專利名稱:一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種從魚類加工副產(chǎn)物中提取酶的方法,尤其涉及一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝。
背景技術(shù):
魷魚是生活在海洋中的無脊椎動物,每年全球食用量非常大,而魷魚有30%左右的頭、足、內(nèi)臟及表皮等廢棄物,其中內(nèi)臟占15. 92%,通常被廢棄和就地掩埋處理,這樣既沒有充分開發(fā)魷魚附加值,造成其中蛋白質(zhì)資源的極大浪費,而且還存在著環(huán)境污染的隱患。隨著魷魚加工業(yè)的不斷發(fā)展,加工下腳料中內(nèi)臟占大部分,魷魚內(nèi)臟中含有豐富的酶,但至今還沒有對其進行提取方法的研究。目前對魷魚內(nèi)臟的利用主要集中在利用蛋白酶從魷魚內(nèi)臟中提取魚油和用其生產(chǎn)“魷溶漿”,該法利用內(nèi)源蛋白酶的自溶作用將魷魚內(nèi)臟液化, 以得到蛋白水解液,但通過自溶作用獲得的水解液存在明顯的苦澀味和腥臭味,產(chǎn)品風(fēng)味差。因此,有效地處理魷魚廢棄物并進行高值化綜合利用,具有較大的經(jīng)濟和環(huán)保價值。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足,提供一種提取方法設(shè)計合理、能將魷魚廢棄物進行綜合利用的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實現(xiàn)的。本發(fā)明是一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝,其特點是其步驟如下
(1)以新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料,將水浙干后,按質(zhì)量體積比I:1 3向原料中加入丙酮,再用組織勻漿機處理成漿狀;過濾,所得濾液經(jīng)冷凍離心機0°C,3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,溶液再經(jīng)離心機0°C,3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,所得溶液經(jīng)離心機0°C, 3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,取出沉淀在自然條件下風(fēng)干,得丙酮干粉;
(2)堿性酶的提取將丙酮干粉按重量體積比I:8 12用pH為7. 5的20mM Tris-HCl溶解成均勻狀態(tài),經(jīng)冷凍離心機0°C,3000 4000r/min離心10 20min后,得到上清液,沉淀再用pH為7. 5的20mM Tris-HCl處理后再次離心,棄去沉淀,上清液合并,過濾,得到魷魚內(nèi)臟堿性酶液。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題還可以通過以下的技術(shù)方案來進一步實現(xiàn)。本發(fā)明還提供了另一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝,其特點是其步驟如下
(1)以新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料,將水浙干后,按質(zhì)量體積比I:1 3向原料中加入丙酮,再用組織勻漿機處理成漿狀;過濾,所得濾液經(jīng)冷凍離心機0°C,3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,溶液再經(jīng)離心機0°C,3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,所得溶液經(jīng)離心機0°C, 3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,取出沉淀在自然條件下風(fēng)干,得丙酮干粉;
