專利名稱：：水楊酸結(jié)合膠紅酵母使用生物防治水果采后病害的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種利用水楊酸和將膠紅酵母(Mwdotorulamucilaginosa)結(jié)合使用對(duì)水果采后病害生物防治的方法，屬于水果采后生物防治領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：水果在采摘、運(yùn)銷、儲(chǔ)藏過程中因腐爛造成的損失是巨大的，也是全球關(guān)注的問題。據(jù)報(bào)道，在發(fā)達(dá)國(guó)家有10%-30%的新鮮產(chǎn)品由于采后病害導(dǎo)致腐爛，而在缺乏貯運(yùn)冷藏設(shè)備的發(fā)展中國(guó)家，果實(shí)采后腐爛率則高達(dá)40%—50%。國(guó)外水果貯藏保鮮量占水果總產(chǎn)量60%以上，目前我國(guó)果品貯藏量800多萬(wàn)噸，不到總量的15%，其中冷藏庫(kù)和氣調(diào)庫(kù)的貯藏量為70萬(wàn)噸，僅占總產(chǎn)量的7%。我國(guó)水果采后損失一般在20%-30%，高者甚至達(dá)到50%。2007年3月國(guó)家統(tǒng)計(jì)局發(fā)布的《中華人民共和國(guó)2006年國(guó)民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展統(tǒng)計(jì)公報(bào)》顯示，2006年我國(guó)水果總產(chǎn)量達(dá)17050萬(wàn)噸。據(jù)此估算，我國(guó)水果采后的損失每年將達(dá)到數(shù)百億元人民幣的水平。水果腐爛的主要原因在于病原微生物的致病作用，這些病原微生物主要有灰葡11iBotrytiscinerea)>^1{Rhizopusstoloniger)>iPenicilliumspp.)、毛霉iMucorspp.)、鏈格孢(Alternariaspp.)、曲霉(Aspergillusspp.)和軟腐細(xì)菌(.Erwinia)等。病原微生物對(duì)采后水果的危害不僅在于其導(dǎo)致水果在數(shù)量上造成的嚴(yán)重?fù)p失，而且由于許多病原真菌能分泌產(chǎn)生許多次生代謝產(chǎn)物從而引起嚴(yán)重的食品安全問題，如擴(kuò)展青霉0°.權(quán)/？浙仰)產(chǎn)生的棒曲霉素(patulin)、灰葡萄孢儀ci/^rea)產(chǎn)生的葡雙醛霉素(botrydial)等。目前最常用的控制水果采后腐爛的方法是低溫貯藏和化學(xué)殺菌劑處理。近年來(lái)低溫貯藏技術(shù)在我國(guó)得到了廣泛的發(fā)展和應(yīng)用，但已有的冷藏設(shè)備往往不能滿足大多數(shù)水果的需要。同時(shí)，在低溫條件下仍有相當(dāng)數(shù)量的致病菌能夠在水果上生長(zhǎng)，并造成水果腐爛。例如，能引起多種水果灰霉病的灰葡萄孢、BotiyriScinerea)，也稱灰霉菌，在_0.5°C時(shí)也能生長(zhǎng)繁殖，引起許多水果腐爛變質(zhì)，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。而那些對(duì)低溫敏感的水果，因只能在不低于使產(chǎn)品受冷害的溫度下貯藏，病原物的生長(zhǎng)、繁殖更不能得到有效地抑制，腐爛相當(dāng)嚴(yán)重。長(zhǎng)期以來(lái)，控制水果采后病害的主要措施是使用殺菌劑?；瘜W(xué)殺菌劑對(duì)防治病害可以起到立竿見影的效果，但是，化學(xué)殺菌劑長(zhǎng)期和大量的使用，不僅導(dǎo)致病原微生物產(chǎn)生抗藥性，同時(shí)嚴(yán)重污染環(huán)境，有損于人類健康。