專利名稱：粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器以及粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)，特別是涉及用于在培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)需要以容器壁等作為基點(diǎn)的粘附細(xì)胞的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器以及粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法。
背景技術(shù)：
近年來，在醫(yī)藥品的生產(chǎn)、基因治療、再生醫(yī)療、免疫療法等領(lǐng)域中，要求在人工環(huán)境下高效地大量培養(yǎng)細(xì)胞和組織、微生物等。這樣的狀況下，在培養(yǎng)容器(培養(yǎng)袋)中填充細(xì)胞和培養(yǎng)液，在封閉系統(tǒng)中自動(dòng)地大量培養(yǎng)細(xì)胞。對(duì)于這樣的培養(yǎng)容器，需要細(xì)胞培養(yǎng)所必需的透氣性和耐久性、制袋所必需的熱密封強(qiáng)度等，因此，在該材料中優(yōu)選使用具備這些性質(zhì)的聚烯烴類樹脂。但是，在使用由聚烯烴類樹脂構(gòu)成的培養(yǎng)容器的情況下，可以適合培養(yǎng)浮游類的細(xì)胞，但在培養(yǎng)時(shí)需要以容器壁等作為基點(diǎn)的粘附細(xì)胞，以往存在不能高效地培養(yǎng)的問題。即，由于粘附細(xì)胞粘附在培養(yǎng)容器的壁上，因此，通常在培養(yǎng)面上需要適度的潤(rùn)濕性，需要為親水性。但是，由聚烯烴類樹脂構(gòu)成的培養(yǎng)容器的表面為疏水性，因此，粘附細(xì)胞無法充分地粘附在培養(yǎng)面上，無法得到高增殖效率。為了解決這樣的問題，提出了:在進(jìn)行培養(yǎng)容器的制袋前，對(duì)于構(gòu)成培養(yǎng)容器的膜的培養(yǎng)面，進(jìn)行通過電暈放電(參照專利文獻(xiàn)I)和UV-臭氧法(參照專利文獻(xiàn)2，3)的親水化處理。專利文獻(xiàn)1:日本特開平6-98756號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2:日本特開2009-27944號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)3:日本特開2009-27945號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的問題但是，進(jìn)行這樣的親水化處理時(shí)，膜的熱密封強(qiáng)度大幅降低，因此，產(chǎn)生不能適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行培養(yǎng)容器的制袋這樣的新問題。而且，為了解決這樣的問題，在專利文獻(xiàn)3中提出了如下的方案:遮蓋膜中的要進(jìn)行熱密封的部分，實(shí)施UV-臭氧法。但是，該方法中，存在制造工序變煩雜的問題。另外，如上所述對(duì)膜的培養(yǎng)面進(jìn)行親水化處理的情況下，在表面處理時(shí)露出培養(yǎng)面，因此，難以無菌地制造培養(yǎng)容器，也存在需要潔凈度高的制造環(huán)境的問題。本發(fā)明人進(jìn)行了深入的研究，通過對(duì)構(gòu)成培養(yǎng)容器的樹脂照射一定的紫外線，不會(huì)使培養(yǎng)面親水化，并且成功地使在培養(yǎng)容器中進(jìn)入培養(yǎng)液的狀態(tài)下的粘附細(xì)胞相對(duì)于培養(yǎng)面的細(xì)胞粘附率顯著地提高，從而完成了本發(fā)明。 即，本發(fā)明的目的在于，提供一種粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器以及粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法，其中，所述粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器中，在將由聚烯烴構(gòu)成的培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面或整個(gè)內(nèi)面中的靜態(tài)水接觸角維持在高狀態(tài)下保持疏水性，在該狀態(tài)下，使滯后(水滑落時(shí)的前進(jìn)接觸角-后退接觸角)大于一定值，由此，使細(xì)胞粘附率提高，能夠適當(dāng)?shù)嘏囵B(yǎng)粘附細(xì)胞。用于解決問題的方法為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器是由至少在最內(nèi)層具有聚烯烴的層的單層或多層的膜或片構(gòu)成的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，得到如下構(gòu)成:培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面或整個(gè)內(nèi)面中的靜態(tài)水接觸角為95 °以上，并且水滑落時(shí)的前進(jìn)接觸角以及后退接觸角滿足下述式(I)。另外，本發(fā)明的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法為如下方法:對(duì)至少在最內(nèi)層具有聚烯烴的層的單層或多層的膜或片實(shí)施除去了臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的紫外線照射，以靜態(tài)水接觸角為95°以上、并且水滑落時(shí)的前進(jìn)接觸角以及后退接觸角滿足下述式(I)的方式形成由該膜或片構(gòu)成的培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面或整個(gè)內(nèi)面。另外，本發(fā) 明的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法為如下方法:對(duì)聚烯烴的顆粒實(shí)施除去了臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的紫外線照射，形成至少在最內(nèi)層具有聚烯烴的層的單層或多層的膜或片，以靜態(tài)水接觸角為95°以上、并且水滑落時(shí)的前進(jìn)接觸角以及后退接觸角滿足下述式(I)的方式形成由膜或片構(gòu)成的培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面或整個(gè)內(nèi)面。前進(jìn)接觸角-后退接觸角> 25。...(式I)發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，不需要必要以上的潔凈度高的制造環(huán)境和遮蓋這樣的復(fù)雜的制造工序，可以制造能高效地培養(yǎng)粘附細(xì)胞的培養(yǎng)容器。