(2)酸性酶的提取將丙酮干粉按重量體積比I: 8 12用0. 065M HCl溶解成均勻狀態(tài),經(jīng)冷凍離心機0°C, 3000 4000r/min,離心5 20min后,取上清液,沉淀再用0. 065MHCl緩沖液處理后再次離心,棄去沉淀,上清液合井,過濾,即得魷魚內(nèi)臟酸性酶液。本發(fā)明所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝中可以將所得的堿性或者酸性酶液在-20°C _40°C的溫度條件下保藏,作為酶液存入?;蛘呓?jīng)冷凍干燥,即得到高活性的魷魚內(nèi)臟酶酶粉粗制品。保藏的溫度條件最佳為-23. 5°C。與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明方法以魷魚加工廢棄物為原料,從中提取內(nèi)臟酶,有效利用魷魚加工過程中的副產(chǎn)物——內(nèi)臟,變廢為寶,避免了其中蛋白資源的浪費,減少對環(huán)境的污染。該エ藝簡單,生產(chǎn)成本低,高效節(jié)能,本發(fā)明所得酶粉活性高,穩(wěn)定性強,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,エ藝簡単,生產(chǎn)周期短,提取率高,高效節(jié)能,適合 エ業(yè)化生產(chǎn),有很好的經(jīng)濟效益和廣闊的應(yīng)用前景。
具體實施例方式以下進ー步描述本發(fā)明的具體技術(shù)方案,以便于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進ー步地理解本發(fā)明,而不構(gòu)成對其權(quán)利的限制。實施例1,ー種魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝,其步驟如下
(1)以新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料,將水浙干后,按質(zhì)量體積比I:1向原料中加入丙酮,再用組織勻漿機處理成漿狀;過濾,所得濾液經(jīng)冷凍離心機0°c,3000r/min,離心5min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,溶液再經(jīng)離心機0°C, 3000r/min,離心5min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,所得溶液經(jīng)離心機0°C,3000r/min,離心5min,棄去上清液,取出沉淀在自然條件下風(fēng)干,得丙酮干粉;
(2)堿性酶的提取將丙酮干粉按重量體積比I:8用pH為7. 5的20mM Tris-HCl溶解成均勻狀態(tài),經(jīng)冷凍離心機0°C,3000r/min離心IOmin后,得到上清液,沉淀再用pH為7. 5的20mM Tris-HCl處理后再次離心,棄去沉淀,上清液合并,過濾,得到魷魚內(nèi)臟堿性酶液。實施例2,ー種魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝,其步驟如下
(1)以新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料,將水浙干后,按質(zhì)量體積比I: 3向原料中加入丙酮,再用組織勻漿機處理成漿狀;過濾,所得濾液經(jīng)冷凍離心機0°C,3000r/min,離心15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,溶液再經(jīng)離心機0°C, 3000r/min,離心15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,所得溶液經(jīng)離心機0°C, 3000r/min,離心15min,棄去上清液,取出沉淀在自然條件下風(fēng)干,得丙酮干粉;
(2)堿性酶的提取將丙酮干粉按重量體積比I: 12用pH為7. 5的20mM Tris-HCl溶解成均勻狀態(tài),經(jīng)冷凍離心機0°C,4000r/min離心20min后,得到上清液,沉淀再用pH為7. 5的20mM Tris-HCl處理后再次離心,棄去沉淀,上清液合并,過濾,得到魷魚內(nèi)臟堿性酶液。實施例3,ー種魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝,其步驟如下
(I)以新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料,將水浙干后,按質(zhì)量體積比I :2向原料中加入丙酮,再用組織勻漿機處理成漿狀;過濾,所得濾液經(jīng)冷凍離心機0°C,3000r/min,離心lOmin,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,溶液再經(jīng)離心機0°C,3000r/min,離心lOmin,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,所得溶液經(jīng)離心機0°C, 3000r/min,離心lOmin,棄去上清液,取出沉淀在自然條件下風(fēng)干,得丙酮干粉;(2)堿性酶的提取將丙酮干粉按重量體積比I :10用pH為7. 5的20mM Tris-HCl溶解成均勻狀態(tài),經(jīng)冷凍離心機0°C,3500r/min離心15min后,得到上清液,沉淀再用pH為7. 