專利名稱：：臭氧與羅倫隱球酵母結(jié)合處理對(duì)草莓采后病害防治的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種臭氧處理與羅倫隱球酵母處理結(jié)合對(duì)草莓采后病害防治的方法，屬于水果采后生物防治領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：水果在采摘、運(yùn)銷、儲(chǔ)藏過(guò)程中因腐爛造成的損失是巨大的，也是全球關(guān)注的問(wèn)題。據(jù)報(bào)道，在發(fā)達(dá)國(guó)家有10%-30%的新鮮產(chǎn)品由于采后病害導(dǎo)致腐爛，而在缺乏貯運(yùn)冷藏設(shè)備的發(fā)展中國(guó)家，果實(shí)采后腐爛率則高達(dá)40%—50%。國(guó)外水果貯藏保鮮量占水果總產(chǎn)量60%以上，目前我國(guó)果品貯藏量800多萬(wàn)噸，不到總量的15%，其中冷藏庫(kù)和氣調(diào)庫(kù)的貯藏量為70萬(wàn)噸，僅占總產(chǎn)量的7%。我國(guó)水果采后損失一般在20%-30%，高者甚至達(dá)到50%。2007年3月國(guó)家統(tǒng)計(jì)局發(fā)布的《中華人民共和國(guó)2006年國(guó)民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展統(tǒng)計(jì)公報(bào)》顯示，2006年我國(guó)水果總產(chǎn)量達(dá)17050萬(wàn)噸。據(jù)此估算，我國(guó)水果采后的損失每年將達(dá)到數(shù)百億元人民幣的水平。水果腐爛的主要原因在于病原微生物的致病作用，這些病原微生物主要有灰葡11iBotrytiscinerea)>^1{Rhizopusstoloniger)>iPenicilliumspp.)、毛霉iMucorspp.)、鏈格孢(Alternariaspp.)、曲霉(Aspergillusspp.)和軟腐細(xì)菌(.Erwinia)等。病原微生物對(duì)采后水果的危害不僅在于其導(dǎo)致水果在數(shù)量上造成的嚴(yán)重?fù)p失，而且由于許多病原真菌能分泌產(chǎn)生許多次生代謝產(chǎn)物從而引起嚴(yán)重的食品安全問(wèn)題，如擴(kuò)展青霉0°.權(quán)/？浙仰)產(chǎn)生的棒曲霉素(patulin)、灰葡萄孢儀ci/^rea)產(chǎn)生的葡雙醛霉素(botrydial)等。目前最常用的控制水果采后腐爛的方法是低溫貯藏和化學(xué)殺菌劑處理。近年來(lái)低溫貯藏技術(shù)在我國(guó)得到了廣泛的發(fā)展和應(yīng)用，但已有的冷藏設(shè)備往往不能滿足大多數(shù)水果的需要。同時(shí)，在低溫條件下仍有相當(dāng)數(shù)量的致病菌能夠在水果上生長(zhǎng)，并造成水果腐爛。例如，能引起多種水果灰霉病的灰葡萄孢、BotiyriScinerea)，也稱灰霉菌，在_0.5°C時(shí)也能生長(zhǎng)繁殖，引起許多水果腐爛變質(zhì)，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。而那些對(duì)低溫敏感的水果，因只能在不低于使產(chǎn)品受冷害的溫度下貯藏，病原物的生長(zhǎng)、繁殖更不能得到有效地抑制，腐爛相當(dāng)嚴(yán)重。長(zhǎng)期以來(lái)，控制水果采后病害的主要措施是使用殺菌劑。化學(xué)殺菌劑對(duì)防治病害可以起到立竿見(jiàn)影的效果，但是，化學(xué)殺菌劑長(zhǎng)期和大量的使用，不僅導(dǎo)致病原微生物產(chǎn)生抗藥性，同時(shí)嚴(yán)重污染環(huán)境，有損于人類健康。美國(guó)國(guó)家科學(xué)院(NationalAcademyofScinces)的一份報(bào)告顯示，在用于處理食品的全部農(nóng)藥中，殺菌劑構(gòu)成60%的致癌危險(xiǎn)。