專利名稱：Hiv-1b亞型耐藥突變株及其構(gòu)建方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種HIV-IB亞型耐藥突變株及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus, HIV)是引起人類獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)的病原體，自 1981 年美國首次診斷出艾滋病以來，艾滋病在全球范圍內(nèi)迅速傳播。中國艾滋病的流行已有25年，截止2010年10月底，中國已累計(jì)報(bào)告艾滋病病毒感染者和艾滋病患者37萬余例，其中艾滋病病人已逾13萬之多，僅死亡病例就已超過6. 8萬。在國家“四免一關(guān)懷”政策的支持下，我國從2003年開始在全國范圍內(nèi)逐步實(shí)施免費(fèi)的艾滋病抗病毒治療，到2010年底治療人數(shù)已超過7萬人。臨床觀察表明，抗病毒治療對(duì)減輕病情、提高病人生活質(zhì)量、延長生命具有很好的作用。但抗病毒治療也是一把“雙刃劍”，在為病人帶來福音的同時(shí)也為進(jìn)一步的治療帶來了困難——HIV耐藥性的出現(xiàn)與流行成了制約抗病毒治療的瓶頸。HIV-I抑制劑主要是針對(duì)蛋白酶和逆轉(zhuǎn)錄酶設(shè)計(jì)而成，目的是阻斷HIV-I的復(fù)制和包裝。盡管目前已經(jīng)確定了大量HIV耐藥突變位點(diǎn)，但是仍然不斷有新型耐藥突變位點(diǎn)被發(fā)現(xiàn)和鑒定，原因是(1)以往對(duì)耐藥突變位點(diǎn)的研究主要集中于藥物與病毒靶標(biāo)的結(jié)合區(qū)，近年來發(fā)現(xiàn)，藥物壓力對(duì)病毒的影響是長期的、整體的，在藥物結(jié)合區(qū)以外也有耐藥相關(guān)突變位點(diǎn)；( 病毒長期處于藥物壓力下，宿主/病毒/藥物長期相互作用，病毒將出現(xiàn)比初期受到藥物壓力時(shí)更多耐藥相關(guān)突變；C3)不同亞型HIV-I毒株在相同的藥物壓力下可能出現(xiàn)不同的耐藥突變或突變型。新型耐藥突變位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)及鑒定對(duì)抗病毒治療以及了解耐藥機(jī)制都具有至關(guān)重要的意義。中國于2003年在既往有償采漿感染HIV的艾滋病人群中首推使用6種國產(chǎn)仿制抗病毒藥物(Zidovudine，簡稱AZT或ZDV，中文名稱為齊多夫定；Dideoxyinosine，簡稱ddl，中文名稱為去羥肌苷J(rèn)tavudine，簡稱d4T，中文名稱為司他夫定；Lamivudine，簡稱3TC，中文名稱為拉米夫定；Nevirapine，簡稱NVP，中文名稱為奈韋拉平；Efavirenz，簡稱EFV,中文名稱為依非韋侖)組成的AZT/ddl/NVP、AZT/3TC/NVP等6種治療方案，之后在全國范圍內(nèi)全面推廣。我國的抗病毒治療模式存在以下特點(diǎn)(1)目前的抗病毒治療主要使用國產(chǎn)仿制藥，盡管藥物的主要成分與國外的藥物相同，但生產(chǎn)工藝的細(xì)小差別也可能影響藥物的效果，例如在有些地區(qū)發(fā)現(xiàn)毒副作用可能較大，這可能直接影響藥物的吸收以及血藥濃度，對(duì)耐藥性產(chǎn)生有重要影響；( 抗病毒治療模式是以農(nóng)村為主的依托鄉(xiāng)村醫(yī)生的治療，服藥的治療和保障方式均有特點(diǎn)；C3)在河南等地區(qū)，由于對(duì)抗病毒治療認(rèn)識(shí)上的不足和缺乏必要的臨床藥物服用監(jiān)督，藥物依從性不能達(dá)到一個(gè)理想的水平，而依從性是影響耐藥發(fā)生的一個(gè)至關(guān)重要的因素，在一些地區(qū)耐藥發(fā)生已經(jīng)到了相當(dāng)嚴(yán)重的地步。雖然艾滋病病毒在我國流行呈多樣性，但在我國以既往獻(xiàn)/輸血感染HIV的邊遠(yuǎn)農(nóng)村地區(qū)，HIV-IB亞型毒株依然占主導(dǎo)地位?？共《局委煏r(shí)間長及上述抗病毒模式的特點(diǎn)，提示在HIV-IB亞型毒株中可能會(huì)存在有尚未被認(rèn)知的新型耐藥突變。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種HIV-IB亞型耐藥突變株及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種構(gòu)建HIV-IB亞型耐藥突變株的方法，是將HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸(T)突變?yōu)槔i氨酸(V)，獲得HIV-IB亞型耐藥突變株(HIV-1B亞型T369V突變株)。所述HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的氨基酸序列如序列表的序列1所示。