專利名稱：涉及編碼pae以及pae樣多肽的基因并具有改變的貯藏化合物水平的植物種子、相關的構 ...的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物分子生物學領域。更具體地，本發(fā)明涉及在植物和種子中編碼果膠乙酰酯酶(PAE)和果膠乙酰酯酶樣(PAE樣)蛋白質的分離的核酸片段以及此類片段用于調節(jié)編碼PAE或PAE樣活性的基因的表達的用途。
背景技術：
在成熟期，大豆種子干重的約40%是蛋白質，并且20%是可提取的油。這些組成了大豆作物的有經(jīng)濟價值的產(chǎn)物。例如，植物油是可得自植物的最富含能量的生物質；它們具有碳水化合物兩倍的能含量。另外，只需要很少的能量來提取植物油并將其轉化成燃料。在種子重量的剩余40%中，約10%是可溶性碳水化合物?？扇苄蕴妓衔锊糠謱Υ蠖狗N子的經(jīng)濟價值沒有多少貢獻，并且可溶性碳水化合物級分的主要組分棉籽糖對加工過程和對大豆粉在單腹動物中的食物價值都是有害的(Coon等人(1988) Proceedings SoybeanUtilization Alternatives, Univ.0f Minnesota,第 203-211 頁X因為更好的理解了種子中貯藏化合物生物合成途徑，很顯然，有可能通過改變油、淀粉和可溶性碳水化合物生物合成途徑中的特定酶的催化活性來調節(jié)植物細胞中貯藏化合物庫的大小(Taiz L.等人 ，PlantPhysiology ;The Benjamin/Cummings PublishingCompany:New York, 1991)。例如，調查LPAT和DAGAT的過表達的研究顯示出，使甘油主鏈?；淖罱K步驟在種子中對于向著脂質的流量發(fā)揮了重要的控制作用。通過過表達酵母甘油3-磷酸脫氫酶也可在油籽油菜中提高種子油含量，而在質粒中的脂肪酸從頭合成所涉及的各個基因(例如乙酰-CoA羧化酶和脂肪酸合酶)的過表達基本上沒有改變所積累的脂質的量(Vigeolas H.等人，Plant BiotechnologyJ.5,431-441 (2007))。在擬南芥中已鑒定了低種子油突變體wrinkledl。該突變明顯產(chǎn)生了碳水化合物代謝的種子特異性調控中的缺陷(Focks,Nicole 等人,Plant Physiol.(1998), 118 (I) , 91-101 )。持續(xù)關注鑒定編碼可在植物中調節(jié)貯藏化合物諸如油、蛋白質、淀粉和可溶性碳水化合物的合成的蛋白質的基因。絲氨酸水解酶類是自然界中富含的，并且在例如蛋白酶、脂肪酶、酯酶和轉移酶的酶中發(fā)揮不同的生物化學作用。全部這些相異的酶類在活性位點均有絲氨酸殘基，其在親核攻擊中作為底物從而形成共價中間體。已從植物和微生物中純化了果膠乙酰酯酶(PAE) (EC3.1.1.6)。PAE特異性地使乙?；妓衔锞酆衔锶缒揪厶呛凸z去乙酰化。PAE已顯示例如在半乳糖醛酸殘基的C2和/或C3位置從甜菜果膠除去乙酰酯基團(Nielsen, John E.；Christensen, Tove M.1.E.Distribution of pectin methylesterase and acetylesterase in thegenus Citrus visualized by tissue prints andchromatography.Plant Science (Shannon，Ireland) (2002)，162 (5)，799-807)。編碼來自植物的PAE的基因已被克隆和測序(Christensen等人，Protein and cDNA sequences oforange fruit pectin acetylesterase, and uses thereof0 PCT 國際申請(2000)，第 88頁C0DEN:PIXXD2W02000017368A120000330)。在接受了深度基因組或EST (表達序列標記)測序的每種植物中，已鑒定了編碼與PAE具有相似性的蛋白質的大基因家族。就PAE基因家族而言，不同的序列性質和所觀察到的表達模式表明，基因家族成員有多糖的去乙?；獾纳锘瘜W功能。對于這些與具有PAE相似性的蛋白質的可能的作用，進行的研究很少。根據(jù)編碼PAE樣蛋白質的基因在植物中普遍存在的性質，對它們在植物生長和發(fā)育中，特別是在貯藏化合物在種子中含量的調控中的作用的深入研究是極為受關注的。

發(fā)明內容
在第一實施例中，本發(fā)明涉及包含重組DNA構建體的轉基因植物，所述重組DNA構建體包含可操作地連接到至少一種調控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述多肽基于 Clustal V 比對方法在與 SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68或85進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列，并且其中來自所述轉基因植物的種子在與來自不包含所述重組DNA構建體的對照植物的種子進行比較時具有改變的油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量。在第二實施例中，本發(fā)明涉及包含重組DNA構建體的轉基因種子，所述重組DNA構建體包含可操作地連接到至少一種調控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述多肽基于 Clustal V 比對方法在與 SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、
