專利名稱：濃縮試樣組分和擴增核酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于濃縮試樣組分和擴增含于試樣組分中的核酸的方法。
背景技術(shù)：
在傳染病診斷中，由于對于大腸桿菌以及引起結(jié)核病、敗血癥或肺炎的細菌的抗生素抗性如MRSA和氟喹諾酮抗性不斷擴展，所以對該抗生素抗性的證實具有越來越大的
重要性。在常規(guī)診斷中，這些抗性大多基于培養(yǎng)得知。但該基于細胞培養(yǎng)的抗性測定是一種耗時的方法，因為培養(yǎng)和評定需2-3天時間。借助于細菌-DNA分析可明顯快地測定抗性。 為此需擴增細菌的DNA。這類擴增例如可通過DNA聚合酶和RNA聚合酶的協(xié)同作用(基于核酸序列的擴增；NASBA)、通過聚合和索排代(Strang-Verdi^ngung)(滾環(huán)擴增；RCA)或借助于連接酶(連接酶鏈反應(yīng)；LCR)實現(xiàn)。但聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)由于其特異性和敏感性而成為最常使用的擴增方法。為此，一般在PCR前處理和凈化含核酸的物質(zhì)。核酸的處理流程有多個工作步驟，其中例如通過離心濃集細胞或病毒，且通過細胞溶解和各種洗滌步驟分離核酸。歐洲專利EP 0389063 B2描述了一種常用的多步驟的凈化方法，其中在離液鹽存在下DNA結(jié)合到含二氧化硅的固相上。在此方法中首先用離液緩沖液溶解細胞。使該溶胞產(chǎn)物與含二氧化硅的結(jié)合有DNA的固相接觸。接著從溶胞產(chǎn)物的殘余物中分離出含有結(jié)合的DNA的固相，并洗滌該DNA絡(luò)合物。最后依最終應(yīng)用從固相中洗脫該DNA或直接以結(jié)合的狀態(tài)擴增該DNA。與此相反，所謂的微全分析裝置(μ全分析裝置，μ TAS)的優(yōu)點在于，將各工作步驟合并并進行自動化，并同時減少到微量規(guī)模。這類系統(tǒng)的潛力主要在于低功率消耗、快的反應(yīng)時間和減少了試樣體積和試劑體積，以致可實現(xiàn)芯片大小的分析實驗室(“芯片實驗室”)。從WO 200465010已知一種這類可從水溶液中分離和擴增DNA的微流體系統(tǒng)。在應(yīng)用該系統(tǒng)時，首先通過膜過濾試樣，這時細胞保留在膜上，并且在下一步驟中與膜一起從過濾器室中取出。將該膜送入實際的微流體系統(tǒng)中后，洗滌、溶解細胞，并接著擴增DNA，這時從儀器中取出用于擴增的膜，并隨后再次送入。最后在該膜穿過通道時檢測擴增的DNA。但是，不僅由于在試樣處理和PCR反應(yīng)之間的許多工作步驟使得用于診斷的耐用的μ-TAS的制備變得困難，而且還由于例如為分析含細胞或含病毒的流體而必須提供明顯多于用于分析的僅幾滴的量，因為在這種介質(zhì)中常僅存在非常少量的細胞數(shù)或病毒數(shù)。 例如對于敗血癥的情形，每毫升血液中僅有5個病菌。所以通常需處理較大的試樣體積(幾毫升)，由此才能有機會在分析物中發(fā)現(xiàn)足夠的細胞或病毒。將由此產(chǎn)生的對宏觀量的試樣體積的必需轉(zhuǎn)變?yōu)槲⒘黧w系統(tǒng)中所需的微升量就成了問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用于從生物試樣中濃縮試樣組分和擴增含于試樣組分中的核酸的方法，該方法以少數(shù)幾步單一步驟進行，并可實現(xiàn)自動化。此外，本發(fā)明的目的還在于提供一種實施相應(yīng)方法的設(shè)備，該設(shè)備勝任微型規(guī)模的自動化要求。因此本發(fā)明的目的是一種用于從生物試樣中濃縮試樣組分和擴增含于試樣組分中的核酸的方法，該方法包括下列步驟
