專利名稱：脂肽類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新化合物，具體地說，是關(guān)于兩種新型脂肽類化合物及其制備方法和應用
背景技術(shù)：
隨著致病菌耐藥性問題的日益嚴峻，臨床上對新抗生素的需求也顯得更為迫切。為了應對這一局面，人們一方面對已有抗生素進行改造，另一方面也加快了新型抗生素篩選的步伐。Alexandra H0ltzel等在2002年從Streptomyces sp.TU6075分離得到了兩組脂月太類化合物 arylomycins,包括 arylomycins A^Parylomycins B (Schimana, Gebhardt etal.2002)。它們都屬于六肽化合物，含有相同肽鏈(D-Me-Ser-D-Ala-Gly-L-Me-Hpg-L-Ala-L-Tyr),不同的是，arylomycins B中的Tyr含有-NO2取代基。2004 年，Mark Paetzel 等獲得了 arylomycin A2 與 Escherichia coli I 型信號肽酶結(jié)合復合物2.5-A分辨率的晶體結(jié)構(gòu)，研究發(fā)現(xiàn)arylomycin A2的C端可與信號肽酶催化活性中心的Ser和Lys殘基側(cè)鏈形成氫鍵，同時arylomycin A2形成β -折疊結(jié)構(gòu)模擬信號肽酶底物的結(jié)合(Paetzel，Goodall et al.2004)。I型信號肽酶(SPase I, EC3.4.21.89)是一種 廣泛存在于真細菌細胞膜中的絲氨酸蛋白酶，負責將前蛋白N-端的信號肽切除，對細菌的生存和生長至關(guān)重要。SPase I被抑制后，會造成分泌蛋白在細胞膜上的大量積累并最終導致細菌死亡(Dalbey and Wicknerl985)。一直以來，病原菌蛋白酶抑制劑被認為藥物發(fā)展的一個方向，但是對人體的毒害性降低了這些抑制劑最終成藥的可能性。區(qū)別于經(jīng)典的Ser/His/Asp催化機制,SPase I利用獨特的Ser/Lys催化二元體機制，這就意味著SPase I抑制劑有著更高的特異性，對真核細胞有著更低的毒性。同時，由于催化活性中心位于細胞膜外側(cè)，I型信號肽酶被認為是一種很有潛力的抗生素篩選靶標。雖然已經(jīng)得到了 arylomycin A2與Escherichia coli SPase I結(jié)合復合物的晶體結(jié)構(gòu)，但在最初生物活性研究中，arylomycins 只對 Streptococcus pneumonia、Staphylococcusepidermidis及土壤微生物 Rhodococcus opacus>BrevibaciIIus brevis有抗菌活性，而對大多的病原菌如 Staphylococcus aureus>Escherichia coli 和 Pseudomonas aeruginosa沒有活性，這大大限制了其成為藥物的可能性。但2010年有研究發(fā)現(xiàn)，Staphylococcusaureus、Escherichia coli 和 Pseudomonas aeruginosa 之所以對 arylomycins 表現(xiàn)出耐藥性,是由于這些病原菌的SPase I催化活性中心的Ser突變?yōu)镻ro從而導致兩者的親和力降低。通過對自然界中厚壁菌門、放線菌們、變形菌門、擬桿菌門及疣微菌門衣原體屬中SPase I相應位置Pro突變的分布研究表明，很多自然界中的細菌不存在Pro突變而對arylomycins表現(xiàn)為敏感，如革蘭氏陽性邊病原菌Streptococcus pneumoniae、Streptococcus pyogenes、S.haemolyticus 及革蘭氏陰性病原菌 Chlamydia trachomatis等(Smith, Roberts et al.2010)。因此arylomycins作為廣譜性抗生素有著廣闊的應用前景。除了加工與生存及生長相關(guān)蛋白，I型信號肽酶與其它生命活動如細菌耐藥性、細菌毒素的分泌等，也有著密切關(guān)系。例如，一些病原菌由于能分泌β-內(nèi)酰胺酶而對β-內(nèi)酰胺類抗生素產(chǎn)生耐藥性，而研究表明arylomycins類似物Iipoglycopeptides能抑制
