專利名稱：載細(xì)胞生物微膠囊的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于輔料、載體制備技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種制備載細(xì)胞生物微膠囊的方法。
背景技術(shù)：
對(duì)組織工程而言，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)將干細(xì)胞或相關(guān)細(xì)胞通過載體植入壞死骨的表面能夠有效的治療骨壞死；對(duì)生物工程而言細(xì)胞載體可以避免體內(nèi)相關(guān)蛋白的干擾，正確到達(dá)病灶部分，實(shí)現(xiàn)局部用藥；對(duì)臨床應(yīng)用而言，顆粒運(yùn)載細(xì)胞更易實(shí)施手術(shù)，保證治療過程中細(xì)胞的活性。將無免疫抑制的天然產(chǎn)物制成微膠囊，可以解決組織工程，生物工程和臨床應(yīng)用面臨的很多問題，對(duì)生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有一定的積極意義。作為無免疫抑制的天然產(chǎn)物，天然 多糖由于其優(yōu)越的性能一直是學(xué)界研究的對(duì)象，十年來文獻(xiàn)中大量報(bào)道了有關(guān)天然多糖在生物醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用，例如Lee等以海藻酸鈉為囊材負(fù)載胰島素，Lim等人將微囊化技術(shù)與組織細(xì)胞移植相結(jié)合，制備海藻酸鈉/聚賴氨酸(APA)微膠囊作為免疫隔離工具，這些研究成果較好的解決了組織細(xì)胞移植過程中的免疫排斥問題，避免或減少了昂貴的免疫抑制劑的使用，為組織細(xì)胞移植治療神經(jīng)/內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病提供了新思路。但由于制備技術(shù)和材料的限制，這些方法制備的載細(xì)胞膠囊無法達(dá)到理想效果，往往存在細(xì)胞生長(zhǎng)困難，細(xì)胞間信息傳遞受阻等問題，使該類膠囊在實(shí)際應(yīng)用中受到局限，近幾年對(duì)該類膠囊載細(xì)胞的研究漸漸減少，而轉(zhuǎn)向其他方面如Kaddoumi等以改性聚こニ醇制備載細(xì)胞顆粒，用于組織エ程修復(fù)的臨床研究。對(duì)于傳統(tǒng)材料，制備膠囊的技術(shù)包括物理方法、化學(xué)方法和物理化學(xué)方法，各類方法中乳液法和噴霧干燥法較為常用，噴霧干燥法成囊粒徑均一，大小在微米到毫米范圍內(nèi)可控，但無法實(shí)現(xiàn)一歩形成多孔中空顆粒，比較而言乳液法操作簡(jiǎn)單無需特殊設(shè)備因此使用廣泛。而目前乳液法的使用雖被廣泛報(bào)道，但僅局限于無機(jī)物和某些化學(xué)合成的高分子物質(zhì)，如Peter Ma等結(jié)合細(xì)胞反應(yīng)器和乳液聚合兩種技術(shù)，對(duì)聚乳酸微囊進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)具有三維結(jié)構(gòu)的多孔聚乳酸微囊成囊效果理想，大小均一，且細(xì)胞在其表面生長(zhǎng)狀態(tài)良好。但報(bào)道中，乳液體系和細(xì)胞微載體所使用的材料不具備天然產(chǎn)物的良好生物相容性且會(huì)引起免疫系統(tǒng)響應(yīng)，不是理想的生物醫(yī)用材料，無法推廣應(yīng)用。因此，解決制備方法、材料和實(shí)際應(yīng)用之間的矛盾，將是當(dāng)前生物材料領(lǐng)域的重大課題，若能以理想的制備方法和理想的材料制備具有三維多孔結(jié)構(gòu)的細(xì)胞微囊化載體將對(duì)組織工程，制藥，和生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域均能起到良好的推動(dòng)作用。

