專利名稱：一種檢測五條染色體數(shù)目異常的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體地說，本發(fā)明涉及一種檢測五條染色體數(shù)目異常的方法。
背景技術(shù)：
21三體綜合征又稱唐氏綜合征或先天愚型屬常染色體畸變，是小兒染色體病中最常見的一種，活嬰中發(fā)生率約1/(600 800)，母親年齡愈大，本病的發(fā)病率愈高。約60%患兒在胎兒早期即夭折流產(chǎn)。21三體綜合征會導(dǎo)致包括學(xué)習(xí)障礙、智能障礙和殘疾等。另夕卜，13、18、X和Y染色體的非整倍性分別導(dǎo)致帕陶氏綜合征、愛德華氏綜合征、克萊恩費爾特綜合征和特納氏綜合征，這些非整倍染色體導(dǎo)致的遺傳病會不同程度地使人體發(fā)育失常和出現(xiàn)其它病變。一旦患兒出生，將給家庭帶來巨大的痛苦，也給社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)。目前，臨床上用于檢測唐氏綜合征的手段主要是抽取孕婦血清，檢測母體血清中妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)、游離hCGB亞基(早期兩項)或甲型胎兒蛋白(AFP)和絨毛促性腺激素(HCG)和游離雌三醇(uE3)(中期三項)的指標(biāo)，結(jié)合孕婦預(yù)產(chǎn)期、體重、年齡和采血時的孕周，計算出“唐氏兒”的危險系數(shù)，這樣可以查出80%的唐氏兒和部分18三體，但不能確診胎兒是否患病。唐氏篩查指數(shù)超出正常的孕婦應(yīng)進(jìn)行羊膜穿刺檢查或絨毛檢查，然后進(jìn)行胎兒細(xì)胞染色體核型分析。而染色體核型分析的缺點是耗時長(一周以上)，技術(shù)要求相對較高，收費也較高。分子診斷，又稱基因診斷，是一種應(yīng)用高科技手段檢測DNA和RNA，進(jìn)而揭示基因的結(jié)構(gòu)和表達(dá)的技術(shù)。該技術(shù)目前發(fā)展迅速，應(yīng)用領(lǐng)域十分廣泛。我們的方法應(yīng)用多重PCR和毛細(xì)電泳的方法，具有靈敏、定量、快速、高通量等技術(shù)優(yōu)勢。我們的發(fā)明能為產(chǎn)科臨床提供一種優(yōu)越的分子診斷方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種同步擴(kuò)增三十八個人類基因位點(男性三十八位點，女性 位點)的多重PCR方案，并能同步檢測13、18、21、X和Y五條染色體數(shù)目異常的方法
及該方法的用途。根據(jù)本發(fā)明的第一方面，一種檢測五條染色體數(shù)目異常的方法，用于同時檢測包括21、13、18、X和Y染色體在內(nèi)的五條染色體數(shù)目的非整倍性，包括:(I)、在所述五條染色體上分別選取七個基因，針對所選取的三十八的基因設(shè)計了三十八對引物(表I) ;(2)、利用以上引物組合進(jìn)行多重PCR和毛細(xì)電泳；(3)、利用軟件對電泳結(jié)果進(jìn)行分析。優(yōu)選地，所述染色體數(shù)目的非整倍性是指不同于正常人體的染色體數(shù)目的增加或者缺失。優(yōu)選地，步驟(I)還包括在這五條染色體之外的其他染色體上選取三個基因作為對照(CK)。優(yōu)選地，所述步驟(2)中的PCR模板為人類基因組DNA。
優(yōu)選地，同一染色體的若干個基因盡量位于該染色體的不同區(qū)域；設(shè)計片段大小介于IOObp和400bp之間,相鄰兩片段大小之差一般為3 10bp。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，一種采用前述方法的用途，所述的方法應(yīng)用于采用有創(chuàng)和無創(chuàng)兩種手段獲得需要檢測的臨床樣品的產(chǎn)前診斷。優(yōu)選地，所述的有創(chuàng)手段通過羊膜穿刺獲取羊水或胚胎絨毛膜細(xì)胞。優(yōu)選地，所述的無創(chuàng)手段通過流式細(xì)胞儀篩選孕婦外周血得到胎兒細(xì)胞。由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明具有如下的有益效果:本發(fā)明人經(jīng)過深入的研究，首次研發(fā)生產(chǎn)結(jié)合了 PCR和毛細(xì)電泳優(yōu)勢的“人類染色體非整倍性多重分子檢測試劑盒”(以下簡稱“試劑盒”)。該試劑盒采用分子診斷的方法，不僅靈敏度和準(zhǔn)確率高、耗時短(8小時)，而且能同時檢測5種不同的先天遺傳病，費用也相對低廉。這正 是目前臨床急需的診斷手段，具有良好的市場應(yīng)用前景。表1、人類染色體非整倍性分析各位點及引物序列表
權(quán)利要求
1.一種檢測五條染色體數(shù)目異常的方法，用于同時檢測包括21、13、18、X和Y染色體在內(nèi)的五條染色體數(shù)目的非整倍性，包括:(I)、在所述五條染色體上分別選取七個基因，針對所選取的三十八的基因設(shè)計了三十八對引物；(2)、利用以上引物組合進(jìn)行多重PCR和毛細(xì)電泳；(3)、利用軟件對電泳結(jié)果進(jìn)行分析。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，所述染色體數(shù)目的非整倍性是指不同于正常人體的染色體數(shù)目的增加或者缺失。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，步驟(I)還包括在這五條染色體之外的其他染色體上選取三個基因作為對照(CK)。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，所述步驟(2)中的PCR模板為人類基因組DNA。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，同一染色體的若干個基因盡量位于該染色體的不同區(qū)域；設(shè)計片段大小介于IOObp和400bp之間,相鄰兩片段大小之差一般為3 10bp。
6.一種如前述權(quán)利要求中的任一項所述的方法的用途，所述的方法應(yīng)用于采用有創(chuàng)和無創(chuàng)兩種手段獲得需要檢測的臨床樣品的產(chǎn)前診斷。
7.如權(quán)利要求6所述的用途，所述的有創(chuàng)手段通過羊膜穿刺獲取羊水或胚胎絨毛膜細(xì) 胞。
8.如權(quán)利要求6所述的用途，所述的無創(chuàng)手段通過流式細(xì)胞儀篩選孕婦外周血得到胎兒細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測五條染色體數(shù)目異常的方法。用于同時檢測包括21、13、18、X和Y染色體在內(nèi)的五條染色體數(shù)目的非整倍性，包括(1)在所述五條染色體上分別選取七個基因，針對所選取的三十八的基因設(shè)計了三十八對引物；(2)利用以上引物組合進(jìn)行多重PCR和毛細(xì)電泳；(3)利用軟件對電泳結(jié)果進(jìn)行分析。
文檔編號C12Q1/68GK103074416SQ20121020420
公開日2013年5月1日 申請日期2012年6月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月20日
發(fā)明者吳勇, 徐冰 申請人:海爾施生物醫(yī)藥股份有限公司