高產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌的鑒定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌的鑒定方法，取待測(cè)菌株接種于脫脂奶粉平板培養(yǎng)基上35℃培養(yǎng)24h后，革蘭氏染色，鏡檢；再分別取待測(cè)菌株1.0ml用基因組DNA提取試劑盒提取DNA模板，設(shè)計(jì)合成PCR擴(kuò)增引物，上游引物P1：5＇-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3＇；下游引物P2：5＇-AGTAAGGAGGTGATCCAACCGCA-3＇，進(jìn)行16SrDNA的PCR擴(kuò)增。對(duì)菌株選擇性強(qiáng)，鑒定方法科學(xué)，時(shí)間周期短，效率高。
【專利說(shuō)明】高產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌的鑒定方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及菌株的鑒定方法。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]催化蛋白質(zhì)水解的酶類有很多種類，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、組織蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶和地衣芽孢桿菌蛋白酶等。蛋白酶對(duì)所作用的反應(yīng)底物有嚴(yán)格的選擇性，一種蛋白酶僅能作用于蛋白質(zhì)分子中一定的肽鍵，如胰蛋白酶催化水解堿性氨基酸所形成的肽鍵。蛋白酶廣泛存在于動(dòng)物內(nèi)臟、植物莖葉、果實(shí)和微生物中。微生物蛋白酶主要由霉菌、細(xì)菌,其次由酵母、放線菌生產(chǎn)。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)鑒定枯草芽孢桿菌的方法普遍存在對(duì)菌株選擇性低，鑒定方法不科學(xué)，時(shí)間周期長(zhǎng)，效率低的問(wèn)題。
[0006]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了克服現(xiàn)有【技術(shù)領(lǐng)域】存在的上述缺陷，本發(fā)明的目的在于，提供一種高產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌的鑒定方法，解決現(xiàn)有技術(shù)對(duì)菌株選擇性低，鑒定方法不科學(xué)，時(shí)間周期長(zhǎng)，效率低的問(wèn)題。
[0008]本發(fā)明提供的高產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌的鑒定方法，包括以下步驟:
一、形態(tài)學(xué)鑒定，取待測(cè)菌株接種于脫脂奶粉平板培養(yǎng)基上35°C培養(yǎng)24h后，革蘭氏染色，鏡檢；
二、PCR鑒定，分別取待測(cè)菌株1.0ml用基因組DNA提取試劑盒提取DNA模板，設(shè)計(jì)合成 PCR 擴(kuò)增引物，上游引物 P1: 5 ' - AGAGTTTGATCCTGGCTCAG -3 ;;下游引物 P2:5 '-AGTAAGGAGGTGATCCAACCGCA -3 ;，進(jìn)行 16S rDNA 的 PCR 擴(kuò)增，PCR 反應(yīng)條件為:94°C預(yù)變性lOmin，然后94°C變性lmin，54°C退火lmin，72°C延伸2min，共25個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸IOmin0
[0009]本發(fā)明提供的高產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌的鑒定方法，其有益效果在于，對(duì)菌株選擇性強(qiáng)，鑒定方法科學(xué)、時(shí)間周期短、效率高。
[0010]
【具體實(shí)施方式】
[0011]下面結(jié)合一個(gè)實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明提供的高產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌的鑒定方法進(jìn)行詳細(xì)的說(shuō)明。
[0012]實(shí)施例
[0013]本實(shí)施例的高產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌的鑒定方法，包括以下步驟:
一、形態(tài)學(xué)鑒定，取待測(cè)菌株接種于脫脂奶粉平板培養(yǎng)基上35°C培養(yǎng)24h后，革蘭氏染色，鏡檢；
二、PCR鑒定，分別取待測(cè)菌株1.0ml用基因組DNA提取試劑盒提取DNA模板，設(shè)計(jì)合成 PCR 擴(kuò)增引物，上游引物 P1: 5 ' - AGAGTTTGATCCTGGCTCAG -3 ;;下游引物 P2:5 '-AGTAAGGAGGTGATCCAACCGCA -3 ;，進(jìn)行 16S rDNA 的 PCR 擴(kuò)增，PCR 反應(yīng)條件為:94°C預(yù)變性lOmin，然后94°C變性lmin，54°C退火lmin，72°C延伸2min，共25個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸IOmin0
[0014]PCR產(chǎn)物純化后連接克隆載體并轉(zhuǎn)化，酶切鑒定后送至上海Invitrogen公司測(cè)序，所測(cè)序列提交GenBank進(jìn)行同源性比較。所得序列為:
【權(quán)利要求】
1.一種高產(chǎn)蛋白酶枯草芽孢桿菌的鑒定方法，其特征在于:包括以下步驟: 一、形態(tài)學(xué)鑒定，取待測(cè)菌株接種于脫脂奶粉平板培養(yǎng)基上35°C培養(yǎng)24h后，革蘭氏染色，鏡檢； 二、PCR鑒定，分別取待測(cè)菌株1.0ml用基因組DNA提取試劑盒提取DNA模板，設(shè)計(jì)合成 PCR 擴(kuò)增引物，上游引物 P1: 5 ' - AGAGTTTGATCCTGGCTCAG -3 ;;下游引物 P2:5 '-AGTAAGGAGGTGATCCAACCGCA -3 ;，進(jìn)行 16S rDNA 的 PCR 擴(kuò)增，PCR 反應(yīng)條件為:94°C預(yù)變性lOmin，然后94°C變性lmin，54°C退火lmin，72°C延伸2min，共25個(gè)循環(huán)，最后72°C延伸IOmin0`
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK103882097SQ201210561060
【公開日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2012年12月21日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月21日
【發(fā)明者】張述智, 夏偉, 朱紹輝, 張 浩, 王曉麗, 徐權(quán)汗, 李之詳, 許團(tuán)輝 申請(qǐng)人:青島中仁藥業(yè)有限公司