所述將HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變?yōu)槔i氨酸具體是通過將HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因自5’末端第1105位核苷酸由a突變?yōu)間，第1106位核苷酸由c突變?yōu)閠實(shí)現(xiàn)的；所述HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因如序列表的序列2所示。所述HIV-IB亞型耐藥突變株對(duì)藥物的耐受能力高于所述HIV-IB亞型野生株；所述藥物為AZT(Zidovudine，又稱齊多夫定)、EFV(Efavirenz ；又稱依非韋侖)和NVP(Nevirapine，又稱奈韋拉平)中的至少一種。所述將HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變?yōu)槔i氨酸的方法具體包括如下步驟(1)將pNL4. 3質(zhì)粒中的所述HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因自5’末端第1105位核苷酸由a突變?yōu)間，第1106位核苷酸由c突變?yōu)閠，獲得重組質(zhì)粒pNL4. 3_T369V ；(2)將重組質(zhì)粒pNL4. 3_T369V轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞，培養(yǎng)細(xì)胞并收獲上清液。所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞具體可為細(xì)胞。所述培養(yǎng)的方法具體可為37°C培養(yǎng)18-4他。以上任一所述方法獲得的HIV-IB亞型耐藥突變株也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述HIV-IB亞型耐藥突變株可用于篩選抗艾滋病藥物。本發(fā)明還保護(hù)一種重組質(zhì)粒，為將pNL4. 3質(zhì)粒中的HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因自5’末端第1105位核苷酸由a突變?yōu)間，第1106位核苷酸由c突變?yōu)閠，獲得的重組質(zhì)粒PNL4. 3_T369V ；所述HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因如序列表的序列2所示。本發(fā)明還保護(hù)T369V突變?cè)诖龠M(jìn)HIV-IB亞型野生株的耐藥性中的應(yīng)用；所述T369V突變?yōu)镠IV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸(T)突變?yōu)槔i氨酸(V)。所述逆轉(zhuǎn)錄酶的氨基酸序列如序列表的序列1所示。本發(fā)明對(duì)于抗HIV藥物的篩選具有重大價(jià)值，進(jìn)而對(duì)艾滋病的治療具有深遠(yuǎn)影響。


圖1為重組質(zhì)粒pNL4. 3_T369V的Hind III酶切鑒定圖；泳道6 重組質(zhì)粒pNL4. 3_T369V ；泳道10 分子量Marker ；其它泳道與本專利無關(guān)。圖2為HIV-IB亞型T369V突變株感染MT_2細(xì)胞后的CPE效應(yīng)(普通光學(xué)顯微鏡下的數(shù)碼照片，物鏡放大倍數(shù)為IOX，目鏡放大倍數(shù)為10X)；箭頭指示的為合胞體。
具體實(shí)施例方式以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。pMD-18 T 載體TaKaRa 公司。AZT (Zidovudine) =SIGMA0 EFV(Efavirenz)上海迪賽諾公司。NVP(Nevirapine)上海迪賽諾公司。Phusion Site-directed MutagenesisKit 購自 New England Biolabs, Product Code :F541，用于 DNA 序列的定點(diǎn)突變。Lipofectamine 2000 購自 Invitrogen，Cat No :11668_019。實(shí)施例1、耐藥突變位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)比較抗病毒治療失敗患者與未治療患者蛋白全長基因的序列，在逆轉(zhuǎn)錄酶區(qū)的560個(gè)密碼子中，2組人群中共計(jì)有6個(gè)位點(diǎn)的7個(gè)突變，其中一個(gè)突變?yōu)門369V。HIV-IB亞型的逆轉(zhuǎn)錄酶的氨基酸序列如序列表的序列1所示，其編碼序列如序列表的序列2所示。從蛋白層面來說，T369V突變即將HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶(序列表的序列1所示)自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸(T)突變?yōu)槔i氨酸(V)。