專利名稱：一種柑橘CrNCED1基因及其在植物抗非生物脅迫中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本專利屬于植物基因工程領(lǐng)域。具體涉及ー種從印度酸橘(Citrus reshni)中分離、克隆得到一個ABA合成關(guān)鍵酶NCED(9-cis_epoxycarotenoid dioxygenase,9_順式-環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶)的編碼基因CrNCEDl，本發(fā)明還涉及ー種CrNCEDl基因在植物抗非生物脅迫環(huán)境中的應(yīng)用，將該基因?qū)氲綗煵葜?，獲得的轉(zhuǎn)基因植株抗旱、抗鹽和氧化脅迫能力明顯提尚。
背景技術(shù)：
植物經(jīng)常遭受一系列的環(huán)境脅迫，包括干旱、高溫、低溫、鹽堿、淹水等，其中，干旱是影響作物生長發(fā)育和產(chǎn)量及限制植物地理分布最為重要的因素之一。在漫長的進(jìn)化過程 中，植物已經(jīng)形成一套復(fù)雜的機制來適應(yīng)和生存非生物逆境。對植物抗逆性的研究表明，植物對逆境的適應(yīng)受遺傳因素和植物激素兩方面因素的控制，這兩者可以通過逆境基因表達(dá)控制或代謝作用改變細(xì)胞膜系統(tǒng)，提高植物的抗逆能力。植物激素可能是抗逆性基因表達(dá)的啟動物質(zhì)，逆境脅迫改變了植物體內(nèi)的激素平衡水平，從而使代謝途徑發(fā)生變化，使得植物對逆境脅迫的抵抗能力增強(Nan等，2002;Wang等，2008)。脫落酸(Abscisic acid，ABA)是ー種重要的脅迫激素，又稱應(yīng)激激素，它調(diào)節(jié)植物對逆境脅迫的適應(yīng)(Meurs等，1992)。ABA不僅可以作為胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)物質(zhì)調(diào)節(jié)整個植株的抗逆反應(yīng)，同時作為細(xì)胞逆境信號物質(zhì)直接調(diào)控多個抗逆基因的表達(dá)(Bray，2002; Ishitani等，1997)。在逆境脅迫下，植物體內(nèi)ABA合成系統(tǒng)啟動，合成大量的ABA，促進(jìn)氣孔關(guān)閉，抑制氣孔開放，減少蒸騰失水；并能通過增加根的透性和水的通導(dǎo)性來促進(jìn)水分吸收，從而增強植物抵抗逆境脅迫的能力(Ji等，2011;Webb and Hetherington, 1997)。植物體內(nèi)ABA的積累受到合成途徑和降解途徑的控制。對ABA合成途徑的研究表明NCED (9-順式-環(huán)氧類胡蘿卜素雙加氧酶)是ABA合成過程中的關(guān)鍵酶。NCED催化9-順式紫黃質(zhì)和9-順式新黃質(zhì)發(fā)生氧化裂解反應(yīng)，生成ABA的前體物質(zhì)黃質(zhì)醛。NCED是ー個多基因家族，不同植物的NCED基因承擔(dān)著不同的作用，眾多的NCED基因家族的成員不但在ABA合成過程中擔(dān)負(fù)著重要的作用，而且在抵抗逆境脅迫維持植物生理形態(tài)等方面也發(fā)揮著重要的作用(Schwartz等，2003)。已開展的研究表明，脅迫誘導(dǎo)的NCED基因在逆境應(yīng)答反應(yīng)和抗逆中起著重要作用，主要表現(xiàn)在以下幾個方面第一，在玉米(Burbidge等，1997)、番爺(Schwartz等，1997 ;Thompson 等，2000)、豆子(Qin 等，1999)、紅豆(Iuchi 等，2000)、鱷梨(Chern ys 等，2000)、擬南芥(Iuchi 等，2001 ；Frey 等,2012)、花生(Wan 等，2005)、柱花草(Stylosanthesguianensis) (Yang and