專利名稱：茶葉提取物在黃曲霉毒素生物防控中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及茶葉提取物的新用途，具體的說(shuō)，涉及茶葉提取物在黃曲霉毒素生物防控中的應(yīng)用，具體為該茶葉提取物在抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生菌的生長(zhǎng)及其抑制黃曲霉毒素生物合成的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
黃曲霉毒素(Aflatoxins)是一種對(duì)人類和畜禽強(qiáng)致癌性的霉菌毒素，是指一類結(jié)構(gòu)類似的化合物的總稱，根據(jù)其分子結(jié)構(gòu)的不同，天然產(chǎn)生的黃曲霉毒素分為B1，B2，G1，G2。黃曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(A.parasiticus)是產(chǎn)生黃曲霉毒素的兩種主要真菌。毒力試驗(yàn)證明，BI毒性最強(qiáng)，接下來(lái)依次是:M1 > Gl > B2 > M2 > G2。由于AFBl是已知致癌毒性最強(qiáng)的霉菌毒素，而且目前研究最多，因此通常所說(shuō)的黃曲霉毒素主要是指AFB1。AFBl的毒性是氰化鉀的10倍，砒霜的68倍，致癌力為二甲基亞硝胺的75倍。食品或飼料中AFBl的含量高于lmg/kg就有劇毒。它除了主要誘使動(dòng)物發(fā)生肝癌外，也能誘發(fā)胃癌、腎癌、直腸癌及乳腺、卵巢、小腸等部位的癌癥。黃曲霉毒素可污染多種農(nóng)產(chǎn)品，對(duì)人類和動(dòng)物的健康造成嚴(yán)重的威脅。黃曲霉毒素的毒性和穩(wěn)定性很強(qiáng)。被黃曲霉毒素BI嚴(yán)重污染的稻谷，在室溫下自然存放20多年，仍可檢出黃曲霉毒素BI。玉米、花生、大豆、大米、小麥等等大宗農(nóng)產(chǎn)品和核桃、杏仁等果仁類產(chǎn)品最易受到黃曲霉及其毒素的污染。對(duì)黃曲霉及其毒素的生物防治，目前國(guó)內(nèi)外的研究方向主要是利用植物提取物和微生物的次生代謝產(chǎn)物及其產(chǎn)酶來(lái)獲得具有抗菌或降解毒素特性的物質(zhì)。植物提取物主要有山蒼子精油、百里香油、海馬齒香精油、玫瑰精油等，這些精油均為揮發(fā)性物質(zhì)，對(duì)黃曲霉生長(zhǎng)以及毒素的產(chǎn)生有較強(qiáng)抑制作用，但持效性較差；微生物中，乳酸菌、芽孢桿菌、橙黃桿菌、粘細(xì)菌、假單胞菌、雷爾氏菌、伯克霍爾德菌、部分酵母及少量真菌等均有抑制黃曲霉生長(zhǎng)和產(chǎn)毒的能力，但在農(nóng)產(chǎn)品貯藏期或食品加工中，這些微生物的應(yīng)用受到限制。

發(fā)明內(nèi)容
為解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種茶葉提取物在黃曲霉毒素生物防控中的應(yīng)用，具體為該茶葉提取物在抑制黃曲霉生長(zhǎng)及黃曲霉毒素生物合成中的新用途。本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):茶葉提取物在黃曲霉毒素生物防控中的應(yīng)用。所述應(yīng)用可以為所述茶葉提取物在抑制黃曲霉生長(zhǎng)及黃曲霉毒素生物合成中的應(yīng)用。所述應(yīng)用具體為茶葉提取物在食品或飼料貯藏過(guò)程黃曲霉毒素污染防控中的應(yīng)用。將茶葉提取物與食品或飼料混合后貯藏即可。所述茶葉提取物屬于已知的成熟產(chǎn)品，在市場(chǎng)上已有相關(guān)產(chǎn)品出售，可采用多種提取方法得到，包括水提取和醇提取等，其成分主要包括兒茶素、咖啡堿、茶氨酸等。所述茶葉提取物可以是以各種茶葉品種為原料經(jīng)過(guò)提取得到，可用茶葉鮮葉、干葉提取，也可以用各大茶類，如綠茶、紅茶、黑茶、黃茶、烏龍茶和白茶等進(jìn)行提取。所得茶葉提取物，按照常規(guī)制劑工藝技術(shù)，將茶葉提取物作為主要成分，加入常規(guī)的防腐劑、賦形劑、粘合劑、表面活性劑、溶劑、增稠劑、增溶劑等作為輔料，制成任何一種方便于生產(chǎn)上使用的劑型，如粉劑或水劑等劑型。本發(fā)明首次公開了茶葉提取物具有抑制黃曲霉產(chǎn)生菌及其黃曲霉生物合成的功效，將茶葉提取物用于產(chǎn)毒黃曲霉的生物防治或黃曲霉毒素生物合成的抑制，均屬于本發(fā)明保護(hù)范疇。采用茶葉提取物制成任何一種劑型，在其包裝或說(shuō)明書等標(biāo)識(shí)材料或其他宣傳材料中，只要注明或提到具有產(chǎn)毒黃曲霉的生物防治或抑制黃曲霉毒素生物合成的功效，則落入本發(fā)明保護(hù)范圍。