專利名稱：一種蛹蟲(chóng)草半連續(xù)液體發(fā)酵生產(chǎn)蟲(chóng)草素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物與發(fā)酵工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是利用蛹蟲(chóng)草菌絲在培養(yǎng)體系中聚集、凝絮而形成的菌絲球，實(shí)施蛹蟲(chóng)草半連續(xù)液體發(fā)酵生產(chǎn)蟲(chóng)草素的方法。
背景技術(shù)：
蛹蟲(chóng)草(( / 辦ce/75·,蟲(chóng)草屬的重要種,是一種昆蟲(chóng)強(qiáng)致病菌,含有蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草多糖、蟲(chóng)草酸等多種活性成分。其中蟲(chóng)草素(CordyCepin，3’-脫氧腺嘌呤核苷)，是一種核苷類抗生素.具有多種生物活性，被證明能提高人體免疫力，對(duì)于腫瘤和致病性的細(xì)菌和真菌表現(xiàn)出一定的抗性，成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)，已經(jīng)成功用于治療在小鼠模型上人類非洲錐蟲(chóng)病(HAT)，被確認(rèn)在白血病和癌癥上有藥物應(yīng)用價(jià)值。國(guó)內(nèi)外報(bào)道蟲(chóng)草素的獲得途徑主要有3個(gè)①人工合成，該方法過(guò)程復(fù)雜，且產(chǎn)生許多對(duì)環(huán)境有害的物質(zhì)，還沒(méi)有見(jiàn)到大規(guī)模生產(chǎn)的報(bào)道；②固體發(fā)酵，從蟲(chóng)草屬真菌的子實(shí)體或培養(yǎng)殘基中提取。固體發(fā)酵 培養(yǎng)周期長(zhǎng)，培養(yǎng)條件苛刻，成本高且產(chǎn)量低；③液體發(fā)酵，從發(fā)酵液和菌絲體中提取。液體發(fā)酵周期短，培養(yǎng)基組成簡(jiǎn)單，為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。已報(bào)道的液體發(fā)酵生產(chǎn)蟲(chóng)草素的方法主要為分批發(fā)酵工藝，蟲(chóng)草素主要存在于發(fā)酵液內(nèi)，發(fā)酵周期在10-15天，發(fā)酵結(jié)束時(shí)大量健壯的蛹蟲(chóng)草細(xì)胞得不到充分利用，菌體利用時(shí)間短，發(fā)酵強(qiáng)度低。蛹蟲(chóng)草深層液體發(fā)酵生產(chǎn)蟲(chóng)草素過(guò)程中，菌體形態(tài)復(fù)雜，有絲狀、片狀、球狀、塊狀等，對(duì)傳質(zhì)、溶氧等有著重要的影響。通過(guò)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基組成及發(fā)酵條件控制蛹蟲(chóng)草菌體形態(tài)，反復(fù)利用活性蛹蟲(chóng)草細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)蛹蟲(chóng)草半連續(xù)液體發(fā)酵生產(chǎn)蟲(chóng)草素，縮短發(fā)酵周期，提高發(fā)酵強(qiáng)度，對(duì)大規(guī)模生產(chǎn)蟲(chóng)草素有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
為了使發(fā)酵結(jié)束時(shí)大量健壯的蛹蟲(chóng)草細(xì)胞得到充分利用，縮短發(fā)酵周期，提高發(fā)酵強(qiáng)度，本發(fā)明提供一種蛹蟲(chóng)草半連續(xù)液體發(fā)酵生產(chǎn)蟲(chóng)草素的方法。本發(fā)明所用蛹蟲(chóng)草購(gòu)自中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，拉丁學(xué)名-,Cordyceps Jiiari1S,保藏號(hào)3· 4655。一種蛹蟲(chóng)草半連續(xù)液體發(fā)酵生產(chǎn)蟲(chóng)草素的操作步驟如下
