專利名稱：基于多孔材料的核酸等溫?cái)U(kuò)增試劑的保存方法及試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物試劑保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生化試劑組合物的保存方法，確切地說(shuō)是分子生物學(xué)中核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑及其混合物的常溫保存方法，以及采用該方法制作的可以常溫保存和運(yùn)輸?shù)姆磻?yīng)試劑。
背景技術(shù)：
在過(guò)去的20年里，以多聚酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)為代表的核酸擴(kuò)增技術(shù)得到了迅猛的發(fā)展和應(yīng)用。最近幾年，產(chǎn)生了一系列新型的核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，這些技術(shù)或基于DNA/RNA生物合成機(jī)制研究的新發(fā)現(xiàn)，或者利用具有特殊功能的核酸酶來(lái)實(shí)現(xiàn)恒溫條件下對(duì)目標(biāo)核酸的擴(kuò)增；無(wú)論在實(shí)際操作還是在儀器要求方面，這些等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)都比PCR技術(shù)更簡(jiǎn)單和廉價(jià)，從而更容易被開(kāi)發(fā)和利用，尤其是在核酸檢測(cè)及診 斷領(lǐng)域，等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)正逐漸成為PCR技術(shù)的替代方法而被廣泛應(yīng)用。利用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)開(kāi)發(fā)的各類檢測(cè)及診斷產(chǎn)品在特異性、易用性、成本和方便性等方面具有PCR技術(shù)產(chǎn)品無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)，市場(chǎng)前景極為廣闊。雖然等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)本身優(yōu)勢(shì)明顯，但基于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的產(chǎn)品在大規(guī)模應(yīng)用過(guò)程中卻面臨一些問(wèn)題的困擾，其中最為突出的是產(chǎn)品需要低溫冷凍保存和運(yùn)輸。作為核酸擴(kuò)增技術(shù)的一種，等溫?cái)U(kuò)增也需要由具有生物活性的酶的參與，而酶生物活性的長(zhǎng)期保持需要低溫冷凍條件，同時(shí)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)所需的寡聚核苷酸引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)和反應(yīng)緩沖液等均需在冷凍條件下貯存，并且反復(fù)凍融會(huì)使這些成份失效，所以基于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的產(chǎn)品要求在低溫冷凍條件進(jìn)行運(yùn)輸和保存，這一方面增加了運(yùn)輸成本，另一方面也限制了這些產(chǎn)品在不具備低溫保存條件的環(huán)境或地區(qū)的應(yīng)用。對(duì)于大規(guī)模生產(chǎn)、商品化的基于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的產(chǎn)品，為了保證產(chǎn)品的一致性、穩(wěn)定性和可靠性，也要求盡可能把各種反應(yīng)試劑一次性添加和分裝，并使產(chǎn)品在貯存和運(yùn)輸過(guò)程中具備盡可能長(zhǎng)的保質(zhì)期限。因此，發(fā)明一種能夠方便有效保存等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑混合物的方法具有重要的價(jià)值。申請(qǐng)?zhí)枮?00810159414. 3的發(fā)明專利“環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑混合物的保存方法”公開(kāi)了一種在環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑混合物中添加干燥保護(hù)劑 然后進(jìn)行真空干燥或快速風(fēng)干實(shí)現(xiàn)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑混合物常溫長(zhǎng)期保存的方法，但這種方法需要專門的真空冷凍干燥儀或快速風(fēng)干機(jī)等復(fù)雜的設(shè)備，還需要消耗大量的能源，并不是一種十分經(jīng)濟(jì)的方法。所以，有必要開(kāi)發(fā)新的、更加簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、高效的核酸等溫?cái)U(kuò)增試劑常溫長(zhǎng)期保存方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種基于多孔材料的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑保存方法及反應(yīng)試劑，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。本發(fā)明的一個(gè)方面是提供一種在核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑中添加多孔材料從而使核酸等溫?cái)U(kuò)增試劑或其混合物在常溫或室溫長(zhǎng)期保存的方法。