圖1是表示利用本發(fā)明的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的細(xì)胞粘附率的提高以及熱密封強(qiáng)度降低的抑制的圖。圖2是表示本發(fā)明中的通過紫外線照射產(chǎn)生的構(gòu)成粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的膜的特性(接觸角)的變化的圖。圖3是表示本發(fā)明中的通過紫外線照射產(chǎn)生的構(gòu)成粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的膜的特性(滯后)的變化的圖。圖4是表示本發(fā)明的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造工序的圖。圖5是表示本發(fā)明的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造工序中的紫外線照射的對(duì)象(膜、培養(yǎng)容器、制膜中的膜)的圖。圖6是表示使用本發(fā)明的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞粘附機(jī)理的圖。圖7是表示實(shí)施例以及比較例中的接觸角的測(cè)定方法以及滯后的測(cè)定方法的圖。圖8是表示實(shí)施例以及比較例中的實(shí)驗(yàn)條件、和細(xì)胞粘附率、滯后以及熱密封強(qiáng)度的圖。圖9是表示實(shí)施例以及比較例中的滯后與細(xì)胞粘附率的關(guān)系的圖。
具體實(shí)施方式
以下，對(duì)本發(fā)明的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器以及粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法的一個(gè)實(shí)施方式詳細(xì)地進(jìn)行說明。(培養(yǎng)容器)1.材料本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器是以軟包材料作為材料將膜進(jìn)行制膜、使用該膜形成袋狀(袋型)的培養(yǎng)容器。在該培養(yǎng)容器中封入培養(yǎng)液和細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。另夕卜，培養(yǎng)容器在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通過按壓板按壓，或每隔一定時(shí)間通過顯微鏡進(jìn)行培養(yǎng)細(xì)胞的拍攝等。由此，對(duì)該材料要求用于培養(yǎng)細(xì)胞所需要的透氣性和耐久性、高熱密封強(qiáng)度，另外，為了能夠確認(rèn)內(nèi)容物，要求具有透明性。因此，作為滿足這樣的條件的材料，可以優(yōu)選使用聚乙烯和聚丙烯等聚烯烴類樹脂。另外，膜可以為單層，也可以由二層以上的多層構(gòu)成，由多層構(gòu)成的情況下，也可以層疊不同的樹脂種類和品種的聚烯烴類樹脂來構(gòu)成。如果至少在最內(nèi)層具有聚烯烴的層，則也可以在其他層使用其他樹脂。需要說明的是，膜也可以以片的形式構(gòu)成。另外，作為本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的材料，優(yōu)選使用在聚烯烴類樹脂中含有抗氧化劑的材料。這是由于，通過含有抗氧化劑，進(jìn)行一定的紫外線照射，如后所述可以使構(gòu)成粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的膜的滯后增大，在封入培養(yǎng)液時(shí)，提高培養(yǎng)面的親水性，能夠使細(xì)胞的粘附性提聞。作為這樣的抗氧化劑，沒有特別的限定，例如，酚類抗氧化劑、和磷類抗氧化劑由于細(xì)胞毒性低，能夠適當(dāng)?shù)靥岣邷?，因此?yōu)選。2.紫外線照射處理另外，本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器中，通過對(duì)這樣的聚烯烴類樹脂照射一定的紫外線，使其性質(zhì)改性，使構(gòu)成培養(yǎng)容器的膜的特性發(fā)生變化。此時(shí)，使用由聚烯烴類樹脂構(gòu)成的膜，將培養(yǎng)容器進(jìn)行制袋后，從培養(yǎng)容器的外側(cè)實(shí)施紫外線照射處理，由此，能夠使容器內(nèi)部的培養(yǎng)面的特性發(fā)生變化。在該膜特性的變化中，如后所述，培養(yǎng)面的接觸角未見大變化，因此，沒有進(jìn)行培養(yǎng)面的親水化。另一方面，對(duì)于本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器而言，通過照射一定的紫外線，培養(yǎng)面的滯后(接觸角滯后)增大。其結(jié)果，將培養(yǎng)液封入培養(yǎng)容器中時(shí)，培養(yǎng)面的親水性增高，細(xì)胞粘附率提高。本實(shí)施方式的紫外線照射中，使用沒有照射臭氧發(fā)生波長(zhǎng)(185nm)的紫外線源。例如，可以優(yōu)選使用能夠通過石英管等截?cái)喑粞醢l(fā)生波長(zhǎng)的、主波長(zhǎng)254nm的低壓水銀燈等ο這樣，本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器中，通過對(duì)聚烯烴類樹脂照射除去了臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的紫外線，因此，幾乎不會(huì)使照射后的培養(yǎng)面的接觸角發(fā)生變化，能夠使細(xì)胞粘附率提聞。即，本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器中，沒有使培養(yǎng)面親水化，因此，可以不使培養(yǎng)面露出來而制造粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器。另外，由于這樣沒有使培養(yǎng)面親水化，因此，膜的熱密封強(qiáng)度的降低少。因此，在培養(yǎng)容器的制袋前，即使對(duì)膜進(jìn)行紫外線照射，也能夠沒有問題地進(jìn)行培養(yǎng)容器的制造。另一方面，專利文獻(xiàn)2中記載的UV-臭氧法中，通過包含臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的紫外線照射，進(jìn)行培養(yǎng)面的親水化(實(shí)施例中，接觸角從104°降低至71° )。即可以認(rèn)為，通過使用包含臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的紫外線，引起由于空氣中的氧氣而產(chǎn)生的臭氧與材料表面的直接反應(yīng)，進(jìn)行培養(yǎng)面的親水化。另外，專利文獻(xiàn)2中，作為容器材料使用容易親水化、并且容易得到穩(wěn)定性的易親水化樹脂，特別是使用玻璃化轉(zhuǎn)變溫度高的樹脂。這些材料由于常溫下分子鏈不會(huì)運(yùn)動(dòng)，因此認(rèn)為，進(jìn)行表面的親水化后，親水基難以潛入樹脂內(nèi)部，得到親水化的穩(wěn)定性。