發(fā)明內(nèi)容
解決的技術(shù)問題本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)以上傳統(tǒng)エ藝中存在制備方法，材料和實(shí)際應(yīng)用之間的矛盾，提出ー種制備納米載藥生物微膠囊的方法。本發(fā)明采用的材料價(jià)格低廉易獲取，涉及的新技術(shù)，路線簡(jiǎn)單，技術(shù)含量高，且產(chǎn)品載細(xì)胞量大，隔離和自降解性能好，對(duì)細(xì)胞和生物體無毒，有望取代現(xiàn)階段所使用的傳統(tǒng)材料和制備方法，解決了當(dāng)前同類材料在膠囊的制備過程中大小不一，難以中空，尺寸不適，使用上存在著高泄漏，聞風(fēng)險(xiǎn)的問題。技術(shù)方案制備載細(xì)胞生物微膠囊的方法，制備步驟為a.將陰離子表面活性劑與油相混合，制備得到油包水型反相乳液體系，所述的油包水型反相乳液體系，其油相為石蠟油，環(huán)己烷或辛烷中的ー種，陰離子表面活性劑為直鏈烷基苯磺酸鈉、α-烯烴磺酸鹽、烷基磺酸鹽、α -磺基單羧酸及其衍生物、脂肪酸磺烷基酷、脂肪酸磺烷基酰胺、琥珀酸雙酷磺酸鹽、硫酸酯鹽、烷基甘油醚磺酸鹽和磷酸酯鹽中的ー種或幾種，將油相混合于陰離子表面活性劑中得到油包水型反相乳液體系，使混合液呈現(xiàn)乳白色，室溫放置30分鐘不分層山.對(duì)陽離子聚電解質(zhì)多糖進(jìn)行降解處理，得到分子量為未降解之前三分之ニ的陽離子聚電解質(zhì)多糖；c.向步驟a制備的油包水型反相乳液體系中加入經(jīng)步驟b降解處理后的低 分子量陽離子聚電解質(zhì)多糖，加入量不超過乳液體系總質(zhì)量的50%，通過自組裝反應(yīng)聚合成囊；d.將步驟c所得的含囊乳液體系固液分離，得到固體微膠囊。所述烷基磺酸鹽為伯烷基磺酸鹽或仲烷基磺酸鹽。所述的陽離子聚電解質(zhì)多糖為明膠、聚氨基葡萄糖、羥甲基殼聚糖、殼聚糖和殼寡糖中的ー種或幾種混合物。有益效果
本技術(shù)方案提出的以乳體系為成囊環(huán)境，以陰離子表面活性劑為分散劑和初步聚合齊U，對(duì)降解后的低分子量陽離子聚電解質(zhì)多糖進(jìn)行表面鉸鏈成囊。以殼聚糖為例，降解后的低分子量殼聚糖可以在微乳體系中形成微膠束，在膠束反應(yīng)器中，降解后的低分子量殼聚糖為核與陰離子表面活性劑和陰離子聚電解質(zhì)通過正負(fù)離子聚合成外表面，該類膠囊成三維中空多孔結(jié)構(gòu)，在生物材料領(lǐng)域具有極高的應(yīng)用前景，將成為ー類新型細(xì)胞載體。微膠囊的合成可以分為具陰離子表面活性劑的油相體系制備、低分子量聚陽離子電解質(zhì)多糖水溶液的乳化、膠囊的自組裝反應(yīng)三個(gè)步驟。所述的低分子量聚陽離子電解質(zhì)多糖水溶液在陰離子表面活性劑的油相體系中發(fā)生初步鉸鏈，在低分子量聚陽離子電解質(zhì)多糖外層復(fù)合成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。其中單個(gè)納米顆粒粒徑一般在130 μ m左右。該類膠囊避免了某些復(fù)合微球由高分子材料(如聚苯こ烯等)或半高分子材料(如聚こニ醇等)包埋細(xì)胞的復(fù)雜步驟，且粒徑均勻，分散性好，可通過攪拌速度、反應(yīng)時(shí)間、清洗方法進(jìn)ー步控制顆粒的大小，膜的厚度及孔隙綠等成囊因素。針對(duì)微乳體系可能會(huì)在膠囊內(nèi)殘留乳化劑和助乳化劑的問題，本文對(duì)膠囊進(jìn)行了生物相容性評(píng)價(jià)，通過細(xì)胞毒性試驗(yàn)和動(dòng)物全身毒性試驗(yàn)，研究者發(fā)現(xiàn)細(xì)胞在細(xì)胞載體微囊中的相對(duì)增殖度在七天中從71. 