1)備制液態(tài)的生物試樣，
2)將該試樣送入具有至少一個過濾器的分離系統(tǒng)中，
3)通過在過濾器上分離試樣組分而濃集含于試樣中的試樣組分，
4)加入擴增試劑，和
5)直接擴增至少一種含于試樣組分中的核酸。術(shù)語“試樣組分”在下面應(yīng)意指細胞以及病毒。術(shù)語“細胞”在下面應(yīng)意指原核細胞以及真核細胞。術(shù)語“病毒”在下面應(yīng)意指具有其增殖和擴展信息但無自身代謝的和因此指定寄主細胞的代謝的非細胞顆粒。在寄主細胞的外面病毒主要作為病毒粒存在。術(shù)語“含于試樣組分中的核酸”在下面一方面應(yīng)意指自身(內(nèi)生)核酸，包括線粒體的核酸或病毒粒的核酸，另一方面也應(yīng)意指例如侵害細胞的病毒的外來(外生)核酸。核酸可以是DNA (脫氧核糖核酸)、RNA (核糖核酸)或cDNA。直接或間接來自活的或死的生物體并已呈液態(tài)存在或已溶解以致可施加到過濾系統(tǒng)中的所有物質(zhì)均看作是“生物試樣”。術(shù)語“分離系統(tǒng)”在下面應(yīng)意指一種可實施本發(fā)明方法并包含至少一個過濾器的設(shè)備。因此“分離系統(tǒng)”也可包括由多個過濾器組成的系統(tǒng)。此外，分離系統(tǒng)還包括試樣和試劑的相應(yīng)送入和排出連接端。本文中的“過濾器”意指一種部件，借助于該部件可將生物試樣中的含待擴增的核酸的試樣組分與其它組分分離。因此通過在過濾器上的分離濃縮或濃集了這些試樣組分。 該試樣組分不僅可在過濾器上也可在過濾材料內(nèi)進行分離。術(shù)語“擴增”意指核酸的有目的增殖。例如可借助于NASBA、RCA、LCR和/或PCR 進行擴增?！爸苯訑U增”意指核酸在至少一個過濾器上或至少一個過濾器中的直接擴增，無需預(yù)先例如通過細胞溶解進行單獨的核酸提取?！皵U增試劑”意指用于實施擴增的所有必需的試劑如酶、緩沖劑、核苷酸、引物和其它助劑。術(shù)語“提取”在下面意指使待擴增的核酸適用于擴增的過程。令人意外的是，用本發(fā)明的方法可僅用少數(shù)幾個方法步驟即可濃縮和擴增試樣組分或含于其中的核酸。這種情況特別可歸因于該擴增直接在過濾器上發(fā)生且無需單獨的核酸提取步驟，因為直接擴增包括了試樣組分的可能提取。由此可省去多個工作步驟。此外，可在一個微流體系統(tǒng)中實施通常呈空間分離的幾個工作步驟即濃集、核酸提取、核酸凈化和擴增，在該微流體系統(tǒng)中個別步驟甚至不再必要。由此明顯減少了工作步驟的數(shù)目和所用的介質(zhì)，這導(dǎo)致時間和成本的大大節(jié)省。
所述試樣組分優(yōu)選是細胞或大的病毒粒如天花病毒粒。在一個實施方案中，步驟5中的擴增通過PCR進行，并包括至少下列分步驟 5. 1)過濾器的改性、核酸提取和至少一種核酸的變性，
5.2)引物結(jié)合，和