S.aureus β-內(nèi)酸胺酶的分泌(Kulanthaivel, Kreuzman et al.2004)。因此除了直接作為抗生素使用，arylomycins還能夠調(diào)節(jié)細菌毒性或者使得病原菌變得對其它抗生素敏感，這將大大擴大 arylomycins 應用范圍(Roberts, Smith et al.2007)。本發(fā)明的申請人從小鏈霉菌(Streptomyces parvus)CGMCC N0.4027的發(fā)酵液中分離到了 arylomycin A2和arylomycin A4,結(jié)構(gòu)如

圖1所示,并獲得了其生物合成基因簇。arylomycins的一個顯著特點是肽鏈中第四位的甲基HPG和第六位的Tyr通過聯(lián)芳鍵連接形成一個三肽的環(huán)形結(jié)構(gòu)。在糖肽類抗生素中，如萬古霉素和balhimycin的七肽中，第五位的HPG和第七位的Dpg之間也通過聯(lián)苯鍵連接，并且證明其由oxyC基因編碼P450酶的催化形成(Bischoff, Pelzer et al.2001)。在arylomycins的基因族中aryC基因編碼P450酶，推測其負責甲基HPG與Tyr之間聯(lián)苯鍵的形成。通過對aryC基因的敲除一方面證明aryC的基因功能，另一方面探索通過對后修飾基因敲除以獲得新的脂肽類化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的申請人在對小鏈霉菌(Streptomyces parvus) CGMCC N0.4027的aryC基因缺失突變株的代謝產(chǎn)物的研究過程 中，分離得到了兩種化合物，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定為兩種新的脂肽類化合物。因此，本發(fā)明的首要目的是提供兩種新的脂肽化合物。本發(fā)明的第二個目的是提供所述脂肽化合物的制備方法。本發(fā)明的第三個目的是提供所述脂肽化合物的應用。本發(fā)明的脂肽化合物的結(jié)構(gòu)式為:
權(quán)利要求
1.脂肽化合物，其特征在于，所述脂肽化合物的結(jié)構(gòu)式為:
2.如權(quán)利要求1所述的脂肽化合物的制備方法，其特征在于，所述脂肽化合物是由小鏈霉菌CGMCC N0.4027的aryC基因缺失突變株發(fā)酵制得。
3.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述發(fā)酵的發(fā)酵培養(yǎng)條件為: 發(fā)酵溫度28 30°C，發(fā)酵時間4 6天； 種子培養(yǎng)基:葡萄糖2 %，可溶性淀粉8 %，黃豆餅粉5 %，磷酸氫二鉀0.02%, pH7.0 7.5 ; 搖瓶用發(fā)酵培養(yǎng)基:黃豆餅粉2.4%，糊精3.2%，葡萄糖0.6%，磷酸氫二鉀0.02 %，氯化鈉 0.15%, pH7.0 7.5 ; 發(fā)酵罐用發(fā)酵培養(yǎng)基 :糊精6 %，黃豆餅粉2 %，磷酸氫二鉀0.02%，氯化鈉0.15 %，pH7.0 7.5。
4.如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括將發(fā)酵液經(jīng)大孔樹脂吸附和制備型HPLC分離的步驟。
5.如權(quán)利要求1所述的脂肽化合物的應用，其特征在于，用于制備抑制革蘭氏陽性菌的藥物。
6.如權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于，所述革蘭氏陽性菌為革蘭氏陽性球菌。
7.如權(quán)利要求6所述的應用，其特征在于，所述革蘭氏陽性球菌為藤黃八疊球菌與金黃色葡萄球菌。
全文摘要
本發(fā)明提供了兩種新型的脂肽化合物，其結(jié)構(gòu)式為其中，R為iso-C12或anteiso-C13。所述脂肽化合物是在小鏈霉菌(Streptomyces parvus)CGMCC No.4027的aryC基因缺失突變株中發(fā)現(xiàn)，可用于制備抑制革蘭氏陽性菌的藥物。
文檔編號C12R1/465GK103159830SQ20111042222
公開日2013年6月19日 申請日期2011年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月15日
發(fā)明者饒敏, 靳旭, 戈梅, 夏興, 阮麗軍, 張蕓, 羅敏玉, 朱麗 申請人:上海來益生物藥物研究開發(fā)中心有限責任公司, 浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