Guo，2007)等多種植物中，正常生長條件時，NCED基因表達(dá)量很低，逆境脅迫下其表達(dá)量迅速上升，并且NCED基因的表達(dá)早于ABA積累；而一旦脅迫解除，其表達(dá)水平和ABA量又迅速回落到基準(zhǔn)水平(Schwartz等，2003)，表明NCED基因表達(dá)的誘導(dǎo)是脅迫下ABA生物合成的主要原因，從另ー個方面也說明ABA生物合成是通過NCED基因在轉(zhuǎn)錄水平上進(jìn)行調(diào)節(jié)(Qin等，1999 ；Iuchi等，2000);第二，在煙草和擬南芥上的研究表明，與NCED基因有關(guān)的ABA合成突變體或NCED反義基因轉(zhuǎn)化植株中ABA合成受到嚴(yán)重影響，其抗逆性也明顯下降(Iuchi等，2000)，外源加入ABA則能夠提高突變體的抗性；在突變體中超量表達(dá)NCED基因后ABA合成得到恢復(fù)，抗性隨之增強(Wan等，2006)，進(jìn)ー步說明逆境下NCED介導(dǎo)的ABA合成是植物抗逆的ー個重要因素；第三，超量表達(dá)NCED基因的轉(zhuǎn)基因植株中ABA含量增高，轉(zhuǎn)基因植株的抗性顯著增強(Iuchi等，2001 ；Qin等，2002 ；Aswath等，2005 ;Thompson 等，2007 ；Zhu 等，2007 ；Hu 等，2010)。由于ABA是植物逆境信號傳遞途徑中的重要信使，它能夠激活在此途徑中的ー些重要激酶和轉(zhuǎn)錄因子，引起下游較多的逆境應(yīng)答基因表達(dá)，類似于ー種“集團作戰(zhàn)”的方式。超量表達(dá)NCED基因與轉(zhuǎn)化某些單ー的功能基因(如LEA、脯氨酸合成相關(guān)基因等)相比，前者在提高抗旱性上更有優(yōu)勢(Yamaguchi-Shinozaki等，2005)。因此，NCED基因是用于遺傳、工程提高植物抗旱性的重要基因資源。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的ー個目的是提供了ー種從抗旱的印度酸橘(Citrus reshni)中分離、克隆得到ー個NCED基因，申請人將其命名為CrNCEDl，其核苷酸序列為SEQ ID NO. I所示。本發(fā)明的另ー個目的是提供了ー種CrNCEDl基因在植物抗非生物脅迫中的應(yīng)用。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法將該基因轉(zhuǎn)化煙草，鑒定其抗旱功能，為植物抗逆分子設(shè)計育種提供新的基因資源，以為實施緑色農(nóng)業(yè)、節(jié)水農(nóng)業(yè)提供新的遺傳資源。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案申請人:利用植物基因克隆技術(shù)從印度酸橘中克隆得到ー個新基因CrNCEDl，其核苷酸序列為序列表SEQ ID NO :1所示,在SEQ ID NO :1所示序列的l_1821bp處為該基因的編碼區(qū)，它包含1821bp的開放閱讀框，編碼606個氨基酸；其編碼的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO :2所示，等電點為6. 05，預(yù)測的分子量為67. OkDa。申請人:設(shè)計了克隆上述基因CrNCEDl的cDNA序列的引物對，其核苷酸序列如下所示正向引物5’-TTCGGATCCATGGCGGCAGCAACTAC-3’，即 SEQ ID NO. 3 ；反向引物5’ -TTCGAGCTCTTAGGCCTGCTTGGCCA-3，，即 SEQ ID NO. 4。ー種CrNCEDl基因在植物抗非生物脅迫中的應(yīng)用，其應(yīng)用過程是將該基因通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)入煙草，獲得轉(zhuǎn)基因植株抗脫水、抗旱、抗鹽和抗氧化脅迫。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點I、利用該基因轉(zhuǎn)化，獲得的轉(zhuǎn)基因植株對多種非生物脅迫(脫水、抗旱、鹽和氧化脅迫)具有抗性，從而實現(xiàn)ー個基因提高多種抗性。2、該基因的發(fā)現(xiàn)為植物抗逆基因工程提供了重要的基因資源，以為實施緑色農(nóng)業(yè)提供新的遺傳資源。