58、60、62、64、66、68或85進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列 ，并且其中所述轉基因種子在與不包含所述重組DNA構建體的對照種子進行比較時具有改變的油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量。在第三實施例中，本發(fā)明涉及轉基因種子，所述轉基因種子包含:重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包含:(a)可操作地連接到至少一種調控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述多肽基于Clustal V比對方法在與SEQ IDNO:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68 或 85 進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列，或(b)包含至少一種調控元件的抑制DNA構建體，所述調控元件可操作地連接到:(i)以下序列的全部或部分:(A)編碼多肽的核酸序列，所述多肽基于 Clustal V 比對方法在與 SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68或85進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列，或(B) (b) (i) (A)的核酸序列的全長互補序列來源于受關注的靶基因的有義鏈或反義鏈的全部或部分的區(qū)域，所述區(qū)域基于Clustal V比對方法在與所述區(qū)域所源自的有義鏈或反義鏈的所述全部或部分進行比較時具有至少70%序列同一性的核酸序列，并且其中所述受關注的靶基因編碼PAE樣蛋白質，并且其中所述植物在與不包含所述重組DNA構建體的對照植物進行比較時具有改變的油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量。在第四實施例中，本發(fā)明涉及轉基因種子，所述轉基因種子在與非轉基因的種子的油含量進行比較時，基于干重計具有提高了至少4%的油含量，其中所述轉基因種子包含重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包含:(a)如SEQ ID NO: 35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67或84所不的核苷酸序列的全部或部分；或(b) (a)的全長互補序列:其中(a)或(b)具有足以抑制內源性活性在轉基因植物中的表達的長度，并且進一步地其中所述種子與從非轉基因的植物獲得的種子相比，基于干重計具有至少4%的油含量的提聞。
在第五實施例中，本發(fā)明涉及轉基因種子，所述轉基因種子包含重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包含:(a) SEQ ID NO: 35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、
63、65、67或84所示的核苷酸序列的全部或部分；或(b)(a)的全長互補序列:其中(a)或
(b)具有足以抑制內源性PAE或PAE樣蛋白質活性在轉基因植物中的表達的長度，并且進一步地其中所述種子與從非轉基因的植物獲得的種子相比，基于干重計具有至少4%的油含量的提聞。在第六實施例中，本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生轉基因種子的方法，所述方法包括:Ca)用重組DNA構建體轉化植物細胞，所述重組DNA構建體包含可操作地連接到至少一種調控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述多肽基于Clustal V比對方法在與SEQ IDNO:35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67 或 84 進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列；和(b)由(a)的轉化的植物細胞再生轉基因植物；以及(c)選擇產(chǎn)生轉基因種子的轉基因植物，所述轉基因種子與從非轉基因的植物獲得的轉基因種子相比具有改變的油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量。在第七實施例中，本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生轉基因種子的方法，所述方法包括:(a)用重組DNA構建體轉化植物細胞，所述重組DNA構建體包含:(i)如SEQ ID N0:35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67或84所示的核苷酸序列的全部或部分；或