5的20mM Tris-HCl處理后再次離心,棄去沉淀,上清液合并,過濾,得到魷魚內(nèi)臟堿性酶液。實施例4,實施例1-3任何一項所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝中將所得的堿性酶液在_20°C的溫度條件下保藏,或經(jīng)冷凍干燥,即得到高活性的魷魚內(nèi)臟酶酶粉粗制品。實施例5,實施例1-3任何一項所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝中將所得的堿性酶液在_40°C的溫度條件下保藏,或經(jīng)冷凍干燥,即得到高活性的魷魚內(nèi)臟酶酶粉粗制品。實施例6,實施例1-3任何一項所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝中將所得的堿性酶液在-23. 5°C的溫度條件下保藏,或經(jīng)冷凍干燥,即得到高活性的魷魚內(nèi)臟酶酶粉粗制品。實施例7,ー種魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝,其步驟如下 (1)以新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料,將水浙干后,按質(zhì)量體積比I:1向原料中加入丙酮,再用組織勻漿機處理成漿狀;過濾,所得濾液經(jīng)冷凍離心機0°c,3000r/min,離心5min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,溶液再經(jīng)離心機0°C, 3000r/min,離心5min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,所得溶液經(jīng)離心機0°C,3000r/min,離心5min,棄去上清液,取出沉淀在自然條件下風(fēng)干,得丙酮干粉;
(2)酸性酶的提取將丙酮干粉按重量體積比I:8用0. 065M HCl溶解成均勻狀態(tài),經(jīng)冷凍離心機0°C,3000r/min,離心5min后,取上清液,沉淀再用0. 065M HCl緩沖液處理后再次離心,棄去沉淀,上清液合并,過濾,即得魷魚內(nèi)臟酸性酶液。實施例8,ー種魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝,其步驟如下
(1)以新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料,將水浙干后,按質(zhì)量體積比I:3向原料中加入丙酮,再用組織勻漿機處理成漿狀;過濾,所得濾液經(jīng)冷凍離心機0°C,3000r/min,離心15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,溶液再經(jīng)離心機0°C,3000r/min,離心15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,所得溶液經(jīng)離心機0°C, 3000r/min,離心15min,棄去上清液,取出沉淀在自然條件下風(fēng)干,得丙酮干粉;
(2)酸性酶的提取將丙酮干粉按重量體積比I: 12用0. 065M HCl溶解成均勻狀態(tài),經(jīng)冷凍離心機0°C,4000r/min,離心20min后,取上清液,沉淀再用0. 065M HCl緩沖液處理后再次離心,棄去沉淀,上清液合并,過濾,即得魷魚內(nèi)臟酸性酶液。實施例9,ー種魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝,其步驟如下
(1)以新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料,將水浙干后,按質(zhì)量體積比I:2向原料中加入丙酮,再用組織勻漿機處理成漿狀;過濾,所得濾液經(jīng)冷凍離心機0°C,3000r/min,離心lOmin,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,溶液再經(jīng)離心機0°C,3000r/min,離心lOmin,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,所得溶液經(jīng)離心機0°C,3000r/min,離心IOmin,棄去上清液,取出沉淀在自然條件下風(fēng)干,得丙酮干粉;