美國(guó)國(guó)家科學(xué)院(NationalAcademyofScinces)的一份報(bào)告顯示，在用于處理食品的全部農(nóng)藥中，殺菌劑構(gòu)成60%的致癌危險(xiǎn)。隨著國(guó)家經(jīng)濟(jì)發(fā)展和消費(fèi)水平的提高，人們對(duì)食品安全和環(huán)境保護(hù)意識(shí)的日益增強(qiáng)，目前多種化學(xué)殺菌劑^WCaptaruBenomyl等)已被明令禁止使用或者在部分水果產(chǎn)品上限制使用，其直接的后果是目前許多水果采后病害已經(jīng)沒有殺菌劑能予以控制。因此，各國(guó)科學(xué)家都在積極地探索能代替化學(xué)殺菌劑的安全、高效的新型水果采后病害防治方法。當(dāng)前國(guó)際上對(duì)用拮抗微生物進(jìn)行水果采后病害的生物防治的研究已經(jīng)取得了階段性的成果，并認(rèn)為這是最有希望取代化學(xué)殺菌劑的方法之一。隨著酵母分類、生態(tài)、生理、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的研究取得進(jìn)展，人們對(duì)果蔬貯藏中利用酵母的興趣日益提高。國(guó)內(nèi)外的研究表明，許多酵母菌應(yīng)用于水果表面，可以防治水果由致病霉菌引起的病害，這些酵母被稱為拮抗酵母。酵母菌遺傳穩(wěn)定，抑菌譜廣、效價(jià)高，一般不產(chǎn)生對(duì)人和寄主植物有害的代謝產(chǎn)物，安全性高，且對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求低，生長(zhǎng)快，并對(duì)多種脅迫、逆境具有較強(qiáng)的耐受力，對(duì)大多數(shù)殺菌劑不敏感，對(duì)其它化學(xué)和物理處理能夠相容。因此近年來(lái)拮抗酵母作為水果采后病害生防菌，受到國(guó)際上的廣泛關(guān)注。國(guó)外方面，Sansone等從蘋果表面分離得到的粘紅酵母對(duì)由召OiiTiisCinerea引起的灰霉病有顯著的防治效果，在實(shí)驗(yàn)室條件下，其腐爛率與對(duì)照相比降低了M%。Calvente等的研究也發(fā)現(xiàn)粘紅酵母對(duì)水果采后青霉病害有顯著的抑制效果。我國(guó)水果采后病害生物防治研究起步較晚，鄭曉冬等在體外和體內(nèi)抑菌試驗(yàn)中研究了粘紅酵母對(duì)由指狀青霉引起的柑桔青霉腐爛的抑制效果，發(fā)現(xiàn)粘紅酵母在控制由指狀青霉引起的柑桔腐爛中顯示出了很高的抑菌活性，在25°C條件下，對(duì)照的發(fā)病率為10096，而使用IXIO8個(gè)/ml的菌懸液的發(fā)病率僅為45%,而且隨著酵母濃度的提高，發(fā)病率也有逐漸下降的趨勢(shì)。張紅印等研究了粘紅酵母對(duì)草莓采后灰霉病的抑制效果，對(duì)草莓進(jìn)行了前期的預(yù)處理后，接種IXIO9個(gè)/ml的菌懸液和IXlO5個(gè)/ml的病原菌孢子菌懸液分別在4°C下貯藏7天和20°C下貯藏2天后，發(fā)現(xiàn)接種粘紅酵母的草莓，其腐爛率與對(duì)照相比分別降低了95%和94.7%。范青O001)等對(duì)果實(shí)病害生物防治拮抗菌進(jìn)行了篩選和分離，結(jié)果表明季也蒙假絲酵母(Pandidaguiliermondii),檸檬形克勒克酵母iKloGckerei、漢遜德巴利酵母iPebaryomyceshansenii)對(duì)甜櫻桃褐腐病都表現(xiàn)出顯著的抑制效果，季也蒙假絲酵母和檸檬形克勒克酵母能有效地防治核果類果實(shí)軟腐病；Tian(2004)等研究，在甜櫻桃采前噴灑1X108CFU/mL的絲孢酵母{Trichosporon//"^肅)，羅倫隱球酵母{Cryptococcuslaurentii)和紅酵母(Mhodotorulaglutinis)，分別在25°C,0°C以及氣調(diào)貯藏下，絲孢酵母在果實(shí)上繁殖數(shù)量最高，抑菌效果最好；張紅印等000研究了不同溫度下，羅倫隱球酵母對(duì)灰霉病的防治效果，結(jié)果表明，25°C下，梨灰霉病的發(fā)病率為16.7%，結(jié)合CaCl2使用效果更顯著。