隨著國(guó)家經(jīng)濟(jì)發(fā)展和消費(fèi)水平的提高，人們對(duì)食品安全和環(huán)境保護(hù)意識(shí)的日益增強(qiáng)，目前多種化學(xué)殺菌劑(如CaptaruBenomyl等)已被明令禁止使用或者在部分水果產(chǎn)品上限制使用，其直接的后果是目前許多水果采后病害已經(jīng)沒(méi)有殺菌劑能予以控制。因此，各國(guó)科學(xué)家都在積極地探索能代替化學(xué)殺菌劑的安全、高效的新型水果采后病害防治方法。當(dāng)前國(guó)際上對(duì)用拮抗微生物進(jìn)行水果采后病害的生物防治的研究已經(jīng)取得了階段性的成果，并認(rèn)為這是最有希望取代化學(xué)殺菌劑的方法之一。隨著酵母分類、生態(tài)、生理、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的研究取得進(jìn)展，人們對(duì)果蔬貯藏中利用酵母的興趣日益提高。國(guó)內(nèi)外的研究表明，許多酵母菌應(yīng)用于水果表面，可以防治水果由致病霉菌引起的病害，這些酵母被稱為拮抗酵母。酵母菌遺傳穩(wěn)定，抑菌譜廣、效價(jià)高，一般不產(chǎn)生對(duì)人和寄主植物有害的代謝產(chǎn)物，安全性高，且對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求低，生長(zhǎng)快，并對(duì)多種脅迫、逆境具有較強(qiáng)的耐受力，對(duì)大多數(shù)殺菌劑不敏感，對(duì)其它化學(xué)和物理處理能夠相容。因此近年來(lái)拮抗酵母作為水果采后病害生防菌，受到國(guó)際上的廣泛關(guān)注。國(guó)外方面，Sansone等從蘋果表面分離得到的粘紅酵母對(duì)由召OiiTiisCinerea引起的灰霉病有顯著的防治效果，在實(shí)驗(yàn)室條件下，其腐爛率與對(duì)照相比降低了M%。Calvente等的研究也發(fā)現(xiàn)粘紅酵母對(duì)水果采后青霉病害有顯著的抑制效果。我國(guó)水果采后病害生物防治研究起步較晚，鄭曉冬等在體外和體內(nèi)抑菌試驗(yàn)中研究了粘紅酵母對(duì)由指狀青霉引起的柑桔青霉腐爛的抑制效果，發(fā)現(xiàn)粘紅酵母在控制由指狀青霉引起的柑桔腐爛中顯示出了很高的抑菌活性，在25°C條件下，對(duì)照的發(fā)病率為10096，而使用IXIO8個(gè)/ml的菌懸液的發(fā)病率僅為4596，而且隨著酵母濃度的提高，發(fā)病率也有逐漸下降的趨勢(shì)。張紅印等研究了粘紅酵母對(duì)草莓采后灰霉病的抑制效果，對(duì)草莓進(jìn)行了前期的預(yù)處理后，接種IXIO9個(gè)/ml的菌懸液和IXlO5個(gè)/ml的病原菌孢子菌懸液分別在4°C下貯藏7天和20°C下貯藏2天后，發(fā)現(xiàn)接種粘紅酵母的草莓，其腐爛率與對(duì)照相比分別降低了95%和94.7%。范青O001)等對(duì)果實(shí)病害生物防治拮抗菌進(jìn)行了篩選和分離，結(jié)果表明季也蒙假絲酵母(Pandidaguiliermondii),檸檬形克勒克酵母iKloGckerei、漢遜德巴利酵母iPebaryomyceshansenii)對(duì)甜櫻桃褐腐病都表現(xiàn)出顯著的抑制效果，季也蒙假絲酵母和檸檬形克勒克酵母能有效地防治核果類果實(shí)軟腐?。籘ian(2004)等研究，在甜櫻桃采前噴灑1X108CFU/mL的絲孢酵母{Trichosporon//"^肅)，羅倫隱球酵母{Cryptococcuslaurentii)和紅酵母(Mhodotorulaglutinis)，分別在25°C,0°C以及氣調(diào)貯藏下，絲孢酵母在果實(shí)上繁殖數(shù)量最高，抑菌效果最好；張紅印等000研究了不同溫度下，羅倫隱球酵母對(duì)灰霉病的防治效果，結(jié)果表明，25°C下，梨灰霉病的發(fā)病率為16.7%，結(jié)合CaCl2使用效果更顯著。從國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中可知當(dāng)前以有效微生物取代化學(xué)殺菌劑用于采后水果病害的防治已顯示出巨大的應(yīng)用前景，水果采后病害的生物防治成為一個(gè)新的研究熱點(diǎn)。