(2)酸性酶的提取將丙酮干粉按重量體積比I: 10用0. 065M HCl溶解成均勻狀態(tài),經(jīng)冷凍離心機0°C,3500r/min,離心12min后,取上清液,沉淀再用0. 065M HCl緩沖液處理后再次離心,棄去沉淀,上清液合并,過濾,即得魷魚內(nèi)臟酸性酶液。實施例10,實施例7-9任何一項所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝中將所得的酸性酶液在_20°C的溫度條件下保藏,或經(jīng)冷凍干燥,即得到高活性的魷魚內(nèi)臟酶酶粉粗制品。實施例11,實施例7-9任何一項所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取エ藝中將所得的酸性酶液在_40°C的溫度條件下保藏,或經(jīng)冷凍干燥,即得到高活性的魷魚內(nèi)臟酶酶粉粗制品。實施例12,實施例7-9任何一項所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝中將所得的酸性酶液在-23. 5°C的溫度條件下保藏,或經(jīng)冷凍干燥,即得到高活性的魷魚內(nèi)臟酶酶粉粗制品。酶是一種能催化反應(yīng)過程的蛋白質(zhì),本發(fā)明通過酶活力的測定來驗證所提取出來的物質(zhì)是酶。蛋白酶在20°C、pH為7的條件下,水解酪素底物,然后 加入三氯乙酸終止酶反應(yīng),并將未水解的酪素沉淀除去,濾液對紫外光有吸收,可用紫外分光光度法測定。根據(jù)吸光度計算其酶活力。酶活單位的定義每ImL粗酶液,在一定溫度和pH值條件下,Imin水解酪素產(chǎn)生Iug酪氨酸為一個酶活力單位,以(u/mL)表示。I.繪制L-酪氨酸標準曲線
(1)取0.05g L-酪氨酸溶于純水中,定容至25ml,作為標準溶液I,其濃度為2mg/ml ;
(2)將標準溶液I稀釋一倍作為標準溶液2,其濃度為lmg/ml;
(3)將標準溶液2稀釋一倍作為標準溶液3,其濃度為0.5mg/ml ;
(4)將標準溶液3稀釋一倍作為標準溶液4,其濃度為0.25mg/ml ;
(5)再將標準溶液4稀釋一倍作為標準溶液5,其濃度為0.125mg/ml ;
(6)取標準溶液1、2、3、4、5各I.4ml,分別加0. 65ml 22. 5%三氯乙酸溶液,于290nm測其吸光度。(7)根據(jù)測得的吸光度值A(chǔ)為為縱坐標,標準溶液的濃度c為橫坐標作出一條標準曲線。2.酶活力的測定
(I)堿性酶液活力測定
先將酪蛋白溶液放入40±0. 2°C恒溫水浴中,預(yù)熱5min,吸取適量稀釋的堿性酶液2ml于試管中,加入酪蛋白2ml搖勻后放入20°C恒溫水浴中反應(yīng)20min,加入4ml 22. 5%三氯乙酸溶液震蕩搖勻后置于冰水浴中l(wèi)Omin,取出室溫條件下6000r/min離心15 min,取上清液過濾,290nm測其吸光度??瞻诪橄劝牙业鞍着c三氯乙酸混合IOmin后再加酶液,然后與反應(yīng)液共同離心測吸光度值,以蒸餾水校準儀器。在20°C下每毫升酶液每分鐘水解酪蛋白產(chǎn)生I U g酪氨酸,定義為I個蛋白酶活力單位。X = AXKX 8/2 X 1/20 XnXE = 1/5 XAXKXnXE 式中X——樣品的酶活力,(u/mL);
A——試樣溶液的平均吸光度;
K——吸光常數(shù);
8——反應(yīng)試劑的總體積,mL ;
2——吸取酶液2. OOmL ;
1/10-反應(yīng)時間IOmin,以Imin計;
n——稀釋倍數(shù);
E——紫外法與福林法的換算系數(shù)(中性、堿性蛋白酶系數(shù)為0. 50)。
所得結(jié)果表示至整數(shù)。所得堿性酶液活力不低于12u/mL。(2)酸性酶活力測定
先將牛血紅蛋白溶液放入40±0. 2°C恒溫水浴中,預(yù)熱5min,吸取適量稀釋的酶液2ml于試管中,加入牛血紅蛋白2ml搖勻后放入30°C恒溫水浴中反應(yīng)20min,加入4ml 22. 5%三氯こ酸溶液震蕩搖勻后置于冰水浴中IOmin,取出室溫條件下6000r/min離心15 min,取上清液過濾,275nm測其吸光度??瞻诪橄劝雅Qt蛋白與三氯こ酸混合IOmin后再加酶液,然后與反應(yīng)液共同離心測吸光度值,以蒸餾水校準儀器。在20°C下每毫升酶液每分鐘水解酪蛋白產(chǎn)生I U g酪氨酸,定義為I個蛋白酶活力単位。 X = AXKX 8/2 X 1/20 XnXE = 1/5 XAXKXnXE 式中X——樣品的酶活力,(u/mL);
A——試樣溶液的平均吸光度;
K——吸光常數(shù);
8——反應(yīng)試劑的總體積,mL ;
2——吸取酶液2. OOmL ;
1/20-反應(yīng)時間20min,以Imin計;
n——稀釋倍數(shù)
E——紫外法與福林法的換算系數(shù)(酸性蛋白酶系數(shù)為0. 77)。所得酸性酶液活力不低于12u/mL。
權(quán)利要求