33%提高到96. 97%，說明材料溶出物對(duì)細(xì)胞沒有傷害，毒性較小。通過全身急性毒性試驗(yàn)觀察小鼠，發(fā)現(xiàn)小鼠運(yùn)動(dòng)飲食均正常，未見腹部刺激癥狀，眼瞼下垂，等不良特征，小鼠各項(xiàng)指標(biāo)均符合《醫(yī)療器械監(jiān)瞀管理和評(píng)價(jià)》2008年2月第一版中《醫(yī)療器械臨床研究標(biāo)準(zhǔn)(IS014155 — 1996 )中的詳細(xì)描述。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，低分子量殼聚糖微膠囊并無急性毒性作用，生物相容性好。


圖I為膠囊結(jié)構(gòu)示意圖，聚陽離子多糖核1，離子交聯(lián)殼2 ;圖2為膠囊的SEM照片細(xì)胞在膠囊內(nèi)生長(zhǎng)情況染色照片；微囊的SEM照片(a)和養(yǎng)細(xì)胞后，亞甲基橙染色照片(b)，亮色為活細(xì)胞，深色為死細(xì)胞。圖3為載溶血酶Al的微囊中酶活的測(cè)定。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :
一、對(duì)陽離子聚電解質(zhì)多糖如明膠、聚氨基葡萄糖、羥甲基殼聚糖、殼聚糖和殼寡糖進(jìn)行降解處理，以羥甲基殼聚糖、殼寡糖和明膠為例說明
以羥甲基殼聚糖制備低分子量羥甲基殼聚糖
反應(yīng)在非均相體系中進(jìn)行，羥甲基殼聚糖首先分散于去離子水中，然后以質(zhì)量比1:1加入雙氧水，于恒溫水浴中進(jìn)行降解反應(yīng)，控制反應(yīng)時(shí)間為8-10小時(shí)以控制產(chǎn)物分子量，具體降解反應(yīng)的步驟如下根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求安裝好實(shí)驗(yàn)儀器后，加入稱取的(3. OOOg)羥甲基殼聚糖，隨后以質(zhì)量比25 :1 (ff ff)加入去離子水75g，加入雙氧水78g，將殼聚糖充分分散，加熱升溫至75°C到85°C之間，攪拌均勻，使羥甲基殼聚糖恒溫反應(yīng)至溶液顔色由無色轉(zhuǎn)為黃緑，停止反應(yīng)。濾去不溶性物質(zhì)，調(diào)濾液的pH值至8，過濾，將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上50°C減壓蒸發(fā)濃縮至原體積的三分之一左右，用9倍濾液體積的無水こ醇沉淀，90%こ醇洗滌兩次，50°C以內(nèi)減壓干燥，最后得到水溶性的低分子量殼聚糖。利用旋轉(zhuǎn)粘度計(jì)測(cè)定其分子量。使降解后的陽尚子多糖分子量為初始分子量的三分之ニ。以殼寡糖制備低分子量殼寡糖
反應(yīng)在非均相體系中進(jìn)行，殼寡糖首先分散于去離子水中，然后以質(zhì)量比I :1加入雙氧水，于恒溫水浴中進(jìn)行降解反應(yīng)，通過調(diào)整反應(yīng)時(shí)間來控制產(chǎn)物分子量，具體降解反應(yīng)的步驟如下根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求安裝好實(shí)驗(yàn)儀器后，加入稱取的(3. OOOg)羥甲基殼聚糖，隨后以質(zhì)量比10 1加入去離子水30g，加入雙氧水33g，將殼寡糖充分分散，加熱升溫至75°C到85°C之間，攪拌均勻，使殼寡糖恒溫反應(yīng)5小時(shí)，至溶液顔色由無色轉(zhuǎn)為黃綠，停止反應(yīng)。濾去不溶性物質(zhì)，調(diào)濾液的pH值至8，過濾，將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上50°C減壓蒸發(fā)濃縮至原體積的三分之一左右，用9倍濾液體積的無水こ醇沉淀，90%こ醇洗滌兩次，50°C以內(nèi)減壓干燥，最后得到水溶性的低分子量殼寡糖。利用旋轉(zhuǎn)粘度計(jì)測(cè)定其分子量。使降解后的陽離子多糖分子量為初始分子量的三分之ニ。以明膠制備低分子量明膠
