亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

大分子活性膠原蛋白的制備方法

文檔序號:506448閱讀:286來源:國知局
大分子活性膠原蛋白的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種大分子活性膠原蛋白的制備方法,包括以下步驟:魚皮的預(yù)處理;活性膠原蛋白的提??;活性膠原蛋白溶液的純化。本發(fā)明通過超聲波、乙酸和復(fù)合酶的協(xié)同作用提取膠原蛋白,并綜合運用鹽析、透析和超濾技術(shù)制得大分子活性膠原蛋白溶液,并能穩(wěn)定存在。
【專利說明】大分子活性膠原蛋白的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)用材料的制備領(lǐng)域,具體涉及一種大分子活性膠原蛋白的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]膠原蛋白是具有獨特結(jié)構(gòu)的一族蛋白質(zhì),廣泛存在于哺乳動物組織中,約占總蛋白質(zhì)的30%以上。膠原蛋白為骨、皮膚、肌腱和韌帶提供生物力學(xué)性能、控制發(fā)育中的細胞基因表型。膠原蛋白的結(jié)構(gòu)呈三股螺旋結(jié)構(gòu),由三條多肽鏈組成,每一條膠原鏈都是左手螺旋構(gòu)型,三條左手螺旋α-鏈又互相纏成右手螺旋結(jié)構(gòu)一即超螺旋結(jié)構(gòu)。單個α-鏈含有至少一個Gly-X-Y序列。每三個氨基酸就有一個甘氨酸殘基。膠原蛋白的特有結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成使其具有許多獨特性質(zhì)和功能。這些性質(zhì)和功能使其在各個領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用,如生物醫(yī)學(xué)材料、藥物輸送載體、組織工程、化妝品和食品等領(lǐng)域。
[0003]目前,國內(nèi)活性膠原蛋白雖有科研單位進行了研究和開發(fā),并有一些活性膠原蛋白提取工藝方面的專利與報道,但目前離產(chǎn)業(yè)化水平仍有一定差距,只限于少數(shù)幾家公司能夠進行中試或小規(guī)模試生產(chǎn)。由于活性膠原蛋白產(chǎn)業(yè)化水平較低,限制了它的下游產(chǎn)品開發(fā)與應(yīng)用。目前,活性膠原蛋白在保健食品、化妝品領(lǐng)域中的應(yīng)用有大量報道和銷售,但對于醫(yī)用級大分子量活性膠原蛋白的提取技術(shù)僅處于小規(guī)模水平。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種大分子活性膠原蛋白的制備方法。
[0005]本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:一種大分子活性膠原蛋白的制備方法,包括以下步驟:
一、魚皮的預(yù)處理
選取新鮮魚皮,100重量份,水洗去肉后,加入20-30% NaCI (0.05Μ Tris-HCI,ρΗ7.5)溶液中(1:20-40,w/v)均質(zhì)5-lOmin,用轉(zhuǎn)速為10000-15000rpm高速冷凍離心機離心10-25min,取沉淀,重復(fù)上述操作,直到?jīng)]有浮游脂肪和氣泡產(chǎn)生,然后用去離子水清洗;
二、活性膠原蛋白的提取
將預(yù)處理后的魚皮加入預(yù)冷的去離子水中(1:5 O -10 O,w/ V ),冰浴,加入乙酸至0.5-1.0M超聲10-25min,超聲波功率300-600W,加入0.1-0.5重量份胃蛋白酶、酸性酶3350和木瓜蛋白酶中的一種或數(shù)種,酶解5-8h,離心,取上清,所得沉淀加去離子水(1:50-100),調(diào)pH值至中性,加入0.1-0.5重量份中性蛋白酶、菠蘿蛋白酶中的一種或兩種,酶解3-6h,離心,取上清,合并兩份上清,得膠原蛋白溶液;
三、活性膠原蛋白溶液的純化
選孔徑為10-50nm的超濾膜濃縮上述膠原蛋白溶液,加入NaCl至終濃度為0.5-1.3M,鹽析過夜,然后離心10-30min,取沉淀,沉淀再次用0.5-1M乙酸溶解后,離心l_2h,取上清,對0.1-0.2M乙酸透析脫鹽,用100-200nm孔徑的超濾膜去除小分子物質(zhì)和多肽,得到濃度為20-50%的大分子活性膠原蛋白溶液。
[0006]有益效果:本發(fā)明通過超聲波、乙酸和復(fù)合酶的協(xié)同作用提取膠原蛋白,并綜合運用鹽析、透析和超濾技術(shù)制得大分子活性膠原蛋白溶液,并能穩(wěn)定存在。
【具體實施方式】
[0007]下面對本發(fā)明的【具體實施方式】進行詳細的說明。
[0008]實施例1:選取新鮮魚皮,100重量份,水洗去肉后,加入20% NaCI (0.05MTris-HCI, pH7.5)溶液中(1:20, w/v)均質(zhì)5min,用轉(zhuǎn)速為1000Orpm高速冷凍離心機離心lOmin,取沉淀,重復(fù)上述操作,直到?jīng)]有浮游脂肪和氣泡產(chǎn)生,然后用去離子水清洗。將預(yù)處理后的魚皮加入預(yù)冷的去離子水中(1:50, w/v),冰浴,加入乙酸至0.5M超聲IOmin,超聲波功率300W。加入0.1重量份胃蛋白酶,酶解5h,離心,取上清。所得沉淀加去離子水(1:50),調(diào)pH值至中性,加入0.1重量份中性蛋白酶,酶解3h,離心,取上清。合并兩份上清,得膠原蛋白溶液。選孔徑為IOnm的超濾膜濃縮上述膠原蛋白溶液,加入NaCl至終濃度為0.5M,鹽析過 夜,然后離心IOmin,取沉淀。沉淀再次用0.5M乙酸溶解后,離心Ih,取上清,對0.1M乙酸透析脫鹽,用IOOnm孔徑的超濾膜去除小分子物質(zhì)和多肽,得到濃度為20%的大分子活性膠原蛋白溶液。
