素的材料。
[0044] 如本文所用，"溫育方法"是指用于細菌或細胞的生長和發(fā)育的適當條件的規(guī)定， 其中這樣的細菌或細胞使用生物合成途徑以代謝各種飼料原料。在實施方案中，例如，溫育 方法可在有氧條件下進行。在其它實施方案中，溫育方法可包括發(fā)酵。
[0045] 如本文所用，術(shù)語"溫育產(chǎn)物"是指從溫育方法/反應(yīng)直接得到的任何剩余物質(zhì)。 在某些情況下，溫育產(chǎn)物含有微生物使得其相比缺乏這樣的微生物的溫育產(chǎn)物具有增強的 營養(yǎng)物含量。溫育產(chǎn)物可含有來自溫育肉湯（broth)的適合成分。例如，溫育產(chǎn)物可包括 來自溫育肉湯的溶解的和/或懸浮的成分。懸浮的成分可包括未溶解的可溶成分（如，其 中溶液是一種或多種組分過飽和的）和/或存在于溫育肉湯中的不溶性材料。溫育產(chǎn)物可 包括在溫育結(jié)束時存在的基本上全部干物質(zhì)（例如，通過噴霧干燥溫育肉湯、和通過培養(yǎng) 產(chǎn)生的生物質(zhì)），或可包括它們的一部分。溫育產(chǎn)物可包括來自溫育的粗材料，其中微生物 可被分級和/或部分純化，以增加材料的營養(yǎng)物含量。
[0046]如本文所用，"轉(zhuǎn)化培養(yǎng)"是指包含在包括足以使微生物生長的材料，例如，水和營 養(yǎng)物質(zhì)，的培養(yǎng)基中的微生物的培養(yǎng)。術(shù)語"營養(yǎng)物"是指任何具有營養(yǎng)價值的物質(zhì)。它可 以是動物飼料或用于動物的食品補充劑的一部分。示例性的營養(yǎng)物包括但不限于蛋白質(zhì)、 肽、脂肪、脂肪酸、脂類、水和脂溶性維生素、必需氨基酸、碳水化合物、留醇、酶和微量礦物 質(zhì)，例如，磷、鐵、銅、鋅、猛、鎂、鈷、碘、硒、鑰、鎳、氟、銀、錫和娃。
[0047]轉(zhuǎn)化是在適合轉(zhuǎn)化蛋白質(zhì)/碳水化合物/多糖材料的條件下，培養(yǎng)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)中的 微生物的過程，例如，大豆材料轉(zhuǎn)化為高品質(zhì)的蛋白質(zhì)濃縮物。適當?shù)霓D(zhuǎn)化是指，利用90% 或更多的特定的碳水化合物，產(chǎn)生微生物細胞量（cell mass)和/或胞外多糖。在實施方 案中，轉(zhuǎn)化可以是需氧或厭氧的。
[0048]如本文所用"絮凝劑"或"清除劑"是通過凝聚促進膠體離開懸浮液的化學(xué)物質(zhì)， 且包括，但不限于，多價離子和聚合物。在實施方案中，這樣的絮凝劑/清除劑可包括生物 絮凝劑如胞外多糖。
[0049]大量的植物蛋白質(zhì)來源可與本公開內(nèi)容組合使用作為用于轉(zhuǎn)化的飼料原料。在 飼料工業(yè)使用植物蛋白質(zhì)的主要原因是替代更昂貴的蛋白質(zhì)來源，例如動物蛋白質(zhì)來 源。另一個重要的因素是通過飼養(yǎng)動物蛋白質(zhì)至相同或相關(guān)物種的動物的傳播疾病的危 險。植物蛋白質(zhì)來源的實例包括，但不限于，來自以下的蛋白質(zhì)：豆科（Fabaceae)植物，如 大豆和花生所示例的，來自十字花科（Brassiciaceae)植物，如油菜、棉籽所示例的，菊科 (Asteraceae)植物，包括但不限于向日葵，和棕櫚科（Arecaceae)植物，包括椰子核。這 些蛋白質(zhì)來源，也通常被定義為油料種子蛋白質(zhì)，可完整地用于飼養(yǎng)，但其更通常作為油 已被除去后的副產(chǎn)物飼養(yǎng)。其它植物蛋白來源包括來自以下的植物蛋白質(zhì)來源：禾本科 (Poaceae)，也被稱為禾本科（Gramineae)，像谷類和谷物特別是玉米、小麥和水稻或其它主 要作物如馬鈴薯、木薯和豆科植物（豌豆類（peas)和菜豆屬植物（beans))，一些研磨副產(chǎn) 物包括胚芽粉或玉米蛋白粉、或蒸餾/釀酒副產(chǎn)物。在實施方案中，蛋白質(zhì)的飼料原料包 括，但不限于，來自以下的植物材料：大豆、花生、油菜籽、大麥、油菜、芝麻、棉籽、棕櫚仁、葡 萄籽、橄欖、紅花、向日葵、椰子核、玉米、椰子、亞麻籽、榛子、小麥、水稻、馬鈴薯、木薯、豆科 植物、亞麻芥籽、芥菜籽、胚芽粉、玉米蛋白粉、蒸餾/釀酒副產(chǎn)物、及其組合。
[0050]在魚類養(yǎng)殖業(yè)，據(jù)報道使用的植物來源的主要魚粉代替物包括，但不限于，大豆粉 (SBM)、玉米蛋白粉、油菜籽/油菜（蕓苔屬（Brassica))粉、羽扇豆（羽扇豆屬（Lupinus)), 像去殼的白（白羽扇豆（Lupinus albus))、甜（狹葉羽扇豆（L.angustifolius))和黃（黃 羽扇豆（L. Iuteus))羽扇豆核粉中的蛋白質(zhì)、向日葵（向日葵（Helianthus annuus))種 子粉、結(jié)晶氨基酸；以及豌豆粉（豌豆（Pisum sativum))、棉籽（棉屬（Gossypium))粉、花 生（花生；落花生（Arachis hypogaea))粉和油漁餅、大豆蛋白質(zhì)濃縮物、玉米（玉米（Zea mays))蛋白粉和小麥（小麥（Triticum aestivum))谷蛋白、馬鈴薯（馬鈴薯（Solanum tuberosum L.))蛋白質(zhì)濃縮物以及其它植物飼料如辣木（辣木（Moringa oleifera Lam.)) 葉，都以各種濃度和組合。
[0051] 蛋白質(zhì)來源可以是未經(jīng)處理的植物材料的形式和處理和/或提取的植物蛋白質(zhì) 的形式。作為實例，熱處理的大豆產(chǎn)物具有較高的蛋白質(zhì)消化率。
[0052] 蛋白質(zhì)材料包括任何類型的蛋白質(zhì)或肽。在實施方案中，可以使用大豆材料或類 似材料，如全大豆。全大豆可以是標準的、商品化的大豆；以某種方式已被轉(zhuǎn)基因（GM)的 大豆；或非GM身份保留的大豆。示例性的GM大豆包括，例如，被工程化以產(chǎn)生除了水蘇糖 和棉子糖外的碳水化合物的大豆。示例性的非轉(zhuǎn)GM大豆包括，例如，為了低油、低碳水化合 物、且低胰蛋白酶的抑制選育的Schillinger品種。
[0053] 其他類型的大豆材料包括大豆蛋白質(zhì)粉、大豆蛋白質(zhì)濃縮物、大豆粉、和分離大豆 蛋白質(zhì)，或其混合物。全大ii向其它形式的大ii蛋白，如大ii蛋白質(zhì)粉、大ii蛋白質(zhì)濃縮 物、大豆粉、和分離大豆蛋白質(zhì)的傳統(tǒng)加工，包括裂化清潔的、生的全大豆為數(shù)塊，典型地六 (6)至八（8)塊，產(chǎn)生大豆片和殼，然后將殼除去。然后將大豆片置于大約60°C，并片成約 0. 25毫米厚。然后以惰性溶劑，如烴類溶劑，通常是己燒，在多種類型的逆流提取系統(tǒng)之一 中提取所得到的薄片，以除去大豆油。對于大豆蛋白質(zhì)粉、大豆蛋白質(zhì)濃縮物、和分離大豆 蛋白質(zhì)，重要的是，薄片以最大限度地減少蒸煮或烘烤大豆蛋白質(zhì)的量以保持水溶性大豆 蛋白質(zhì)的高含量的方式被脫溶劑。這通常是通過使用蒸氣脫溶裝置或急驟脫溶裝置（flash desolventizers)完成的。從該過程獲得的薄片，一般稱為"食用脫脂薄片"或"白大豆（豆） 薄片"。
[0054] 白大豆薄片是大豆蛋白質(zhì)粉、大豆蛋白質(zhì)濃縮物、和分離大豆蛋白質(zhì)的起始原料， 具有約50 %的蛋白質(zhì)含量。白大豆薄片然后被粉碎，通常在開環(huán)研磨系統(tǒng)中，通過錘式粉碎 機、級分粉碎機、滾筒粉碎機或沖擊銷粉碎機首先粉碎成粗粉，并以另外的研磨，成為具有 所需的顆粒尺寸的大豆粉末。通常使用篩選以排列產(chǎn)物尺寸至均勻的粒徑范圍，并可以以 振動篩或圓筒狀離心篩完成。其它油料種子可以以類似的方式被加工。
[0055] 在實施方案中，可以使用干酒糟及可溶物ODGS)。目前DDGS是由玉米乙醇業(yè)制造 的。傳統(tǒng)的DDGS來自干磨設(shè)備，其中整玉米核被研磨和加工。在這些設(shè)施中的DDGS通常 含有28-32%的蛋白質(zhì)。
[0056]蛋白質(zhì)來源可以是以未經(jīng)處理的植物材料的形式和處理和/或提取的植物蛋白 質(zhì)的形式。作為實例，熱處理的大豆產(chǎn)物具有高的蛋白質(zhì)消化率。盡管如此，包含在食肉魚 的食物中的全脂或脫脂大豆粉的上限包含水平是在20到30%的包含水平之間，即使熱不 穩(wěn)定抗營養(yǎng)因子被排除。在魚類中，大豆蛋白質(zhì)已經(jīng)顯示，以超過30%的蛋白質(zhì)濃度包含水 平飼養(yǎng)魚類造成腸道損傷，且通常減少不同的魚種的生長表現(xiàn)。事實上，由于這些影響，大 多數(shù)養(yǎng)魚場主不愿意在總食物中使用多于10%的植物蛋白。