從國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中可知當(dāng)前以有效微生物取代化學(xué)殺菌劑用于采后水果病害的防治已顯示出巨大的應(yīng)用前景，水果采后病害的生物防治成為一個(gè)新的研究熱點(diǎn)。但到目前為止，已實(shí)際應(yīng)用于生產(chǎn)的拮抗菌種類不多，只有Biosave和Aspire等少數(shù)幾種產(chǎn)品上市，而我國(guó)目前尚沒有拮抗菌應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。主要原因在于商業(yè)生產(chǎn)條件下，目前已報(bào)道的拮抗微生物的防治效果往往不如化學(xué)殺菌劑的效果，從而達(dá)不到保鮮要求。這些因素影響了拮抗菌作為果蔬保鮮劑在生產(chǎn)中的使用。為了盡快地將拮抗微生物應(yīng)用于水果貯藏保鮮實(shí)際生產(chǎn)上，還需進(jìn)一步篩選拮抗效果好、抗病譜廣的微生物，并進(jìn)一步提高拮抗酵母的拮抗效力，從而將其應(yīng)用于水果貯藏保鮮。水楊酸(Salicylicacid，SA)，化學(xué)名稱為鄰羥基苯甲酸，是一種普遍存在的植物內(nèi)源酚類化合物。20世紀(jì)60年代后，人們開始發(fā)現(xiàn)SA在植物中具有重要的生理作用，而且越來(lái)越多的研究表明，SA是植物抗病反應(yīng)的信號(hào)分子和誘導(dǎo)植物對(duì)非生物逆境反應(yīng)的抗逆信號(hào)分子。近年來(lái)，SA功能的研究已經(jīng)成為生物學(xué)最重要、發(fā)展最迅速的研究領(lǐng)域之一。目前，對(duì)SA在采后水果果實(shí)的研究熱點(diǎn)集中在它能抑制水果腐爛、延緩采后果實(shí)成熟衰老、保持果實(shí)品質(zhì)、提高對(duì)非生物學(xué)逆境的抗性和誘導(dǎo)采后果實(shí)對(duì)病原菌的抗性及抗性相關(guān)反應(yīng)。此外，也有SA具有直接抑制病原菌的活性的報(bào)道。本發(fā)明利用水楊酸和膠紅酵母結(jié)合使用提高其對(duì)水果采后病害生物防治的效力，從而降低水果的腐爛率，進(jìn)而達(dá)到水果貯藏保鮮的目的。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明利用水楊酸和膠紅酵母結(jié)合使用來(lái)提高其對(duì)水果采后病害生物防治的效力。經(jīng)水楊酸和膠紅酵母結(jié)合使用，可以明顯地抑制水果病原菌，防治水果采后腐爛。本發(fā)明具有安全、高效、成本低等優(yōu)點(diǎn)，可以廣泛地用于水果采后病害的生物防治過程中，減少水果采后病害造成的損失。本發(fā)明提供了水楊酸結(jié)合膠紅酵母使用生物防治水果采后病害的方法，按照下述步驟進(jìn)行將膠紅酵母活化，用NYDB培養(yǎng)基培養(yǎng)膠紅酵母，離心得到菌體；將菌體用100μg/ml的水楊酸(SA)稀釋制備成IXIO8個(gè)/ml的菌懸液；將水果放入菌懸液中，浸泡30s后馬上取出，自然風(fēng)干；放在塑料筐中，用保鮮膜密封后，放在室溫條件下存放。其中所述的NYDB培養(yǎng)基為酵母膏5g，牛肉浸膏8g，葡萄糖10g，純化水1000ml，PH自然。其中所述的膠紅酵母、Rhodotorulamucilaginosa)，保藏菌株編號(hào)為CGMCCNo.3617，2010年1月四日保存于位于中國(guó)北京的北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)的中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心中心(CGMCC)。