相對(duì)于此，本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器中，使用聚乙烯或聚丙烯作為材料，但它們?cè)诔叵路肿渔溎軌蜻\(yùn)動(dòng)，與空氣中親水基在表面上存在相比，在樹脂的內(nèi)側(cè)存在的方式在熱力學(xué)上更穩(wěn)定，因此認(rèn)為，即使含有親水性官能團(tuán)，如果是少量也難以在表面上露出，其結(jié)果，表面難以發(fā)生親水化。3.細(xì)胞粘附率根據(jù)本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，相對(duì)于培養(yǎng)容器的內(nèi)面的細(xì)胞粘附率顯著提高。圖1(a)示出了本實(shí)施方式中的進(jìn)行了紫外線照射的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器、和在除了沒有進(jìn)行本實(shí)施方式中的紫外線照射之外的其他方面與本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器在同一條件下制造的培養(yǎng)容器的細(xì)胞粘附率。該圖中的細(xì)胞粘附率示出了后述的實(shí)施例I以及比較例I的細(xì)胞粘附率，為培養(yǎng)粘附細(xì)胞28小時(shí)后的粘附細(xì)胞數(shù)相對(duì)于浮游的細(xì)胞與粘附的細(xì)胞的總數(shù)的百分率。如該圖所示，通過本實(shí)施方式的紫外線照射，細(xì)胞粘附率從3.2%增加至80.8%。這樣，根 據(jù)本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，能夠顯著增加細(xì)胞粘附率，因此，可以大幅提高粘附細(xì)胞的培養(yǎng)效率。4.熱密封強(qiáng)度根據(jù)本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，與以往相比能夠抑制由提高相對(duì)于培養(yǎng)容器的內(nèi)面的細(xì)胞粘附率而引起的熱密封強(qiáng)度的降低。圖1(b)示出了本實(shí)施方式中的進(jìn)行紫外線照射的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器、除沒有進(jìn)行本實(shí)施方式中的紫外線照射外其他方面與本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器在同一條件下制造的培養(yǎng)容器、除沒有進(jìn)行本實(shí)施方式中的紫外線照射而是進(jìn)行電暈放電處理外其他方面與本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器在同一條件下制造的培養(yǎng)容器的熱密封強(qiáng)度。這些熱密封強(qiáng)度基于最大試驗(yàn)力，分別示出了后述的實(shí)施例1、2、5(該圖的UV處理)、比較例1、2、7(該圖的未處理)、比較例14、15、16(該圖的電暈處理)的熱密封強(qiáng)度。如該圖所示可知，以往方法的電暈放電處理中，與未處理的培養(yǎng)容器比較，熱密封強(qiáng)度大幅降低，相對(duì)于此，本實(shí)施方式的進(jìn)行紫外線照射處理的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器中，抑制熱密封強(qiáng)度的降低。這樣，根據(jù)本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，能夠抑制熱密封強(qiáng)度降低，因此，在制袋前，即使進(jìn)行紫外線照射，也能夠適當(dāng)?shù)刂圃煺掣郊?xì)胞用培養(yǎng)容器。5.接觸角接著，參照?qǐng)D2，對(duì)接觸角進(jìn)行說明。細(xì)胞培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)面的親水性與培養(yǎng)面的接觸角相關(guān)。本實(shí)施方式中的接觸角是在靜止的液體的表面與固體壁相接觸的部位的液面與固體面所成的角(圖2的Θ s)，是指靜態(tài)水接觸角。存在接觸角大的情況下表面的疏水性強(qiáng)、接觸角小的情況下表面的親水性強(qiáng)的關(guān)系。通常已知，適合粘附細(xì)胞的培養(yǎng)的培養(yǎng)面的接觸角據(jù)稱約60° 80° (Jurnal ofBiomedical Materials Research, Vol.28，783-789 (1994))，接觸角如果在該范圍內(nèi)，則培養(yǎng)面的親水性高，粘附細(xì)胞適當(dāng)?shù)卣掣皆谂囵B(yǎng)面上。圖2中示出了，本實(shí)施方式中的進(jìn)行紫外線照射的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器、除沒有進(jìn)行本實(shí)施方式中的紫外線照射外其他方面與本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器在同一條件下制造的培養(yǎng)容器中的培養(yǎng)面的接觸角，分別與后述的實(shí)施例1和比較例I的接觸角(分別 101.9±1.7°、102.7±1° )相對(duì)應(yīng)。由此可知，通過本實(shí)施方式中的紫外線照射，培養(yǎng)面的接觸角幾乎沒有變化，沒有進(jìn)行培養(yǎng)面的親水化。因此，本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器盡管進(jìn)行紫外線照射，熱密封強(qiáng)度的降低也得到抑制。另外，這樣如果培養(yǎng)面沒有被親水化，則以往粘附細(xì)胞不能充分地粘附于培養(yǎng)面上，但本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，沒有使培養(yǎng)面親水化，卻能夠使粘附細(xì)胞在培養(yǎng)面上的粘附率提聞。另外，本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的接觸角優(yōu)選為95°以上。這是由于，接觸角小于95°時(shí),培養(yǎng)面的親水性增高,熱密封強(qiáng)度大幅降低。這樣，通過本實(shí)施方式中的紫外線照射，粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面或整個(gè)內(nèi)面的區(qū)域中的接觸角達(dá)到95°以上，能夠抑制熱密封強(qiáng)度的降低。6.滯后根據(jù)本實(shí)施方式中的紫外線照射，能夠使構(gòu)成細(xì)胞培養(yǎng)容器的膜的滯后增大。在此所謂的滯后為接觸角滯后，表示水滴滑落培養(yǎng)面時(shí)的前進(jìn)接觸角(0a)與后退接觸角(Θ r)之差(滑落時(shí)滯后(Θ a- Θ r))。即，將水滴滴加到水平地支撐的表面上，緩慢地傾斜表面，基于液滴開始掉下時(shí)的前進(jìn)接觸角和后退接觸角進(jìn)行計(jì)算。該滯后作為表示表面的動(dòng)態(tài)潤(rùn)濕性的指標(biāo)使用。圖3示出了本實(shí)施方式中的進(jìn)行紫外線照射的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器、和除沒有進(jìn)行本實(shí)施方式的紫外線照射外其他方面與本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器在同一條件下制造的培養(yǎng)容器的滯后，分別與后述的實(shí)施例1和比較例I的滯后(分別27.8°、