[0057]本發(fā)明解決了這個問題，并允許植物蛋白質(zhì)包含水平高達40或甚至50%，取決 于，除了其他因素以外，被飼養(yǎng)的動物物種、植物蛋白質(zhì)來源的源頭、不同植物蛋白質(zhì)來源 的比例、蛋白質(zhì)濃度、和葡聚糖和/或甘露聚糖的量、源頭、分子結(jié)構(gòu)和濃度。在實施方案 中，植物蛋白質(zhì)包含水平高達40%、優(yōu)選高達20%或30%。通常存在于食物中的植物蛋白 質(zhì)是介于5和40%之間，優(yōu)選在10或15和30%之間。這些百分比界定在動物飼料或食物 中的總植物蛋白質(zhì)來源的百分比量，這包括脂肪、灰分等。在實施方案中，純蛋白質(zhì)水平高 達50 %、典型地高達45 %、在實施方案5-95 %。
[0058] 在總飼料或食物中的植物蛋白質(zhì)對其它蛋白質(zhì)的比例可以是5:95至95: 5、15:85 至 50:50、或 25:75 至 45:55。
[0059] 微生物
[0060] 本公開的微生物必須能夠在轉(zhuǎn)化培養(yǎng)中將碳水化合物和其它營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為高 品質(zhì)的蛋白質(zhì)濃縮物。在實施方案中，微生物是酵母樣真菌。酵母樣真菌的實例是出芽短 梗霉菌。其它實例微生物包括酵母，例如克魯維酵母和畢赤酵母、乳酸菌、里氏木霉、糙皮側(cè) 耳、根霉，和許多類型的木質(zhì)纖維素降解微生物。一般地，示例性的微生物包括那些能代謝 水蘇糖、棉子糖、木糖及其它糖的微生物。然而，根據(jù)公開的方法選擇其它合適的微生物是 本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)的，無需過多實驗。
[0061] 在實施方案中，可在本方法中使用的微生物有機體包括但不限于，出芽短梗霉菌、 硬葡聚糖小核菌、少動鞘脂單胞菌、Ralstonia eutropha、深紅紅螺菌、克魯維酵母和畢赤 酵母、里氏木霉、糙皮側(cè)耳、根霉，及其組合。在實施方案中，微生物是出芽短梗霉菌。
[0062] 在實施方案中，出芽短梗霉菌適于在轉(zhuǎn)化過程中遇到的各種環(huán)境/壓力源。在實 施方案中，表示為NRRL保藏號50793,根據(jù)布達佩斯條約的條款于2012年11月30日保 藏在美國農(nóng)業(yè)研究菌種保藏中心（Agricultural Research Culture Collection, NRRL)， Peoria，111.的出芽短梗霉菌菌株，表現(xiàn)出較低的膠狀物產(chǎn)生，并且適合于DDGS。在實施 方案中，表示為NRRL保藏號50792,根據(jù)布達佩斯條約的條款于2012年11月30日保藏在 美國農(nóng)業(yè)研究菌種保藏中心（NRRL)，Peoria，111.的出芽短梗霉菌菌株，適用于高濃度的 抗生素四環(huán)素（例如，從大約75iig/ml四環(huán)素至約200iig/ml四環(huán)素）。在實施方案中， 表示為NRRL保藏號50794,根據(jù)布達佩斯條約的條款于2012年11月30日保藏在美國農(nóng) 業(yè)研究菌種保藏中心（NRRL)，Peoria，111.的出芽短梗霉菌菌株，適用于高濃度的抗生素 LACTROL? (例如,從約2 ii g/ml維吉霉素至約6 ii g/ml維吉霉素）。在實施方案中，表 示為NRRL保藏號50795,根據(jù)布達佩斯條約的條款于2012年11月30日保藏在美國農(nóng)業(yè)研 究菌種保藏中心（NRRL)，Peoria，111.的出芽短梗霉菌菌株，適應(yīng)于濃縮的玉米可溶物。
[0063] 轉(zhuǎn)化培養(yǎng)
[0064] 在示例性的實施方案中，預(yù)處理后，蛋白質(zhì)材料（如擠壓的大豆白薄片）可以至 少5%的固體加載率與水混合，調(diào)節(jié)pH至4. 5-5. 5。然后可加入合適劑量的水解酶，且漿料 在50°C以150-250rpm攪拌溫育3-24小時。冷卻至35°C后，可以添加出芽短梗霉菌的接種 物，且培養(yǎng)物可再溫育72-120h，或直至碳水化合物被消耗。在溫育過程中，無菌空氣可以以 0. 5-lL/L/h的速率被噴射到反應(yīng)器中。在實施方案中，轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物經(jīng)過與大豆材料溫育少 于約96小時的轉(zhuǎn)化。在實施方案中，轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物將溫育約96小時和約120小時之間。在 實施方案中，轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物可溫育多于約120小時。轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物可在約35°C下溫育。
[0065] 在實施方案中，當經(jīng)歷轉(zhuǎn)化時，轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物的pH可為約4. 5至約5. 5。在實施方案 中，轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物的pH可以小于4. 5(例如，在pH3)。在實施方案中，可對轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物主動地充 氣，如在Deshpande等人，Aureobasidiumpullulans in applied microbiology :A status report, Enzyme and Microbial Technology(1992), 14(7) :514中公開的。
[0066]高品質(zhì)的蛋白質(zhì)濃縮物（HQPC)，以及短梗霉聚糖和鐵載體，可以從轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物中 按照通過任選地醇沉淀和離心的轉(zhuǎn)化方法被回收。醇的實例是乙醇，盡管本領(lǐng)域技術(shù)人員 明白，其它醇應(yīng)當起作用。在實施方案中，鹽也可以用于沉淀。示例性的鹽可以是鉀、鈉和 鎂的氯化物鹽。在實施方案中，可以單獨使用或與醇組合使用聚合物或多價離子。
[0067] 在實施方案中，最終蛋白質(zhì)濃縮物固體回收可以通過改變溫育時間調(diào)節(jié)。例如，在 溫育14天后可實現(xiàn)約75%的蛋白質(zhì)，其中固體回收率為約16-20%。在實施方案中，溫育 2-2. 5天增加固體回收至約60-64%，且HQPC中的蛋白質(zhì)水平為58-60%。在實施方案中， 4-5天的溫育可最大化蛋白質(zhì)含量（例如，但不限于大于約70%)和固體回收（例如，但 不限于大于約60%)兩者。取決于飼料原料，這些數(shù)值可更大或更低。在實施方案中，蛋 白濃縮物（即，HQSPC或HP-DDGS)可以具有特定的脂：蛋白質(zhì)比，例如，在約0.010:1至約 0. 03:1、約 0. 020:1 至約 0. 025:1、或約 0. 021:1 至約 0. 023:1。
[0068] 在實施方案中，飼料原料可在單螺桿擠壓機（例如，BRABENDER PLASTI-C0RDER EXTRUDER Model PL2000, Hackensack, NJ)中擠壓，以筒長比螺桿直徑為1:20和3:1的壓縮 t匕，雖然其它幾何形狀和比例也可使用。飼料原料可被調(diào)整為約10%至約15%的水分，至 約15%，或至約25%的水分。飼料、筒、和擠壓機的出口截面的溫度可以保持在約40°C至 約50°C、或約50°C至約KKTC、約KKTC至約150°C、約150°C至約170°C之間，且螺桿轉(zhuǎn)速 可以被設(shè)置在約50rpm至約75rpm、或約75rpm至約lOOrpm、或約IOOrpm至約200rpm至約 250rpm。在實施方案中，螺桿轉(zhuǎn)速足以提供針對筒兩側(cè)的脊形通道的剪切作用。在實施方 案中，螺桿轉(zhuǎn)速被選擇以最大化糖的釋放。