圖I為ー種本發(fā)明的技術(shù)流程示意圖。圖2為ー種CrNCEDl基因在脫水、鹽、低溫脅迫和ABA處理及恢復(fù)后的表達(dá)模式示意圖。圖2A是印度酸橘在室溫下失水0、1、3、6、9、12小時及恢復(fù)1、3、6小時后的表達(dá)；圖2B是印度酸橘在200mM氯化鈉、100 u M ABA處理和4度處理O、1、3、6、9、12、24、72、120小時及恢復(fù)1、3、6、9小時的表達(dá)。圖3為ー種CrNCEDl基因載體構(gòu)建示意圖。圖4為ー種CrNCEDl基因轉(zhuǎn)化煙草過程示意圖。圖4A，轉(zhuǎn)基因煙草再生愈傷；圖4B，轉(zhuǎn)基因煙草再生生芽；圖4C，轉(zhuǎn)基因煙草植株生根。圖5為ー種CrNCEDl基因轉(zhuǎn)化煙草再生植株的PCR鑒定示意圖。
圖5A，CrNCEDl轉(zhuǎn)化煙草后得到的TO代植株的PCR鑒定(上圖為CrNCEDl特異引物擴增圖，下圖為NPTII基因特異引物擴增圖)。圖5B，CrNCEDl轉(zhuǎn)化煙草后得到的T2代植株P(guān)CR鑒定(上圖為CrNCEDl特異引物擴增圖，下圖為NPTII基因特異引物擴增圖)。圖6為ー種陽性轉(zhuǎn)基因植株轉(zhuǎn)基因CrNCEDl的表達(dá)量分析示意圖。圖6A，TO代2個陽性轉(zhuǎn)基因植株中CrNCEDl基因RT-PCR分析結(jié)果。圖6B，T2代陽性轉(zhuǎn)基因植株中CrNCEDl基因RT-PCR分析結(jié)果。WT為野生型植株，其余編號為轉(zhuǎn)基因植株。P-Actin基因用作內(nèi)參。圖I為ー種CrNCEDl轉(zhuǎn)基因煙草T2代三個系(C5_6、C7_4和C9-4)與野生型(WT)葉片脫水下的抗性比較和生理指標(biāo)測定示意圖。圖7A是轉(zhuǎn)基因煙草和野生型葉片脫水前(上)和脫水80分鐘(下)后的表型。圖7B是煙草轉(zhuǎn)基因系和野生型葉片脫水處理下的相對失水率變化。圖7C是葉片脫水后的相對電導(dǎo)率檢測結(jié)果。圖8為ー種CrNCEDl轉(zhuǎn)基因煙草T2代三個系(C5_6、C7_4和C9-4三個系)和野生型(WT)葉片脫水處理SOmin后葉片活性氧含量分析示意圖。圖8A是采用NBT (氯化硝基四氮唑藍(lán))染色的結(jié)果，顯示02_含量(染色越深，含量越高)。圖8B是采用DAB(ニ氨基聯(lián)苯胺)染色的結(jié)果，顯示H2O2含量(染色越深，含量越高)。圖9為ー種60天大小的CrNCEDl轉(zhuǎn)基因煙草T2代三個系(C5-6、C7-4和C9-4)與野生型(WT)盆栽苗抗旱性比較示意圖。圖9A是煙草轉(zhuǎn)基因植株和野生型控水(干旱處理)7天后的表型。圖9B是煙草轉(zhuǎn)基因植株和野生型干旱處理7天后葉片含水量的測定結(jié)果。圖9C是CrNCEDl基因轉(zhuǎn)化煙草和野生型干旱處理7天后的相對電導(dǎo)率檢測結(jié)果。圖10為ー種CrNCEDl轉(zhuǎn)基因煙草T2代三個系(C5-6、C7-4和C9-4)與野生型(WT)鹽(200mM NaCl)處理4天后的表型及生理測定示意圖。圖IOA是葉圓片鹽處理前和處理4天后的表型。圖IOB是處理4天后相對電導(dǎo)率檢測結(jié)果。圖IOC是采用DAB分析處理前(上)和處理后(下)葉圓片中的H2O2含量。圖IOD是處理4天后采用NBT分析處理前(上)和處理后(下)葉圓片中的02_含量。圖11為ー種CrNCEDl轉(zhuǎn)基因煙草T2代兩個系(C7-4和C9-4)與野生型(WT)在1%H202處理4天后表型和葉綠素含量測定示意圖。圖IlA是葉圓片處理前和1%H202處理4天后的表型。圖IlB是H2O2處理葉圓片4天后葉綠素含量測定結(jié)果。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施對本發(fā)明做出詳細(xì)的描述。根據(jù)以下的描述和這些實施，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定本發(fā)明的基本特征，并且在不偏離本發(fā)明精神和范圍的情況下，可以對本發(fā)明做出各種改變和修改，以使其適用各種用途和條件，具體實施方式