但到目前為止，已實(shí)際應(yīng)用于生產(chǎn)的拮抗菌種類不多，只有Biosave和Aspire等少數(shù)幾種產(chǎn)品上市，而我國(guó)目前尚沒(méi)有拮抗菌應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。主要原因在于商業(yè)生產(chǎn)條件下，目前已報(bào)道的拮抗微生物的防治效果往往不如化學(xué)殺菌劑的效果，從而達(dá)不到保鮮要求。這些因素影響了拮抗菌作為果蔬保鮮劑在生產(chǎn)中的使用。為了盡快地將拮抗微生物應(yīng)用于水果貯藏保鮮實(shí)際生產(chǎn)上，還需進(jìn)一步篩選拮抗效果好、抗病譜廣的微生物，并進(jìn)一步提高拮抗酵母的拮抗效力，從而將其應(yīng)用于水果貯藏保鮮。臭氧被廣泛地應(yīng)用于食品保鮮與加工領(lǐng)域。1997年，臭氧直接應(yīng)用于食品領(lǐng)域獲準(zhǔn)了FDA的認(rèn)可。2001年美國(guó)FDA又將抽樣列入可以直接和食品接觸的添加劑范圍。據(jù)報(bào)道，臭氧可明顯抑制灰葡萄孢霉(Botiytisci/^rea)、指狀青霉iPenicilliimdigitatum)、竟、大私請(qǐng)毒、PeniciIliumiia/ic腫)、甸枝*艮霄{Rhizopusstolonifer)等致病菌孢子萌發(fā)。臭氧處理能明顯減少葡萄草莓等果實(shí)的采后病害，品質(zhì)指標(biāo)沒(méi)有不利影響個(gè)別指標(biāo)反而有所增加。4本發(fā)明利用臭氧處理提高羅倫隱球酵母(frj^iococcmIaurentiη對(duì)草莓采后病害的生物防治效力，從而降低水果的腐爛率，進(jìn)而達(dá)到水果貯藏保鮮的目的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明利用臭氧和羅倫隱球酵母結(jié)合使用來(lái)提高其對(duì)水果采后病害生物防治的效力。經(jīng)臭氧處理和羅倫隱球酵母結(jié)合使用，可以明顯地抑制水果病原菌，防治水果采后腐爛。本發(fā)明具有安全、高效、成本低等優(yōu)點(diǎn)，可以廣泛地用于水果采后病害的生物防治過(guò)程中，減少水果采后病害造成的損失。本發(fā)明同時(shí)提供了臭氧與羅倫隱球酵母結(jié)合處理對(duì)草莓采后病害防治的方法，按照下述步驟進(jìn)行將羅倫隱球酵母(frj^iococcmIaurentiO活化，用NYDB培養(yǎng)基培養(yǎng)羅倫隱球酵母(frj^tococcmlmrentii\離心得到菌體；將菌體用無(wú)菌水稀釋制備成IXlO8個(gè)/ml的菌懸液；將草莓放入塑料筐子中置于自制的塑料帳中，打開(kāi)臭氧發(fā)生器通氣30s；此時(shí)臭氧濃度為0.57%ig/ml，維持10min,臭氧處理后的草莓用1XIO8個(gè)/ml的羅倫隱球酵母菌懸液浸泡30s，自然風(fēng)干；放在塑料筐中，用保鮮膜密封后，放在室溫條件下存放。其中所述的NYDB培養(yǎng)基為酵母膏5g，牛肉浸膏8g，葡萄糖10g，純化水1000ml,PH自然。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明所使用的羅倫隱球酵母(JJryptococcus皿iii)，其拮抗效力強(qiáng)，對(duì)人體無(wú)害。(2)本發(fā)明使用臭氧處理和羅倫隱球酵母結(jié)合使用，與單獨(dú)使用臭氧處理或羅倫隱球酵母處理相比，可以顯著提高羅倫隱球酵母(frj^iococcmIaurentiO的拮抗活性，從而降低水果的腐爛率，進(jìn)而達(dá)到水果貯藏保鮮的目的。(3)本發(fā)明使用臭氧處理和羅倫隱球酵母結(jié)合使用可以代替化學(xué)殺菌劑防治水果采后病害，避免使用化學(xué)殺菌劑對(duì)人的危害，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。其中圖1為臭氧與羅倫隱球酵母結(jié)合使用對(duì)草莓灰霉病的控制作用；注CK對(duì)照；臭氧臭氧通氣30s維持10min；羅倫加入羅倫隱球酵母菌懸液；羅倫+臭氧臭氧通氣30s維持10min，處理后通風(fēng)加入羅倫隱球酵母菌懸液。