16.1° )對(duì)應(yīng)。由此可知，通過本實(shí)施方式中的紫外線照射，培養(yǎng)面的滯后大幅增大，培養(yǎng)面的動(dòng)態(tài)潤(rùn)濕性提聞。因此，本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器通過紫外線照射，盡管培養(yǎng)面沒有被親水化，但其動(dòng)態(tài)潤(rùn)濕性也提高，其結(jié)果，能夠使細(xì)胞粘附率提高。本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器中的滯后，優(yōu)選水滑落時(shí)的前進(jìn)接觸角以及后退接觸角顯示出滿足下 述式(I)的值。前進(jìn)接觸角-后退接觸角> 25。...(式I)這是由于，由后述的實(shí)施例可知，滯后在25。以下的情況下，無法得到充分的細(xì)胞粘附率，相對(duì)于此，滯后大于25°時(shí)，細(xì)胞粘附率顯著提高。
另外，滯后大于25°的區(qū)域可以為粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器整體，也可以為粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面或整個(gè)內(nèi)面。這是由于，即使為粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面，如果滯后大于25。，則也能夠使該區(qū)域的細(xì)胞粘附率提高，細(xì)胞增殖效率提高。(粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法)本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法中，以聚烯烴類樹脂作為材料，進(jìn)行除去臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的紫外線照射，除此以外，可以通過通常的方法進(jìn)行，例如，如圖4所示，可以包括以下的工序。首先，通過擠出成形和熱壓將聚烯烴類樹脂構(gòu)成的樹脂顆粒進(jìn)行制膜，形成膜(或片)。該樹脂顆粒的制造時(shí)，優(yōu)選使聚烯烴類樹脂中含有酚類或磷類的抗氧化劑。這是由于，通過這樣使聚烯烴類樹脂中含有抗氧化劑，能夠適當(dāng)?shù)卦龃筮M(jìn)行紫外線照射時(shí)的聚烯烴類樹脂的滯后。接著，將該膜制袋，制造粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器。對(duì)于本實(shí)施方式中的紫外線照射而言，如圖5(a)所示，可以在將膜制袋形成培養(yǎng)容器后進(jìn)行。即，對(duì)于本實(shí)施方式中的紫外線照射而言，由于沒有使培養(yǎng)面親水化，因此，也可以不對(duì)培養(yǎng)面直接照射，從由膜或片形成的封閉區(qū)域的外側(cè)實(shí)施，由此，能夠使培養(yǎng)面的滯后增大。另外，通過這樣從封閉區(qū)域的外側(cè)實(shí)施紫外線照射，可以得到容易保證培養(yǎng)面的無菌性的效果。另外，對(duì)于本實(shí)施方式中的紫外線照射而言，如圖5(b)所示，也可以對(duì)制袋前的膜或片進(jìn)行。另外，如圖5 (C)所示，也可以從吹脹膜開始卷繞膜的期間進(jìn)行紫外線照射。另夕卜，如圖4所示，也可以對(duì)樹脂顆粒進(jìn)行紫外線照射。

S卩，本實(shí)施方式中的紫外線照射不包含臭氧發(fā)生波長(zhǎng)，因此，被照射的膜的表面沒有被親水化，膜的熱密封強(qiáng)度沒有大幅降低。因此，在制袋前，即使對(duì)膜或片進(jìn)行紫外線照射，也能夠適當(dāng)?shù)刂拼?，可以不包含像以往方法那樣的將進(jìn)行熱密封的部分遮蓋的煩雜的工序，來制造粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器。(粘附機(jī)理)接著，對(duì)在本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器上粘附粘附細(xì)胞的機(jī)理進(jìn)行說明。已知粘附細(xì)胞通常如下所示在培養(yǎng)容器等的基材上粘附。首先，在培養(yǎng)液中包含的粘附蛋白(例如，纖維連結(jié)蛋白和玻璃粘連蛋白)吸附到基材。接著，在粘附細(xì)胞的表面的整合蛋白等與粘附蛋白相互作用而進(jìn)行粘附。由此，粘附細(xì)胞在基材上粘附并伸展。這樣可以認(rèn)為，粘附蛋白具有細(xì)胞粘附的部位，但基材為疏水性的情況下，該部位與基材表面相互作用，與細(xì)胞的相互作用受到了抑制。需要說明的是，基材的表面為過量地親水性的情況下，最初粘附蛋白不能吸附到基材上，粘附細(xì)胞也不能吸附。通過本實(shí)施方式中的紫外線照射，粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的培養(yǎng)面的接觸角不發(fā)生變化，滯后增高，結(jié)果推定，細(xì)胞粘附率提高是由于以下的理由。首先，如圖6所示，通過紫外線照射，從構(gòu)成本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的聚烯烴類樹脂產(chǎn)生來自樹脂的RO0.。另外，來自樹脂的RO0.與聚烯烴類樹脂中含有的抗氧化劑反應(yīng)，該抗氧化劑中的自由度增加的酯鍵部分根據(jù)材料表面的環(huán)境發(fā)生移動(dòng)。
其結(jié)果，將培養(yǎng)液封入粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器中，培養(yǎng)面在水中潤(rùn)濕時(shí)，親水基在培養(yǎng)面上露出，從而能夠吸附水。其結(jié)果，滯后增高，細(xì)胞粘附率提高。另一方面，本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的培養(yǎng)面與空氣接觸的情況為親水基藏入樹脂中的狀態(tài)，因此認(rèn)為，培養(yǎng)面成為疏水性，接觸角不發(fā)生變化。如以上所說明，根據(jù)本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器及其制造方法，對(duì)于由聚烯烴類樹脂構(gòu)成的培養(yǎng)容器進(jìn)行除去臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的紫外線照射，由此，使培養(yǎng)面的接觸角和滯后為規(guī)定的范圍，能夠在不使培養(yǎng)面親水化的情況下，使細(xì)胞粘附率提高。因此，可以不需要必要以上的潔凈度高的制造環(huán)境和遮蓋這樣的復(fù)雜的制造工序，提供顯示出優(yōu)良的細(xì)胞粘附率的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器。實(shí)施例