中為特別說明的實驗方法，均為常規(guī)實驗方法。實施例1，CrNCEDl基因分離克隆及表達(dá)分析使用Trizol試劑盒抽提印度酸橘葉片RNA(試劑盒購自Invitrogen公司，抽提按照提供的說明書操作)，將抽提的I y g總RNA經(jīng)IU的DNaseI (購自Fermentas公司)室溫處理30分鐘后，加入I U I EDTA (25mM),于65°C溫育10分鐘。用MBI反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成第一鏈cDNA (貨號K1621,購自Fermentas公司，按照試劑盒說明書操作),所得的第一鏈cDNA用于擴增CrNCEDl基因全長。根據(jù)NCBI 中的 NCED 基因序列(AAR11193、AARl 1194、NP_188062、NP_193569、NP_177960)，采用同源序列法，先利用多個序列找出高度保守區(qū)，再用Premier5. 0設(shè)計帶有BamHI、SacI酶切位點的引物，根據(jù)酶切特點加保護(hù)堿基。用RT-PCR的方法擴出全長。50ii I的反應(yīng)體系中包括200ng cDNAUX緩沖液(TransStart FastPfu緩沖液)、IOmMdNTPUU Taq聚合酶(前述緩沖液和聚合酶購自TRANS公司)及I. Oii M上述引物。PCR反應(yīng)在ABI9700 (Applied Biosystem)擴增儀上按以下程序完成94°C 5分鐘；94°C變性30秒、58°C退火50秒、72°C延伸90秒(共35個循環(huán))；循環(huán)完成后72°C延伸15分鐘。PCR擴增獲得一條特異帶，經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳后，用E,Z.N.A*DNA凝膠回收試劑盒(購自O(shè)mega公司，美國)回收特異帶(提取步驟參照使用說明)。回收純化的DNA溶液與PMD18-T載體(購自寶生物工程大連有限公司，即TaKaRa公司)進(jìn)行連接反應(yīng)(按說明書操作)，連接反應(yīng)體系中回收產(chǎn)物與PMD18-T載體的摩爾比為3 :1，連接反應(yīng)總體積是lOiil，包括5iil的2X緩沖液(購自寶生物工程大連有限公司)，I. 5 ill純化的PCR產(chǎn)物和0. 5 illPMD18-T載體。16°C連接過夜。取IOiU連接產(chǎn)物，熱激法轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 a，在含有100mg/L氨芐青霉素的LB固體平板中篩選陽性克隆，挑取克隆送上海聯(lián)合基因公司測序。測序結(jié)果表明，該基因長1821bp。通過測序、比對確定為NCED基因(命名為CrNCEDl)，編碼由606個氨基酸組成的多肽，其分子量為67kDa，等電點為6. 05。BLASTX分析發(fā)現(xiàn)CrNCEDl與其它植物的NCED基因有很高的同源性。為分析CrNCEDl基因是否響應(yīng)非生物脅迫和外源ABA，采用半定量PCR分析該基因在高鹽、干旱、低溫和ABA處理下的表達(dá)。結(jié)果表明，干旱(見圖2A)、鹽和外源ABA (見圖2B)處理均能誘導(dǎo)CrNCEDl基因的表達(dá)，表明它是ー個逆境應(yīng)答基因，但低溫對CrNCEDl基因的表達(dá)量影響不大。