5.3)引物延伸。PCR的優(yōu)點在于，在約95°C下變性的第一PCR步驟可靠地提取核酸，即使其易于擴增。如果試樣組分是細胞，則尤其如此。過濾器的改性使得在后續(xù)步驟中至少一種核酸和PCR試劑均不滯留在過濾器上或結(jié)合在過濾器上并由此對擴增產(chǎn)生不利影響和阻止擴增。因此該過濾器的改性導(dǎo)致更好的PCR結(jié)果。由此不再需要單獨的提取步驟，該單獨的提取步驟由于事后所需的提取試劑的去活化而隨之產(chǎn)生耗費的凈化過程和沖洗過程。在一個優(yōu)選的實施方案中，在步驟5. 1)中的過濾器改性通過在步驟4)中加入阻斷過濾器的聚合物進行，該聚合物選自可溶性的蛋白或白蛋白，優(yōu)選BSA;或合成的聚合物，優(yōu)選PEG成PPG。BSA的應(yīng)用對PCR而言顯示特別好的結(jié)果。在另一個實施方案中，在步驟幻中側(cè)向流過過濾器，即試樣的流向相對過濾器呈橫向或水平。側(cè)向流過的優(yōu)點在于，該分離裝置的結(jié)構(gòu)比橫向結(jié)構(gòu)的過濾器系統(tǒng)更為簡單。此夕卜，通過過濾器的流徑明顯更短。因此例如可通過使流過方向從橫向改變成側(cè)向而在相同分離度情況下用面積為3x16 mm或直徑為8 mm的單層過濾器代替直徑約為8 mm的雙層過濾器^jiampeMini Spin column)。由此，與橫向整合的過濾器相比，可大大減少過濾器體積， 而無需承受分離度的損失。在微流體應(yīng)用中，這種體積減少具有顯著優(yōu)點，因為整個結(jié)構(gòu)可微型化。此外，側(cè)向流過的過濾器有助于簡單的、可自動化的工藝進程，其明顯有利于試樣組分的高收率以及后續(xù)的核酸擴增。術(shù)語“分離率”描述了單位時間由過濾器滯留的試樣組分?jǐn)?shù)目，而“分離度”或“效率”給出在過濾器上總共滯留的試樣組分的百分?jǐn)?shù)。在含1000試樣組分的起始溶液情況下，由過濾器滯留的700試樣成分相應(yīng)于該過濾器的分離度或效率為70 %。在另一個實施方案中，使用纖維過濾器作為側(cè)向流過的過濾器。雖然纖維過濾器具有較大的孔，但可分離較大量的試樣組分。在具有約ι μ m的孔的膜過濾器情況下，僅可分離少量(< 10 %)的直徑約為1 μ m的試樣組分，與此相反，在孔徑< 0. 5 μ m情況下可實現(xiàn)顯著的分離率。相反，在纖維直徑為1-10 μ m和孔隙度為50-90 %的側(cè)向流過的纖維過濾器情況下，可達明顯高于90 %的非常高的分離度?；蛘?，也可橫向流過該纖維過濾器。在另一個實施方案中，該過濾器選自纖維過濾器，優(yōu)選含二氧化硅的纖維過濾器， 特別優(yōu)選玻璃纖維過濾器；膜過濾器和離子交換劑，優(yōu)選陰離子交換劑。優(yōu)選使用含二氧化硅的纖維過濾器，其玻璃纖維的直徑為> 0.01 μπι至<40 μ m，優(yōu)選彡0.1 μ m至彡30 μ m，特別優(yōu)選彡0.1 μπι至彡5 μ m。該優(yōu)選的直徑特別是與待濃縮的試樣組分的直徑有關(guān)。此外，該過濾器還可包含散粒料，即呈固定相。或者，也可使用膜過濾器。在膜過濾器情況下，過濾主要經(jīng)篩選效應(yīng)實現(xiàn)。優(yōu)選使用具有0.22 ym孔徑的I^all的Supor 200型膜過濾器。