其中所述的水果優(yōu)選草莓或桃果。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明所使用的膠紅酵母為本實(shí)驗(yàn)室篩選，其拮抗效力強(qiáng)，對(duì)人體無(wú)害。(2)本發(fā)明使用水楊酸和膠紅酵母結(jié)合使用，與單獨(dú)使用水楊酸處理或膠紅酵母處理相比，可以顯著提高膠紅酵母的拮抗活性，從而降低水果的腐爛率，進(jìn)而達(dá)到水果貯藏保鮮的目的。(3)本發(fā)明使用水楊酸和膠紅酵母結(jié)合使用可以代替化學(xué)殺菌劑防治水果采后病害，避免使用化學(xué)殺菌劑對(duì)人的危害，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。其中圖1為水楊酸與膠紅酵母結(jié)合使用對(duì)草莓根霉病、灰霉病和青霉病的控制效應(yīng)；注=CK對(duì)照；SA水楊酸(100μg/ml)；膠紅膠紅酵母菌懸液(1XIO8個(gè)/ml)；SA+膠紅1XIO8個(gè)/ml膠紅酵母菌懸液(含濃度為100μg/ml的SA)。發(fā)病率是20°C放置2d后測(cè)定的結(jié)果。不同字母代表差異顯著(P=O.05)。圖2為水楊酸與膠紅酵母結(jié)合使用對(duì)草莓自然腐爛的影響；注SA水楊酸(100μg/ml)；膠紅膠紅酵母菌懸液(1XIO8個(gè)/ml);SA+膠紅1XIO8個(gè)/ml膠紅酵母菌懸液(含濃度為100μg/ml的SA)。不同字母代表差異顯著性(p=0.05)。圖3為水楊酸與膠紅酵母結(jié)合使用對(duì)桃果實(shí)根霉病、灰霉病和青霉病的控制效應(yīng)；注=CK對(duì)照；SA水楊酸(100μg/ml)；膠紅膠紅酵母菌懸液(1XIO8個(gè)/ml)；SA+膠紅1XIO8個(gè)/ml膠紅酵母菌懸液(含濃度為100μg/ml的SA)。發(fā)病率是25°C放置7d后測(cè)定的結(jié)果。不同字母代表差異顯著(P=O.05)。具體實(shí)施例方式通過借助以下實(shí)施實(shí)例將更加詳細(xì)的說明本發(fā)明。以下實(shí)施例僅是說明性的，本發(fā)明并不受這些實(shí)施實(shí)例的限制。膠紅酵母、Rhodotorulamucilaginosa)系本實(shí)驗(yàn)室篩選得到，現(xiàn)保存于位于中國(guó)北京的北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)的中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心中心(CGMCC)，保藏菌株編號(hào)為CGMCCNo.3617，于NYDA(NYDB培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加洲的瓊脂(質(zhì)量計(jì)))培養(yǎng)基4°C低溫保存。培養(yǎng)程序?yàn)?1)固體活化將膠紅酵母接種于NYDA培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)48h；(2)液體培養(yǎng)在250ml的三角瓶中裝入50ml的NYDB種子培養(yǎng)基，用接種環(huán)接入一環(huán)活化好的膠紅酵母，在200rpm(轉(zhuǎn)/分鐘條件下培養(yǎng)Mh;(3)離心分離再懸浮將酵母培養(yǎng)混合物在7000Xg條件下，離心10-15min，并用無(wú)菌蒸餾水洗滌2次，以去除培養(yǎng)介質(zhì)，用無(wú)菌蒸餾水重新再懸浮，并用血球計(jì)數(shù)板調(diào)節(jié)酵母細(xì)胞濃度為IXlO9個(gè)/ml，再用滅過菌的生理鹽水稀釋到所需濃度。