[0069] 在實施方案中，擠壓的飼料原料材料（例如，植物蛋白質(zhì)或DDGS)可與水混合以 達到在反應(yīng)器（例如，5L NEW BRUNSWICK BI0FL03BI0REACT0R;3-4 L工作容積）中至少 5%的固體加載率。漿料可以被高壓滅菌、冷卻，然后通過使用酶的混合物進行酶法水解的 糖化，所述酶包括，但不限于，內(nèi)切木聚糖酶和木糖苷酶、糖苷水解酶、葡糖苷酶、 半纖維素酶活性。在一方面，酶的混合物包括NOVOZYME?酶。劑量可以包括6 % 匸￡1_±1〇^￡]^@(每克葡聚糖）、0.3%匸￡1^1〇1丁￡1^@(每克總固體）、和0.15% NOVOZYME960? (每克總固體）。糖化可以進行大約I2h至約24h,在40°至約5〇°C, 且約150rpm至約200rpm，以增溶纖維和低聚糖為單糖。然后溫度可以降低至約30°C至約 37°C之間，在實施方案中至約35°C，且漿料可以以2% (v/v)的微生物的24小時培養(yǎng)物接 種。漿料可以以〇. 5L/L/min充氣，且溫育可一直持續(xù)到糖的利用停止或約96h至約120h。 在補料分批（fed-batch)轉(zhuǎn)化中，更多的擠壓的飼料原料可在糖化和/或微生物轉(zhuǎn)化階段 期間被加入。
[0070] 在實施方案中，接種轉(zhuǎn)化微生物前，飼料原料和/或擠壓物可以以一種或多種抗 生素處理（例如，但不限于，四環(huán)素、青霉素、紅霉素、泰樂菌素、維吉霉素、及其組合）以避 免，例如，被有害的細菌菌株污染。
[0071] 在溫育期間，樣品可以以6_12h的間隔取出。用于HPLC分析的樣品可被煮沸、離 心、過濾（例如，通過〇.22i!m過濾器）、置于自動采樣瓶、并冷凍直到分析。在實施方案中， 樣品可以使用WATERS HPLC系統(tǒng)測定碳水化合物和有機溶劑，雖然可使用其它HPLC系統(tǒng)。 可對樣品進行平板或血球計數(shù)以評價微生物群體。樣品也可使用美國國家可再生能源實驗 室（National Renewable Energy Laboratory)程序測定纖維素、半纖維素和果膠的水平。 [0072] 食物制劑
[0073] 在示例性實施方案中，從已經(jīng)經(jīng)受轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)化培養(yǎng)物中回收的高品質(zhì)的蛋白質(zhì)濃 縮物用在食物制劑中。在實施方案中，回收的高品質(zhì)的蛋白質(zhì)濃縮物（HQPC)將是食物制 劑中主要的蛋白質(zhì)來源。食物制劑中蛋白質(zhì)來源百分比不意味著是限制性的，且可包括24 至80%的蛋白質(zhì)。在實施方案中，高品質(zhì)的蛋白質(zhì)濃縮物（HQPC)將是多于約50%、多于約 60 %、或多于約70 %的總食物制劑蛋白質(zhì)來源。回收的HQPC可代替蛋白質(zhì)來源，如魚粉、大 豆粉、小麥和玉米粉和谷蛋白及濃縮物，及動物副產(chǎn)物，如血液、家禽肉、和羽毛粉。使用收 回的HQPC的食物制劑還可包括補充劑，如礦物質(zhì)和維生素預(yù)混物以酌情滿足其余的營養(yǎng) 需求。
[0074] 在某些實施方案中，HQPC如高品質(zhì)的大豆蛋白質(zhì)濃縮物（HQSPC)或高質(zhì)量 DDGS (HP-DDGS)的性能，可以通過比較飼養(yǎng)高品質(zhì)蛋白質(zhì)濃縮物食物制劑的動物與飼養(yǎng)對 照食物制劑如魚粉的動物的生長、飼料轉(zhuǎn)化率、蛋白質(zhì)功效、和存活率來測量。在實施方 案中，測試制劑含有一致的蛋白質(zhì)、脂類和能量含量。例如，當動物是魚，可測量內(nèi)臟（脂 肪沉積）和器官（肝和脾）的特性、修復(fù)（dress-out)百分比、和魚片近似分析（fillet proximate analysis)、以及腸道組織學(xué)（腸炎），以評價食物響應(yīng)。
[0075] 如所理解的，含有回收的HQPC的單獨食物制劑可被優(yōu)化用于不同種類的動物。在 實施方案中，動物是在商業(yè)水產(chǎn)養(yǎng)殖生長的魚。食物制劑優(yōu)化的方法是眾所周知的，且本領(lǐng) 域技術(shù)人員易于確定而無需過度實驗。
[0076] 全價生長食物（Complete grower diets)可以根據(jù)各種動物物種已知的營養(yǎng)需求 使用HQPC配制。在實施方案中，制劑可用于黃鱸（例如，42%蛋白質(zhì)、8%脂類）。在實施方 案中，制劑可用于虹鱒魚（45%蛋白質(zhì)、16%脂類）。在實施方案中，制劑可用于上文提及的 任一種動物。
[0077] 可以使用用于基于植物食物的基礎(chǔ)礦物質(zhì)和維生素預(yù)混物，以確保微營養(yǎng)需求將 得到滿足。任何補充劑（如通過分析認為必要）可以通過比較無補充的相同制劑來評價；因 此，飼養(yǎng)試驗可以在析因設(shè)計中完成以考慮到補充作用。在實施方案中，飼養(yǎng)試驗可包括基 于魚粉的對照食物及基于ESPC和LSPC的參考食物[傳統(tǒng)的SPC (TSPC)是從溶劑洗滌大豆 薄片以除去可溶性碳水化合物產(chǎn)生的；紋理（texturized) SPC (ESPC)是由在潮濕、高溫下 擠壓TSPC產(chǎn)生的；及低抗原SPC (LSPC)是從TSPC通過改變加工過程中溶劑洗滌和溫度產(chǎn) 生的]?？梢允褂脤嶒炇乙?guī)模的單螺桿擠壓機（例如，BRABENDER PLASTI-CORDER EXTRUDER Model PL2000)產(chǎn)生用于飼養(yǎng)試驗的小粒。
[0078] 飼養(yǎng)試驗
[0079] 在實施方案中，每個處理（S卩，每個實驗組和對照食物混合物）可以使用四個實驗 單元的重復(fù)（例如，各約60天至120天）。試驗可以在110-L圓形罐（20魚/罐）進行，所 述罐并聯(lián)至由離心泵驅(qū)動并由固體貯槽、和生物反應(yīng)器、過濾器（IOOum袋，碳和紫外線） 組成的閉環(huán)再循環(huán)系統(tǒng)。熱泵可被用作維持為物種特異性生長的最佳溫度必需的。水質(zhì) (例如，溶解氧、pH、溫度、氨和亞硝酸鹽）可以在所有系統(tǒng)中被監(jiān)測。
[0080] 在實施方案中，實驗食物可以根據(jù)魚的大小被遞送，并分成二到五個每天飼養(yǎng)量。 生長性能可以通過在一至四個星期（取決于魚的大小和試驗持續(xù)時間）獲取總質(zhì)量測量來 確定；配給可以根據(jù)增重進行調(diào)整，以允許飽食飼養(yǎng)和減少廢物流。消耗可從來自單個罐 的未食用的飼料的收集每兩周進行評價。未食用的飼料可以干燥至恒定的溫度，冷卻并稱 重以估計飼料轉(zhuǎn)化率。蛋白質(zhì)和能量的消化率可從每個實驗的中點期間手動剝離的排泄物 材料，或經(jīng)由飼養(yǎng)試驗結(jié)束時從下部腸道的剖檢確定。存活率、體重增加、生長速率、健康指 標、飼料轉(zhuǎn)化率、蛋白質(zhì)和能量的消化率、和蛋白質(zhì)功效可以在各處理組之間進行比較?？?進行剖檢魚的近似分析以比較各食物處理之間魚片的組成。根據(jù)飼養(yǎng)試驗?zāi)繕?，如對魚片 成分需要的，可進行氨基酸和脂肪酸的分析。食物處理的飼養(yǎng)試驗響應(yīng)可以與對照（如魚 粉）食物響應(yīng)比較，以確定HQPC食物的性能是否達到或超過對照響應(yīng)。
[0081] 食物和飼養(yǎng)試驗響應(yīng)的統(tǒng)計分析可以以先驗a = 0.05完成。根據(jù)需要，在處理 之間的性能參數(shù)的分析可以以方差或協(xié)方差（Proc Mixed)和事后多重比較的適當?shù)姆治?進行。魚性能和組織響應(yīng)的分析可由非線性模型評價。
[0082] 在實施方案中，本公開內(nèi)容提出使用，例如，GRAS狀態(tài)微生物，以轉(zhuǎn)化大豆薄片/ 粉或DDGS中的纖維和其它碳水化合物為另外的蛋白質(zhì)。還可產(chǎn)生微生物胞外多糖（即膠 狀物），其可有助于擠壓的飼料小粒形成，省去粘合劑的需求。這種微生物膠狀物還可提供 免疫刺激活性，以激活保護魚類遠離自應(yīng)激物產(chǎn)生的常見病原體的先天防御機制。免疫預(yù) 防的物質(zhì)，如葡聚糖、細菌產(chǎn)物、和植物成分，在商業(yè)飼料中的使用增加，以減少由于傳 染病的經(jīng)濟損失，并最小化抗生素的使用。本公開內(nèi)容的微生物還產(chǎn)生胞外肽酶，這將增加 代謝過程中谷物蛋白質(zhì)的消化率和吸收，提供更高的飼料功效和產(chǎn)量。如本文所公開，此微 生物溫育方法提供了有價值的、可持續(xù)的水產(chǎn)養(yǎng)殖飼料，其每單位蛋白質(zhì)比SPC和魚粉更 便宜。