以下，對(duì)于用于評(píng)價(jià)本實(shí)施方式的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的性能以及特性而進(jìn)行的實(shí)施例以及比較例，參照?qǐng)D7 圖9進(jìn)行說明。首先，對(duì)實(shí)施例以及比較例中所使用的培養(yǎng)容器涉及的、1.制膜、紫外線照射以及電暈處理的方法、2.細(xì)胞粘附性能的評(píng)價(jià)方法、3.接觸角以及滯后的測(cè)定方法、以及4.熱密封強(qiáng)度的測(cè)定方法依次進(jìn)行說明。〈1.制膜、紫外線照射以及電暈處理的方法〉制膜使用LABO PLAST MILL(東洋精機(jī)制作所制)通過擠出成形進(jìn)行。另外，在一部分的實(shí)施例以及比較例中，使用熱壓(莊司鐵鋼制)進(jìn)行制膜。紫外線照射中使用UV燈(主波長(zhǎng)254nm、臭氧發(fā)生波長(zhǎng)185nm通過石英管截?cái)?，商品名TUV15W/G15T8，飛利浦公司制)。需要說明的是，實(shí)施例或比較例中，在制袋后進(jìn)行紫外線照射的情況以及在制袋前進(jìn)行紫外線照射情況(對(duì)于膜直接紫外線照射)，以累積光量5J/cm2進(jìn)行。其是將膜距離燈12cm照射2小時(shí)。另外，對(duì)樹脂顆粒進(jìn)行紫外線照射以累積光量lOJ/cm2進(jìn)行。其是在燈附近放置膜照射2小時(shí)。累積光量用紫外線累積光量計(jì)UIT-150 (Ushio電機(jī)株式會(huì)公司制)測(cè)定。電暈處理中使用高頻電源裝置CG_102(春日電機(jī)株式會(huì)公司制)。另外，此時(shí)，將施加電流設(shè)為3.5A、將膜與電極之間的距離設(shè)為5mm、將膜移動(dòng)速度設(shè)為5m/分鐘，進(jìn)行電暈放電處理?！?.細(xì)胞粘附性能的評(píng)價(jià)方法〉首先，如下進(jìn)行操作來準(zhǔn)備培養(yǎng)的粘附細(xì)胞。作為使用培養(yǎng)基，使用在Nutrient mixture F/12Ham(西格瑪奧德里奇公司制)中添加10%胎牛血清(Invitrogen公司制)后的培養(yǎng)基，作為粘附細(xì)胞，使用CHO-Kl (中國(guó)倉鼠卵巢)細(xì)胞株，在細(xì)胞培養(yǎng)皿(Cp6cm，Becton-Dickinson公司制)中培養(yǎng)，從底面剝離回收所得到的粘附細(xì)胞，進(jìn)行計(jì)數(shù)。接著,在培養(yǎng)皿(Cp6cm, Becton.Dickinson公司制)中預(yù)先貼合實(shí)施例以及比較例中的各膜。此時(shí)，也切割貼合在制袋后進(jìn)行了紫外線照射的膜。另外，在各個(gè)膜上，將新鮮的培養(yǎng)基150μ I與從細(xì)胞培養(yǎng)皿底面剝離回收的細(xì)胞懸浮液150 μ I (液的總量:300 μ I)混合，接種成點(diǎn)狀。此時(shí)，由于上述回收的細(xì)胞數(shù)每次實(shí)驗(yàn)發(fā)生變化，因此，接種的細(xì)胞數(shù)在各實(shí)施例以及比較例中不同，大約7.2 8.9 X IO4細(xì)胞/點(diǎn)。另外，培養(yǎng)面積為2cm2。
經(jīng)過I日后(24或28小時(shí)后)，計(jì)數(shù)浮游的細(xì)胞數(shù)和粘附的細(xì)胞數(shù)，基于以下式子，計(jì)算細(xì)胞粘附率。(粘附的細(xì)胞數(shù))/(浮游的細(xì)胞數(shù)+粘附的細(xì)胞數(shù))=細(xì)胞粘附率〈3.接觸角以及滯后的測(cè)定方法〉接觸角以及滯后的測(cè)定中，使用固液界面分析系統(tǒng)DropMaSter700(協(xié)和界面科學(xué)株式會(huì)公司制)。如圖7所示，接觸角(θ8)在膜上滴加純水3μ I進(jìn)行測(cè)定。另外，對(duì)于滑落時(shí)滯后(Θ a- Θ r)而言，在膜上滴加純水30 μ 1，每I秒傾斜測(cè)定臺(tái)1° ,滑落時(shí)的前進(jìn)接觸角(Θ a)和后退接觸角(Θ r)通過切線法計(jì)算得到?！?.熱密封強(qiáng)度的測(cè)定方法〉熱密封強(qiáng)度的測(cè)定中使用熱密封試驗(yàn)裝置(Tester產(chǎn)業(yè)株式會(huì)公司制)。關(guān)于密封條件，將密封寬設(shè)為10mm，僅上側(cè)密封條加熱至140°C，將壓力設(shè)為3kgf/cm2，將密封時(shí)間設(shè)為2秒。拉伸試驗(yàn)中使用精密萬能試驗(yàn)機(jī)自動(dòng)繪圖儀AG-1S(島津制作所株式會(huì)公司制)，將試驗(yàn)片寬設(shè)為15mm,在M.D.方向上以300mm/分鐘的速度拉伸，根據(jù)最大試驗(yàn)力(N/15mm)評(píng)價(jià)密封強(qiáng)度。接著，參照?qǐng)D8，對(duì)實(shí)施例以及比較例進(jìn)行說明。該圖中，EPPE表示EasyProcessing PolyEthylene (易加工性聚乙烯)，LLDPE 表不 Linear Low-DensityPolyEthylene (直鏈狀低密度聚乙烯)，PP表示Polypropylene (聚丙烯)，LDPE表示Low-Density PolyEthylene (低密度聚乙烯)。另外，處理內(nèi)容的“制袋后UV”表示:在貼合膜、密封四周后，照射254nm波長(zhǎng)的UV。在該紫外線照射中，以累積光量達(dá)到5J/cm2的方式進(jìn)行照射。另外，處理內(nèi)容的“直接UV”表示:使膜在露出的狀態(tài)下照射254nm波長(zhǎng)的UV。該紫外線照射中，以累積光量達(dá)到5J/cm2的方式進(jìn)行照射。另外，處理內(nèi)容的“preUV”表示:對(duì)樹脂顆粒照射254nm波長(zhǎng)的UV。該紫外線照射中，以累積光量達(dá)到lOJ/cm2的方式進(jìn)行照射。另外，處理內(nèi)容的“電暈處理”表示:使用高頻電源裝置CG_102(春日電機(jī)株式會(huì)公司制)，將施加電流設(shè)為3.5A，將膜與電極之間的距離設(shè)為5_，將膜移動(dòng)速度設(shè)為5m/分鐘，進(jìn)行電暈放電處理。(實(shí)施例1)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用預(yù)先含有抗氧化劑的Excellen FX CX3007(EPPE、住友化學(xué)株式會(huì)公司制)，通過擠出成形制膜。需要說明的是，在外層使用Excellen GMHCB2001 (EPPE、住友化學(xué)株式會(huì)公司制)，形成由二層構(gòu)成的膜。接著，將該膜貼合成袋狀，密封四周，照射254nm波長(zhǎng)的紫外線照射。在所得到的培養(yǎng)容器中，接種如上所述準(zhǔn)備的粘附細(xì)胞CHO-Kl (中國(guó)倉鼠卵巢)細(xì)胞株，進(jìn)行培養(yǎng)。