發(fā)病率是20°C放置2d后測(cè)定的結(jié)果。不同字母代表差異顯著性(P=0.05)。圖2為臭氧與羅倫隱球酵母結(jié)合使用對(duì)草莓自然腐爛率的影響；注CK對(duì)照；臭氧臭氧通氣30s維持10min；羅倫加入羅倫隱球酵母菌懸液；羅倫+臭氧臭氧通氣30s維持10min，處理后通風(fēng)加入羅倫隱球酵母菌懸液。不同字母代表差異顯著性(p=0.05)。具體實(shí)施例方式通過(guò)借助以下實(shí)施實(shí)例將更加詳細(xì)的說(shuō)明本發(fā)明。以下實(shí)施例僅是說(shuō)明性的，本發(fā)明并不受這些實(shí)施實(shí)例的限制。羅倫隱球酵母(frj^tococcmIaurentiO系購(gòu)買于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)，于NYDA(NYDB培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加H的瓊脂(質(zhì)量計(jì)))培養(yǎng)基4°C低溫保存。培養(yǎng)程序?yàn)?1)固體活化將羅倫隱球酵母接種于NYDA培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)48h；(2)液體培養(yǎng)在250ml的三角瓶中裝入50ml的NYDB種子培養(yǎng)基，用接種環(huán)接入一環(huán)活化好的羅倫隱球酵母，在200rpm(轉(zhuǎn)/分鐘)條件下培養(yǎng)Mh；(3)離心分離再懸浮將酵母培養(yǎng)混合物在7000Xg條件下，離心10-15min，并用無(wú)菌蒸餾水洗滌2次，以去除培養(yǎng)介質(zhì)，用無(wú)菌蒸餾水重新再懸浮，并用血球計(jì)數(shù)板調(diào)節(jié)酵母細(xì)胞濃度為1XIO9個(gè)/ml，再用滅過(guò)菌的生理鹽水稀釋到所需濃度。實(shí)施例1臭氧與羅倫酵母結(jié)合使用對(duì)草莓果實(shí)灰霉病的控制作用一、試驗(yàn)方案供試的果實(shí)經(jīng)過(guò)精細(xì)挑選，盡量選擇果實(shí)均勻一致，表面無(wú)擦傷、機(jī)械傷和病蟲傷害。將水果用無(wú)菌打孔器打孔(3X3mm)后接入5X104個(gè)/ml灰霉孢子，池后，進(jìn)行以下處理(1)將草莓放入塑料筐子中置于自制的塑料帳中，打開(kāi)臭氧發(fā)生器通氣30s(此時(shí)臭氧濃度為0.574mg/ml)，維持10min,臭氧處理后的草莓用1XIO8個(gè)/ml的羅倫隱球酵母菌懸液浸泡30s，自然風(fēng)干；(2)加入30ul羅倫酵母懸液(濃度為IXlO8個(gè)/ml)；(3)臭氧通氣30s維持10min同時(shí)測(cè)定塑料帳中臭氧濃度；(4)不經(jīng)任何處理。將處理好的果實(shí)放入塑料筐用保鮮膜密封，在20°C(RH95%)的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每處理重復(fù)3次，每次重復(fù)10個(gè)果實(shí)。整個(gè)試驗(yàn)重復(fù)2次。經(jīng)過(guò)若干天的培養(yǎng)，記錄果實(shí)發(fā)病率，以此評(píng)價(jià)羅倫隱球酵母(frj^tococcm的抑菌效果。發(fā)病率的計(jì)算公式如下發(fā)病率(%)=發(fā)病的果實(shí)/接種病原菌的果實(shí)總數(shù)X100%二、試驗(yàn)結(jié)果按照上述步驟試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)水果的腐爛率結(jié)果如下從圖1可以看出，臭氧和羅倫隱球酵母單獨(dú)處理以及臭氧與羅倫隱球酵母結(jié)合處理對(duì)草莓果實(shí)灰霉病的抑制作用都顯著好于對(duì)照處理。其中結(jié)合處理的效果是最好的，腐爛率最低為29.63%，顯著低于對(duì)照處理的70.37%。臭氧和羅倫隱球酵母單獨(dú)處理經(jīng)過(guò)3天的培養(yǎng)，其腐爛率分別為48.15%和44.44%，均顯著低于對(duì)照處理。