專利名稱：角鯊烯合成酶抑制劑cj-13982的制備方法
角鯊烯合成酶抑制劑CJ-13982的制備方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及利用植物內(nèi)生真菌稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8發(fā)酵制備具有抑制角鯊烯合成酶作用的化合物CJ-13982的方法。
背景技術(shù)：
隨著我國人口的老齡化，心血管病發(fā)病率和病死率逐年上升，冠心病是其中的主要?dú)⑹?。我們常說的冠心病多由動(dòng)脈器質(zhì)性狹窄或阻塞引起，又稱冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，其冠狀動(dòng)脈狹窄多系脂肪物質(zhì)沿血管內(nèi)壁堆積所致，這一過程稱之為動(dòng)脈硬化。動(dòng)脈硬化發(fā)展到一定程度，冠狀動(dòng)脈狹窄逐漸加重，限制流入心肌的血流。心臟得不到足夠的氧氣供給，就會(huì)發(fā)生胸部不適，即心絞痛。冠心病是指冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致心肌缺血、缺氧而引發(fā)的心臟病，常伴發(fā)心絞痛。目前該病嚴(yán)重威脅中老年人的健康，是造成中老年人死亡的主要原因，如何降低其發(fā)病率及減少死亡率已成為世界各國關(guān)注的研究課題。
引起動(dòng)脈硬化的脂肪物質(zhì)的主要成分是膽固醇，許多研究表明，膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的水平與冠心病的發(fā)病率密切相關(guān)。由于人體內(nèi)大約有70%膽固醇源于體內(nèi)合成，所以抑制其體內(nèi)合成是一種有效降低膽固醇的方法。羥甲基戊二酰輔酶 A(HMG-CoA)還原酶抑制劑(如洛伐他汀)是目前最有效的降膽固醇藥。據(jù)報(bào)道，冠心病病人使用HMG-CoA還原酶抑制劑降低血漿高膽固醇后，死亡率可降低約1/3。但是，當(dāng)體內(nèi)甲羥戊酸合成途徑中的關(guān)鍵酶一一HMG-CoA還原酶被抑制后，不僅膽固醇的合成減少，由甲羥戊酸進(jìn)一步合成的非留醇類異戊二烯(如多萜醇)等物質(zhì)也相應(yīng)減少，而這些物質(zhì)是細(xì)胞正常生長、分化和發(fā)育所需要的。因此HMG-CoA還原酶抑制劑會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長、增殖和分化產(chǎn)生影響，并由此引起多種不良反應(yīng)。另外，有證據(jù)表明血中甘油三酯過多是引起冠狀動(dòng)脈心臟病的又一原因，而HMG-CoA還原酶抑制劑幾乎沒有降低血漿甘油三酯的作用。所以， 需要有比HMG-CoA還原酶抑制劑更安全有效的降血脂藥。
角鯊烯合成酶(squalene synthase, SQS)是體內(nèi)膽固醇合成、代謝途徑中的一種重要酶，它能催化兩分子法呢基二磷酸(FPP)經(jīng)還原性二聚作用，產(chǎn)生中間體前角鯊烯二磷酸，在NADPH的還原作用下，前角鯊烯二磷酸生成角鯊烯，后者再經(jīng)進(jìn)一步合成生成膽固醇。抑制SQS的活性，就能減少角鯊烯的生成量，從而降低膽固醇的水平，而且因?yàn)镾QS的催化反應(yīng)在合成類異戊二烯的分支途徑之后，所以SQS抑制劑對(duì)類異戊二烯的合成沒有影響。而且，還有報(bào)道指出，SQS抑制劑不僅能降低血漿膽固醇水平，還降低血漿甘油三酯水平。所以，SQS成為了治療高脂血癥和冠狀動(dòng)脈心臟病的極具吸引力的作用靶點(diǎn)，其抑制劑的研究也已成為降血脂藥物研制的一個(gè)重要方向。
在文獻(xiàn)“CJ-13981 and CJ-13982, new squalene synthase inhibitors, J. Antibiot.，2001，54(12)，1025-1030”中，作者從一株未鑒定的真菌CL15036中分離得到了本發(fā)明專利中的活性化合物CJ-13982及一個(gè)結(jié)構(gòu)類似物CJ-13981，通過質(zhì)譜和核磁共振技術(shù)鑒定了其平面結(jié)構(gòu)，并測(cè)試了兩個(gè)化合物對(duì)大鼠和人體肝臟微粒體中SQS的抑制活性，結(jié)果表明，CJ-13982對(duì)大鼠和人體肝臟微粒體中SQS的IC50分別為2. 2和1. 1 μ Μ。3在文獻(xiàn)"Total synthesis and determination of the absolute stereochemistry of the squalene synthase inhibitors CJ-13981and CJ-13982, Tetrahedron Lett.， 2009，50( ) ,3388-3390”中，作者通過全合成的方法確定了本發(fā)明專利中的活性化合物 CJ-13982及其結(jié)構(gòu)類似物CJ-13981的絕對(duì)構(gòu)型。