在均相體系中進(jìn)行明膠的降解，首先將干燥過的明膠溶于去離子水中，配置成濃度為2% wt的溶液，加熱至100°C，冷卻至室溫后平行取三份2% wt的明膠均相溶液10mL，平鋪于IScm2XScm2的平板上，在紫外儀中降解，自行選取降解模式，紫外光強(qiáng)度為48W，波長(zhǎng)為312nm，每平方厘米的照射量為O. 120J/cm2。利用旋轉(zhuǎn)粘度計(jì)測(cè)定其分子量。使降解后的陽離子多糖分子量為初始分子量的三分之ニ。ニ、微囊的制備固定油相(O)的加入量，利用陰離子表面活性剤，其中油相可以為石蠟油，環(huán)己烷或辛烷中的ー種，陰離子表面活性劑可以為直鏈烷基苯磺酸鈉(LAS)、α -烯烴磺酸鹽(AOS)、烷基磺酸鹽(AS和SAS)、α ー磺基單羧酸及其衍生物(MES)、脂肪酸磺烷基酯(Ig印onA)、脂肪酸磺烷基酰胺(Ig印on T)、琥珀酸雙酯磺酸鹽、硫酸酯鹽、烷基甘油醚磺酸鹽(AGS)或磷酸酯鹽，在混合液中滴加低分子量陽離子聚電解質(zhì)多糖，使其在陰離子表面活性劑的作用下自組裝成囊，其中所得油包水型反相乳液體系呈現(xiàn)乳白色，室溫放置30分鐘不分層。石蠟油、α -烯烴磺酸鹽(AOS)和低分子量羥甲基殼聚糖溶液 將α-烯烴磺酸鹽(AOS)分散于石蠟油中，石蠟油與α-烯烴磺酸鹽(AOS)的質(zhì)量比例為3 :1，低速攪拌(50轉(zhuǎn)/秒以上，500轉(zhuǎn)/秒以下)的過程中分散低分子量羥甲基殼聚糖溶液于石蠟油/α-烯烴磺酸鹽(AOS)中，在攪拌的條件下制成混合體系。所述在攪拌條件下向體系中滴加低分子量羥甲基殼聚糖溶液，溶液濃度控制在7%wt以下l%wt以上，滴加量為上述油包水型反相乳液體系質(zhì)量的20 — 30%，攪拌至少十分鐘，自組裝成囊。停止攪拌，將混合體系自然沉淀分離，取出沉淀以90%的こ醇洗滌，過濾得到微膠囊。如圖I所示。該制備方法技術(shù)簡(jiǎn)單易操作，形成的顆粒粒徑分布均勻，顆粒不團(tuán)聚不粘連易于分離并具有良好的生物相容性是理想的細(xì)胞載體顆粒。以環(huán)己烷、脂肪酸磺烷基酰胺(Ig印on T)、琥珀酸雙酯磺酸鹽和低分子量殼寡糖的溶液制備顆粒
將脂肪酸磺烷基酰胺(Ig印on T):琥珀酸雙酯磺酸鹽以任意比例混合(S混合液)，將S混合液與環(huán)己烷以I :3 (質(zhì)量比)混合，低速攪拌(50轉(zhuǎn)/秒以上，500轉(zhuǎn)/秒以下)的過程中分散低分子量殼寡糖于脂肪酸磺烷基酰胺(Ig印on T)/琥珀酸雙酯磺酸鹽/環(huán)己烷溶液中，所述分散的過程中滴加的低分子量殼寡糖溶液，溶液濃度控制的7%wt以下，滴加量為上述油包水型反相乳液體系質(zhì)量的20 — 30%，繼續(xù)攪拌10分鐘以上，自組裝成囊。停止攪拌，將混合體系自然沉淀分離，取出沉淀以90%的こ醇洗滌，過濾得到微膠囊。圖2為溶液中膠囊的SEM照片。該制備方法技術(shù)簡(jiǎn)單易操作，形成的顆粒粒徑分布均勻，顆粒不團(tuán)聚不粘連易于分離并具有良好的生物相容性是理想的細(xì)胞載體顆粒。三、對(duì)比例的研究。不對(duì)聚電解質(zhì)多糖進(jìn)行技術(shù)處理，將沒有降解的殼寡糖直接加入乳化體系，
考察未降解殼寡糖能否制成均勻微囊
以石蠟油為油相，利用陰離子表面活性劑烷基甘油醚磺酸鹽(AGS)和磷酸酯鹽，以陰離子表面活性劑烷基甘油醚磺酸鹽(AGS)與磷酸酯鹽任意比混合液為S組分，石蠟油與S組分混合液的比例為3 1 (質(zhì)量比)，在50轉(zhuǎn)/秒以上，500轉(zhuǎn)/秒以下保持勻速攪，在攪拌條件下向體系中滴加未降解過的殼寡糖溶液，濃度同上述的使用量，滴加量為上述體系體積的20 — 30%，繼續(xù)攪拌十分鐘以上，形成粘連顆粒，或塊狀凝膠無法形成乳化體系亦無法成囊。四、在乳化體系中可制備包埋細(xì)胞或酶類物質(zhì)的膠囊，并對(duì)膠囊進(jìn)行熒光發(fā)光觀察和酶性能的考察。考察微乳體系中制備載細(xì)胞微膠囊的過程