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是提供一種采用上述方法制作的核酸等溫?cái)U(kuò)增試劑，以及包含有該反應(yīng)試劑的試劑盒。本發(fā)明的保存方法，其特征是在一種或幾種核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中添加多孔材料進(jìn)行保存。上述的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分為核酸等溫?cái)U(kuò)增的聚合酶。上述核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分還包括有引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)和/或三磷酸核苷酸(NTP)、核酸等溫?cái)U(kuò)增聚合酶的反應(yīng)緩沖液的任一種或幾種。上述的核酸等溫?cái)U(kuò)增的聚合酶為DNA聚合酶和/或RNA聚合酶。上述的核酸等溫?cái)U(kuò)增的聚合酶的反應(yīng)緩沖液為核酸序列依賴性擴(kuò)增的反應(yīng)緩沖 液、鏈替代擴(kuò)增反應(yīng)緩沖液或環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)緩沖液。上述的多孔材料在核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加質(zhì)量體積百分比g/ml為0. 005% 60%。上述的多孔材料為孔徑不小于I納米的多孔材料。上述的多孔材料為有序多孔材料和/或無(wú)序多孔材料。上述的有序多孔材料為微孔材料、介孔材料、大孔材料中的任一種或幾種。上述的有序多孔材料為硅藻土、活性炭、氧化鋁多孔陶瓷、氧化硅多孔陶瓷、介孔二氧化硅、SBA-15中的一種或幾種。上述的無(wú)序多孔材料為多孔磷酸鹽微晶玻璃、氧化硅凝膠、有機(jī)硅聚苯乙烯多孔材料中的一種或幾種。上述的硅藻土在核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加質(zhì)量體積百分比g/ml為0. 01% 10%，優(yōu)選為 0. 02% 5%。上述的活性炭在核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加質(zhì)量體積百分比g/ml為0. 01% 35%，優(yōu)選為 0. 02% 35%。上述的介孔二氧化硅在核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加質(zhì)量體積百分比g/ml 為 0. 01% 20%，優(yōu)選為 0. 02% 20%。上述的多孔磷酸鹽微晶玻璃在核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加質(zhì)量體積百分比g/ml為1%飛0%，優(yōu)選為5% 50%。本發(fā)明還涉及一種可在常溫下長(zhǎng)期保存的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑，其特征在于，所述的反應(yīng)試劑是在一種或幾種核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中添加多孔材料制備的。上述的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液為核酸等溫?cái)U(kuò)增的聚合酶、引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)、核酸等溫?cái)U(kuò)增的聚合酶的反應(yīng)緩沖液中的任一種或幾種。本發(fā)明還包括一種核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑盒，該試劑盒包含有上述可在常溫下長(zhǎng)期保存的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑。本發(fā)明方法處理后的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分(等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑的單獨(dú)組分或其混合物)，可常溫貯存和運(yùn)輸，使用時(shí)無(wú)需特殊處理，直接使用即可。本發(fā)明的方法具有工藝簡(jiǎn)單、成本低廉的特點(diǎn)，采用本發(fā)明方法處理后的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑混合物在便利的貯存條件下(常溫或室溫等溫度條件)具有活性穩(wěn)定持久的優(yōu)點(diǎn)，這在大大降低等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑的貯運(yùn)成本的同時(shí)，還為等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的實(shí)際操作帶來(lái)極大的便利。該發(fā)明必將有力促進(jìn)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的在科研、醫(yī)療、檢驗(yàn)和檢疫等領(lǐng)域的運(yùn)用和基于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的診斷或檢測(cè)試劑產(chǎn)品的大規(guī)模推廣應(yīng)用。說(shuō)明書附I :固定化的LAMP反應(yīng)體系在4°C儲(chǔ)存下的活性衰減特征圖；圖2 :固定化的LAMP反應(yīng)體系在25°C儲(chǔ)存下的活性衰減特征圖；