化合物CJ-13982的結(jié)構(gòu)如式(I)所示
權(quán)利要求
1.一種化合物CJ-13982的制備方法，其特征在于，所述的CJ-13982是從稻黑孢 (Nigrospora oryzae)A8的發(fā)酵培養(yǎng)物中分離制備得到的，所述的稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8，其保藏編號(hào)為 CCTCC NO :M 2011412。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物CJ-13982的制備方法，其特征在于，具體步驟如下(a)制備稻黑孢(Nigrosporaoryzae)A8的固體發(fā)酵培養(yǎng)物；(b)將固體發(fā)酵培養(yǎng)物用乙酸乙酯冷浸提取，濃縮乙酸乙酯提取液，得到總浸膏，將總浸膏用甲醇溶解懸浮，懸浮液用環(huán)己烷萃取，萃取后的甲醇溶液經(jīng)濃縮得到甲醇相浸膏；(c)甲醇相浸膏經(jīng)硅膠柱層析，以氯仿-甲醇作為洗脫劑，從體積比100 O O 100 梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為10 1 5 1梯度下洗脫下來的餾分，將該餾分用凝膠柱層析，以體積比為1 1的氯仿-甲醇作為洗脫劑洗脫，收集在TLC上能用體積比為 5 1的氯仿-甲醇作為展開劑展開，且用碘顯色成黃色長條的餾分，將該餾分用反相硅膠柱層析，先以體積比為4 1的甲醇-水作為洗脫劑洗脫至柱子上黃色部分洗出以后，再換純甲醇洗脫，收集該餾分，濃縮得到白色固體，即為目標(biāo)化合物CJ-13982。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物CJ-13982的制備方法，其特征在于，所述的制備稻黑孢(Nigrospora oryzae) A8的固體發(fā)酵培養(yǎng)物是通過以下方法制備的將稻黑孢 (Nigrospora oryzae) A8接種到CPDA培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)3天，獲得種子平板，然后將種子平板培養(yǎng)物切成20X20mm的小塊，接種于固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30天，獲得稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8的固體發(fā)酵培養(yǎng)物；所述的固體發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為每升含有:1000g大米，6g蛋白胨，IOOOmL水。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種角鯊烯合成酶抑制劑CJ-13982的制備方法?；衔顲J-13982是從稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8的發(fā)酵培養(yǎng)物中分離制備得到的，所述的稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8，其保藏編號(hào)為CCTCC NOM 2011412。本發(fā)明提供的從植物內(nèi)生真菌稻黑孢(Nigrospora oryzae)A8的發(fā)酵培養(yǎng)物中制備得到具有抑制角鯊烯合成酶作用的化合物CJ-13982的方法，該方法具有培養(yǎng)條件溫和、培養(yǎng)基配制簡(jiǎn)單易行、分離純化步驟簡(jiǎn)單、產(chǎn)量大、可以在人工控制條件下實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，能夠比較方便解決研究或應(yīng)用化合物CJ-13982所需的原料問題，為制備化合物CJ-13982提供了一條新的途徑。
文檔編號(hào)C12R1/645GK102517350SQ20111040692
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月8日
發(fā)明者李冬利, 王磊, 章衛(wèi)民 申請(qǐng)人:廣東省微生物研究所