實(shí)施例2臭氧與羅倫酵母結(jié)合使用對(duì)草莓果實(shí)自然腐爛率的影響一、試驗(yàn)方案將水果進(jìn)行以下處理(1)將草莓放入塑料筐子中置于自制的塑料帳中，打開(kāi)臭氧發(fā)生器通氣30s(此時(shí)臭氧濃度為0.57%ig/ml)，維持10min,臭氧處理后的草莓用1XIO8個(gè)/ml的羅倫隱球酵母菌懸液浸泡30s，自然風(fēng)干；(2)用IXIO8個(gè)/ml的羅倫隱球酵母菌懸液浸泡30s；(3)臭氧通氣30s(臭氧濃度為0.57%ig/ml)，維持10min；(4)不經(jīng)任何處理。然后，將處理好的果實(shí)放入塑料筐用保鮮膜密封，在20°C(RH95%)的恒溫培養(yǎng)箱中貯藏3天和4°C冰柜中貯藏7天后轉(zhuǎn)入20°C(RH95%)的恒溫培養(yǎng)箱中貯藏1天，取出水果統(tǒng)計(jì)腐爛水果個(gè)數(shù)。每處理重復(fù)3次，整個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次。記錄果實(shí)發(fā)病率，以此評(píng)價(jià)各個(gè)處理對(duì)草莓貯藏期病害的防治效果。發(fā)病率的計(jì)算公式如下發(fā)病率(%)=發(fā)病的果實(shí)/接種病原菌的果實(shí)總數(shù)X100%二、試驗(yàn)結(jié)果按照上述步驟試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)水果的自然腐爛率結(jié)果如下從圖2可以看出經(jīng)過(guò)臭氧和羅倫隱球酵母結(jié)合處理的草莓果實(shí)，不論是在20°C、濕度為95%的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，還是在4°C7天后轉(zhuǎn)入20°C培養(yǎng)1天，草莓果實(shí)的發(fā)病率為36.67%和20%，顯著低于對(duì)照處理的66.67%和53.33%。在4°C7天后轉(zhuǎn)入20°C培養(yǎng)1天后，羅倫隱球酵母單獨(dú)處理的草莓果實(shí)自然腐爛率也顯著低于對(duì)照處理。在20°C培養(yǎng)3天后，羅倫隱球酵母單獨(dú)處理的草莓果實(shí)自然腐爛率也低于對(duì)照處理，但是差異不顯-frh-者O實(shí)施例3臭氧與羅倫隱球酵母結(jié)合使用對(duì)草莓貯藏品質(zhì)的影響一、試驗(yàn)方案將水果進(jìn)行以下處理(1)將草莓放入塑料筐子中置于自制的塑料帳中，打開(kāi)臭氧發(fā)生器通氣30s(此時(shí)臭氧濃度為0.57%ig/ml)，維持10min,臭氧處理后的草莓用1XIO8個(gè)/ml的羅倫隱球酵母菌懸液浸泡30s，自然風(fēng)干；(2)用IXIO8個(gè)/ml的羅倫隱球酵母菌懸液浸泡30s；(3)臭氧通氣30s維持10min；(4)不經(jīng)任何處理。然后，將處理好的果實(shí)放入塑料筐用保鮮膜密封，在20°C(RH95%)的恒溫培養(yǎng)箱中貯藏3天和4°C冰柜中貯藏7天后轉(zhuǎn)入20°C(RH95%)的恒溫培養(yǎng)箱中貯藏1天，取出進(jìn)行貯藏品質(zhì)分析。貯藏品質(zhì)分析方法如下(1)硬度采用ΤΑ-ΧΤ2質(zhì)構(gòu)分析儀(英國(guó)StableMicroSystems公司)測(cè)試，探頭直徑為5mm，探頭測(cè)試前、測(cè)試中、測(cè)試后的遠(yuǎn)行速度均為l.Omm/s，測(cè)試深度為10mm，探頭插入水果時(shí)所受的最大阻力(單位為牛頓)就被定義為水果的硬度。每個(gè)處理重復(fù)4個(gè)水果。(2)總可溶性固形物采用WYT(0-80%)手持糖量計(jì)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果表示為g/100g樣品。(3)可滴定酸度(％):采用滴定法，從6個(gè)水果取樣稱取10g樣品，加蒸餾水迅速研磨，定容至100ml容量瓶，過(guò)濾，取10mL濾液，用0.1mol/1NaOH進(jìn)行滴定至PH8.1，滴定后進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果以含檸檬酸的百分?jǐn)?shù)表示。