從基因?qū)用鎭碚f，T369V突變可為將HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因(序列表的序列2所示)自5’末端第1105位核苷酸由a突變?yōu)間，第1106位核苷酸由c突變?yōu)閠。實(shí)施例2、HIV-IB亞型耐藥突變株(HIV-1B亞型T369V突變株)的構(gòu)建pNL4. 3質(zhì)粒公眾可以從中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所獲得；參考文獻(xiàn)Wang CiMitsuya YiGharizadeh B, Ronaghi Μ, Shafer RW. Characterizationof mutation spectra with ultra-deep pyrosequencing-application to HIV-I drugresistance. Genome Res. 2007 ； 17 (8) :1195-201. ；Hoffmann CiMinkah N,Leipzig J,WangGiArens MQ，Tebas PiBushman FD. NA bar coding and pyrosequencing to identify rareHIV drug resistance mutations. Nucleic Acids Res. 2007 ；35 (13) :e91. ；pNL4.3 質(zhì)粒含有HIV-IB亞型野生株的全基因組序列，轉(zhuǎn)染細(xì)胞并表達(dá)可以得到HIV-IB亞型野生株。細(xì)胞購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所。ΜΤ-2細(xì)胞公眾可以從中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所獲得；參考文獻(xiàn)Coakley Ε, Reeves JD,Huang W,Mangas-Ruiz Μ,Maurer I,Harskamp AM, etal. Comparision of the HIV-I tropism profiles in clinical samples by the Trofileand MT-2 cell assays. Antimicrob Agents Chemother 2009 ；53 (11) :4686-93.。一、構(gòu)建具有定點(diǎn)突變的重組質(zhì)粒1、設(shè)計(jì)用于定點(diǎn)突變的引物如下T369V_F 5' -GATGTGAAACAATTAGTAGAGGCAGTACAAA-3'；T369V_R 5’ -ATTAGTGTGGGCACCCTTCATTC-3 ’。2、以pNL4. 3質(zhì)粒為模板，用PLA-7和Vif_3組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物(約2258bp)。PLA-7 :5，-CTTTGGATGGGTTATGAACT-3，(針對(duì) pNL4. 3 的位置 3231-3250)；Vif-3 :5，-TCGCTGTCTTCGCTTCTTCCTGCCAT-3，(針對(duì) pNL4. 3 的位置 5994-6019)。
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(PCR擴(kuò)增的目的片段包括pNL4. 3質(zhì)粒中的HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因區(qū)域，并且在該區(qū)域以外具有Age I和EcoR I酶切位點(diǎn))。3、將步驟2的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與pMD-18 T載體連接，得到重組質(zhì)粒甲。4、以重組質(zhì)粒甲為模板，用T369V_F和T369V_R組成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并在T4 DNA連接酶的作用下得到重組質(zhì)粒乙(因?yàn)槭菍?duì)環(huán)狀DNA進(jìn)行擴(kuò)增，T369V_F和T369V_R分別擴(kuò)增環(huán)狀DNA的正義鏈和反義鏈，PCR擴(kuò)增結(jié)束后，擴(kuò)增產(chǎn)物在T4 DNA連接酶的作用下形成新的環(huán)形DNA，即重組質(zhì)粒乙；重組質(zhì)粒甲和重組質(zhì)粒乙的區(qū)別僅在于將重組質(zhì)粒甲中攜帶的HIV-IB亞型野生株逆轉(zhuǎn)錄酶編碼基因自5’末端第1105位核苷酸由a突變?yōu)間，第1106位核苷酸由c突變?yōu)閠)。5、用限制性內(nèi)切酶Age I和EcoR I雙酶切步驟4的重組質(zhì)粒乙，回收酶切產(chǎn)物(約 2258bp)。6、用限制性內(nèi)切酶Age I和EcoR I雙酶切pNL4. 3質(zhì)粒，回收載體骨架(約12. 2kb)。7、將步驟5的酶切產(chǎn)物和步驟6的載體骨架連接，得到重組質(zhì)粒丙(又稱重組質(zhì)粒pNL4. 3_T369V)。利用限制性內(nèi)切酶Hind III對(duì)重組質(zhì)粒pNL4. 