初期接種細(xì)胞數(shù)為7.8X IO4細(xì)胞/點(diǎn)，培養(yǎng)面積為2cm2。經(jīng)過28小時(shí)后，計(jì)數(shù)浮游的細(xì)胞數(shù)和粘附的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算細(xì)胞粘附率。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為80.8%。另外，測(cè)定該培養(yǎng)容器的培養(yǎng)面的接觸角 、滯后以及熱密封強(qiáng)度。其結(jié)果，接觸角為101.9°，滯后為27.8°，熱密封強(qiáng)度為15.8(N/15mm)。(實(shí)施例2)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用預(yù)先含有抗氧化劑的Excellen FX CX3502(EPPE、住友化學(xué)株式會(huì)公司制)，通過擠出成形制膜。其他方面，與實(shí)施例1同樣操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為87.5%，接觸角為103.8°，滯后為35.9°，熱密封強(qiáng)度為
18.9(N/15mm)。(實(shí)施例3)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用預(yù)先含有抗氧化劑的Excellen GMHCB2001(EPPE、住友化學(xué)株式會(huì)公司制)，通過擠出成形制膜。需要說明的是，在外層使用Kernel KS240T (LLDPE、日本聚乙烯株式會(huì)公司制)，形成由二層構(gòu)成的膜。其他方面，與實(shí)施例I同樣操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。需要說明的是，沒有進(jìn)行熱密封強(qiáng)度的測(cè)定。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為86.1%，接觸角為100.0°，滯后為26.5°。(實(shí)施例4)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用預(yù)先含有抗氧化劑的Kernel KS240T(LLDPE、日本聚乙烯株式會(huì)公司制)，通過擠出成形制膜。其他方面，與實(shí)施例1同樣操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。需要說明的是，沒有進(jìn)行熱密封強(qiáng)度的測(cè)定。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為82.0%，接觸角為105.V，滯后為 35.0°。(實(shí)施例5)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用預(yù)先含有抗氧化劑的Kernel KS340T(LLDPE、日本聚乙烯株式會(huì)公司制)，通過擠出成形制膜。其他方面，與實(shí)施例1同樣操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為87.1 %，接觸角為104.3°，滯后為40.9°、熱密封強(qiáng)度為17.3(N/15mm)。(實(shí)施例6)作為由單層構(gòu)成的細(xì)胞培養(yǎng)容器的層，使用預(yù)先含有抗氧化劑的KernelKF283 (LLDPE、日本聚乙烯株式會(huì)公司制)，通過擠出成形制膜。另外，將初期接種細(xì)胞數(shù)設(shè)定為8.9X104細(xì)胞/點(diǎn)，在該方面與實(shí)施例1同樣操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。需要說明的是，沒有進(jìn)行熱密封強(qiáng)度的測(cè)定。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為81.0%，接觸角為95.6°，滯后為30.0°。(實(shí)施例7)作為由單層構(gòu)成的細(xì)胞培養(yǎng)容器的層，使用預(yù)先含有抗氧化劑的 Novatec PPMG3F(PP、日本聚丙烯株式會(huì)公司制)，通過熱壓形成膜。接著，將該膜在露出的狀態(tài)下照射254nm波長(zhǎng)的紫外線照射。在所得到的培養(yǎng)容器中，接種如上所述準(zhǔn)備的粘附細(xì)胞CHO-Kl (中國(guó)倉鼠卵巢)細(xì)胞株，進(jìn)行培養(yǎng)。初期接種細(xì)胞數(shù)為7.2X IO4細(xì)胞/點(diǎn)，培養(yǎng)面積為2cm2。經(jīng)過24時(shí)間 后，計(jì)數(shù)浮游的細(xì)胞數(shù)和粘附的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算細(xì)胞粘附率。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為82.7%。另外，測(cè)定該培養(yǎng)容器的培養(yǎng)面的接觸角以及滯后。其結(jié)果，接觸角為97.3°，滯后為25.9°。(實(shí)施例8)作為由單層構(gòu)成的細(xì)胞培養(yǎng)容器的層，使用預(yù)先含有抗氧化劑的Excellen FXCX3007 (EPPE、住友化學(xué)株式會(huì)公司制)，對(duì)該樹脂顆粒照射254nm波長(zhǎng)的紫外線照射。之后，通過熱壓制膜，制造培養(yǎng)容器。使用所得到的培養(yǎng)容器，與實(shí)施例7同樣地進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，計(jì)算細(xì)胞粘附率。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為91.9%。另外，測(cè)定該培養(yǎng)容器的培養(yǎng)面的接觸角以及滯后。其結(jié)果，接觸角為102.2°，滯后為29.2°。(比較例I)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用與實(shí)施例1相同的樹脂，除了沒有進(jìn)行紫外線照射之外，其他方面，與實(shí)施例1同樣操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為3.2%，接觸角為102.7。，滯后為16.1°、熱密封強(qiáng)度為18.5(N/15mm)。(比較例2)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用與實(shí)施例2相同的樹脂，除了沒有進(jìn)行紫外線照射之外，其他方面，與實(shí)施例2同樣地進(jìn)行 實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為1.9%，接觸角為103.2。，滯后為17.0°，熱密封強(qiáng)度為20.5(N/15mm)。