A、菌種活化
將蛹蟲(chóng)草(Cb/■辦ce/75· mi Ii tar is)的菌絲接種到PDA固體培養(yǎng)基上,溫度20 25 V條件下避光培養(yǎng)5d,菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基平面,轉(zhuǎn)到見(jiàn)光條件下,培養(yǎng)5d,菌絲全部由白轉(zhuǎn)至橙黃，得到活化的菌苔；
B、制備種子液
取面積6 10 mm2的菌苔I 2塊接入種子培養(yǎng)基，搖瓶的裝液量為130/250 mL,于溫度20 25°C、搖床轉(zhuǎn)速為120 150 r/min條件下，培養(yǎng)5 7d，得到種子液，種子液中的菌絲球形態(tài)規(guī)則、顆粒均勻；
種子培養(yǎng)基的制備方法土豆汁200 mL、酵母10 g、葡萄糖40 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)2.0g和硫酸鎂(MgSO4) 1.0 g混勻，補(bǔ)水至IOOOmL, pH自然，121°C高壓滅菌20min ；
土豆汁的做法去皮馬鈴薯100 g，加500 mL自來(lái)水煮沸20min，用4 6層紗布過(guò)濾，濾液補(bǔ)足到500mL ；
C、種子液的擴(kuò)培
將IL種子液轉(zhuǎn)接至9L液體培養(yǎng)基中，溫度20 25 °C、通氣流量I. 5 2. O L/(L · min)、攪拌速度100 120 r/min條件下,攪拌培養(yǎng)5 7 d,實(shí)現(xiàn)菌絲球的更新與擴(kuò)增，制得蛹蟲(chóng)草種子液；
所述液體培養(yǎng)基及制備方法同B步驟中的種子培養(yǎng)基及制備方法；
D、500L罐首批發(fā)酵 將30L蛹蟲(chóng)草種子液轉(zhuǎn)接到發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵罐的裝液系數(shù)O. 75，在溫度20 25°C、通氣I. 5 2. O L/ (L *min)、攪拌速度100 120 r/min條件下，培養(yǎng)10 d ;發(fā)酵結(jié)束，截留住蛹蟲(chóng)草菌絲球，正壓放料300 L，首批發(fā)酵得蟲(chóng)草素產(chǎn)量為63. 91 mg/L ；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法將酵母粉10-15 g、葡萄糖30-40 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)2. 0-3. O g、硫酸鎂(MgSO4) I. 0-2. O g、磷酸氫二鉀(K2HPO4) I. 0-2. O g、硝酸鉀(KNO3)O. 5-1.0 g和硫酸亞鐵(FeSO4) O. 1-0. 5 g溶于IOOOmL水中，混勻，pH自然，121°C高壓滅菌 20min ；
E、500L罐重復(fù)發(fā)酵
重復(fù)D步驟進(jìn)行10批次半連續(xù)發(fā)酵；即每次無(wú)菌正壓放料排出發(fā)酵液300 L，再往罐內(nèi)正壓補(bǔ)充所述發(fā)酵培養(yǎng)基至原體積375 L，發(fā)酵控制條件不變；最后將11批次的發(fā)酵液合并，即得蟲(chóng)草素發(fā)酵液產(chǎn)品；重復(fù)批次發(fā)酵過(guò)程中的發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法將酵母粉3-5g，葡萄糖 15-20 g、磷酸二氫鉀(KH2P04)2.0-3.0 g、硫酸鎂(MgSO4) I. 0-2. O g、磷酸氫二鉀(K2HPO4) I. 0-2. O g、硝酸鉀(KNO3) O. 5-1. O g 和硫酸亞鐵(FeSO4) O. 1-0. 5 g 溶于 IOOOmL水中，混勻，pH自然，121°C高壓滅菌20min ；