3_T369V進(jìn)行單酶切鑒定，見圖1，顯示有5個(gè)條帶，與預(yù)期相符。二、構(gòu)建HIV-IB亞型T369V突變株1、用DMEM培養(yǎng)基(含100 μ g/ml青霉素和100U/ml鏈霉素)重懸細(xì)胞，得到4 X IO5個(gè)細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液。2、將細(xì)胞懸液加入6孔培養(yǎng)板，每孔anl，在(X)2培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)M小時(shí)，然后棄除上清，用PBS緩沖液洗滌兩次。3、借助Lipofectamine 2000 (按說明書操作)，將重組質(zhì)粒pNL4. 3_T369V轉(zhuǎn)染步驟2的細(xì)胞，每孔轉(zhuǎn)染4微克重組質(zhì)粒，在(X)2培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)36小時(shí)，收集上清，將上清進(jìn)行 P24 抗原測(cè)定(P24 試劑盒Vironostika@HIV-l Antigen Microelisa system，生產(chǎn)商=BiomeriEUX，產(chǎn)地法國)，結(jié)果為陽性，該上清即為即為HIV-IB亞型T369V突變株病毒液，分裝后-80°C保存。三、HIV-IB亞型野生株的獲得將pNL4. 3質(zhì)粒代替重組質(zhì)粒pNL4. 3_T369V，其它同步驟二，獲得HIV-IB亞型野生株病毒液。四、突變病毒株的鑒定將步驟二得到HIV-IB亞型T369V突變株病毒液感染MT_2細(xì)胞，每5X IO4個(gè)細(xì)胞感染10微升病毒液(病毒液每毫升含1122TCID5(1的病毒劑量)，在(X)2培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)，培養(yǎng)5天后的照片見圖2?？梢杂^察到，MT-2細(xì)胞產(chǎn)生了很大的合胞體，具有明顯的CPE(cytopathic effect)反應(yīng)，證明HIV-1B亞型T369V突變株是具有感染性的。分別將步驟二得到的HIV-IB亞型T369V突變株病毒液和步驟三得到的HIV-IB亞型野生株病毒液提取基因組DNA并進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果表明，與HIV-IB亞型野生株相比，HIV-IB亞型T369V突變株的差異僅在于兩個(gè)核苷酸(將序列表的序列2所示的HIV-IB亞型野生株逆轉(zhuǎn)錄酶編碼基因自5’末端第1105位核苷酸由a突變?yōu)間，第1106位核苷酸由c突變?yōu)閠)，引起一個(gè)氨基酸突變(將序列表的序列1所示的HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變?yōu)槔i氨酸)。實(shí)施例3、HIV-IB亞型耐藥突變株的耐藥性鑒定1、在細(xì)胞培養(yǎng)板中加入10微升藥物溶液(藥物溶液由藥物和水組成；分別采用AZT、EFV和NVP三種藥物；每種藥物設(shè)置6個(gè)梯度濃度AZT為2000nM 2. 74nM，稀釋度為3° ；EFV為IOOnM 0. 14nM,稀釋度為3° ；NVP為6000nM 8. 23nM,稀釋度為3° 3_6 ；每個(gè)藥物的每個(gè)濃度設(shè)置三個(gè)復(fù)孔)。2、用PBS緩沖液調(diào)整實(shí)施例2的步驟二得到的HIV-IB亞型T369V突變株病毒液(或?qū)嵤├?的步驟三得到的HIV-IB亞型野生株病毒液)的濃度，得到病毒稀釋液。3、在步驟1的細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔加入20 μ 1步驟2的病毒稀釋液，然后每孔加入70 μ 1 ΜΤ-2細(xì)胞懸液(ΜΤ-2細(xì)胞懸液中的細(xì)胞濃度為7 X IO4個(gè)細(xì)胞/ml)，感染性倍數(shù)(multiplicity of infection)MOI = 0. 003366TCID5(I，37°C、5% CO2 培養(yǎng) 2 天；第 3 天，每孔補(bǔ)加50 μ 1 RPMI-1640培養(yǎng)基(含10% FBS)，繼續(xù)培養(yǎng)2天；第5天觀察CPE，統(tǒng)計(jì)不同濃度下CPE出現(xiàn)的比例(CPE，% )。4、計(jì)算50%細(xì)胞出現(xiàn)CPE時(shí)的藥物濃度，即IC5tl值。HIV-IB亞型T369V突變株針對(duì)AZT的IC50值為318. IOnM,針對(duì)EFV的IC50值為36. 92ηΜ，針對(duì) NVP 的 IC5tl 值為 2661. ΟΟηΜ。HIV-IB亞型野生株針對(duì)AZT的IC50值為112. 50ηΜ，針對(duì)EFV的IC50值為8. IlnM,針對(duì) NVP 的 IC5tl 值為 230. 40ηΜ。5、計(jì)算突變病毒株對(duì)于各個(gè)藥物的耐藥倍數(shù)。耐藥倍數(shù)=HIV-IB亞型T369V突變株的IC5(1/HIV_1B亞型野生株的IC5(1。HIV-IB亞型T369V突變株針對(duì)AZT的耐藥倍數(shù)為2. 83。HIV-IB亞型T369V突變株針對(duì)EFV的耐藥倍數(shù)為4. 55。HIV-IB亞型T369V突變株針對(duì)NVP的耐藥倍數(shù)為11. 5。