(4)維生素C含量的測(cè)定采用2，6_二氯酚靛酚法法。從6個(gè)水果上取5g樣品加5mL洲草酸研磨勻漿，倒入IOOml容量瓶，用1%草酸洗滌殘?jiān)覫ml30%硫酸鋅，搖勻。再加1ml15%亞鐵氰化鉀(除色素)，用1%草酸定容，搖勻過(guò)濾。取過(guò)濾液細(xì)1，然后向各管加入2，6-二氯酚靛酚染料溶液，隨即加入二甲苯5ml，迅速搖動(dòng)約0.5min，靜置后二甲苯與水層分離，將上層二甲苯萃取液在500nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。根據(jù)測(cè)定液的光密度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出相應(yīng)的Vc含量。二、試驗(yàn)結(jié)果按照上述步驟試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)草莓貯藏品質(zhì)的結(jié)果如下表1臭氧與羅倫隱球酵母結(jié)合使用對(duì)草莓果實(shí)貯藏品質(zhì)的影響注臭氧臭氧通氣30s維持10min；羅倫加入羅倫隱球酵母菌懸液；羅倫+臭氧臭氧通氣30s維持10min，處理后通風(fēng)加入羅倫隱球酵母菌懸液。不同字母代表差異顯著性(p=0.05)。由表1可知除20°C時(shí)單獨(dú)使用羅倫隱球酵母和羅倫隱球酵母與臭氧結(jié)合使用時(shí)，可溶性固形物的含量和4°C時(shí)結(jié)合處理草莓果實(shí)的可滴定酸度明顯高于對(duì)照處理外，其它方面都與對(duì)照相比無(wú)顯著差異權(quán)利要求1.臭氧與羅倫隱球酵母結(jié)合處理對(duì)草莓采后病害防治的方法，其特征在于按照下述步驟進(jìn)行將羅倫隱球酵母(frj^iococcmhare/7iii)活化，用NYDB培養(yǎng)基培養(yǎng)羅倫隱球酵(^iyptococcushare/iii)，離心得到菌體；將菌體用無(wú)菌水稀釋制備成1XIO8個(gè)/ml的菌懸液；將草莓放入塑料筐子中置于自制的塑料帳中，打開(kāi)臭氧發(fā)生器通氣30s；此時(shí)臭氧濃度為0.57%ig/ml，維持10min,臭氧處理后的草莓用1XIO8個(gè)/ml的羅倫隱球酵母菌懸液浸泡30s，自然風(fēng)干；放在塑料筐中，用保鮮膜密封后，放在室溫條件下存放。2.臭氧與羅倫隱球酵母結(jié)合處理對(duì)草莓采后病害防治的方法，其特征在于其中所述的NYDB培養(yǎng)基為酵母膏5g，牛肉浸膏8g，葡萄糖10g，純化水1000ml，pH自然。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了臭氧與羅倫隱球酵母結(jié)合處理對(duì)草莓采后病害防治的方法，屬于水果采后生物防治領(lǐng)域。將羅倫隱球酵母(Cryptococcuslaurentii)活化，接種到NYDB培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，離心得到菌體，將菌體用無(wú)菌水稀釋制備成1×108個(gè)/ml的菌懸液；將草莓放入塑料筐子中置于自制的塑料帳中，打開(kāi)臭氧發(fā)生器通氣30s，此時(shí)臭氧濃度為0.574mg/ml，維持10min,臭氧處理后的草莓用羅倫隱球酵母菌懸液浸泡30s，自然風(fēng)干；放在塑料筐中，用保鮮膜密封后，放在室溫條件下存放。本發(fā)明利用臭氧處理提高羅倫隱球酵母對(duì)草莓采后病害生物防治的效力，使用簡(jiǎn)單，操作方便，效果好，成本低。文檔編號(hào)A23B7/152GK102388955SQ20111036076公開(kāi)日2012年3月28日申請(qǐng)日期2011年11月15日優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日發(fā)明者任曉鋒,姜松,張紅印,趙利娜,馬龍傳申請(qǐng)人:江蘇大學(xué)