實(shí)施例1水楊酸與膠紅酵母結(jié)合使用對(duì)對(duì)水果病害的抑制效果一、試驗(yàn)方案供試的果實(shí)經(jīng)過精細(xì)挑選，盡量選擇果實(shí)均勻一致，表面無(wú)擦傷、機(jī)械傷和病蟲傷害。將水果用無(wú)菌打孔器打孔，其中草莓的表面?zhèn)跒?mm(直徑)X3mm(深)，桃果的表面?zhèn)跒?_(直徑)X3_(深)。每個(gè)傷口處等量加入30μ1以下處理液(1)1XIO8個(gè)/ml的膠紅酵母菌懸液(含濃度為100μg/ml的SA)；(2)1XIO8個(gè)/ml的膠紅酵母菌懸液；(3)SA(100μg/ml)和(4)無(wú)菌水。2h后，再分別接種15μL致病菌孢子懸浮液1XIO5個(gè)/ml的灰葡萄孢(Motrytiscinerea)孢子懸浮液、5XIO4個(gè)/ml的葡枝根霉(Mhizopusstoloniger)孢子懸浮液和5XIO4個(gè)/ml的擴(kuò)展青霉(/^/jiciWiexpansum)孢子懸浮液。自然晾干后，將果實(shí)放入塑料筐并用保鮮膜密封，恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(濕度95%)，桃果置于25°C，草莓置于20°C。每處理重復(fù)3次，每次重復(fù)10個(gè)果實(shí)。整個(gè)試驗(yàn)重復(fù)2次。經(jīng)過若干天的培養(yǎng)，記錄果實(shí)發(fā)病率，以此評(píng)價(jià)膠紅酵母的抑菌效果。發(fā)病率的計(jì)算公式如下發(fā)病率(%)=發(fā)病的果實(shí)/接種病原菌的果實(shí)總數(shù)X100%二、試驗(yàn)結(jié)果按照上述步驟試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)水果的腐爛率結(jié)果如下1.1對(duì)草莓根霉病、灰霉病和青霉病的抑制效果從圖1可以看出，膠紅酵母單獨(dú)處理和SA與膠紅酵母結(jié)合處理對(duì)草莓采后根霉病都顯著低于對(duì)照處理，其中結(jié)合處理效果最好，腐爛率為40%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于對(duì)照(100%,)，為對(duì)照處理的40%。單獨(dú)使用膠紅酵母的腐爛率為56.67%，為對(duì)照處理的56.67%。單獨(dú)使用SA處理對(duì)根霉病沒有顯著影響。膠紅酵母單獨(dú)處理和SA與膠紅酵母結(jié)合處理對(duì)草莓采后灰霉病都有顯著的抑制效果，其腐爛率分別為26.67%和18.33%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于對(duì)照(93.33%，)，單獨(dú)應(yīng)用SA對(duì)草莓采后灰霉病的抑制作用與對(duì)照相比沒有顯著影響。膠紅酵母單獨(dú)處理和SA與膠紅酵母結(jié)合處理對(duì)草莓采后青霉病的抑制作用都顯著好于對(duì)照處理，其中結(jié)合處理效果最好，腐爛率為16.67%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于對(duì)照(63.33%)，為對(duì)照處理的沈.32%。單獨(dú)使用膠紅酵母的腐爛率為56.67%，為對(duì)照處理的42.11%，單獨(dú)使用SA對(duì)草莓采后青霉病的抑制作用與對(duì)照相比沒有顯著影響。對(duì)桃果實(shí)根霉病、灰霉病和青霉病的抑制效果從圖2可以看，膠紅酵母(IXlO8個(gè)/ml)與SA(100yg/ml)結(jié)合能顯著抑制桃果的根霉病、灰霉病和青霉病的發(fā)病率，結(jié)合處理根霉病、灰霉病和青霉病的發(fā)病率分別30%、31.67%和8.33%，為對(duì)照處理的30%、37.5%和20.83%。