本發(fā)明的茶葉提取物可應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品采后貯藏期間和田間植物生長(zhǎng)期產(chǎn)毒黃曲霉的生物防治或黃曲霉毒素生物合成的抑制，茶葉提取物相關(guān)制劑的這兩種使用方式也在本發(fā)明保護(hù)范圍之內(nèi)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:本發(fā)明提供的茶葉提取物在產(chǎn)毒黃曲霉的生物防治和黃曲霉毒素生物合成的抑制中的新用途具有以下優(yōu)點(diǎn):1、茶葉提取物原料來(lái)源廣，采用茶渣或粗老茶葉提取，產(chǎn)品成本低廉、可行性高、有良好的應(yīng)用前景。2、茶是我國(guó)傳統(tǒng)保健飲料，茶葉提取物應(yīng)用于食品和農(nóng)產(chǎn)品，其安全性高。3、茶葉提取物用于產(chǎn)毒黃曲霉的生物防治和黃曲霉毒素生物合成的抑制，可在較低濃度下起到效果，且效果穩(wěn)定，不易受環(huán)境變化的影響。


圖1為實(shí)施例1中茶葉水浸提取物對(duì)黃曲霉As3.4408和寄生曲霉As3.124生長(zhǎng)的抑制效果。圖2為實(shí)施例1中綠茶水浸提取物對(duì)黃曲霉As3.4408和寄生曲霉As3.124生物合成的影響。圖3為實(shí)施例2中綠茶水浸提取物對(duì)黃曲霉AS3.4408在不同農(nóng)產(chǎn)品中生物合成
黃曲霉毒素的影響。圖4為實(shí)施例3中黑茶水提取物對(duì)寄生曲霉AS3.124在不同農(nóng)產(chǎn)品中生物合成黃
曲霉毒素的影響。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1通過(guò)平板抑菌實(shí)驗(yàn)考察茶葉提取物對(duì)黃曲霉As3.4408(中國(guó)微生物菌種保藏中心，現(xiàn)用編號(hào)為CGMCC3.4408)和寄生曲霉As3.124 (中國(guó)微生物菌種保藏中心，現(xiàn)用編號(hào)為CGMCC3.124)生長(zhǎng)的抑制效果，該實(shí)驗(yàn)研究過(guò)程如下:(I)茶葉提取物的制備:將綠茶、烏龍茶、紅茶和黑茶各500g分別于5L沸水中保溫浸泡20分鐘后，過(guò)濾，濾液濃縮除去2/3的水分，再通過(guò)冷凍干燥升華剩余水分獲得4種茶葉水浸提取物。(2)含茶葉提取物的PDA固體培養(yǎng)基的制作:分別稱取4種茶葉水浸提取物溶解于蒸餾水，配制成溶液，其中取綠茶提取物Ig溶于IL蒸餾水，得到綠茶提取物濃度為0.1%(m/v)的溶液，將紅茶、烏龍茶和黑茶提取物各Sg分別溶解于IL蒸餾水中，所得茶葉提取物溶液濃度均為0.8% (m/v)。然后分別以上述溶液代替蒸餾水按常規(guī)方法配制含茶葉提取物的PDA固體培養(yǎng)基，滅菌后倒入滅菌平皿(直徑9cm)，制成含茶葉水浸提取物的PDA平板。按相同的方法用蒸餾水(即不加入茶葉水浸提取物)制得的PDA平板作為對(duì)照。(3)將黃曲霉As3.4408和寄生曲霉As3.124菌株分別轉(zhuǎn)接于PDA斜面培養(yǎng)基，28°C恒溫培養(yǎng)5d后，用接種針無(wú)菌點(diǎn)接于各含茶葉水浸提取物的PDA平板及用蒸餾水制備的PDA平板中央，28°C恒溫培養(yǎng)，每24h測(cè)定一次菌落直徑，共培養(yǎng)4d，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，直徑取平均值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表I 2。(4)由于黃曲霉毒素具有在紫外光下可激發(fā)產(chǎn)生藍(lán)綠色熒光的特性，這種熒光強(qiáng)弱與黃曲霉毒素含量成正相關(guān)關(guān)系(方祥等.2005.食品與發(fā)酵工業(yè),36 (4):185-188)。將接種后的PDA平板于28°C恒溫培養(yǎng)4d時(shí)，打開皿蓋置于254nm紫外光下觀察并拍照，黃曲霉毒素在365nm紫外光下激發(fā)熒光，菌落周圍熒光強(qiáng)弱(對(duì)應(yīng)圖片中菌落周圍的白色光圈的亮度)反應(yīng)出黃曲霉毒素濃度的高低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。