圖3 :固定化的LAMP反應(yīng)體系在37°C儲(chǔ)存下的活性衰減特征圖。
具體實(shí)施例方式在目前的分子實(shí)驗(yàn)、檢測(cè)操作中，若是直接將核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑(即核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分)如引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)或三磷酸核苷酸(NTP)、聚合酶(DNA聚合酶、RNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶和內(nèi)切酶等)、聚合酶的反應(yīng)緩沖液(不同類型的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)需要不同的聚合酶和反應(yīng)試劑)等的混合物保存在常溫或者室溫條件下，通常情況下廣2天后這些反應(yīng)試劑混合物就失去了對(duì)目的核酸的擴(kuò)增能力。研究發(fā)現(xiàn)，在常溫或室溫的條件下，等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液(即等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑混合物)中最容易失去反應(yīng)活性的是聚合酶，而這些聚合酶喪失活性的主要原因是由于長(zhǎng)時(shí)間保存、溫度過(guò)高或溫度變化導(dǎo)致酶活性中心維持高級(jí)結(jié)構(gòu)的氫鍵、離子鍵、二硫鍵等分子作用力受到破壞所致；同時(shí)在常溫或室溫條件下，等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液(即等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑混合物)中的寡聚核苷酸引物、dNTP也會(huì)很快降解，無(wú)法參與基因擴(kuò)增。核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑中體積較大的有機(jī)活性成分如聚合酶(DNA聚合酶和/或RNA聚合酶)、模板核酸、引物等分子質(zhì)量在I 100千道爾頓(kDa)之間，直徑大約介于I 100納米(nm)。申請(qǐng)人在研究中發(fā)現(xiàn)，將多孔材料添加到核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中，聚合酶、核酸模板、引物等分子會(huì)組裝或固定在多孔材料的孔道中或多孔材料顆粒的間隙里，一方面聚合酶分子就會(huì)被多孔材料的孔道或間隙所固定，酶分子的空間結(jié)構(gòu)(三維結(jié)構(gòu)或高級(jí)結(jié)構(gòu))得以長(zhǎng)期維持，聚合酶的活性即可長(zhǎng)期保持；另一方面核酸模板、引物等分子也會(huì)組裝或固定在酶分子附近，能使酶更易與底物接觸反應(yīng)，這樣即使在長(zhǎng)期保存后仍能表現(xiàn)出較高的反應(yīng)效率。在較便利的貯存條件下(如常溫或室溫)和一定的貯存期內(nèi)，上述添加多孔材料后的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液(即等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑混合物)進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)所得的結(jié)果與用新鮮配制的反應(yīng)混合物所得到的結(jié)果完全相同。因不同類型的等溫?cái)U(kuò)增所需的聚合酶不同，所以不同類型的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑混合物需要添加不同種類、不同孔徑的多孔材料實(shí)現(xiàn)常溫長(zhǎng)期保存。實(shí)際使用中，可以選用的多孔材料可以是孔道排布規(guī)則有序、孔徑均一的孔徑小于2nm的微孔材料(但不小于lnm)、孔徑在2 50nm介孔材料、孔徑大于50nm的大孔材料(也稱為宏孔材料)，也可以是孔徑不規(guī)則的無(wú)序多孔材料如無(wú)定型的微晶玻璃、氧化硅多孔材料和氧化鋁多孔材料等。以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例I 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)反應(yīng)試劑混合物添加多孔材料后的保存效果分析I. LAMP反應(yīng)試劑混合物添加不同質(zhì)量體積百分比和不同種類多孔材料進(jìn)行保存將除被測(cè)樣品核酸以外的各種LAMP反應(yīng)試劑的混合物16. 128mL(包括LAMP引物FIP 和 BIP 各 I. 6iiM，引物 F3 和 B3 各 0. 2iiM，dATP、dTTP、dGTP 和 dCTP 各 I. 4mM,MgCl26mM,甜菜堿 1M, Tris-HCl 20mM, KCl IOmM, MgS042mM, (NH4)2SO4IOmM, Triton X-1000. 1%, BstDNA聚合酶5376U)按每管288 u L分裝于56個(gè)I. 5mL的離心管中，按表I第1、2、3列(共56種，包括不添加多孔材料的空白對(duì)照)所示的濃度和種類向每個(gè)I. 5mL的離心管中加入多孔材料并混勻(對(duì)于添加量較低的多孔材料，可預(yù)先配制成200倍最終添加量的高濃度預(yù)混液，然后搖勻懸浮后用移液槍吸取)，再將每個(gè)I. 5mL離心管中的混合物按24 y L的量分裝于12個(gè)0. 2mL的離心管中，然后將每組12個(gè)裝有混合物的0. 2mL的離心管分別置于200C (常溫)與37°C條件下保存(每個(gè)溫度條件下保存6個(gè)裝有混合物的0. 