一種高通量清露酊微生物檢查方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，本發(fā)明的目的在于提供一種清露酊微生物限度檢查的方法，有助于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)方面的研究。薄膜過(guò)濾使微生物被濾膜充分截留,再用適量無(wú)干擾的沖洗液洗去供試品的干擾,就能準(zhǔn)確地進(jìn)行樣品的微生物限度檢查。沖洗液的用量是關(guān)鍵,如過(guò)量沖洗,會(huì)使菌體受損,不利于生長(zhǎng),從而影響回收率,還會(huì)使濾膜受損,孔徑改變,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。反之,如沖洗不充分,樣品抗菌作用就不能徹底消除,也無(wú)法保證實(shí)驗(yàn)效果的準(zhǔn)確性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種高通量清露酊微生物檢查方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種清露酊微生物限度檢查的方法，有助于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)方面今后對(duì)微生物的研究。
【背景技術(shù)】
[0002]清露酊較合理地運(yùn)用了中醫(yī)治標(biāo)固本，滋陰潤(rùn)喉，清熱解毒辨證施治。處方中桔梗、甘草清利咽喉載藥上行，配枳殼理氣升降氣機(jī)。麥冬、天冬、石斛、生地、熟地滋陰清熱潤(rùn)喉消炎。全方達(dá)到滋陰潤(rùn)喉，清熱解毒(利咽)。主治急慢性咽炎、喉頭水腫。本品氣味方香純正，口感良好，適宜患者服用，未見(jiàn)不良反應(yīng)，為臨床治療急慢性咽炎、喉頭水腫良藥。
[0003]微生物限度檢查法系檢查法規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法，也是評(píng)價(jià)生產(chǎn)企業(yè)的要用原料、輔料、設(shè)備、器具、工藝流程、環(huán)境和操作者衛(wèi)生狀況的重要手段和依據(jù)。檢查項(xiàng)目包括染菌量及控制菌檢查。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]清露酊由桔梗、石斛、枳實(shí)、生地、甘草、熟地、麥冬和天冬等中藥組成，有治療咽痛、咳喘和清熱解毒功效，放置后出現(xiàn)少量沉淀，對(duì)質(zhì)量功效無(wú)影響。清露酊含有15%乙醇，低醇環(huán)境對(duì)微生物生長(zhǎng)有干擾，可影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。試驗(yàn)表明，按常規(guī)方法測(cè)定其回收率僅為50%~60%，不符合要求(應(yīng)為70%以上)。通過(guò)采用薄膜過(guò)濾法測(cè)定，可以減少乙醇對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0005]1、供試液制備取樣品的 上清液加稀釋液制成供試液。
[0006]2、菌液制備按中國(guó)藥典2005年版二部方法制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液，另配制濃度為l(T100cfu/ml大腸埃希菌液。
[0007]3、取供試液加濾器中經(jīng)薄膜過(guò)濾后沖洗，在最后一次的沖洗液中加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，過(guò)濾。取出濾膜，菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)。每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，計(jì)數(shù)。
[0008]實(shí)施例1
1、供試液制備取樣品的上清液10 ml，加稀釋液至100ml，制成I 10供試液。
[0009]2、菌液制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液均按中國(guó)藥典2005年版二部方法制備，濃度為5(T100cfu/ml，另配制濃度為10~IOOcfu /m I大腸埃希菌液。
[0010]3、取I 10供試液Iml加入裝有50ml稀釋液的濾器中，經(jīng)薄膜過(guò)濾后，沖洗3次，每次100ml,在最后一次的沖洗液中各加入1ml的50~IOOcfu / ml大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，過(guò)濾。取出濾膜，菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上，分別置30~35°C培養(yǎng)48 h或置23~28°C培養(yǎng)72h。每株試驗(yàn)菌平行制 備2個(gè)平皿。按中國(guó)藥典2005年版菌落計(jì)數(shù)方法計(jì)數(shù)。
【權(quán)利要求】
1.一種清露酊微生物限度檢查的方法，其特征是:通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn)的:(1)供試液制備取樣品的上清液加稀釋液制成供試液；(2)菌液制備按中國(guó)藥典2005年版二部方法制備大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液，另配制濃度為l(T100cfU/ml大腸埃希菌液；(3)取供試液加濾器中經(jīng)薄膜過(guò)濾后沖洗，在最后一次的沖洗液中加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，過(guò)濾；取出濾膜，菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)；每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，計(jì)數(shù)。
2.如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞共養(yǎng)方法，其特征是:步驟(1)取樣品的上清液10ml，加稀釋液至100ml，制成I 10供試液。
3.如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞共養(yǎng)方法，其特征是:步驟(2)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌及黑曲霉菌菌液均按中國(guó)藥典2005年版二部方法制備，濃度為5(T100cfu/ml，另配制濃度為KTlOOcfu /m I大腸埃希菌液。
4.如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞共養(yǎng)方法，其特征是:步驟(3)取I10供試液Iml加入裝有50ml稀釋液的濾器中，經(jīng)薄膜過(guò)濾后，沖洗3次，每次100mL，在最后一次的沖洗液中各加入1ml的50~IOOcfu / ml大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌菌液或白色念珠菌和黑曲霉菌菌液，過(guò)濾；取出濾膜，菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上，分別置30~35°C培養(yǎng)48 h或置23~28°C培養(yǎng)72h ;每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿；按中國(guó)藥典2005年版菌 落計(jì)數(shù)方法計(jì)數(shù)。
【文檔編號(hào)】C12Q1/02GK103882089SQ201210560914
【公開(kāi)日】2014年6月25日 申請(qǐng)日期:2012年12月21日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月21日
【發(fā)明者】王英俊, 郝智慧 申請(qǐng)人:青島康地恩藥業(yè)股份有限公司