(ii)⑴的全長互補序列；其中⑴或(ii)具有足以抑制內源性PAE或PAE樣蛋白質活性在轉基因植物中的表達的長度；(b)由(a)的轉化的植物細胞再生轉基因植物；以及(c)選擇產(chǎn)生轉基因種子的轉基因植物，所述轉基因種子與從非轉基因的植物獲得的轉基因種子相比具有改變的油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量。在第八實施例中，本發(fā)明涉及用于產(chǎn)生轉基因種子的方法，所述方法包括:(a)用重組DNA構建體轉化植物細胞，所述重組DNA構建體包含:(i)如SEQ ID N0:35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67或84所示的核苷酸序列的全部或部分；或
(ii)⑴的全長互補序列；其中⑴或(ii)具有足以抑制內源性PAE或PAE樣蛋白質活性在轉基因植物中的表達的長度；(b)由(a)的轉化的植物細胞再生轉基因植物；以及(c)選擇產(chǎn)生轉基因種子的轉基因植物，所述轉基因種子與從非轉基因的植物獲得的轉基因種子相比，基于干重計具有至少4%的油含量的提高。在第九實施例中，本發(fā)明涉及轉基因種子，所述轉基因種子包含:重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包含:(a)可操作地連接到至少一種調控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述多肽基于Clustal V比對方法在與SEQ IDN0:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68 或 85 進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列；或(b)包含至少一種調控元件的抑制DNA構建體，所述調控元件可操作地連接到:(i)以下序列的全部或部分:(A)編碼多肽的核酸序列，所述多肽基于 Clustal V 比對方法在與 SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、
64、66、68或85進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列，或(B)(b) (i) (A)的核酸序列的全長互補序列來源于受關注的靶基因的有義鏈或反義鏈的全部或部分的區(qū)域，所述區(qū)域基于Clu stal V比對方法在與所述區(qū)域所源自的有義鏈或反義鏈的所述全部或部分進行比較時具有至少70%序列同一性的核酸序列，并且其中所述受關注的靶基因編碼PAE樣蛋白質，并且其中所述植物在與不包含所述重組DNA構建體的對照植物進行比較時具有改變的、提高的或降低的油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量。在第十實施例中，本發(fā)明包括分離的多核苷酸，所述分離的多核苷酸包含:(a)編碼改變即提高或降低油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量所需的多肽的核苷酸序列，其中所述多肽在與SEQ ID N0:36或48進行比較時具有至少95%序列同一性的氨基酸序列，或(b)所述核苷酸序列的全長互補序列，其中所述全長互補序列和所述核苷酸序列由相同數(shù)目的核苷酸組成并且 是100%互補的。所述多肽可包含SEQ ID N0:36或48的氨基酸序列。所述核苷酸序列可包含SEQ ID NO:35或47的核苷酸序列。在另一個實施例中，本發(fā)明涉及包含本發(fā)明任何分離的多核苷酸的重組DNA構建體，所述分離的多核苷酸可操作地連接到至少一種調控序列，并且本發(fā)明涉及包含所述重組DNA構建體的細胞、植物和種子。所述細胞可為真核細胞，例如酵母、昆蟲或植物細胞，或者為原核細胞，例如細菌細胞。從單子葉植物和雙子葉植物(例如，分別如玉米和大豆)獲得的包含本發(fā)明的重組構建體的種子在本發(fā)明的范圍之內。驅動表達本發(fā)明核酸序列的種子特異性或種子優(yōu)選的啟動子也被包括在內。驅動表達本發(fā)明核酸序列的胚或胚乳特異性的啟動子也被包括在內。此外，本發(fā)明的方法對于從單子葉植物(例如玉米和稻)和雙子葉植物(例如大豆和卡諾拉)獲得轉基因種子是有用的。也在本發(fā)明范圍之內的是從轉基因種子獲得的產(chǎn)物和/或副產(chǎn)物，所述轉基因種子從單子葉植物或雙子葉植物(分別例如玉米和大豆)獲得。在另一個實施例中，本發(fā)明涉及用于在植物中抑制編碼具有PAE樣蛋白質活性的多肽的基因的表達水平的方法，其中所述方法包括用本發(fā)明的任何核酸片段轉化單子葉植物或雙子葉植物。


和序列表根據(jù)以下的形成本專利申請的一部分的具體實施方式