權(quán)利要求
1.一種構(gòu)建HIV-IB亞型耐藥突變株的方法，是將HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變?yōu)槔i氨酸，獲得HIV-IB亞型耐藥突變株。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述逆轉(zhuǎn)錄酶的氨基酸序列如序列表的序列1所示。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述將HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變?yōu)槔i氨酸是通過所述將HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因自5’末端第1105位核苷酸由a突變?yōu)間，第1106位核苷酸由c突變?yōu)閠實(shí)現(xiàn)的；所述HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因如序列表的序列2所示。
4.如權(quán)利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于所述HIV-IB亞型耐藥突變株對(duì)藥物的耐受能力高于所述HIV-IB亞型野生株；所述藥物為AZT、EFV和NVP中的至少一種。
5.如權(quán)利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于所述將HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變?yōu)槔i氨酸的方法包括如下步驟(1)將pNL4.3質(zhì)粒中的所述HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因自5’末端第1105位核苷酸由a突變?yōu)間，第1106位核苷酸由c突變?yōu)閠，獲得重組質(zhì)粒pNL4. 3_T369V ；(2)將重組質(zhì)粒pNL4.3_T369V轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞，培養(yǎng)細(xì)胞并收獲上清液。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞為細(xì)胞；所述培養(yǎng) 的方法為37°C培養(yǎng)18-4 1。
7.權(quán)利要求1至6中任一所述方法獲得的HIV-IB亞型耐藥突變株。
8.權(quán)利要求7所述HIV-IB亞型耐藥突變株在篩選抗艾滋病藥物中的應(yīng)用。
9.一種重組質(zhì)粒，為將pNL4. 3質(zhì)粒中的HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因自5’末端第1105位核苷酸由a突變?yōu)間，第1106位核苷酸由c突變?yōu)閠，獲得的重組質(zhì)粒pNL4. 3_T369V ；所述HIV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶的編碼基因如序列表的序列2所示。
10.T369V突變?cè)诖龠M(jìn)HIV-IB亞型野生株的耐藥性中的應(yīng)用；所述T369V突變?yōu)镠IV-IB亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變?yōu)槔i氨酸；所述逆轉(zhuǎn)錄酶的氨基酸序列如序列表的序列1所示。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種HIV-1B亞型耐藥突變株及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供的的方法，是將HIV-1B亞型野生株的逆轉(zhuǎn)錄酶自N末端第369位氨基酸殘基由蘇氨酸突變?yōu)槔i氨酸，獲得HIV-1B亞型耐藥突變株。本發(fā)明對(duì)于抗HIV藥物的篩選具有重大價(jià)值，進(jìn)而對(duì)艾滋病的治療具有深遠(yuǎn)影響。
文檔編號(hào)C12Q1/70GK102392039SQ20111034490
公開日2012年3月28日 申請(qǐng)日期2011年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月4日
發(fā)明者劉思揚(yáng), 劉永健, 莊道民, 李天一, 李敬云, 李林, 李韓平, 王曉林, 耿慶茂, 郭偉, 鮑作義 申請(qǐng)人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所