重復(fù)批次發(fā)酵過(guò)程中每批次發(fā)酵時(shí)間5 d，蟲(chóng)草素產(chǎn)量穩(wěn)定在60 mg/L以上，發(fā)酵強(qiáng)度保持在15 mg/(L · d)以上，細(xì)胞活力穩(wěn)定在90%以上。本發(fā)明的蛹蟲(chóng)草半連續(xù)液體發(fā)酵生產(chǎn)蟲(chóng)草素的方法與常規(guī)蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)方法相比，具有菌體可反復(fù)使用、發(fā)酵強(qiáng)度高，目標(biāo)產(chǎn)量和轉(zhuǎn)化率高，產(chǎn)物和細(xì)胞易于分離等特點(diǎn)，易于實(shí)現(xiàn)工藝過(guò)程的連續(xù)化、自動(dòng)化，降低生產(chǎn)成本，有益技術(shù)效果具體體現(xiàn)在以下方面
(1)采用調(diào)節(jié)培養(yǎng)基組成及發(fā)酵條件的方法，控制蛹蟲(chóng)草形成均一菌絲球形態(tài)，不采用細(xì)胞生長(zhǎng)和蟲(chóng)草素合成所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以外的其他任何化學(xué)物質(zhì)，蛹蟲(chóng)草的生長(zhǎng)和代謝不受干擾，有利于蟲(chóng)草素的合成；
(2)利用蛹蟲(chóng)草菌絲球反復(fù)發(fā)酵，縮短了發(fā)酵周期，提高了發(fā)酵強(qiáng)度，節(jié)約了菌體生長(zhǎng)消耗的碳氮源，節(jié)約了成本；
(3)發(fā)酵過(guò)程中，蛹蟲(chóng)草形成形狀規(guī)則、大小均一的菌絲球，其直徑平均在3 5mm范圍內(nèi)，易于發(fā)酵液和菌絲體分離；
(4)半連續(xù)液體發(fā)酵生產(chǎn)蟲(chóng)草素，工藝操作簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
下面通過(guò)實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。本發(fā)明所用蛹蟲(chóng)草的菌株購(gòu)自中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，拉丁學(xué)名-,Cordyceps Jiiari1S,保藏號(hào)3. 4655。實(shí)施例I
1、菌種活化
用接種環(huán)取斜面上蛹蟲(chóng)草(βατ辦ce/75· mi Ii tar is)的菌絲接種到PDA固體培養(yǎng)基上，25°C條件下避光培養(yǎng)5d，培養(yǎng)基表面上長(zhǎng)滿菌絲，轉(zhuǎn)到見(jiàn)光條件下，培養(yǎng)5d，菌絲全部由白轉(zhuǎn)至橙黃，得到活化的菌苔；
2、制備種子液
取面積6 IOmm2的菌苔2塊接入種子培養(yǎng)基(250 mL錐形瓶中裝入IOOmL培養(yǎng)基)于 25°C、搖床轉(zhuǎn)速為150 r/min條件下，培養(yǎng)5 d，得到種子液，種子液中的菌絲球形態(tài)規(guī)則、顆粒均勻；
種子培養(yǎng)基的制備方法土豆汁200mL、酵母粉10g、葡萄糖40 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)
2.0g和硫酸鎂(MgSO4)I. O g溶于1000 mL自來(lái)水中，混勻，pH自然，121°C高壓滅菌20min ;
土豆汁的做法去皮馬鈴薯100 g，加500 mL自來(lái)水煮沸20min，用4 6層紗布過(guò)濾，濾液補(bǔ)足到500mL ；
3、種子液的擴(kuò)培
將500mL種子液轉(zhuǎn)接至10 L機(jī)械攪拌罐的7L液體培養(yǎng)基中，溫度23±2°C、通氣流量I. 5 L/ (L · min)、攪拌速度120 r/min條件下，培養(yǎng)5 d,制得蛹蟲(chóng)草種子液；
所述液體培養(yǎng)基及制備方法同步驟2中的種子培養(yǎng)基及制備方法；
4.500L罐首批發(fā)酵