和附圖以及序列表，可更全面地理解本發(fā)明。圖1A-1D顯示了由來源于以下的核苷酸序列編碼的PAE和PAE樣蛋白質的氨基酸序列的比對:完菁(Brassica rapa) (SEQ ID NO: 36);向日葵(Helianthus annuus)(SEQ ID NO:38);蓖麻(Ricinus communis) (SEQ ID NO:40);大豆(Glycine max) (SEQ IDN0:42、44、46 和 48);玉米(Zea mays) (SEQ ID N0:50、52 和 54);水稻(Oryzasativa) (SEQID N0:56、58 和 60);高粱(Sorghumbicolor) (SEQ ID N0:62、64 和 66);小麥(Triticumaestivum) (SEQ ID NO:68);擬南芥(Arabidopsisthaliana) (SEQ ID N0:85,At2g46930)；SEQ ID勵:86，對應于來自美國專利申請”20100083407的5￡0 ID NO:53381 (大豆)；和SEQ ID N0:87，對應于美國專利申請US20090094717的SEQ ID NO: 13822 (擬南芥)。就比對而言，將在全部序列之間在給定位置處保守的氨基酸劃框表示。該程序用短劃線來使序列間最大程度的對齊。圖2顯示了圖1A-1D中顯示的每對氨基酸序列的百分比序列同一性的圖表。序列描述以及所附序列表遵循如37C.F.R.§1.821-1.825所示的關于專利申請中核苷酸和/或氨基酸序列公開的規(guī)定。
SEQIDNO:1對應于載體PHSbarENDS2的核苷酸序列。SEQIDN0:2對應于多接頭的核苷酸序列。SEQIDN0:3對應于載體pKR85的核苷酸序列。SEQIDN0:4對應于載體pKR278的核苷酸序列。SEQIDN0:5對應于載體pKR407的核苷酸序列。SEQIDN0:6對應于載體pKR1468的核苷酸序列。SEQIDN0:7對應于載體pKR1475的核苷酸序列。SEQIDN0:8對應于載體pKR92的核苷酸序列。SEQIDN0:9對應于載體pKR1478的核苷酸序列。SEQIDNO: 10 對應于 SAIFF 和 lo22730 的基因組 DNA。SEQIDNO: 11 對應于正向引物 PAE ORF FffD0SEQIDNO: 12 對應于反向引物 PAE ORF REV。SEQIDNO: 13對應于包含PAE的載體pENTR的核苷酸序列。SEQID勵:14對應于載體口10 1478^^￡的核苷酸序列。SEQID勵:15對應于？10 1481的核苷酸序列。SEQIDNO: 16 對應于 AthLcc In 正向引物。SEQIDNO: 17 對應于 AthLcc In 反向引物。SEQIDNO: 18對應于含有漆酶內含子的PCR (聚合酶鏈反應)產(chǎn)物。SEQIDNO: 19對應于PSM1318的核苷酸序列。SEQIDN0:20 對應于 pMBL18AITR12INT 的核苷酸序列。SEQIDNO:21對應于PSM1789的核苷酸序列。SEQIDN0:22 對應于 pMBL18AITR12INT ATTR21 的核苷酸序列。SEQIDNO:23 對應于 SuSy-5’ 引物。SEQIDNO: 24 對應于 SuSy-3’ 引物。SEQIDN0:25對應于pLF122的核苷酸序列。SEQIDN0:26對應于pKR1142的核苷酸序列。SEQIDN0:27對應于pKR1155的核苷酸序列。SEQIDN0:28對應于KS294的核苷酸序列。SEQIDN0:29對應于pKR627的核苷酸序列。SEQIDN0:30對應于pKR132的核苷酸序列。SEQIDNO:31對應于pKR278的核苷酸序列。SEQIDN0:32對應于pKR1157的核苷酸序列。SEQIDN0:33對應于pKR1479的核苷酸序列。SEQIDN0:34 對應于 pKR1481-PAE 的核苷酸序列。 表I列出了本文所述的多肽、包含編碼這些多肽全部或其主要部分的核酸片段的克隆的命名、以及在所附序列表中使用的對應標識符(SEQ ID NO:)。表I還標示了作為單獨的EST (“EST”)的cDNA克隆、包含標明的cDNA克隆的整個cDNA插入物的序列(“FIS”)、由兩個或更多個EST組裝而成的重疊群(“Contig”)、由FIS和一個或多個EST組裝而成的重疊群(“Contig*”)或編碼源自FIS、重疊群、EST和PCR或FIS和PCR的完整或功能性蛋白質的序列(“ CGS ”)。表IPAE樣蛋白質
權利要求
1.包含重組DNA構建體的轉基因植物，所述重組DNA構建體包含可操作地連接到至少一種調控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述多肽基于Clustal V比對方法在與 SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68 或 85 進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列，并且其中從所述轉基因植物獲得的種子在與不包含所述重組DNA構建體的對照植物進行比較時具有改變的即提高的或降低的油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量。