[0083] 如公開的，本發(fā)明的微生物可代謝大豆薄片/粉或DDGS中的個體碳水化合物，產(chǎn) 生細胞量（蛋白質(zhì)）和微生物膠狀物兩者。這些微生物的不同菌株還增強纖維解構(gòu)。本發(fā) 明的微生物還可將大豆和玉米的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化成更易消化的肽和氨基酸。在實施方案中，以 下操作可以被執(zhí)行：1)確定使用本公開內(nèi)容的精選微生物轉(zhuǎn)化預(yù)處理的大豆蛋白質(zhì)、油料 種子蛋白質(zhì)、DDGS和類似物，以至少45%的蛋白質(zhì)濃度產(chǎn)生高品質(zhì)的蛋白質(zhì)濃縮物（HQPC) 的功效，及2)評價HQPC代替魚粉的功效。在實施方案中，可以進行優(yōu)化大豆、油料種子、及 DDGS預(yù)處理和轉(zhuǎn)化條件，以改善微生物的性能和強壯性，對商業(yè)重要的魚類的范圍測試所 得的生長飼料，驗證方法成本和能量需求，并完成規(guī)?；蜕虡I(yè)化的步驟。在實施方案中， 本公開內(nèi)容的HQPC可以能夠代替至少50%的魚粉，同時提供更高的生長速率和轉(zhuǎn)化效率。 生產(chǎn)成本應(yīng)低于商業(yè)大豆蛋白質(zhì)濃縮物（SPC)且基本上低于魚粉（包括產(chǎn)量）。
[0084] 圖1和圖2顯示了本公開內(nèi)容的方法：基于植物產(chǎn)物的預(yù)處理，將糖類轉(zhuǎn)化成細胞 量（蛋白質(zhì)）和膠狀物，回收HQSPC并產(chǎn)生水產(chǎn)飼料，并在魚飼養(yǎng)測試中測試所產(chǎn)生的水產(chǎn) 飼料。
[0085] 擠壓預(yù)處理后，可以評價纖維素解構(gòu)酶產(chǎn)生糖類，本公開內(nèi)容的微生物可轉(zhuǎn)化糖 類為蛋白質(zhì)和膠狀物。在實施方案中，可以使用這些酶的連續(xù)省略（sequential omission) 和與纖維素分解微生物共培養(yǎng)的評價。可以評價乙醇沉淀膠狀物，并提高HQPC的離心回 收。干燥后，HQPC可被摻入到實際的食物制劑。在實施方案中，可以配制（與礦物質(zhì)和維 生素預(yù)混物一起）測試生長食物，并可以在以商業(yè)重要的魚類，如黃鱸或虹鱒魚的飼養(yǎng)試 驗中，進行與魚粉對照和商業(yè)SPC(SPC與豆粉明顯不同，因為它包含痕量的低聚糖和抗原 物質(zhì)大豆球蛋白和b-伴大豆球蛋白）食物的比較?？梢詸z查性能（如生長、飼料轉(zhuǎn)化率、 蛋白質(zhì)功效）、內(nèi)臟的特性、和腸道組織學(xué)，以評價魚的響應(yīng)。
[0086] 在其它實施方案中，通過確定最佳預(yù)處理和轉(zhuǎn)化條件同時最小化程序輸入，改善 微生物的性能和強壯性，對一系列商業(yè)重要的魚類測試所得的生長飼料，驗證方法成本和 能量需求，并完成對規(guī)?；蜕虡I(yè)化的初步步驟，可進行HQPC生產(chǎn)方法的優(yōu)化。
[0087] 在過去的幾年中，少數(shù)設(shè)施已安裝了在乙醇生產(chǎn)方法之前去除玉米殼和胚芽 的干磨機。此干法分提方法產(chǎn)生具有高達42%的蛋白質(zhì)的DDGS(以下稱為干法分提 DDGS(dryfrac DDGS))。在實施方案中，可在預(yù)先確定的以迅速產(chǎn)生用于鱸魚飼養(yǎng)試驗使用 的足夠量的高蛋白質(zhì)DDGS(HP-DDGS)的條件下，對常規(guī)和干法分提DDGS進行比較。在實 施方案中，進行了這種轉(zhuǎn)化的性能（經(jīng)由化學(xué)組成變化）的仔細監(jiān)測，并鑒定了對HP-DDGS 品質(zhì)影響最大的參數(shù)。在一些實施方案中，低油DDGS可以用作轉(zhuǎn)化的底物，其中這些低油 DDGS具有比常規(guī)的DDGS更高的蛋白質(zhì)水平。在相關(guān)的方面，相比傳統(tǒng)DDGS，低油DDGS增 加出芽短梗霉菌的生長率。
[0088] 一些研究小組正在評價以植物來源的蛋白質(zhì)，如大豆粉和DDGS，部分代替魚粉。 然而，較低的蛋白質(zhì)含量、不恰當?shù)陌被崞胶?、及抗營養(yǎng)因子的存在限制了代替水平至 20-40 %。初步生長試驗表明，沒有現(xiàn)有的基于DDGS或SPC的食物提供類似于魚粉對照食 物的性能。在商業(yè)化生產(chǎn)的DDGS和SPC之中一些缺陷已被鑒定，主要是在蛋白質(zhì)和氨基酸 組成方面，這賦予生長性能和魚組合物的變化性。但是，如本文公開的含有營養(yǎng)補充劑（配 制以滿足或超過所有的需求）的HP-DDGS和HQSPC食物提供類似于或超過魚粉對照的生長 結(jié)果。因此，如本文公開的方法及由此開發(fā)的產(chǎn)物提供了更高品質(zhì)的HQSPC或HP-DDGS (相 對于營養(yǎng)需求），并支持等同于或比含有魚粉的食物更好的生長性能。
[0089] 可以以本公開內(nèi)容的魚飼料組合物飼養(yǎng)的魚包括，但不限于，西伯利亞鱘、小 體鱘、閃光鱘、白鱘、巨骨舌魚、日本鰻、美洲鰻、短鰭鰻、長鰭鰻、歐洲鰻、遮目魚（Chanos chanos)、遮目魚（Milkfish)、藍鰓太陽魚、藍綠鱗鰓太陽魚、白莓鱸、黑莓鱸、Asp、卡特拉紕、 金魚、鯽魚、鯪魚、麥瑞加拉鯪魚、草魚、鯉魚、鰱魚、鳙魚、Orangefin Iabeo、Roho labeo、& 萬鯉魚、武昌魚、青魚、金體美洲鳊、Nilem carp、白阿穆爾鳊魚、泰銀紕、Java、斜齒鳊、丁 鯛、池塘泥鰍、Bocachico、金頭鯛、Cachama、Cachama Blanca、Paco、黑鮰、斑點叉尾鮰、鱷科 It魚、藍It魚、六須It魚、巨It (Swai, Tra, Basa)、條紋It魚、泥鰍、菲律賓It魚、香港It魚、北 非鯰魚、大頭鯰魚、Sampa、南美鯰魚、Atipa、白斑狗魚、香魚、白鱒、白鮭、粉紅鮭、大馬哈魚、 銀大馬哈魚、櫻鮭、虹鱒魚、紅大馬哈魚、大鱗大馬哈魚、大西洋鮭魚、海鱒、北極紅點鮭、溪 紅點鮭、湖紅點鮭、大西洋鱈魚、銀漢魚、Lai、鋸蓋魚、澳洲肺魚/亞洲海鱸魚、尼羅河鱸魚、 蟲紋石斑魚、金鱸魚、條紋鱸魚、白鱸、歐洲鱸魚、香港石斑魚、寶石石斑魚、鱸滑石斑魚、斑 點東星斑、銀鱸、白鱸、寶石鱸、大口黑鱸、小口黑鱸、歐洲鱸、梭鱸（Zander，Pike-perch)、黃 鱸、加拿大梭鱸、大眼梭鱸、竹莢魚、紅鮒、青鮒鰺、卵形鯧鰺、佛羅里達州鯧、谷氏鯧、日本竹 莢魚、軍曹魚、紅樹林紅鯛魚、黃尾笛鯛、黑鯛、白鯛魚、深紅鯛魚、紅鯛魚、真鯛、金絲鯛、金 頭鯛、紅鼓魚、綠寶麗魚、黑帶鯛、淡水石斑魚、墨西哥銀鱸、Pearlspot、三斑羅非魚、藍羅非 魚、長鰭羅非魚、莫桑比克羅非魚、尼羅羅非魚、羅非魚、荷那龍羅非魚、黑顎羅非魚、倫氏非 鯽、福壽魚、金鮫、大鱗鮫、Gold-spot mullet、Thinlip grey mullet、跳鮫、Tade mullet、烏 鯔、白鯔魚、梭狀鯔、太平洋脂塘鱧、尖塘鱧、白斑臭都魚、點藍子魚、刺藍子魚、南方黑鮪、北 方黑鮪魚、攀鱸、Snakeskin gourami、接吻鱸、巨鱸、黑魚、印尼黑魚、斑點黑魚、條紋黑魚、 大菱鲆、大比目魚（日本牙鰈）、夏日鲆、漠斑牙鲆、北美黃蓋鰈、大西洋大比目魚、綠背鲆、 歐鰨、及其組合。
[0090] 技術(shù)人員可以理解，本公開內(nèi)容的魚飼料組合物可以作為用于藥物活性物質(zhì)如例 如抗微生物劑，和包括抗細菌或病毒感染的疫苗的免疫學(xué)活性的物質(zhì)，及其任意組合的方 便的載體使用。
[0091] 根據(jù)本公開內(nèi)容的魚飼料組合物可以以液體、可傾倒的乳劑、或糊狀的形式、或以 干燥的形式，例如作為顆?；蛐×?、粉末、或作為薄片被提供。當魚飼料組合物作為乳劑，水 包脂的乳劑被提供時，其可以以相對濃縮的形式。這樣濃縮的乳劑形式，也可以被稱為預(yù)乳 齊IJ，因為它可以以一個或多個步驟在水介質(zhì)中稀釋，以提供用于生物的最終的富集培養(yǎng)基 (enrichment medium)〇
[0092] 在實施方案中，如公開的用于基于微生物的方法的含有纖維素的起始材料是玉 米。玉米的大約三分之二是淀粉，淀粉在發(fā)酵和蒸餾過程中轉(zhuǎn)化為乙醇和二氧化碳。剩余 的營養(yǎng)物或發(fā)酵產(chǎn)物可產(chǎn)生冷凝蒸餾可溶物或酒糟如DDGS，它可以在飼料產(chǎn)物中使用。在 一般情況下，方法包括玉米的干磨或研磨的初始準備步驟。然后對加工的玉米進行水解并 添加酶以在糖化步驟分解主要淀粉組分。允許隨后的發(fā)酵步驟在添加了根據(jù)本公開的實施 方案提供的微生物（如酵母）后繼續(xù)進行以產(chǎn)生氣態(tài)產(chǎn)物如二氧化碳。進行發(fā)酵用于產(chǎn)生 乙醇，其可以從發(fā)酵液中被蒸餾。然后可干燥發(fā)酵培養(yǎng)基的剩余物，以產(chǎn)生包括DDGS的發(fā) 酵產(chǎn)物。這個步驟通常包括通過離心的固/液分離方法，其中固相組分可以被收集。包括 過濾和噴霧干燥技術(shù)的其它的方法可用于實現(xiàn)這樣的分離。然后可對液相組分進行進一步 的蒸發(fā)步驟，可以濃縮可溶性副產(chǎn)物，例如糖、甘油和氨基酸，成為稱為糖漿或濃縮的玉米 可溶物（CCS)的材料。CCS然后可與固相組分重組，干燥為溫育產(chǎn)物（DDGS)。應(yīng)當理解，本 發(fā)明組合物可以應(yīng)用于基于干磨的新的或現(xiàn)有的乙醇工廠，以提供集成的乙醇產(chǎn)生方法， 其還產(chǎn)生具有增加的價值的發(fā)酵產(chǎn)物。