2mL的離心管，分3個(gè)保存時(shí)間段進(jìn)行抽檢，每個(gè)時(shí)間段每次抽檢2個(gè)裝有混合物的0. 2mL的離心管作為重復(fù))。2. LAMP反應(yīng)試劑混合物添加兩種及兩種以上多孔材料進(jìn)行保存將除被測(cè)樣品核酸以外的各種LAMP反應(yīng)試劑的混合物3168 U L (包括LAMP引物FIP 和 BIP 各 I. 6 ii M，引物 F3 和 B3 各 0. 2 ii M，dATP、dTTP、dGTP 和 dCTP 各 I. 4mM，甜菜堿1M, Tris-HCl 20mM, KCl IOmM, MgS048mM, (NH4)2SO4IOmM, Triton X-1000. 1%, Bst DNA 聚合酶1056U)按每管288 ii L分裝于11個(gè)I. 5mL的離心管中，按表2第1、2、3列(共11種，包 括不添加多孔材料的空白對(duì)照)所示的濃度和種類向每個(gè)I. 5mL的離心管中加入多孔材料并混勻，再將每個(gè)I. 5mL離心管中的混合物按24ii L的量分裝于12個(gè)0. 2mL的離心管中，然后將每組12個(gè)裝有混合物的0. 2mL的離心管分別置于20°C和37°C條件下保存(每個(gè)溫度條件下保存6個(gè)裝有混合物的0. 2mL的離心管，分3個(gè)保存時(shí)間段進(jìn)行抽檢，每個(gè)時(shí)間段每次抽檢2個(gè)裝有混合物的0. 2mL的離心管作為重復(fù))。3. LAMP反應(yīng)試劑混合物的保存和有效性檢驗(yàn)保存于20°C的裝有反應(yīng)試劑混合物的0. 2mL的離心管分別在貯存期滿I個(gè)月、2個(gè)月和3個(gè)月時(shí)進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)，保存于37°C的裝有反應(yīng)試劑混合物的0. 2mL的離心管分別在貯存期滿10天、20天和30天時(shí)進(jìn)行抽樣檢驗(yàn)。檢驗(yàn)方法如下I)依據(jù)上述6個(gè)貯存時(shí)間段，共需進(jìn)行6批次、每批次130個(gè)的LAMP反應(yīng)試劑混合物的有效性檢測(cè)，每次檢測(cè)的時(shí)候需將變性后的對(duì)蝦白班綜合征病毒(White spotsyndrome virus, WSSV)的核酸(30ng/ u L) 130 u L等量分裝于130個(gè)裝有混合有多孔材料的LAMP反應(yīng)試劑混合物的0. 2mL的離心管中。同時(shí),按照本實(shí)施例步驟I中的試劑比例配制新鮮的LAMP反應(yīng)液24ii L，添加變性后的WSSV核酸(30ng/ii L) I u L，作為陽(yáng)性對(duì)照。2)將上述離心管于63° C保溫60min進(jìn)行LAMP反應(yīng)。LAMP反應(yīng)終止后，在每個(gè)離心管中加入2 ii L 10倍稀釋的核酸染料GeneFinder ，然后于90° C保溫5min使反應(yīng)產(chǎn)物染色并終止反應(yīng)。如果離心管中反應(yīng)液呈現(xiàn)綠色，則說(shuō)明該離心管中的LAMP反應(yīng)試劑的混合物具有正常的反應(yīng)活性；如果離心管中反應(yīng)液呈現(xiàn)橙黃色，則說(shuō)明該離心管中的LAMP反應(yīng)試劑的混合物已失去正常的反應(yīng)活性。檢測(cè)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)設(shè)置的陽(yáng)性對(duì)照均顯綠色，表明該LAMP反應(yīng)體系工作正常；實(shí)驗(yàn)設(shè)置的空白對(duì)照組(LAMP反應(yīng)試劑的混合物中不添加任何多孔材料直接在20°C和37° C條件下保存)均顯色橙黃色，表明LAMP反應(yīng)試劑的混合物不添加任何多孔材料而直接放置在20°C和37° C條件下，經(jīng)過(guò)上述時(shí)間的保存后，已喪失反應(yīng)能力；對(duì)上述添加不同濃度、不同種類多孔材料的LAMP反應(yīng)試劑混合物的保存效果的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表I和表2。對(duì)上述部分陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照和添加多孔材料的反應(yīng)體系擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，結(jié)果顯示擴(kuò)增后染色反應(yīng)液顯示綠色樣本的其電泳泳道均出現(xiàn)LAMP產(chǎn)物的典型LADDER帶型，擴(kuò)增后染色反應(yīng)液顯示橙黃色的樣本其電泳泳道均未出現(xiàn)LAMP產(chǎn)物的典型LADDER帶型。添加不同濃度、不同種類多孔材料的LAMP反應(yīng)試劑混合物的保存效果的后檢測(cè)結(jié)果(見(jiàn)表I和2)表明保存時(shí)間為I個(gè)月、2個(gè)月時(shí)，在20°C條件下貯存的混合物絕大部分都具有正常的反應(yīng)活性；保存時(shí)間為10天、20天時(shí)，在37°C條件下貯存的混合物絕大部分都具有正常的反應(yīng)活性。表I.不同質(zhì)量體積百分比、不同種類多孔材料對(duì)LAMP反應(yīng)試劑混合物的保護(hù)效果
權(quán)利要求
1.一種核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑的保存方法，其特征在于，是在一種或幾種核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中添加多孔材料進(jìn)行保存。
2.如權(quán)利要求I所述的保存方法，其特征在于所述的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分為核酸等溫?cái)U(kuò)增的聚合酶。