2.從權利要求1所述的轉基因植物獲得的轉基因種子，所述轉基因種子包含重組DNA構建體，所述重組DNA構建體包含可操作地連接到至少一種調控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述多肽基于Clustal V比對方法在與SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68或85進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述轉基因種子在與來自不包含所述重組DNA構建體的對照植物的種子進行比較時具有改變的油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量。
3.轉基因種子，包含: 重組DNA構建體，其包含: (a)可操作地連接到至少一種調控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述多肽基于 Clustal V 比對方法在與 SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68或85進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列，或 (b)抑制DNA構建體，所述構建體包含至少一種調控元件，所述調控元件可操作地連接到: (i)以下序列的全部或部分:(A)編碼多肽的核酸序列，所述多肽基于ClustalV比對方法在與 SEQ ID N0:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68 或 85 進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列，或(B) (b) (i) (A)的核酸序列的全長互補序列；或 (ii)來源于受關注的靶基因的有義鏈或反義鏈的全部或部分的區(qū)域，所述區(qū)域基于Clustal V比對方法在與所述區(qū)域所源自的有義鏈或反義鏈的所述全部或部分進行比較時具有至少70%序列同一性的核酸序列，并且其中所述受關注的靶基因編碼PAE或PAE樣蛋白質， 并且其中所述植物在與不包含所述重組DNA構建體的對照植物進行比較時具有改變的、提高的或降低的油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量。
4.根據(jù)權利要求1所述的轉基因種子，其中所述油含量在與非轉基因的植物的油含量進行比較時提高了至少4%。
5.包含重組DNA構建體的轉基因種子，包含:(a)如 SEQ ID NO:35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67 或84 所示的核苷酸序列的全部或部分； 或(b) (a)的全長互補序列: 其中(a)或(b)具有足以抑制內 源性PAE或PAE樣蛋白質活性在轉基因植物中的表達的長度，并且進一步地其中所述種子與從非轉基因的植物獲得的種子相比，基于干重計具有至少4%的油含量的提高。
6.產(chǎn)生轉基因植物的方法，所述方法包括:(a)用重組DNA構建體轉化植物細胞，所述重組DNA構建體包含可操作地連接到至少一種調控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述多肽基于Clustal V比對方法在與 SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68 或 85 進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列；以及由所述轉化的植物細胞再生植物。
7.產(chǎn)生轉基因種子的方法，所述方法包括: (a)用重組DNA構建體轉化植物細胞，所述 重組DNA構建體包含可操作地連接到至少一種調控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述多肽基于Clustal V比對方法在與 SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68 或 85 進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列；以及 (b)由(a)的轉化的植物細胞再生轉基因植物；以及 (c)選擇產(chǎn)生轉基因種子的轉基因植物，所述轉基因種子與從非轉基因的植物獲得的轉基因種子相比具有改變的油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量。