(比較例3)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用與實(shí)施例3相同的樹脂，除了沒有進(jìn)行紫外線照射之外，其他方面，與實(shí)施例3同樣操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為20.7%，接觸角為 100.1。，滯后為 17.8°。(比較例4)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用不含有抗氧化劑的Excellen GMH CB5002(EPPE、住友化學(xué)株式會(huì)公司制)，通過擠出成形制膜。需要說明的是，外層中使用KernelKM262 (LLDPE、日本聚乙烯株式會(huì)公司制)，形成由二層構(gòu)成的膜。另外，除了沒有進(jìn)行紫外線照射之外，其他方面，與實(shí)施例3同樣操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為18.6%，接觸角為101.0°，滯后為15.6°。(比較例5)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用與比較例4相同的樹脂，通過擠出成形制膜。需要說明的是，外層中也使用與比較例4相同的樹脂，形成由二層構(gòu)成的膜。接著，將該膜貼合成袋狀，密封四周，照射254nm波長(zhǎng)的紫外線照射。這樣，除了進(jìn)行紫外線照射以外，其他方面，與比較例4與同樣地操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為12.5%，接觸角為100.4°，滯后為17.1°。(比較例6)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用與實(shí)施例4相同的樹脂，除了沒有進(jìn)行紫外線照射之外，其他方面，與實(shí)施例4同樣地操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為13.5%，接觸角為106.0。，滯后為21.9°。(比較例7)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用與實(shí)施例5相同的樹脂，除了沒有進(jìn)行紫外線照射之外，其他方面，與實(shí)施例5同樣地操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為17.6%，接觸角為103.6°，滯后為25.0°，熱密封強(qiáng)度為17.5(N/15mm)。(比較例8)
作為由單層構(gòu)成的細(xì)胞培養(yǎng)容器的層，使用與實(shí)施例6相同的樹脂，除了沒有進(jìn)行紫外線照射之外，其他方面，與實(shí)施例6同樣地操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為39.0%，接觸角為96.8°，滯后為15.0°。(比較例9)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用不含有抗氧化劑的Kernel KM262 (LLDPE、日本聚乙烯株式會(huì)公司制)，通過擠出成形制膜。需要說明的是，外層中使用Excellen GMHCB5002(EPPE、住友化學(xué)株式會(huì)公司制)，形成由二層構(gòu)成的膜。另外，除了沒有進(jìn)行紫外線照射之外，其他方面，與實(shí)施例3同樣操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為16.0%，接觸角為100.9°，滯后為15.6°。(比較例10)
作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用與比較例9相同的樹脂，通過擠出成形制膜。需要說明的是，外層中也使用與比較例9相同的樹脂，形成由二層構(gòu)成的膜。接著，將該膜貼合成袋狀，密封四周，照射254nm波長(zhǎng)的紫外線照射。這樣，除了進(jìn)行紫外線照射以外，其他方面，與比較例9同樣地操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為
17.3%，接觸角為100.8°，滯后為16.2°。(比較例11)作為由單層構(gòu)成的細(xì)胞培養(yǎng)容器的層，使用不含有抗氧化劑的UBE聚乙烯L719(LDPE、宇部丸善聚乙烯株式會(huì)公司制)，通過擠出成形制膜。另外，除了沒有進(jìn)行紫外線照射之外，其他方面，與實(shí)施例3同樣操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為53.0%，接觸角為102.4°，滯后為15.0°。(比較例12)作為由單層構(gòu)成的細(xì)胞培養(yǎng)容器的層，使用與比較例11相同的樹脂，通過擠出成形制膜。接著，將該膜貼合成袋狀，密封四周，照射254nm波長(zhǎng)的紫外線照射。這樣，除了進(jìn)行紫外線照射以外，其他方面，與比較例11同樣地操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為47.9%，接觸角為102.3°，滯后為17.8°。(比較例13)作為由單層構(gòu)成的細(xì)胞培養(yǎng)容器的層，使用與實(shí)施例7相同的樹脂，除了沒有進(jìn)行紫外線照射之外，其他方面，與實(shí)施例7同樣地操作，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其結(jié)果，細(xì)胞粘附率為21.1%，接觸角為99.5°，滯后為16.1°。(比較例14)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用與實(shí)施例1相同的樹脂，通過擠出成形制膜。需要說明的是，外層中也使用與實(shí)施例1相同的樹脂，形成由二層構(gòu)成的膜。將該膜露出的狀態(tài)下進(jìn)行電暈放電處理，測(cè)定該接觸角和熱密封強(qiáng)度。其結(jié)果，接觸角為87.6°，熱密封強(qiáng)度為11.3(N/15mm)。(比較例15)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用與實(shí)施例2相同的樹脂，通過擠出成形制膜。需要說明的是，外層中也使用與實(shí)施例2相同的樹脂，形成由二層構(gòu)成的膜。將該膜露出的狀態(tài)下進(jìn)行電暈放電處理，測(cè)定該接觸角和熱密封強(qiáng)度。其結(jié)果，接觸角為91.5°，熱密封強(qiáng)度為10.6(N/15mm)。(比較例16)作為細(xì)胞培養(yǎng)容器的內(nèi)層，使用與實(shí)施例5相同的樹脂，通過擠出成形制膜。需要說明的是，外層中也使用與實(shí)施例5相同的樹脂，形成由二層構(gòu)成的膜。將該膜露出的狀態(tài)下進(jìn)行電暈放電處理，測(cè)定該接觸角和熱密封強(qiáng)度。其結(jié)果，接觸角為85.8°，熱密封強(qiáng)度為9.2(N/15mm)。將以上的實(shí)施例以及比較例中的細(xì)胞粘附率與滯后的關(guān)系示于圖9。該圖中，實(shí)心 表示實(shí)施例中得到的培養(yǎng)容器的結(jié)果，使用含有抗氧化劑的樹脂，照射254nm波長(zhǎng)的紫外線。