[0009]實施例2:選取新鮮魚皮,100重量份,水洗去肉后,加入30% NaCI (0.05MTris-HCI, pH7.5)溶液中(1:40, w/v)均質(zhì)IOmin,用轉(zhuǎn)速為15000rpm高速冷凍離心機離心25min,取沉淀,重復(fù)上述操作,直到?jīng)]有浮游脂肪和氣泡產(chǎn)生,然后用去離子水清洗。將預(yù)處理后的魚皮加入預(yù)冷的去離子水中(1: 100, w/v),冰浴,加入乙酸至1.0|/[超聲251]1;[11,超聲波功率600W。加入0.5重量份胃木瓜蛋白酶,酶解8h,離心,取上清。所得沉淀加去離子水(1:100),調(diào)pH值至中性,加入0.5重量份菠蘿蛋白酶,酶解6h,離心,取上清。合并兩份上清,得膠原蛋白溶液。選孔徑為50nm的超濾膜濃縮上述膠原蛋白溶液,加入NaCl至終濃度為1.3M,鹽析過夜,然后離心30min,取沉淀。沉淀再次用IM乙酸溶解后,離心2h,取上清,對0.2M乙酸透析脫鹽,用200nm孔徑的超濾膜去除小分子物質(zhì)和多肽,得到濃度為50%的大分子活性膠原蛋白溶液。
[0010]實施例3:選取新鮮魚皮,100重量份,水洗去肉后,加入25% NaCI (0.05MTris-HCI, pH7.5)溶液中(1:30, w/v)均質(zhì)8min,用轉(zhuǎn)速為12000rpm高速冷凍離心機離心20min,取沉淀,重復(fù)上述操作,直到?jīng)]有浮游脂肪和氣泡產(chǎn)生,然后用去離子水清洗;將預(yù)處理后的魚皮加入預(yù)冷的去離子水中(1:70, w/v),冰浴,加入乙酸至0.8M超聲20min,超聲波功率400W,加入0.3重量份胃蛋白酶、酸性酶3350和木瓜蛋白酶中的一種或數(shù)種,酶解6h,離心,取上清,所得沉淀加去離子水(1:80),調(diào)pH值至中性,加入0.3重量份中性蛋白酶、菠蘿蛋白酶中的一種或兩種,酶解5h,離心,取上清,合并兩份上清,得膠原蛋白溶液;選孔徑為30nm的超濾膜濃縮上述膠原蛋白溶液,加入NaCl至終濃度為0.9M,鹽析過夜,然后離心20min,取沉淀,沉淀再次用0.8M乙酸溶解后,離心1.5h,取上清,對0.15M乙酸透析脫鹽,用150nm孔徑的超濾膜去除小分子物質(zhì)和多肽,得到濃度為30%的大分子活性膠原蛋白溶液。[0011]應(yīng)當(dāng)指出,對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說,在不脫離本發(fā)明原理的前提下,還可以做出若干改進和潤飾,這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。本實施例中未明確的各組成部分均可用現(xiàn)有技·術(shù)加以實現(xiàn)。
【權(quán)利要求】
1.一種大分子活性膠原蛋白的制備方法,其特征在于,包括以下步驟: 一、魚皮的預(yù)處理
選取新鮮魚皮,100重量份,水洗去肉后,加入20-30% NaCI (0.05M Tris-HCI,pH7.5)溶液中(1:20-40,w/v)均質(zhì)5-lOmin,用轉(zhuǎn)速為10000-15000rpm高速冷凍離心機離心10-25min,取沉淀,重復(fù)上述操作,直到?jīng)]有浮游脂肪和氣泡產(chǎn)生,然后用去離子水清洗; 二、活性膠原蛋白的提取
將預(yù)處理后的魚皮加入預(yù)冷的去離子水中(I: 50-100, w/v),冰浴,加入乙酸至0.5-1.0M超聲10-25min,超聲波功率300-600W,加入0.1-0.5重量份胃蛋白酶、酸性酶3350和木瓜蛋白酶中的一種或數(shù)種,酶解5-8h,離心,取上清,所得沉淀加去離子水(1:50-100),調(diào)pH值至中性,加入0.1-0.5重量份中性蛋白酶、菠蘿蛋白酶中的一種或兩種,酶解3-6h,離心,取上清,合并兩份上清,得膠原蛋白溶液; 三、活性膠原蛋白溶液的純化 選孔徑為10-50nm的超濾膜濃縮上述膠原蛋白溶液,加入NaCl至終濃度為0.5-1.3M,鹽析過夜,然后離心10-30min,取沉淀,沉淀再次用0.5-1M乙酸溶解后,離心l_2h,取上清,對0.1-0.2M乙酸透析脫鹽,用100-200nm孔徑的超濾膜去除小分子物質(zhì)和多肽,得到濃度為20-50%的大分子活性膠原·蛋白溶液。
【文檔編號】C12P21/06GK103571901SQ201210276450
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年8月6日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月6日
【發(fā)明者】郁帥陸, 黃榮醒, 林琳 申請人:江蘇奧普萊醫(yī)療用品有限公司
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1