3.如權(quán)利要求2所述的保存方法，其特征在于所述的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分還包括有引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)和/或三磷酸核苷酸(NTP)、核酸等溫?cái)U(kuò)增的聚合酶的反應(yīng)緩沖液的任一種或幾種。
4.如權(quán)利要求2或3所述的保存方法，其特征在于所述的核酸等溫?cái)U(kuò)增的聚合酶為 DNA聚合酶和/或RNA聚合酶。
5.如權(quán)利要求3所述的保存方法，其特征在于所述的核酸等溫?cái)U(kuò)增的聚合酶的反應(yīng)緩沖液為核酸序列依賴性擴(kuò)增的反應(yīng)緩沖液、鏈替代擴(kuò)增反應(yīng)緩沖液或環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)緩沖液。
6.如權(quán)利要求I所述的保存方法，其特征在于所述的多孔材料在核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 005°/Γ60%。
7.如權(quán)利要求I或6所述的保存方法，其特征在于所述的多孔材料為孔徑不小于I納米的多孔材料。
8.如權(quán)利要求7所述的保存方法，其特征在于所述的多孔材料為有序多孔材料和/或無(wú)序多孔材料。
9.如權(quán)利要求8所述的保存方法，其特征在于所述的有序多孔材料為微孔材料、介孔材料、大孔材料中的任一種或幾種。
10.如權(quán)利要求8或9所述的保存方法，其特征在于所述的有序多孔材料為硅藻土、活性炭、氧化鋁多孔陶瓷、氧化硅多孔陶瓷、介孔二氧化硅、SBA-15中的一種或幾種。
11.如權(quán)利要求8所述的保存方法，其特征在于所述的無(wú)序多孔材料為多孔磷酸鹽微晶玻璃、氧化硅凝膠、有機(jī)硅聚苯乙烯多孔材料中的一種或幾種。
12.如權(quán)利要求10所述的保存方法，其特征在于所述的硅藻土在核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 01°/Γ10%。
13.如權(quán)利要求10所述的保存方法，其特征在于所述的介孔二氧化硅在核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加質(zhì)量體積百分比g/ml為O. 01°/Γ20%。
14.如權(quán)利要求11所述的保存方法，其特征在于所述的多孔磷酸鹽微晶玻璃在核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中的添加質(zhì)量體積百分比g/ml為1%飛0%。
15.一種可在常溫下長(zhǎng)期保存的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑，其特征在于，所述的反應(yīng)試劑是在一種或幾種核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中添加多孔材料后制備的。
16.如權(quán)利要求15所述的反應(yīng)試劑，其特征在于所述的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液為核酸等溫?cái)U(kuò)增的聚合酶、引物、三磷酸脫氧核苷酸(dNTP)、核酸等溫?cái)U(kuò)增的聚合酶的反應(yīng)緩沖液中的任一種或幾種。
17.一種核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑盒，其特征在于所述的試劑盒包含有權(quán)利要求15所述的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基于多孔材料的核酸等溫?cái)U(kuò)增試劑的保存方法及試劑，所述的保存方法是在一種或幾種核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分中添加多孔材料進(jìn)行保存。本發(fā)明方法處理后的核酸等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)液的組分可常溫貯存和運(yùn)輸，使用時(shí)無(wú)需特殊處理，直接使用即可。本發(fā)明的方法具有工藝簡(jiǎn)單、成本低廉的特點(diǎn)，采用本發(fā)明方法處理后的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑混合物在便利的貯存條件下具有活性穩(wěn)定持久的優(yōu)點(diǎn)，這在大大降低等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)試劑的貯運(yùn)成本的同時(shí)，還為等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的實(shí)際操作帶來(lái)極大的便利。該發(fā)明必將有力促進(jìn)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的在科研、醫(yī)療、檢驗(yàn)和檢疫等領(lǐng)域的運(yùn)用和基于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)的診斷或檢測(cè)試劑產(chǎn)品的大規(guī)模推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12N15/10GK102703433SQ20121019252
公開(kāi)日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年6月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月12日
發(fā)明者劉莉, 宋曉玲, 張慶利, 李美霞, 王秀華, 黃倢 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所