空心〇表示比較例中得到的培養(yǎng)容器的結(jié)果，使用含有抗氧化劑的樹脂，沒有進(jìn)行紫外線的照射。實(shí)心■表示比較例中得到的培養(yǎng)容器的結(jié)果，使用不含有抗氧化劑的樹脂，照射254nm波長(zhǎng)的紫外線，空心□表示比較例中得到的培養(yǎng)容器的結(jié)果，使用不含有抗氧化劑的樹脂，沒有進(jìn)行紫外線的照射。這些培養(yǎng)容器的內(nèi)面的接觸角均為95°以上，沒有被親水化(參照?qǐng)D8的實(shí)施例1-8、比較例 1-13)。另一方面，滯后超過25°時(shí)，細(xì)胞粘附率急劇增大。這樣，由上述實(shí)施例以及比較例的結(jié)果可知，在粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造中，優(yōu)選使用含有抗氧化劑的聚乙烯或聚丙烯等聚烯烴類樹脂，進(jìn)行除去臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的紫外線照射。由此，可以制造具備接觸角為95°以上、并且滯后大于25°的培養(yǎng)面的培養(yǎng)容器。另外，使用該培養(yǎng)容器，培養(yǎng)粘附細(xì)胞，由此，能夠得到高細(xì)胞粘附率。

本發(fā)明不限定于以上的實(shí)施方式和實(shí)施例，在本發(fā)明的范圍內(nèi)，當(dāng)然可以進(jìn)行各種變更。例如，在上述實(shí)施例中作為粘附細(xì)胞使用CHO-Kl細(xì)胞株，但不限于此，只要是粘附細(xì)胞，則也可以使用其他細(xì)胞。另外，關(guān)于培養(yǎng)液的種類、制膜、制袋方法等，也能夠適當(dāng)變更。另外，在上述實(shí)施方式和實(shí)施例中，作為紫外線源，使用除去了臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的低壓水銀燈，但只要是形成接觸角為95°以上、并且滯后大于25°的培養(yǎng)面的紫外線源，則不限于此，例如，也可以使用能夠照射254nm波長(zhǎng)的UV的高壓水銀燈等。產(chǎn)業(yè)上的可利用性本發(fā)明在使用細(xì)胞培養(yǎng)容器大量培養(yǎng)粘附細(xì)胞的情況下，能夠適當(dāng)利用。
權(quán)利要求
1.一種粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，是包含至少在最內(nèi)層具有聚烯烴的層的單層或多層的膜或片的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，其特征在于，所述培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面或整個(gè)內(nèi)面中的靜態(tài)水接觸角為95°以上，并且水滑落時(shí)的前進(jìn)接觸角以及后退接觸角滿足下述式(1)， 前進(jìn)接觸角-后退接觸角> 25°...(式I)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，其中，所述聚烯烴含有抗氧化劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的粘附細(xì)胞培養(yǎng)容器，其中，所述抗氧化劑為酚類抗氧化劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，其特征在于，對(duì)所述聚烯烴照射除去了臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的紫外線，由此，以靜態(tài)水接觸角為95°以上、并且水滑落時(shí)的前進(jìn)接觸角以及后退接觸角滿足所述式(I)的方式形成所述培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面或整個(gè)內(nèi)面。
5.一種粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法，其特征在于，對(duì)至少在最內(nèi)層具有聚烯烴的層的單層或多層的膜或片實(shí)施除去了臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的紫外線照射，以靜態(tài)水接觸角為95°以上、并且水滑落時(shí)的前進(jìn)接觸角以及后退接觸角滿足式(I)的方式形成由該膜或片構(gòu)成的培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面或整個(gè)內(nèi)面， 前進(jìn)接觸角-后退接觸 角> 25°...(式I)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法，其中，所述紫外線照射從通過所述膜或片形成的封閉區(qū)域的外側(cè)實(shí)施。
7.一種粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法，其特征在于，對(duì)聚烯烴的顆粒實(shí)施除去了臭氧發(fā)生波長(zhǎng)的紫外線照射，形成至少在最內(nèi)層具有聚烯烴的層的單層或多層的膜或片，以靜態(tài)水接觸角為95°以上、并且水滑落時(shí)的前進(jìn)接觸角以及后退接觸角滿足下述式(I)的方式形成由膜或片構(gòu)成的培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面或整個(gè)內(nèi)面， 前進(jìn)接觸角-后退接觸角> 25°...(式I)。
8.根據(jù)權(quán)利要求5 7中任一項(xiàng)所述的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器的制造方法，其中，所述聚烯烴含有抗氧化劑。
全文摘要
可以不需要必要以上的潔凈度高的制造環(huán)境和遮蓋這樣的復(fù)雜的制造工序，提供能培養(yǎng)粘附細(xì)胞的培養(yǎng)袋。形成由聚烯烴構(gòu)成的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，培養(yǎng)容器的一部分內(nèi)面或整個(gè)內(nèi)面中的靜態(tài)水接觸角為95°以上，并且水滑落時(shí)的前進(jìn)接觸角以及后退接觸角滿足前進(jìn)接觸角-后退接觸角＞25°。優(yōu)選該聚烯烴中含有抗氧化劑。特別優(yōu)選為酚類抗氧化劑。具備顯示這樣的接觸角以及滯后的培養(yǎng)面的粘附細(xì)胞用培養(yǎng)容器，可以通過對(duì)聚烯烴照射除去臭氧波長(zhǎng)的紫外線來得到。
文檔編號(hào)C12M3/00GK103180430SQ20118004900
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2011年10月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月13日
發(fā)明者戶谷貴彥, 石崎庸一, 田中鄉(xiāng)史, 末永亮, 太田恭平, 國(guó)則正弘 申請(qǐng)人:東洋制罐株式會(huì)社