單獨(dú)使用膠紅酵母處理也能顯著抑制桃果的根霉病和灰霉病，但是效果不如結(jié)合處理，根霉病、灰霉病發(fā)病率分別為50%和38.33%，為對(duì)照處理的50%和45.4%。單獨(dú)使用膠紅酵母和單獨(dú)使用水楊酸處理不能顯著抑制桃果實(shí)青霉病的發(fā)病率，單獨(dú)使用水楊酸處理不能明顯抑制桃果實(shí)根霉病和灰霉病的發(fā)生。實(shí)施例2水楊酸與膠紅酵母結(jié)合使用對(duì)草莓果實(shí)自然腐爛率的影響一、試驗(yàn)方案將水果進(jìn)行以下處理浸泡果實(shí)30秒=(I)IXlO8個(gè)/ml的膠紅酵母菌懸液(含100μg/ml的SA)；(2)IXIO8個(gè)/ml的膠紅酵母菌懸液；(3)SA(100μg/ml)和(4)無(wú)菌水。然后，將處理好的果實(shí)放入塑料筐用保鮮膜密封，在20°C(RH95%)的恒溫培養(yǎng)箱中貯藏3天和4°C冰柜中貯藏7天后轉(zhuǎn)入20°C(RH95%)的恒溫培養(yǎng)箱中貯藏1天，取出水果統(tǒng)計(jì)腐爛水果個(gè)數(shù)。每處理重復(fù)3次，整個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次。記錄果實(shí)發(fā)病率，以此評(píng)價(jià)膠紅酵母的抑菌效果。發(fā)病率的計(jì)算公式如下發(fā)病率(%)=發(fā)病的果實(shí)/接種病原菌的果實(shí)總數(shù)X100%二、試驗(yàn)結(jié)果按照上述步驟試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)水果的自然腐爛率結(jié)果如下從圖3可以看出，經(jīng)過膠紅酵母(IXlO8個(gè)/ml)和SA(100μg/ml)結(jié)合處理的草莓果實(shí)，不論是在20°C(濕度95%)培養(yǎng)3天還是在4°C下7d后轉(zhuǎn)入20°C培養(yǎng)1天，草莓果實(shí)的自然發(fā)病率均顯著低于對(duì)照，分別為對(duì)照處理的36%和28.56%，單獨(dú)使用膠紅酵母也能顯著降低草莓果實(shí)的自然腐爛率但是效果不如結(jié)合處理好。實(shí)施例3水楊酸和膠紅酵母結(jié)合使用對(duì)水果貯藏品質(zhì)的影響一、試驗(yàn)方案將水果進(jìn)行以下處理浸泡果實(shí)30秒=(I)IXlO8個(gè)/ml的膠紅酵母菌懸液(含100μg/ml的SA)；(2)IXIO8個(gè)/ml的膠紅酵母菌懸液；(3)SA(100μg/ml)和(4)無(wú)菌水。然后，將處理好的果實(shí)放入塑料筐用保鮮膜密封，在20°C(RH95%)的恒溫培養(yǎng)箱中貯藏3天和4°C冰柜中貯藏7天后轉(zhuǎn)入20°C(RH95%)的恒溫培養(yǎng)箱中貯藏1天，取出進(jìn)行貯藏品質(zhì)分析。貯藏品質(zhì)分析方法如下(1)硬度采用ΤΑ-ΧΤ2質(zhì)構(gòu)分析儀(英國(guó)StableMicroSystems公司)測(cè)試，探頭直徑為5mm，探頭測(cè)試前、測(cè)試中、測(cè)試后的遠(yuǎn)行速度均為l.Omm/s，測(cè)試深度為10mm，探頭插入水果時(shí)所受的最大阻力(單位為牛頓)就被定義為水果的硬度。每個(gè)處理重復(fù)4個(gè)水果。(2)總可溶性固形物采用WYT(0-80%)手持糖量計(jì)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果表示為g/100g樣品。(3)可滴定酸度(％):采用滴定法，從6個(gè)水果取樣稱取10g樣品，加蒸餾水迅速研磨，定容至100ml容量瓶，過濾，取10ml濾液，用0.1mol/1NaOH進(jìn)行滴定至PH8.1，滴定后進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果以含檸檬酸的百分?jǐn)?shù)表示。