1.一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝,其特征在于其步驟如下 (1)以新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料,將水浙干后,按質(zhì)量體積比I:1 3向原料中加入丙酮,再用組織勻漿機處理成漿狀;過濾,所得濾液經(jīng)冷凍離心機0°C,3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,溶液再經(jīng)離心機0°C,3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,所得溶液經(jīng)離心機0°C, 3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,取出沉淀在自然條件下風(fēng)干,得丙酮干粉; (2)堿性酶的提取將丙酮干粉按重量體積比I:8 12用pH為7. 5的20mM Tris-HCl溶解成均勻狀態(tài),經(jīng)冷凍離心機0°C,3000 4000r/min離心10 20min后,得到上清液,沉淀再用pH為7. 5的20mM Tris-HCl處理后再次離心,棄去沉淀,上清液合并,過濾,得到魷魚內(nèi)臟堿性酶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝,其特征在于將所得的堿性酶液在-20°C _40°C的溫度條件下保藏,或經(jīng)冷凍干燥,即得到高活性的魷魚內(nèi)臟酶酶粉粗制品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝,其特征在于保藏的溫度條件為-23. 5。。。
4.一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝,其特征在于其步驟如下 (1)以新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料,將水浙干后,按質(zhì)量體積比I:1 3向原料中加入丙酮,再用組織勻漿機處理成漿狀;過濾,所得濾液經(jīng)冷凍離心機0°C,3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,溶液再經(jīng)離心機0°C, 3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,沉淀用丙酮溶解,所得溶液經(jīng)離心機0°C,3000r/min,離心5 15min,棄去上清液,取出沉淀在自然條件下風(fēng)干,得丙酮干粉; (2)酸性酶的提取將丙酮干粉按重量體積比I: 8 12用0. 065M HCl溶解成均勻狀態(tài),經(jīng)冷凍離心機(TC, 3000 4000r/min,離心5 20min后,取上清液,沉淀再用0. 065MHCl緩沖液處理后再次離心,棄去沉淀,上清液合并,過濾,即得魷魚內(nèi)臟酸性酶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝,其特征在于將所得的酸性酶液在_20°C _40°C溫度條件下保藏,或經(jīng)冷凍干燥,即得到高活性的魷魚內(nèi)臟酶酶粉粗制品。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝,其特征在于保藏的溫度條件為-23. 5。。。
全文摘要
本發(fā)明是一種魷魚內(nèi)臟酶的提取工藝,它以新鮮的魷魚內(nèi)臟為原料,將水瀝干后,按質(zhì)量體積比11~3向原料中加入丙酮,再用組織勻漿機處理成漿狀;過濾,所得濾液經(jīng)冷凍離心機后,取出沉淀在自然條件下風(fēng)干,得丙酮干粉;將丙酮干粉按重量體積比18~12用pH為7.5的20mMTris-HCl溶解成均勻狀態(tài),經(jīng)冷凍離心機,沉淀再用pH為7.5的20mMTris-HCl處理后再次離心,上清液合并,過濾,得到魷魚內(nèi)臟堿性酶液。本發(fā)明方法以魷魚加工廢棄物為原料,從中提取內(nèi)臟酶,避免了其中蛋白資源的浪費,減少對環(huán)境的污染。該工藝簡單,生產(chǎn)成本低,高效節(jié)能,本發(fā)明所得酶粉活性高,穩(wěn)定性強,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,工藝簡單,生產(chǎn)周期短,提取率高,高效節(jié)能,適合工業(yè)化生產(chǎn),有很好的經(jīng)濟效益和廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號C12N9/64GK102787110SQ20121021795
公開日2012年11月21日 申請日期2012年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月28日
發(fā)明者張俊杰, 朱勤, 段蕊, 陳憶鳳 申請人:江蘇天福萊集團有限公司