8.產(chǎn)生轉基因種子的方法，所述方法包括: (a)用重組DNA構建體轉化植物細胞，所述重組DNA構建體包含可操作地連接到至少一種調控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸編碼多肽，所述多肽基于Clustal V比對方法在與 SEQ ID NO:36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68 或 85 進行比較時具有至少70%序列同一性的氨基酸序列；以及 (b)由(a)的轉化的植物細胞再生轉基因植物；以及 (c)選擇產(chǎn)生轉基因種子的轉基因植物，所述轉基因種子與從非轉基因的植物獲得的轉基因種子相比具有至少0.5%的提高的淀粉含量。
9.產(chǎn)生轉基因種子的方法，所述方法包括: (a)用重組DNA構建體轉化植物細胞，所述重組DNA構建體包含:(i)如SEQ ID NO:35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67 或84 所示的核苷酸序列的全部或部分；或 (ii)(i)的全長互補序列； 其中(i)或(ii)具有足以抑制內源性PAE或PAE樣蛋白質活性在轉基因植物中的表達的長度； (b)由(a)的轉化的植物細胞再生轉基因植物；以及 (c)選擇產(chǎn)生轉基因種子的轉基因植物，所述轉基因種子與從非轉基因的植物獲得的轉基因種子相比具有改變的油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量。
10.產(chǎn)生轉基因種子的方法，所述方法包括: (a)用重組DNA構建體轉化植物細胞，所述重組DNA構建體包含:(i)如SEQ ID NO:35、37、39、41、43、45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67 或84 所示的核苷酸序列的全部或部分；或 (ii)(i)的全長互補序列； 其中(i)或(ii)具有足以抑制內源性PAE或PAE樣蛋白質活性 在轉基因植物中的表達的長度； (b)由(a)的轉化的植物細胞再生轉基因植物；以及 (c)選擇產(chǎn)生轉基因種子的轉基因植物，所述轉基因種子與從非轉基因的植物獲得的轉基因種子相比，基于干重計具有至少4%的油含量的提高。
11.根據(jù)權利要求1、2、3、4或5中任一項所述的轉基因種子，其中所述轉基因種子從單子葉植物或雙子葉植物獲得。
12.根據(jù)權利要求1、2、3、4或5中任一項所述的轉基因種子，其中所述轉基因種子從玉米植物或大豆植物獲得。
13.根據(jù)權利要求1、2、3、4或5中任一項所述的轉基因種子，其中所述至少一種調控元件是種子特異性或種子優(yōu)選的啟動子。
14.根據(jù)權利要求1、2、3、4或5中任一項所述的轉基因種子，其中所述至少一種調控元件是胚乳或胚特異性啟動子。
15.根據(jù)權利要求6、7、8、9或10中任一項所述的方法，其中所述轉基因種子從轉基因雙子葉植物獲得，所述轉基因雙子葉植物在其基因組中包含所述重組構建體。
16.根據(jù)權利要求6、7、8、9或10中任一項所述的方法，其中所述雙子葉植物是大豆。
17.通過權利要求6、7、8、9或10中任一項所述的方法獲得的轉基因種子。
18.從權利要求6、7、8、9或10中任一項所述的轉基因種子獲得的產(chǎn)物和/或副產(chǎn)物。
19.通過權利要求6、7、8、9、10或11中任一項所述的方法獲得的轉基因種子，其中所述轉基因種子從單子葉植物或雙子葉植物獲得。
20.來自權利要求2所 述的轉基因種子的產(chǎn)物和/或副產(chǎn)物，其中所述植物是玉米或大豆。
21.來自權利要求3所述的轉基因種子的產(chǎn)物和/或副產(chǎn)物，其中所述植物是玉米或大豆。
22.來自權利要求4所述的轉基因種子的產(chǎn)物和/或副產(chǎn)物，其中所述植物是玉米或大豆。
23.來自權利要求5所述的轉基因種子的產(chǎn)物和/或副產(chǎn)物，其中所述植物是玉米或大豆。
24.分離的多核苷酸，包括: (a)編碼在植物中改變，即提高或降低油、蛋白質、淀粉和/或可溶性碳水化合物含量所必需的多肽的核苷酸序列，其中基于Clustal V比對方法，使用逐對比對默認參數(shù)KTUPLE=1、GAPPENALTY=3、WINDOW=5 和 DIAGONALS SAVED=5，，在與 SEQ ID NO: 36 或 48 進行比較時，所述多肽具有至少95%序列同一性的氨基酸序列；或 (b)(a)的核苷酸序列的全長互補序列。
25.根據(jù)權利要求24所述的多核苷酸，其中所述多肽的氨基酸序列包含SEQID NO: 36或48。
26.根據(jù)權利要求24所述的多核苷酸，其中所述核苷酸序列包含SEQID NO: 35或47。
27.包含重組DNA構建體的植物或種子，其中所述重組DNA構建體包含可操作地連接到至少一種調控序列的權利要求24至26中任一項所述的多核苷酸。
全文摘要
本發(fā)明涉及植物分子生物學領域。更具體地，本發(fā)明涉及在植物和種子中編碼PAE或PAE樣蛋白質的分離的核酸片段以及此類片段用于調節(jié)編碼PAE或PAE樣蛋白質活性的基因在轉化的宿主細胞中的表達的用途。
文檔編號C12N15/55GK103080320SQ201180042448
公開日2013年5月1日 申請日期2011年6月29日 優(yōu)先權日2010年7月1日
發(fā)明者K·邁爾, B·麥戈尼格爾, K·L·斯特卡 申請人:納幕爾杜邦公司