將蛹蟲(chóng)草種子液32L轉(zhuǎn)接到發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵罐的裝液系數(shù)O. 75，在溫度23±2°C、通氣1.5 L/(L · min)、攪拌速度120 r/min條件下，培養(yǎng)10 d;發(fā)酵結(jié)束，截留住蛹蟲(chóng)草菌絲球，正壓放料300 L，首批發(fā)酵得蟲(chóng)草素產(chǎn)量為63. 91 mg/L ；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法將酵母粉15 g、葡萄糖40 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4) 2. Og、硫酸鎂(MgSO4) 1.0 g、磷酸氫二鉀(K2HPO4) 1.0 g、硝酸鉀(KNO3) 0.5 g和硫酸亞鐵(FeSO4) O. I g溶于1000 mL自來(lái)水中，混勻，pH自然，121°C高壓滅菌20min ;
5.500L罐重復(fù)發(fā)酵
重復(fù)步驟4進(jìn)行10批次半連續(xù)發(fā)酵；即每次無(wú)菌正壓放料排出發(fā)酵液300 L，再往罐內(nèi)正壓補(bǔ)充所述發(fā)酵培養(yǎng)基至原體積375 L，培養(yǎng)條件不變，最后將11批次的發(fā)酵液合并，得蟲(chóng)草素發(fā)酵液產(chǎn)品；重復(fù)批次發(fā)酵過(guò)程中的發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法將酵母粉5 g，葡萄糖 20 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4) 3. O g、硫酸鎂(MgSO4) 2. O g、磷酸氫二鉀(K2HPO4) 2. O g、硝酸鉀(KNO3)LO g和硫酸亞鐵(FeSO4)O. 5 g溶于1000 mL自來(lái)水中，混勻，補(bǔ)水至IOOOmL,pH自然，121°C高壓滅菌20min ；
重復(fù)批次發(fā)酵過(guò)程中每批次發(fā)酵時(shí)間5 d，最后測(cè)得發(fā)酵液中蟲(chóng)草素產(chǎn)量為62 mg/L,發(fā)酵強(qiáng)度保持在15 mg/(L · d)以上，細(xì)胞活力穩(wěn)定在90%以上。實(shí)施例2
I、菌種活化
用接種環(huán)取斜面上蛹蟲(chóng)草(βατ辦ce/75· mi Ii tar is)的菌絲接種到PDA固體培養(yǎng)基上，25°C條件下避光培養(yǎng)5d，培養(yǎng)基表面上長(zhǎng)滿菌絲，轉(zhuǎn)到見(jiàn)光條件下，培養(yǎng)5d，菌絲全部由白轉(zhuǎn)至橙黃，得到活化的菌苔；
2、制備種子液
取面積6 IOmm2的菌苔2塊接入種子培養(yǎng)基(250 mL錐形瓶中裝入IOOmL培養(yǎng)基)于25°C、搖床轉(zhuǎn)速為150 r/min條件下，培養(yǎng)5 d，得到種子液，種子液中的菌絲球形態(tài)規(guī)則、顆粒均勻；
種子培養(yǎng)基的制備方法土豆汁200mL、酵母粉10g、葡萄糖40 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)
2.0g和硫酸鎂(MgSO4)I. O g溶于1000 mL自來(lái)水中，混勻，pH自然，121°C高壓滅菌20min ; 土豆汁的做法去皮馬鈴薯100 g，加500 mL自來(lái)水煮沸20min，用4 6層紗布過(guò)濾，濾液補(bǔ)足到500mL ； 3、種子液的擴(kuò)培
將500mL種子液轉(zhuǎn)接至10 L機(jī)械攪拌罐的7L液體培養(yǎng)基中，溫度23±2°C、通氣流量I. 5 L/ (L · min)、攪拌速度120 r/min條件下，培養(yǎng)5 d,制得蛹蟲(chóng)草種子液；
所述液體培養(yǎng)基及制備方法同步驟2中的種子培養(yǎng)基及制備方法；
4.500L罐首批發(fā)酵
將蛹蟲(chóng)草種子液32L轉(zhuǎn)接到發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵罐的裝液系數(shù)O. 75，在溫度23±2°C、通氣1.5 L/(L · min)、攪拌速度120 r/min條件下，培養(yǎng)10 d;發(fā)酵結(jié)束，截留住蛹蟲(chóng)草菌絲球，正壓放料300 L，首批發(fā)酵得蟲(chóng)草素產(chǎn)量為64. I mg/L ；