圖1和表I 2中，I表示用黃曲霉As3.4408進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，2表示用寄生曲霉As3.124進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)；CK為用蒸餾水進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)(不添加茶葉水浸提取物)；A表示用0.1%(m/v)的綠茶水浸提取物溶液進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，B為用0.8% (m/v)黑茶水浸提取物溶液進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)、C為用0.8% (m/v)紅茶水浸提取物溶液進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)、D為用0.8% (m/v)烏龍茶水浸提取物溶液進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，則CKl表不用蒸懼水和黃曲霉As3.4408進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，而D2表不用
0.8%烏龍茶水浸提取物溶液和寄生曲霉As3.124進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，其他編號(hào)依此類推。表I和表2中數(shù)據(jù)為菌落直徑，單位mm。數(shù)據(jù)采用Duncan法進(jìn)行多重比較。同一行中標(biāo)有不同大寫字母、小寫字母者分別表示組間差異極顯著(P <0.01)和顯著(P< 0.05)，標(biāo)有相同小寫字母者表示組間差異不顯著(P > 0.05)。由圖1、表I和表2可見，添加0.1% (m/v)綠茶水浸提取物溶液、0.8% (m/v)黑茶水浸提取物溶液、0.8% (m/v)紅茶水浸提取物溶液和0.8% (m/v)烏龍茶水浸提取物溶液后，均對(duì)黃曲霉As3.4408和寄生曲霉As3.124的生長(zhǎng)起到顯著的抑制效果。 表I茶葉水浸提取物對(duì)黃曲霉As3.4408菌落生長(zhǎng)速率的影響(η = 3)
權(quán)利要求
1.茶葉提取物在黃曲霉毒素生物防控中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述茶葉提取物的提取原料為綠茶、紅茶、黑茶、黃茶、烏龍茶或白茶茶葉的鮮葉或干葉，所述茶葉提取物的提取方法按常規(guī)方法進(jìn)行。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述應(yīng)用具體為茶葉提取物在抑制黃曲霉生長(zhǎng)或黃曲霉毒素生物合成中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述應(yīng)用具體為茶葉提取物在食品或飼料貯藏過(guò)程黃曲霉毒素污染防控中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求 4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述應(yīng)用方法是將茶葉提取物與食品或飼料混合后貯藏。
全文摘要
本發(fā)明屬于食品生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了茶葉提取物在黃曲霉毒素生物防控中的應(yīng)用，具體是茶葉提取物在抑制黃曲霉毒素產(chǎn)生菌的生長(zhǎng)及黃曲霉毒素生物合成中的新用途。所述茶葉提取物包括綠茶、紅茶和黑茶等通過(guò)常規(guī)提取方法得到的茶葉提取物，對(duì)黃曲霉毒素產(chǎn)生菌的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，同時(shí)對(duì)黃曲霉毒素的生物合成也具有顯著的抑制效果。實(shí)際應(yīng)用中，可以將茶葉提取物用于糧食或飼料貯藏過(guò)程中黃曲霉毒素的防控，效果顯著。
文檔編號(hào)A23L3/3472GK103211272SQ20121001943
公開日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2012年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月19日
發(fā)明者方祥, 譚英智, 周建良, 李斌, 區(qū)建發(fā), 陳耀旭, 陳柱濤 申請(qǐng)人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)