(4)維生素C含量的測(cè)定采用2，6_二氯酚靛酚法法。從6個(gè)水果上取5g樣品加5mL洲草酸研磨勻漿，倒入IOOml容量瓶，用1%草酸洗滌殘?jiān)?，加Iml30%硫酸鋅，搖勻。再加1ml15%亞鐵氰化鉀(除色素)，用1%草酸定容，搖勻過濾。取過濾液細(xì)1，然后向各管加入2，6-二氯酚靛酚染料溶液，隨即加入二甲苯5ml，迅速搖動(dòng)約0.5min，靜置后二甲苯與水層分離，將上層二甲苯萃取液在500nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。根據(jù)測(cè)定液的光密度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出相應(yīng)的Vc含量。二、試驗(yàn)結(jié)果按照上述步驟試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)草莓和桃果貯藏品質(zhì)的結(jié)果如下表1水楊酸與膠紅酵母結(jié)合使用對(duì)草莓果實(shí)貯藏品質(zhì)的影響權(quán)利要求1.水楊酸結(jié)合膠紅酵母使用生物防治水果采后病害的方法，其特征在于按照下述步驟進(jìn)行將膠紅酵母活化，用NYDB培養(yǎng)基培養(yǎng)膠紅酵母，離心得到菌體；將菌體用100μg/ml的水楊酸稀釋制備成1XIO8個(gè)/ml的菌懸液；將水果放入菌懸液中，浸泡30s后馬上取出，自然風(fēng)干；放在塑料筐中，用保鮮膜密封后，放在室溫條件下存放。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水楊酸結(jié)合膠紅酵母使用生物防治水果采后病害的方法，其特征在于其中所述的NYDB培養(yǎng)基為酵母膏5g，牛肉浸膏8g，葡萄糖10g，純化水1000ml，PH自然。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水楊酸結(jié)合膠紅酵母使用生物防治水果采后病害的方法，其特征在于其中所述的膠紅酵母(/PAoWorWa/ci^^i/0>sa)，保藏菌株編號(hào)為CGMCCNo.3617。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水楊酸結(jié)合膠紅酵母使用生物防治水果采后病害的方法，其特征在于其中所述的水果優(yōu)選草莓或桃果。全文摘要本發(fā)明公開了水楊酸結(jié)合膠紅酵母使用生物防治水果采后病害的方法，屬于水果采后生物防治領(lǐng)域。將膠紅酵母(Rhodotorulamucilaginosa)活化，接種到NYDB培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，離心得到菌體，將菌體用100μg/ml的水楊酸稀釋制備成1×108個(gè)/mL的菌懸液；將水果放入菌懸液中，浸泡30s后馬上取出，自然風(fēng)干；放在塑料筐中，用保鮮膜密封后，放在室溫條件下存放。本發(fā)明利用水楊酸和粘紅酵母結(jié)合使用提高其對(duì)水果采后病害生物防治的效力，使用簡(jiǎn)單，操作方便，效果好，成本低。其結(jié)合使用可以替代化學(xué)殺菌劑防治水果采后病害，避免使用化學(xué)殺菌劑對(duì)人的危害，具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。文檔編號(hào)A23B7/154GK102550653SQ20111036056公開日2012年7月11日申請(qǐng)日期2011年11月15日優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日發(fā)明者任曉鋒,張紅印,趙利娜,馬龍傳申請(qǐng)人:江蘇大學(xué)