所述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法將酵母粉15 g、葡萄糖40 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4) 2. Og、硫酸鎂(MgSO4) 1.0 g、磷酸氫二鉀(K2HPO4) 1.0 g、硝酸鉀(KNO3) 0.5 g和硫酸亞鐵(FeSO4) O. I g溶于1000 mL自來(lái)水中，混勻，pH自然，121°C高壓滅菌20min ;
5.500L罐重復(fù)發(fā)酵
重復(fù)步驟4進(jìn)行10批次半連續(xù)發(fā)酵；即每次無(wú)菌正壓放料排出發(fā)酵液300 L，再往罐內(nèi)正壓補(bǔ)充所述發(fā)酵培養(yǎng)基至原體積375 L，培養(yǎng)條件不變，最后將11批次的發(fā)酵液合并，得蟲(chóng)草素發(fā)酵液產(chǎn)品；重復(fù)批次發(fā)酵過(guò)程中的發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法將酵母粉5 g，葡萄糖 20 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4) 3. O g、硫酸鎂(MgSO4) 2. O g、磷酸氫二鉀(K2HPO4) 2. O g、硝酸鉀(KNO3)LO g和硫酸亞鐵(FeSO4)O. 5 g溶于1000 mL自來(lái)水中，混勻，補(bǔ)水至IOOOmL,pH自然，121°C高壓滅菌20min ；
重復(fù)批次發(fā)酵過(guò)程中每批次發(fā)酵時(shí)間5 d，最后測(cè)得發(fā)酵液中蟲(chóng)草素產(chǎn)量為62. 5 mg/L，發(fā)酵強(qiáng)度保持在15 mg/(L · d)以上，細(xì)胞活力穩(wěn)定在90%以上。
權(quán)利要求
1. 一種蛹蟲(chóng)草半連續(xù)液體發(fā)酵生產(chǎn)蟲(chóng)草素的方法，其特征在于 A、菌種活化 將蛹蟲(chóng)草(Cbz■辦ce/75· mi Ii tar is)的菌絲接種到PDA固體培養(yǎng)基上,溫度20 25 V條件下避光培養(yǎng)5d,菌絲長(zhǎng)滿培養(yǎng)基平面,轉(zhuǎn)到見(jiàn)光條件下,培養(yǎng)5d,菌絲全部由白轉(zhuǎn)至橙黃，得到活化的菌苔； B、制備種子液 取面積6 10 mm2的菌苔I 2塊接入種子培養(yǎng)基，搖瓶的裝液量為130/250 mL,于溫度20 25°C、搖床轉(zhuǎn)速為120 150 r/min條件下，培養(yǎng)5 7d，得到種子液，種子液中的菌絲球形態(tài)規(guī)則、顆粒均勻； 種子培養(yǎng)基的制備方法土豆汁200 mL、酵母10 g、葡萄糖40 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)·2.0 g和硫酸鎂(MgSO4) 1.0 g混勻，補(bǔ)水至IOOOmL, pH自然，121°C高壓滅菌20min ； 土豆汁的做法去皮馬鈴薯100 g，加500 mL自來(lái)水煮沸20min，用4 6層紗布過(guò)濾，濾液補(bǔ)足到500mL ； C、種子液的擴(kuò)培 將IL種子液轉(zhuǎn)接至9L液體培養(yǎng)基中，溫度20 25 °C、通氣流量I. 5 2. O L/(L · min)、攪拌速度100 120 r/min條件下,攪拌培養(yǎng)5 7 d,實(shí)現(xiàn)菌絲球的更新與擴(kuò)增，制得蛹蟲(chóng)草種子液； 所述液體培養(yǎng)基及制備方法同B步驟中的種子培養(yǎng)基及制備方法； D、500L罐首批發(fā)酵 將30L蛹蟲(chóng)草種子液轉(zhuǎn)接到發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵罐的裝液系數(shù)O. 75，在溫度·20 25°C、通氣I. 5 2. O L/(L ·π η)、攪拌速度100 120 r/min條件下，培養(yǎng)10 d ;發(fā)酵結(jié)束，截留住蛹蟲(chóng)草菌絲球，正壓放料300 L，首批發(fā)酵得蟲(chóng)草素產(chǎn)量為63. 