[0093] 在實施方案中，根據(jù)本公開內(nèi)容產(chǎn)生的溫育產(chǎn)物具有比常規(guī)發(fā)酵產(chǎn)物更高的商業(yè) 價值。例如，溫育產(chǎn)物可包括具有改善的氨基酸和微量營養(yǎng)元素含量的增強的干燥的固體。 因此可以提供"黃金色"產(chǎn)物，相比于深色的HQSP其通常表示較高的氨基酸消化率。例如， 根據(jù)本文的實施方案，可產(chǎn)生淺色的HQSP，其相比于通常具有較少的營養(yǎng)價值的相對較深 色的產(chǎn)物具有增加的賴氨酸濃度。產(chǎn)物的顏色可以是發(fā)酵產(chǎn)物或HQSP的品質(zhì)和營養(yǎng)物質(zhì) 消化率的評價中的重要因素或指標。顏色作為干燥過程中暴露于過量的熱的指標使用，所 述過量的熱引起游離氨基基團和糖的焦糖化和美拉德反應(yīng)（Maillard reaction),降低了 某些氨基酸的品質(zhì)。
[0094] 干磨或研磨乙醇產(chǎn)生方法的基本步驟可如下所述：粉碎或研磨玉米或其它谷物 產(chǎn)物、糖化、發(fā)酵、和蒸餾。例如，選擇的全玉米?？赏ǔＲ缘湫偷劐N式粉碎機或滾筒粉碎 機粉碎或研磨。顆粒尺寸可影響蒸煮水合和隨后的酶促轉(zhuǎn)化。然后粉碎或研磨的玉米可 與水混合，制作被蒸煮并冷卻的糊狀物。在此轉(zhuǎn)化的初始步驟期間包括酶可以是有用的， 以降低凝膠淀粉的粘度。然后可將混合物轉(zhuǎn)移至糖化反應(yīng)器中，維持在選定的溫度，如 140 T，在那里淀粉通過添加糖化酶轉(zhuǎn)化為可發(fā)酵的糖如葡萄糖或麥芽糖。轉(zhuǎn)化的糊狀物 可被冷卻至所需的溫度，例如84 T，并供應(yīng)至發(fā)酵反應(yīng)器，在那里可發(fā)酵糖通過使用根據(jù) 本公開內(nèi)容提供的微生物的精選的菌株轉(zhuǎn)化成二氧化碳，相比更傳統(tǒng)的成分，例如釀酒酵 母（Saccharomyces yeasts),其產(chǎn)生更富營養(yǎng)的發(fā)酵產(chǎn)物。得到的產(chǎn)物可以被閃蒸以分離 出二氧化碳，且得到的液體可以被供應(yīng)至由蒸餾塔和汽提塔構(gòu)成的回收系統(tǒng)中。乙醇流可 被引導(dǎo)至分子篩，在那里剩余的水用吸附技術(shù)除去。以少量的汽油變性純化的乙醇，可產(chǎn) 生燃料級乙醇。另一種產(chǎn)物可通過進一步純化初始餾分乙醇以除去雜質(zhì)被產(chǎn)生,產(chǎn)生大約 99. 95%的非燃料用途的乙醇。
[0095]酒糟（whole stillage)可以從蒸饋裝置的底部抽出并離心產(chǎn)生濕酒糟顆粒 (distiller's wet grains，DWG)和酒糟水（thin stillage)(液體）。DWG 可以以 55-65% 水分離開離心機，并可被作為牛的飼料濕地銷售，或干燥作為根據(jù)本公開內(nèi)容提供的增強 的發(fā)酵產(chǎn)物。這些產(chǎn)物包括可在本文中稱為干酒糟（distiller' s dried grains，DDG)的 增強的最終產(chǎn)物。使用蒸發(fā)器，酒糟水（液體）可以被濃縮形成酒糟廢液（distiller' s solubles)，其可以被加回酒糟過程流并與其合并和干燥。根據(jù)本公開內(nèi)容的實施方案的此 合并的產(chǎn)物可以作為具有增加氨基酸和微量營養(yǎng)元素含量的增強的發(fā)酵產(chǎn)物銷售。應(yīng)當理 解，本公開內(nèi)容的各種概念可應(yīng)用于除本文說明的以外該領(lǐng)域已知的其它發(fā)酵方法。
[0096] 本發(fā)明另一方面涉及具有增強的濃度的營養(yǎng)物并包括微生物的全價魚粉組合物， 其特征在于增強的濃度的營養(yǎng)物，所述營養(yǎng)物例如，但不限于，脂肪、脂肪酸、脂類，如磷脂、 維生素、必需氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物、留醇、酶、和微量礦物質(zhì)，如鐵、銅、鋅、錳、鈷、 碘、硒、鑰、鎳、氟、|凡、錫、娃、及其組合。
[0097] 在本公開內(nèi)容的溫育方法中，碳源可被微生物水解為其組分糖以產(chǎn)生醇和其它氣 態(tài)產(chǎn)物。氣態(tài)產(chǎn)物包括二氧化碳且醇包括乙醇。溫育方法后獲得的溫育產(chǎn)物通常有更高的 商業(yè)價值。在實施方案中，相比缺乏微生物的那些產(chǎn)物，包含微生物的溫育產(chǎn)物具有增強的 營養(yǎng)物含量。微生物可存在于溫育系統(tǒng)、溫育肉湯和/或溫育生物質(zhì)中。溫育肉湯和/或 生物質(zhì)可被干燥（例如，噴霧干燥），以產(chǎn)生具有增強含量的營養(yǎng)物含量的溫育產(chǎn)物。
[0098] 例如，根據(jù)本公開內(nèi)容，溫育方法后回收的耗盡、干燥的固體是增強的。這些溫育 產(chǎn)物通常是無毒的、可生物降解、容易得到、價格低廉、且營養(yǎng)物豐富。微生物的選擇和溫育 條件對產(chǎn)生作為飼料或營養(yǎng)補充劑使用的低毒性或無毒性的溫育產(chǎn)物是重要的。盡管葡萄 糖是從谷物淀粉的水解產(chǎn)生的主要的糖，通常它不是碳水化合物產(chǎn)生的唯一的糖。不同于 由傳統(tǒng)的干磨乙醇生產(chǎn)方法產(chǎn)生的SPC或DDG，其包含了大量的非淀粉的碳水化合物（例 如，作為中性洗滌劑纖維測量的百分比高達35%的纖維素和阿拉伯木聚糖，按干重計算）， 本發(fā)明的由非淀粉的碳水化合物的酶水解產(chǎn)生的富含營養(yǎng)物的溫育產(chǎn)物對非反芻動物更 適口和可消化。
[0099] 本公開內(nèi)容的富含營養(yǎng)物的溫育產(chǎn)物可以具有以重量計從至少約1 %至約95% 的營養(yǎng)物含量。營養(yǎng)物含量優(yōu)選在以重量計至少約10% -20 %、20 % -30 %、30 % -40%、 40% -50%、50% -60%、60% -70%、和70% -80%的范圍內(nèi)。可用的營養(yǎng)物含量可以取決 于其所飼養(yǎng)的動物，和其余食物的背景，及在動物的生命周期的階段。例如，肉牛需要的組 氨酸比奶牛少。為飼養(yǎng)動物選擇合適的營養(yǎng)物含量是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
[0100] 溫育產(chǎn)物可制備為噴霧干燥的生物質(zhì)產(chǎn)物。任選地,生物質(zhì)可以通過已知的方法， 如離心、過濾、分離、傾析、分離和傾析的組合、超濾或微濾被分離。生物質(zhì)溫育產(chǎn)物可被進 一步處理以促進過瘤胃（rumen bypass)。在實施方案中，生物質(zhì)產(chǎn)物可以從溫育培養(yǎng)基中 分離，噴霧干燥，并任選的處理，以調(diào)節(jié)過瘤胃，并添加到飼料中作為營養(yǎng)源。除了在含有微 生物的溫育方法中產(chǎn)生營養(yǎng)富含的溫育產(chǎn)物，營養(yǎng)富含的溫育產(chǎn)物也可以在轉(zhuǎn)基因植物系 統(tǒng)中生成。用于產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植物系統(tǒng)的方法是本領(lǐng)域已知的?？蛇x地，當微生物宿主分泌 營養(yǎng)內(nèi)容時，可以從通過溫育產(chǎn)生的生物質(zhì)分離富含營養(yǎng)物的肉湯，且澄清的肉湯可被用 作動物飼料成分，例如，以液體形式或噴霧干燥形式。