以乳化體系制備載細(xì)胞的微膠囊
將細(xì)胞與低分子量殼聚糖水溶液共混制備成細(xì)胞個(gè)數(shù)不低于IO2個(gè)/mL，不高于IO6個(gè)/mL的均相體系，制備時(shí)注意不能急速攪拌。將載細(xì)胞的均相體系分散于含有陰離子表面活性劑磷脂鹽的石蠟油溶液中，使細(xì)胞/殼聚糖混合液與含陰離子表面活性劑的石蠟油溶液體積比為I :1，勻速攪拌(50轉(zhuǎn)/秒以上，500轉(zhuǎn)/秒以下)，30min內(nèi)停止攪拌，將體系低速離心(不高于1000rpm/min) 2分鐘,過濾得到載細(xì)胞微膠囊。
膠囊對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
將載細(xì)胞微囊培養(yǎng)于九十六孔板相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液中，在第一天，第四天，第七天用MTT試劑盒對(duì)載細(xì)胞微膠囊染色，加入20 μ L/孔的MTT ( 2mg/mL)液，繼續(xù)培養(yǎng)6h拋棄孔內(nèi)的培養(yǎng)液和樣品，用PBS溶液洗滌孔內(nèi)殘余樣品兩到三次，加入150 μ L /孔的DMS0，震蕩lOmin，在免疫酶標(biāo)儀上以490nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度。根據(jù)以下公式計(jì)算細(xì)胞的相對(duì)增殖度(RGR)
RGR=(實(shí)驗(yàn)組平均吸光度/陰性對(duì)照組平均吸光度)X 100%
通過酶標(biāo)儀檢測(cè)微囊中細(xì)胞的OD值從而推斷細(xì)胞在微囊中的増殖情況。微囊內(nèi)細(xì)胞的亞甲基橙染色照片如圖2?？疾烊橐后w系中制備溶血磷脂酶Al微膠囊的過程
以乳液體系制備溶血磷脂酶Al微膠囊
取O. 5mL酶液與5mL 3%wt低分子量羥甲基殼聚糖溶液共混制備成均相體系。將包埋溶血酶Al的均相體系分散于含有陰離子表面活性劑AOT的環(huán)己烷溶液中，使陰離子表面活性劑和油相的比例為I :3 (質(zhì)量比)，繼續(xù)攪拌形成低分子量羥甲基殼聚糖/溶血磷脂酶Al水溶液為水相，同時(shí)包含油相和表面活性劑的反相W/0乳液體系，分散30分鐘，繼續(xù)以500轉(zhuǎn)/秒以上攪拌，反應(yīng)30分鐘，停止反應(yīng)，將體系離心分離，過濾得到微膠囊。膠囊對(duì)溶血磷脂酶A活力的研究
以5%wt的新鮮蛋黃5mL為底物，以IOmL O. 05 mo I/L的Tris-HCl為緩沖溶液，加入5mL O. 01 mol/L的去氧膽酸鈉，5mL 25mmol/L的CaCl2,加入實(shí)驗(yàn)所用量的酶液,50°C恒溫振蕩，在IOmin時(shí)間內(nèi)用O. I mol/L的NaOH滴定，保持恒定pH值，測(cè)定所消耗的NaOH體積。酶活力単位定義為，在上述條件下毎分鐘釋放Iymol游離脂肪酸的酶量，為ー個(gè)酶學(xué)単位(μ)。精密稱取微膠囊適量，以上述方法測(cè)定一周內(nèi)的酶活，繪制酶活半衰期曲線。見圖3。五、對(duì)膠囊進(jìn)行生物相容性評(píng)價(jià)
對(duì)膠囊進(jìn)行小鼠全身急性毒性，細(xì)胞毒性試驗(yàn)，采用(石蠟油、α-烯烴磺酸鹽(AOS)和低分子量羥甲基殼聚糖)和(環(huán)己烷、脂肪酸磺烷基酰胺(Ig印on T)、琥珀酸雙酯磺酸鹽和低分子量殼寡糖)中制備的膠囊。小鼠全身毒性試驗(yàn)