91 mg/L ； 所述發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法將酵母粉10-15 g、葡萄糖30-40 g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)·2.0-3. O g、硫酸鎂(MgSO4) I. 0-2. O g、磷酸氫二鉀(K2HPO4) I. 0-2. O g、硝酸鉀(KNO3)·O.5-1.0 g和硫酸亞鐵(FeSO4) O. 1-0. 5 g溶于IOOOmL水中，混勻，pH自然，121°C高壓滅菌 20min ； E、500L罐重復(fù)發(fā)酵 重復(fù)D步驟進(jìn)行10批次半連續(xù)發(fā)酵；即每次無(wú)菌正壓放料排出發(fā)酵液300 L，再往罐內(nèi)正壓補(bǔ)充所述發(fā)酵培養(yǎng)基至原體積375 L，發(fā)酵控制條件不變；最后將11批次的發(fā)酵液合并，即得蟲(chóng)草素發(fā)酵液產(chǎn)品；重復(fù)批次發(fā)酵過(guò)程中的發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法將酵母粉3-5g，葡萄糖 15-20 g、磷酸二氫鉀(KH2P04)2.0-3.0 g、硫酸鎂(MgSO4) I. 0-2. O g、磷酸氫二鉀(K2HPO4) I. 0-2. O g、硝酸鉀(KNO3) O. 5-1. O g 和硫酸亞鐵(FeSO4) O. 1-0. 5 g 溶于 IOOOmL水中，混勻，pH自然，121°C高壓滅菌20min ； 重復(fù)批次發(fā)酵過(guò)程中每批次發(fā)酵時(shí)間5 d，蟲(chóng)草素產(chǎn)量穩(wěn)定在60 mg/L以上，發(fā)酵強(qiáng)度保持在15 mg/(L · d)以上，細(xì)胞活力穩(wěn)定在90%以上。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種蛹蟲(chóng)草半連續(xù)液體發(fā)酵生產(chǎn)蟲(chóng)草素的方法。具體操作步驟如下(1)將蛹蟲(chóng)草(Cordycepsmilitaris)的菌絲接到PDA固體培養(yǎng)基上活化，生成大量濃密菌絲的菌苔；(2)將菌苔接到種子培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，5天后形成大量菌球體，制得種子液；(3)將種子液轉(zhuǎn)接到種子液發(fā)酵罐進(jìn)行擴(kuò)培；(4)將擴(kuò)培種子液再轉(zhuǎn)接到500L罐進(jìn)行首批發(fā)酵；(5)相同條件下，500L罐10批次半連續(xù)發(fā)酵。本發(fā)酵工藝中采用調(diào)節(jié)培養(yǎng)基組成及發(fā)酵條件的方法，控制蛹蟲(chóng)草形成形狀規(guī)則、大小均一的菌絲球，其直徑平均在3~5mm，易于發(fā)酵液和菌體分離；利用蛹蟲(chóng)草菌絲球反復(fù)發(fā)酵，節(jié)約菌絲球生長(zhǎng)所需的碳氮源及其他無(wú)機(jī)鹽，節(jié)約了成本；縮短了發(fā)酵周期，提高了發(fā)酵強(qiáng)度，適于工業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12P19/40GK102965416SQ20121049029
公開(kāi)日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2012年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月28日
發(fā)明者魏兆軍, 方婷婷, 章建國(guó) 申請(qǐng)人:合肥工業(yè)大學(xué)