[0101] 使用微生物的溫育方法后得到的溫育產(chǎn)物可以作為動物飼料或作為人的食品補 充劑。溫育產(chǎn)物包括至少一種成分，其具有來自非動物來源（例如，細菌、酵母、和/或植 物）的增強的營養(yǎng)物含量。特別是，溫育產(chǎn)物富含以下的至少一種或多種：脂肪、脂肪酸、 脂類，如磷脂、維生素、必需氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物、留醇、酶、和微量礦物質(zhì)，如鐵、 銅、鋅、錳、鈷、碘、硒、鑰、鎳、氟、釩、錫和硅。在實施方案中，肽含有至少一種必需氨基酸。 在其它實施方案中，必需氨基酸被封裝在溫育反應(yīng)中使用的本發(fā)明的修飾的微生物內(nèi)。在 實施方案中，必需氨基酸包含在由微生物表達的異源多肽中。當需要時，在合適的微生物中 (例如，真菌）表達異源多肽，并儲存在包涵體中。
[0102] 在實施方案中，溫育產(chǎn)物具有高的營養(yǎng)物含量。結(jié)果是，可以在全價動物飼料中 使用較高比例的溫育產(chǎn)物。在實施方案中，飼料組合物包括按重量計至少約15%的溫育產(chǎn) 物。在全價飼料、或食物中，這種材料將與其它材料一起飼養(yǎng)。根據(jù)其它材料的營養(yǎng)物含 量、和/或被提供該飼料的動物的營養(yǎng)需求，修改的溫育產(chǎn)物的范圍可以從飼料的15%至 飼料的100%。在實施方案中，由于高營養(yǎng)物含量，本發(fā)明的溫育產(chǎn)物可以提供較低比例的 混合。在其它實施方案中，本發(fā)明的溫育產(chǎn)物可提供非常高的級分飼養(yǎng)，例如超過75%。在 合適的實施方案中，飼料組合物包括至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、 至少約40 %、至少約45 %、至少約50 %、至少約60 %、至少約70 %、或至少約75 %的本發(fā)明 的溫育產(chǎn)物。通常，飼料組合物包括按重量計至少約20%的溫育產(chǎn)物。更常見地，飼料組合 物包括按重量計至少約 15-25%、25-20%、20-25%、30% -40%、40% _50%、50% -60%、或 60% -70%的溫育產(chǎn)物。當需要時，本發(fā)明的溫育產(chǎn)物可以作為飼料的唯一來源使用。
[0103] 為了多種用途，例如，為了增加重量和動物健康的總體改善，全價魚粉組合物可具 有關(guān)于一種或多種必需氨基酸的增強的氨基酸含量。因為在溫育產(chǎn)物中游離氨基酸的存在 和/或包括必需氨基酸的蛋白質(zhì)或肽的存在，全價魚粉組合物可具有增強的氨基酸含量。 必需氨基酸可包括精氨酸、半胱氨酸、組氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、蘇氨 酸、?；撬?、色氨酸、和/或纈氨酸，其可作為游離氨基酸或作為富含所選擇的氨基酸的蛋 白質(zhì)或肽的一部分存在于全價動物飼料中。富含至少一種必需氨基酸的肽或蛋白質(zhì)在肽或 蛋白質(zhì)中可具有每總氨基酸殘基至少1 %的必需氨基酸殘基、在肽或蛋白質(zhì)中每總氨基酸 殘基至少5%的必需氨基酸殘基、或在肽或蛋白質(zhì)中每總氨基酸殘基至少10%的必需氨基 酸殘基。通過向動物飼養(yǎng)營養(yǎng)平衡的食物，進行營養(yǎng)物含量的最大利用，實現(xiàn)可比較的生長 率、牛奶產(chǎn)生需要較少的飼料，或減少存在于排泄物的營養(yǎng)物，減少廢物的生物負載。
[0104] 具有增強的含量的必需氨基酸的全價魚粉組合物，可具有相對于粗蛋白質(zhì)和總氨 基酸含量的重量的至少2. Owt%的必需氨基酸含量（包括游離的必需氨基酸和存在于蛋 白質(zhì)或肽中的必需氨基酸），且更適宜地，相對于粗蛋白質(zhì)和總氨基酸含量的重量的至少 5. Owt %。全價魚粉組合物包括來自于微生物的其它營養(yǎng)物，包括但不限于，脂肪、脂肪酸、 脂類，如磷脂、維生素、碳水化合物、留醇、酶、及微量礦物質(zhì)。
[0105] 全價魚粉組合物可包括全價飼料形式組合物、濃縮形式組合物、摻合物形式組合 物、及基本形式組合物。如果組合物是以全價飼料的形式，百分比營養(yǎng)物水平可以是百分之 約10至約25,更適宜地百分之約14至約24,其中營養(yǎng)物獲得自溫育產(chǎn)物中的微生物；然 而，如果組合物是以濃縮物的形式，營養(yǎng)物水平可以是百分之約30至約50,更適宜地百分 之約32至約48。如果組合物是以摻合物（blender)的形式，組合物中的營養(yǎng)物水平可以 是百分之約20至約30,更適宜地百分之約24至約26 ;及如果組合物是以基本混合物的形 式，組合物中的營養(yǎng)物水平可以是百分之約55至約65。除在本文另有說明外，百分比是基 于重量百分比計。如果HQPC的單一營養(yǎng)物例如Lys是高的，它將以低比例用作補充劑；如 果它的氨基酸和維生素如維生素A和E是平衡的，它將是更全價的飼料且將以更高的比例 飼養(yǎng)并補充有低蛋白質(zhì)、低營養(yǎng)飼料原料，如玉米秸桿。
[0106]魚粉組合物可包括存在于溫育產(chǎn)物中的具有至少約2%的必需氨基酸含量的肽或 粗蛋白質(zhì)級分。在實施方案中，肽或粗蛋白質(zhì)級分可具有至少約3%、至少約5%、至少約 10%、至少約15%、至少約20%、至少約30%、至少約40%的必需氨基酸含量，和在實施方 案中，至少約50%。在實施方案中，肽可以是100%的必需氨基酸。通常，魚粉組合物可包括 存在于溫育產(chǎn)物中的具有高達約10%的必需氨基酸含量的肽或粗蛋白質(zhì)級分。更常見地， 魚粉組合物可包括存在于溫育產(chǎn)物中的具有約2-10%、3. 0-8. 0%、或4. 0-6. 0%的必需氨 基酸含量的肽或粗蛋白質(zhì)級分。
[0107]魚粉組合物可包括存在于溫育產(chǎn)物中的具有至少約2%的賴氨酸含量的肽或粗蛋 白質(zhì)級分。在實施方案中，肽或粗蛋白質(zhì)級分可具有至少約3%、至少約5%、至少約10%、 至少約15%、至少約20%、至少約30%、至少約40%的賴氨酸含量，和在實施方案中，至少 約50%。通常，魚粉組合物可包括具有高達約10%的賴氨酸含量的肽或粗蛋白質(zhì)級分。如 果需要，魚粉組合物可包括具有約2-10 %、3. 0-8. 0%、或4. 0-6. 0%的賴氨酸含量的肽或 粗蛋白質(zhì)級分。
[0108]魚粉組合物可包括溫育產(chǎn)物中從約lg/Kg的干固體至900g/Kg的干固體的營養(yǎng) 物。在實施方案中，魚粉組合物中的營養(yǎng)物可以以至少約2g/Kg的干固體、5g/Kg的干固體、 10g/Kg的干固體、50g/Kg的干固體、100g/Kg干固體、200g/Kg的干固體、及約300g/Kg的干 固體存在。在實施方案中，營養(yǎng)物可以以至少約400g/Kg的干固體、至少約500g/Kg的干固 體、至少約600g/Kg的干固體、至少約700g/Kg的干固體、至少約800g/Kg的干固體、和/或 至少約900g/Kg的干固體存在。
[0109]魚粉組合物可包括存在于溫育產(chǎn)物中的具有約lg/Kg干固體至900g/Kg的干固體 含量的必需氨基酸或含有至少一種必需氨基酸的肽。在實施方案中，在魚粉組合物中的必 需氨基酸或含有至少一種必需氨基酸的肽可以以至少約2g/Kg的干固體、5g/Kg的干固體、 10g/Kg干固體、50g/Kg的干固體、100g/Kg的干固體、200g/Kg的干固體、及約300g/Kg的干 固體存在。在實施方案中，必需氨基酸或含有至少一種必需氨基酸的肽可以以至少約400g/ Kg的干固體、至少約500g/Kg的干固體、至少約600g/Kg的干固體、至少約700g/Kg的干固 體、至少約800g/Kg的干固體、和/或至少約900g/Kg的干固體存在。
[0110] 全價魚粉組合物可包含在溫育期間形成的以生物質(zhì)的形式的富含營養(yǎng)物的溫育 產(chǎn)物和至少一種另外的營養(yǎng)組分。在另一個實例中，魚粉組合物包含從溫育期間形成的溫 育肉湯溶解和懸浮的富含營養(yǎng)物的溫育產(chǎn)物和至少一種另外的營養(yǎng)組分。在進一步的實施 方案中，魚粉組合物具有粗蛋白質(zhì)級分，其包括富含至少一種必需氨基酸的蛋白質(zhì)。魚粉組 合物可以配制以提供必需氨基酸的改善的平衡。
[0111] 對于包括DDGS的組合物，全價組合物形式可包含一種或多種成分，如麥麩 ("wheat mids")、玉米、大豆粉、玉米蛋白粉、酒糟或酒糟及可溶物、鹽，常量礦物質(zhì)、微量礦 物質(zhì)和維生素。其它潛在的成分通?？砂?，但不限于向日葵粉、麥芽和大豆殼。摻合物形 式的組合物可包含麥麩、玉米蛋白粉、酒糟或酒糟及可溶物、鹽、常量礦物質(zhì)、微量礦物質(zhì)和 維生素?？蛇x擇的成分可通常包括，但不限于，玉米、大豆粉、向日葵粉、棉籽粉、麥芽和大豆 殼。基本形式組合物可包含麥麩、玉米蛋白粉、和酒糟或酒糟及可溶物?？蛇x擇的成分可通 常包括，但不限于，大豆粉、向日葵粉、麥芽、常量礦物質(zhì)、微量礦物質(zhì)和維生素。