實施例2，植物轉(zhuǎn)化超表達(dá)載體構(gòu)建根據(jù)pBI121載體的多克隆位點和CrNCEDl基因的編碼區(qū)序列上的酶切位點，選擇BamHI和SalI作為內(nèi)切酶。首先將以CrNCEDl基因的克隆子為模板進(jìn)行PCR擴增，再通過TA克隆連接到pMD18-T載體上，從而構(gòu)建ー個重組載體pMD18-T-CrNCEDl。雙酶切體系總體積為40iU，其中含有pMD18-T-CrNCEDl質(zhì)粒8 ylUOXM緩沖液(購自Takana) 4 U I,BamHI及SalI各2 ill、雙蒸水24 ill。在37°C酶切3_4h后純化回收。pBI121載體的雙酶、切體系同上。連接反應(yīng)體系中CrNCEDl基因與載體pBI121分別為6^1和2 yl，反應(yīng)總體積為10111，10父了4連接緩沖液1111，T4連接酶liil，16°C連接14-16小時。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株DH5 a，在含有100mg/L卡那霉素的LB固體平板中篩選，挑單克隆PCR檢測呈陽性后抽提質(zhì)粒進(jìn)行酶切，測序確定讀碼框沒有突變后，即pBI121-CrNCEDl重組載體構(gòu)建成功。將重組載體CrNCEDl轉(zhuǎn)到農(nóng)桿菌EHA105中并保存菌株。構(gòu)建完成的載體圖見圖3。實施例3，煙草遺傳轉(zhuǎn)化I、實驗材料準(zhǔn)備取煙草種子，在超凈工作臺上先用75%的酒精浸泡滅菌30秒，棄去酒精無菌水洗滌I次，再用2%的次氯酸鈉浸泡滅菌8-12min，用滅菌的接種針播種于MS培養(yǎng)基上，置于培 養(yǎng)室。2、農(nóng)桿菌菌液的制備農(nóng)桿菌在含有卡那霉素50mg/L的固體LB培養(yǎng)基上劃線，28°C暗培養(yǎng)兩天；挑取單菌落接種在新的加有卡那霉素的LB平板上，28°C暗培養(yǎng)2_3天；用手術(shù)刀刮下已長好的農(nóng)桿菌，接種在不加抗生素的液MS培養(yǎng)基中，同時加20mg/L (IOOuM) AS, 280C 200r/min振蕩培養(yǎng)2h (同時在這段時間準(zhǔn)備切煙草葉片)；用分光光度計測量菌液的OD6tltl值，用MS液體培養(yǎng)基調(diào)整0D_值到0. 4-0. 55進(jìn)行侵染。3、外植體準(zhǔn)備取煙草葉片，于超凈工作臺上切掉葉片大的葉脈和葉片邊緣，然后將葉片切成約
0.5X0. 5cm大小，切好的葉片暫時放于滅菌的空三角瓶中(加少量水保濕)，待農(nóng)桿菌菌液制備完成后用于轉(zhuǎn)化。4、侵染與共培養(yǎng)將切好的外植體浸泡在已制備好的農(nóng)桿菌菌液里，侵染8-10min，中間搖動幾次。侵染完后用無菌吸水紙吸干外植體表面菌液，再接種到共培養(yǎng)培養(yǎng)基上21-23°C暗處共培養(yǎng)3天。5、篩選培養(yǎng)與再生共培養(yǎng)3天后，將共培養(yǎng)的葉片用500mg/L頭孢霉素洗一次，無菌水洗3_5次，再用無菌吸水紙吸干表面的農(nóng)桿菌，轉(zhuǎn)到加有卡那霉素100mg/L及頭孢霉素400mg/L的篩選培養(yǎng)基上，25°C光照條件下培養(yǎng)。在篩選培養(yǎng)基上長出抗性芽，當(dāng)抗性芽長至2-3cm左右時，切下并轉(zhuǎn)入加IOOmgL卡那霉素(或不加)和400mgL頭孢霉素生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根，煙草轉(zhuǎn)化過程見圖4。常用培養(yǎng)基配方LB固體培養(yǎng)基蛋白胨10g/l+酵母提取物5g/l+NaC110g/l+瓊脂15g/l煙草共培養(yǎng)及篩選培養(yǎng)基MS+6-BA2. 25mg/l+NAA0. 3mgl+瓊脂7. 5g/l+蔗糖30g/I (pH 為 5. 8)煙草生根培養(yǎng)基MS++NAA0.3mg/l+ 瓊脂 7. 5g/l+ 蔗糖 30g/l (pH 為 5. 8)實施例4，轉(zhuǎn)化植株分子及生理鑒定I、煙草葉片DNA提取