本實(shí)驗(yàn)是ー種非特異性急性毒性試驗(yàn)，將實(shí)驗(yàn)材料或材料浸提液通過動(dòng)物靜脈或腹腔注射到動(dòng)物體內(nèi)，觀察其生物學(xué)反應(yīng)以判定材料的急性毒性作用。選擇未經(jīng)過任何其他實(shí)驗(yàn)的昆明小白鼠十只，每只重約23g_25g，實(shí)驗(yàn)前在同一環(huán)境條件下，使用同一飼料培養(yǎng)3日，在此期間體重不減輕，精神、食欲、排泄等無異?，F(xiàn)象。以0. 9%氯化鈉溶液為陰性對(duì)照，考察低分子量羥甲基殼聚糖膠囊浸提液的生物相容性。浸提液制備方法為在制作浸提液前，先用與陰性對(duì)照同一批號(hào)的滅菌0. 9%氯化鈉溶液沖洗3遍，浸提液按照“試樣”“滅菌0.9%氯化鈉溶液”=0.1 (g)l (mL) (W/V)浸提，外部條件為恒溫?fù)u床上于37 ±0. 15 °C, 50 r · min 1振搖，浸提時(shí)間為48h。將昆明小鼠分為兩組每組五只，為兩組小鼠分別注射滅菌0. 9%氯化鈉溶液和材料浸提液，注射量為每公斤50mL (50mL/kg)，將兩組昆明小鼠稱重并在同一環(huán)境條件下，使用同一飼料培養(yǎng)24h、48h、72h分別稱量小鼠的體重。記錄小鼠有無不良反映。經(jīng)觀察試驗(yàn)組中ー只小鼠在四小時(shí)有輕微運(yùn)動(dòng) 能力減退的現(xiàn)象18小時(shí)后又恢復(fù)正常其他小鼠均沒有出現(xiàn)異常情況。符合《藥典》的相關(guān)規(guī)則。
權(quán)利要求
1.載細(xì)胞生物微膠囊的制備方法，其特征在于制備步驟為 a.將陰離子表面活性劑與油相混合，制備得到油包水型反相乳液體系，所述的油包水型反相乳液體系，其油相為石蠟油，環(huán)己烷或辛烷中的一種，陰離子表面活性劑為直鏈烷基苯磺酸鈉、a-烯烴磺酸鹽、烷基磺酸鹽、a-磺基單羧酸及其衍生物、脂肪酸磺烷基酯、脂肪酸磺烷基酰胺、琥珀酸雙酯磺酸鹽、硫酸酯鹽、烷基甘油醚磺酸鹽和磷酸酯鹽中的一種或幾種，將油相混合于陰離子表面活性劑中得到油包水型反相乳液體系，使混合液呈現(xiàn)乳白色，室溫放置30分鐘不分層； b.對(duì)陽離子聚電解質(zhì)多糖進(jìn)行降解處理，得到分子量為未降解之前三分之二的陽離子聚電解質(zhì)多糖； c.向步驟a制備的油包水型反相乳液體系中加入經(jīng)步驟b降解處理后的低分子量陽離子聚電解質(zhì)多糖，加入量不超過乳液體系總質(zhì)量的50%,通過自組裝反應(yīng)聚合成囊； d.將步驟c所得的含囊乳液體系固液分離，得到固體微膠囊。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的載細(xì)胞生物微膠囊的制備方法，其特征在于烷基磺酸鹽為伯烷基磺酸鹽或仲烷基磺酸鹽。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的載細(xì)胞生物微膠囊的制備方法，其特征在于所述的陽離子聚電解質(zhì)多糖為明膠、聚氨基葡萄糖、羥甲基殼聚糖、殼聚糖和殼寡糖中的一種或幾種混合物。
全文摘要
載細(xì)胞生物微膠囊的制備方法，制備步驟為a.將陰離子表面活性劑與油相混合，制備得到油包水型反相乳液體系，將油相混合于陰離子表面活性劑中得到油包水型反相乳液體系，使混合液呈現(xiàn)乳白色，室溫放置30分鐘不分層；b.對(duì)陽離子聚電解質(zhì)多糖進(jìn)行降解處理，得到分子量為未降解之前三分之二的陽離子聚電解質(zhì)多糖；c.向步驟a制備的油包水型反相乳液體系中加入經(jīng)步驟b降解處理后的低分子量陽離子聚電解質(zhì)多糖，通過自組裝反應(yīng)聚合成囊；d.將步驟c所得的含囊乳液體系固液分離，得到固體微膠囊。
文檔編號(hào)C12N11/04GK102703417SQ20121021285
公開日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月26日
發(fā)明者何農(nóng)躍, 馮章啟, 王婷 申請(qǐng)人:東南大學(xué)