[0112] 微生物中的高度不飽和脂肪酸（HUFA)，當暴露于氧化條件下可轉(zhuǎn)化成為不希望的 不飽和脂肪酸或成為飽和脂肪酸。然而，通過向飼料中引入合成的抗氧化劑或天然存在的 抗氧化劑,如胡蘿卜素、維生素E和維生素C，〇-3HUFA的飽和可被減少或阻止。合成 的抗氧化劑，如BHT、BHA、TBHQ或乙氧喹，或天然抗氧化劑如生育酚，通過將它們添加到產(chǎn) 物中可被摻入到食品或飼料產(chǎn)物，或它們可以通過在合適的生物中原位生產(chǎn)被摻入。以這 種方式摻入的抗氧化劑的量取決于，例如，隨后的使用需求，例如產(chǎn)物配制、包裝方法、和希 望的保質(zhì)期。
[0113] 溫育產(chǎn)物或含有本公開內(nèi)容的溫育產(chǎn)物的全價魚粉，也可以作為用于人類消耗的 營養(yǎng)補充劑使用，如果方法以人等級的原材料開始，且貫穿方法遵守人類食品的質(zhì)量標準。 如本文公開的，溫育產(chǎn)物或全價飼料是高營養(yǎng)物含量的。營養(yǎng)物如蛋白質(zhì)和纖維與健康食 物有關(guān)?？砷_發(fā)在食品中利用本公開內(nèi)容的溫育產(chǎn)物或全價飼料的食譜，所述食品如谷 類食品、薄脆餅干、餡餅、餅干、糕餅、披薩餅皮、熏香腸、肉丸、奶昔，并以食用食品的任何形 式。另一種選擇可以是開發(fā)本公開內(nèi)容的溫育產(chǎn)物或全價飼料為零食或零食棒，類似于燕 麥棒（granola bar),其可容易地進食，方便分發(fā)。零食棒可包括來自谷物的蛋白質(zhì)、纖維、 胚芽、維生素、礦物質(zhì)，以及營養(yǎng)制品，如葡萄糖胺、HUFA、或輔因子，如維生素Q-10。
[0114] 包含本發(fā)明的溫育產(chǎn)物的魚粉還可補充香料。具體香料的選擇將取決于被提供飼 料的動物。天然和人工的香料和芳香劑，可用于使得飼料更容易接受和適口。這些補充劑 可與所有的成分良好地混合，且可作為液體或干產(chǎn)物的形式獲得。將在動物飼料中補充的 合適的香料、引誘劑、和芳香劑，包括但不限于魚信息素、胡蘆巴、香蕉、櫻桃、迷迭香、小茴 香、胡蘿卜、薄荷牛至（peppermint oregano)、香草，茴香、加朗姆、楓樹、焦糖、柑橘油、丁酸 乙酯、薄荷醇、蘋果、肉桂，其任何天然或人工的組合。香料和芳香劑可在不同的動物之間互 換。類似地，人工的或天然的各種水果香料，可加入到用于人類消耗的包括本發(fā)明的溫育產(chǎn) 物的食品補充劑。
[0115] 本公開內(nèi)容的溫育產(chǎn)物或全價飼料的保質(zhì)期通?？梢员热狈ξ⑸锏臏赜a(chǎn)物 的保質(zhì)期更長。保質(zhì)期可以取決于因素，例如，產(chǎn)物的水分含量、多少空氣可以流過飼料塊、 環(huán)境條件和防腐劑的使用?？上蛉珒r飼料加入防腐劑以增加保質(zhì)期至幾周和幾個月。其它 增加保質(zhì)期的方法包括類似青貯飼料管理的管理，如與其它飼料混合和包裝，以塑料覆蓋 或裝袋。涼爽的環(huán)境，防腐劑和從飼料塊排出空氣均延長濕副產(chǎn)物的保質(zhì)期。全價飼料可 以在煤倉（bunker)或青貯窖袋中儲存。將濕的溫育產(chǎn)物或全價飼料干燥也可增加產(chǎn)物的 保質(zhì)期，并改善一致性和品質(zhì)。
[0116] 本公開內(nèi)容的全價飼料可以被長時期儲存。保質(zhì)期可以通過青貯、添加防腐劑如 有機酸、或與其它飼料如大豆殼混合而延長。貨物桶（Commodity bins)或大容量存儲倉庫 可用于儲存全價飼料。
[0117] 如本文所用，"室溫"是在標準壓力下約25°C。
[0118] 下面的實施例是說明性的，并不旨在限制本公開的主題的范圍。 實施例
[0119] 實施例1.高品質(zhì)大豆蛋白質(zhì)濃縮物（HQSPC)。
[0120] 圖1顯示了總體的方法：預(yù)處理白薄片，將糖轉(zhuǎn)化為細胞量（蛋白質(zhì)）和膠狀物， 回收HQSPC和產(chǎn)生水產(chǎn)飼料（圖2)，并在魚飼養(yǎng)試驗中測試產(chǎn)生的水產(chǎn)飼料。首先在15% 的水分含量，50°C，及75rpm對白薄片進行擠壓預(yù)處理（BRABENDER PLASTI-CORDER SINGLE SCREW EXTRUDER Model PL2000, Hackensack, NJ)以破壞結(jié)構(gòu)，并允許在隨后的糖化中增加 水解酶的侵入。這些條件提供了針對在筒兩側(cè)的脊形通道的剪切作用，且先前已經(jīng)觀察到， 這導(dǎo)致了酶水解后50-70 %更大的糖釋放。然后將擠壓的白薄片研磨通過3_錘磨機篩，與 水混合以達到10%的固體加載率，并調(diào)節(jié)至PH5。加熱以對糊狀物進行巴氏滅菌或消毒后， 將糊狀物冷卻到約50°C，并加入纖維素和低聚糖-解構(gòu)酶（共15ml/kg白薄片）以水解聚合 物為單糖（4_24h水解）。包括的具體劑量是6 % CELLIC CTEK (每克葡聚糖）、0. 3 % CELLIC HTEK (每克總固體）、0. 015% N0V0ZYME960 (每克固體）。然后將所得的糊狀物冷卻至30°C， 調(diào)節(jié)pH至3-5,接種出芽短梗霉菌（1 % v/v)，并在50至200rpm的攪拌和0. 5L/L/min的充 氣速率下溫育4-5天以轉(zhuǎn)化糖成為蛋白質(zhì)和膠狀物。在溫育期間，樣品被定期取出，并分析 糖、細胞計數(shù)和膠狀物產(chǎn)生。溫育后，將pH提高到6. 5,并加入乙醇（0. 6L/L肉湯）以沉淀 膠狀物。蛋白質(zhì)、短梗霉聚糖和微生物量（microbial mass) (HQSPC)通過離心回收并干燥， 同時將上清液蒸餾以回收乙醇，且化學(xué)測定剩余的液體用于將來在方法的起始再循環(huán)。然 后在以黃鱸進行的飼養(yǎng)試驗中測試HQSPC，黃鱸是地方市場重要的魚。將以HQSPC配制的測 試生長食物與魚粉和競爭的基于植物的成分相比較。檢查了性能（如生長、飼料轉(zhuǎn)化率、蛋 白質(zhì)功效）、內(nèi)臟的特性、和腸道組織學(xué)，以評價魚的響應(yīng)。
[0121] 使用大豆白薄片及以出芽短梗霉菌的微生物轉(zhuǎn)化的HQSPC，用于HQSPC生產(chǎn)的試 驗性規(guī)模系統(tǒng)。
[0122] 系統(tǒng)包含675L生物反應(yīng)器、變速螺桿泵（variable speed progressive cavity pump)、連續(xù)流離心機、及1x4米的干燥臺。用于675L生物反應(yīng)器的接種物在兩個、5L NEW BRUNSWICK BI0FL03BI0REACT0RS中準備。對于每個試驗，通過以描述的培養(yǎng)出芽短梗霉菌 2-3天制備8-10L量的接種物。這種材料用于接種在675L生物反應(yīng)器中制備的更大量的擠 壓和糖化的白薄片。溫育后，加入乙醇，離心糊狀物以回收濕固體，然后干燥濕固體，并在魚 飼養(yǎng)試驗中使用。通過監(jiān)測轉(zhuǎn)化方法的性能、HQSPC的產(chǎn)量和組成，觀察到若干參數(shù)顯著影 響固體回收率。在大規(guī)模試驗中，如表1所示的參數(shù)被改變。
[0123] 表1.預(yù)試規(guī)模試驗變量和關(guān)鍵性能參數(shù)。
[0124]
【權(quán)利要求】