取適量的葉片放入I. 5mL離心管中，加液氮，充分研磨；然后加入700 yl65°C預(yù)熱的十六烷基三こ基溴化銨(簡稱CTAB)DNA提取緩沖液(配方100mM Tris-HCl,pH8. 0，I. 5MNaCl，50mM EDTA, pH8. 0，1%聚こ烯吡咯烷酮，2% (體積)CTAB)，65°C溫浴60-90分鐘(溫浴過程中每15分鐘取出離心管上下輕輕顛倒混勻)；10000Xg離心10分鐘；取上清，加600 ill氯仿，顛倒混勻靜置3分鐘；10000 Xg離心15分鐘；取上清450 yl，加入900 U I預(yù)冷無水こ醇，34iU5M NaCl，混勻后，冰凍30分鐘，IOOOOXg離心10分鐘；棄上清后，用Iml75%的こ醇，洗滌3次后，加適量雙蒸水溶解。2、陽性轉(zhuǎn)基因植株P(guān)CR檢測采用NPTII引物和CrNCEDl基因特異性引物進(jìn)行PCR擴增。引物序列、反應(yīng)程序及體系分別見表I、表2。采用NPTII引物和CrNCEDl基因特異性引物對煙草再生植株進(jìn)行PCR鑒定，對TO代的21個轉(zhuǎn)基因株系的鑒定結(jié)果顯示一共有17個陽性株系(圖5A)。對TO代轉(zhuǎn)基因煙草進(jìn)行繁殖，得到T2代轉(zhuǎn)基因煙草。NPTII引物和CrNCEDl基因特異性引物鑒 定結(jié)果顯示，T2代エ得到了 8個純合陽性轉(zhuǎn)基因株系(圖5B)。表I、引物序列信息
SW f引物序列退火溢度長度(bp)
NPTII S- AGACAATCGGCTGCTCTGAT -3'56742
5,- TCATTTCGAACCCCAGAGTC -3'
CrNCEDi 特 I S- ATGGCGGCAGCAACTAC -3'62895
引衡I
I 5' GACTTCCOTATCACCiTGCCiCGT -3*表2、PCR反應(yīng)程序
步驟 94 V 56 V/62V 72 V 4 V 循環(huán)數(shù)
ipmi 4分鐘I
0B230 #(56*C) 55 秒(5CTC)30
30 秒 45 秒(621) 2 分鐘(6 步驟35分鐘I
MM 430分鐘表3、PCR反應(yīng)體系
權(quán)利要求
1.一種分離的基因，其特征在于基因，其核苷酸序列為SEQ ID NO: I所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種分離的基因，其特征在于，所述基因的正向引物為5’ - TTCGGATCCATGGCGGCAGCAACTAC -3，，即 SEQ ID NO. 3 ;反向引物為5’ -TTCGAGCTCTTAGGCCTGCTTGGCCA -3，，即 SEQ ID NO. 4。
3.權(quán)利要求I所述的基因在植物抗非生物脅迫中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種柑橘CrNCED1基因及其在植物抗非生物脅迫中的應(yīng)用，從抗旱的印度酸橘(Citrusreshni)中分離、克隆得到一個NCED基因，申請人將其命名為CrNCED1，它包含1821bp的開放閱讀框，編碼606個氨基酸，等電點為6.05，預(yù)測的分子量為67.0kDa。本發(fā)明將CrNCED1基因轉(zhuǎn)化煙草，獲得的轉(zhuǎn)基因植株的抗脫水、抗旱、抗鹽和抗氧化脅迫能力均明顯增強。本發(fā)明為植物抗逆基因工程提供了重要的基因資源，以為實施綠色農(nóng)業(yè)、節(jié)水農(nóng)業(yè)提供新的遺傳資源。
文檔編號C12N15/53GK102747093SQ201210258028
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月24日
發(fā)明者劉繼紅, 吳娟, 鮮黎紅 申請人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)