1. 一種組合物，包括基于非動物的蛋白質(zhì)濃縮物，其中基于干物質(zhì)，所述組合物含有至 少55%的蛋白質(zhì)含量，且沒有可檢測的水蘇糖或棉子糖。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述基于非動物的蛋白質(zhì)濃縮物是從植物材料 中分離的，所述植物材料選自以下組成的組：大豆、花生、油菜籽、油菜、芝麻、棉籽、棕櫚仁、 大麥、葡萄籽、橄欖、紅花、向日葵、椰子核、玉米、椰子、亞麻籽、榛子、小麥、水稻、馬鈴薯、木 薯、豆科植物、亞麻芥籽、芥菜籽、胚芽粉、玉米蛋白粉、蒸餾/釀酒副產(chǎn)物，及其組合。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述組合物的蛋白質(zhì)含量在基于干物質(zhì)的從約 56%至約90%的范圍,所述組合物通過包括以下的方法產(chǎn)生： a) 在高于室溫的溫度擠壓植物材料，以形成糊狀物； b) 添加一種或多種纖維素解構(gòu)酶以釋放糖到所述糊狀物中； c) 以至少一種微生物接種所述酶處理的糊狀物，該微生物轉(zhuǎn)化釋放的糖為蛋白質(zhì)和胞 外多糖； d) 以乙醇或絮凝劑沉淀所得到的蛋白質(zhì)、微生物、及胞外多糖； e) 經(jīng)由水動力回收所沉淀的材料；及 f) 干燥所述沉淀的材料。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述至少一種微生物選自以下組成的組：出 芽短梗霉菌（Aureobasidium pullulans)、硬葡聚糖小核菌（Sclerotium glucanicum)、 少動鞘脂單胞菌（Sphingomonas paucimobilis)、Ralstonia eutropha、深紅紅螺菌 (Rhodospirillum rubrum)、克魯維酵母（Kluyveromyces spp)、畢赤酵母（Pichia spp)、里 氏木霉（Trichoderma reesei)、糖皮側(cè)耳（Pleurotus ostreatus)、根霉（Rhizopus spp), 及其組合。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述植物材料以大豆薄片或大豆粉的形式來自 大豆。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述植物材料來自油料種子。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述植物材料來自干酒糟及可溶物 (distiller's dried grain with solubles, DDGS)〇
8. 根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其中所述蛋白質(zhì)濃縮物包括至少0. Ig羥賴氨酸 /IOOg濃縮物，或至少I. 26g脂類/IOOg濃縮物。
9. 一種動物飼料，所述動物飼料包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物 組成所述動物飼料按重量計的至少約35%至約45%。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的動物飼料食物，其中所述組合物是魚飼料中基于動物的魚 粉的完全代替物。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的動物飼料，其中所述魚飼料被配制用于選自以下組成的 組的魚：西伯利亞鱘、小體鱘、閃光鱘、白鱘、巨骨舌魚、日本鰻、美洲鰻、短鰭鰻、長鰭鰻、歐 洲鰻、遮目魚（Chanos chanos)、遮目魚（Milkfish)、藍鰓太陽魚、藍綠鱗鰓太陽魚、白莓鱸、 黑莓鱸、Asp、卡特拉紕、金魚、鯽魚、鯪魚、麥瑞加拉鯪魚、草魚、鯉魚、鰱魚、鳙魚、Orangefin labeo、Roho labeo、紅萬鯉魚、武昌魚、青魚、金體美洲鳊、Nilem carp、白阿穆爾鳊魚、泰 銀舭、Java、斜齒鳊、丁鯛、池塘泥鰍、Bocachico、金頭鯛、Cachama、Cachama Blanca、Paco、 黑鮰、斑點叉尾鮰、鱷科It魚、藍It魚、六須It魚、巨It (Swai, Tra, Basa)、條紋It魚、泥鰍、 菲律賓鯰魚、香港鯰魚、北非鯰魚、大頭鯰魚、Sampa、南美鯰魚、Atipa、白斑狗魚、香魚、白 鱒、白鮭、粉紅鮭、大馬哈魚、銀大馬哈魚、櫻鮭、虹鱒魚、紅大馬哈魚、大鱗大馬哈魚、大西洋 鮭魚、海鱒、北極紅點鮭、溪紅點鮭、湖紅點鮭、大西洋鱈魚、銀漢魚、Lai、鋸蓋魚、澳洲肺魚 /亞洲海鱸魚、尼羅河鱸魚、蟲紋石斑魚、金鱸魚、條紋鱸魚、白鱸、歐洲鱸魚、香港石斑魚、 寶石石斑魚、鱸滑石斑魚、斑點東星斑、銀鱸、白鱸、寶石鱸、大口黑鱸、小口黑鱸、歐洲鱸、梭 鱸（Pike-perch)、黃鱸、加拿大梭鱸、大眼梭鱸、竹莢魚、紅鮒、青鮒鰺、卵形鯧鰺、佛羅里達 州鯧、谷氏鯧、日本竹莢魚、軍曹魚、紅樹林紅鯛魚、黃尾笛鯛、黑鯛、白鯛魚、深紅鯛魚、紅鯛 魚、真鯛、金絲鯛、金頭鯛、紅鼓魚、綠寶麗魚、黑帶鯛、淡水石斑魚、墨西哥銀鱸、Pearl spot、 三斑羅非魚、藍羅非魚、長鰭羅非魚、莫桑比克羅非魚、尼羅羅非魚、羅非魚、荷那龍羅非魚、 黑顎羅非魚、倫氏非鯽、福壽魚、金鮫、大鱗鮫、Gold-spot mullet、Thinlip grey mullet、跳 鮫、Tade mullet、烏鯔、白鯔魚、梭狀鯔、太平洋脂塘鱧、尖塘鱧、白斑臭都魚、點藍子魚、刺 藍子魚、南方黑鮪、北方黑鮪魚、攀鱸、Snakeskin gourami、接吻鱸、巨鱸、黑魚、印尼黑魚、 斑點黑魚、條紋黑魚、大菱鲆、大比目魚（日本牙鰈）、夏日鲆、漠斑牙鲆、北美黃蓋鰈、大西 洋大比目魚、綠背鲆、歐鰨、及其組合。
12. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的動物飼料，其中相比包括基于動物的魚粉或大豆蛋白質(zhì)濃 縮物的相當?shù)聂~飼料，所述魚飼料在一個或多個性能方面產(chǎn)生更大的性能，所述性能方面 選自以下組成的組：生長、體重增加、蛋白質(zhì)功效比、飼料轉(zhuǎn)化率、總消耗、存活率、和弗爾頓 氏豐滿系數(shù)。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的動物飼料，其中所述魚飼料以小于包括基于動物的魚粉或 大豆蛋白質(zhì)濃縮物的相當?shù)聂~飼料的蛋白質(zhì)含量的粗蛋白質(zhì)含量產(chǎn)生所述性能方面。
14. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的動物飼料，其中所述動物飼料補充有賴氨酸和甲硫氨酸。
15. -種產(chǎn)生基于非動物的蛋白質(zhì)濃縮物的方法，所述方法包括： a. 在高于室溫的溫度擠壓植物材料，以形成糊狀物，并將所述糊狀物轉(zhuǎn)移至生物反應(yīng) 器中； b. 添加一種或多種纖維素解構(gòu)酶以釋放糖到所述生物反應(yīng)器中的所述糊狀物中； c. 以至少一種微生物接種所述酶處理的糊狀物，該微生物轉(zhuǎn)化釋放的糖為蛋白質(zhì)和胞 外多糖； d. 以乙醇、絮凝劑、或其組合沉淀所得到的蛋白質(zhì)、微生物、及胞外多糖； e. 經(jīng)由水動力回收所沉淀的材料；及 f. 干燥所述沉淀的材料。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中擠壓是在約50°C至約170°C之間，以約3:1的壓 縮比，且在足以提供針對筒兩側(cè)的脊形通道的剪切作用的螺桿轉(zhuǎn)速下進行。
17. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，所述方法還包括： 混合擠壓的材料與水以達到在所述生物反應(yīng)器中至少約5%的固體加載率；和 任選地，高壓滅菌并冷卻稀釋的擠壓的材料，其中所述一種或多種纖維素解構(gòu)酶選自 以下組成的組：內(nèi)切木聚糖酶和β-木糖苷酶、糖苷水解酶、β-葡糖苷酶、半纖維素酶活 性，及其組合。
18. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，所述方法還包括： 降低所述酶處理的糊狀物的溫度至約30°C至約37°C之間； 以約2% (v/v)的所述至少一種微生物的24小時培養(yǎng)物接種冷卻的糊狀物，其中所 述至少一種微生物選自以下組成的組：出芽短梗霉菌、硬葡聚糖小核菌、少動鞘脂單胞菌、 Ralstonia eutropha、深紅紅螺菌、克魯維酵母、畢赤酵母、里氏木霉、糙皮側(cè)耳、根霉，及其 組合； 任選地，將所接種的糊狀物以約0. 〇5L/L/min充氣；且 溫育至： i. 糖的利用終止，或 ii. 以所述至少一種微生物培養(yǎng)約96至120小時后。
19. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，所述方法還包括： 加入約0. 6升乙醇/L糊狀物； 離心乙醇處理的糊狀物；和 任選地； 從上清液中回收乙醇； 回收在所述上清液中懸浮的細顆粒； 干燥所回收的細顆粒；和 將回收的細顆粒與干燥的沉淀材料合并。
20. 選自由以下組成的組的出芽短梗霉菌菌株的生物純培養(yǎng)物：NRRL編號50792、NRRL 編號 50793、NRRL 編號 50794、及 NRRL 編號 50795。
【文檔編號】C12P21/04GK104321438SQ201280068854
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2012年12月2日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月2日
【發(fā)明者】威廉·R·吉本斯, 邁克爾·L·布朗 申請人:普萊瑞阿夸泰克公司