該膜過濾器的孔徑與待過濾的試樣組分有關(guān)。在大腸桿菌情況下，孔徑大小為< 1 μπι。此外，也可使用離子交換劑，尤其是陰離子交換劑。在離子交換劑情況下，在試樣組分的帶電表面和離子交換劑的交換基團之間形成強相互作用。在此，陰離子交換劑的實例是 Varian Inc.公司的 MratoSperes Ion Exchange SPE PL-MIXED MP 型。令人意外的是，試樣組分在具有較大孔的纖維過濾器上可同樣良好分離。如果該試樣組分是細菌則尤其如此。此外，該纖維過濾器的優(yōu)點在于，與膜過濾器不同，纖維過濾器在較高負荷下也具有小的流阻。相反，在膜過濾器情況下，特別是在高顆粒濃度情況下，常導(dǎo)致過濾器的快速堵塞，因為所有的分離試樣組分均可堵塞孔。因此在相同壓力下，在膜過濾器上的分離率比在纖維過濾器上要小。當(dāng)然，如上所述，也可使用膜過濾器和/或離子交換劑來實施本發(fā)明方法，因為這些過濾器種類也有幾乎100 %的高效率，并因此可確保從生物試樣中有效地分離試樣組分。在本發(fā)明方法的另一個實施方案中使用了多于一個的過濾器。優(yōu)選使用兩個不同的過濾器，以致可分離不同大小的各種試樣組分。在另一個實施方案中，生物試樣是含病菌的試樣流體如尿、血、血漿、血清、涂液、 唾液、痰和/或支氣管肺胞灌洗液(BAL)。在另一個實施方案中，在步驟幻和4)之間可進行試樣組分的酶促分解、化學(xué)分解和/或機械分解，在分解中可使細胞膜或病毒粒殼和/或病毒殼體溶解或受損，并使核酸可用。因此，術(shù)語“分解”在下面意指使待擴增的核酸可進行擴增的過程。按此，術(shù)語提取和分解在內(nèi)容上是一致的，但選用術(shù)語“分解”以強調(diào)其在此是一個單獨的過程，該過程不同于提取，其不受擴增本身的限制。這種分解例如作為溶解進行，其中借助于酶促方法、熱方法或化學(xué)方法而使核酸可用。例如用蛋白酶K處理或用溶菌酶處理適用于酶促溶解法。熱溶解通過加熱或冷凍試樣組分進行?；瘜W(xué)溶解方法的實例是用十二烷基硫酸鈉(SDQ和NaOH的組合進行處理、用硫氰酸胍(DIT)處理和用Triton XlOO和高濃氯化鋰的組合進行處理。機械分解例如使用玻璃珠或渦流器進行。此外，還有其它的已知分解方法。各方法的組合也是可能的。該附加的分解的優(yōu)點在于，也可使試樣組分中的核酸，特別是難分解的細胞，可供進行后續(xù)的擴增。該分解步驟優(yōu)選是酶促分解或化學(xué)分解，因為這無需其它器具，并且該附加的方法步驟可易于自動化。在一個優(yōu)選實施方案中，通過試樣組分的分解所釋出的至少一種核酸在步驟5) 的擴增前經(jīng)凈化。依擴增條件不同，例如在借助于PCR擴增時由于受限的引物選擇，則該凈化是必需的，以達到最佳的擴增結(jié)果。該凈化例如可通過用為隨后的擴增同時調(diào)節(jié)最佳條件的緩沖溶液進行沖洗來實現(xiàn)。此外，在一個優(yōu)選實施方案中，在步驟幻中經(jīng)擴增的核酸接著被過濾器洗脫。術(shù)語“洗脫”表示核酸從過濾器中脫出或溶出。為此向過濾器供入由一種或多種溶劑組成的流動相，并隨洗脫液洗出核酸。如果例如作為最終用途欲成批檢測經(jīng)擴增的核酸，則要實施該步驟。在此特別優(yōu)選是水性洗脫，即在去離子水中洗脫經(jīng)擴增的核酸。如果借助于PCR進行擴增，則在分離試樣組分后優(yōu)選用含BSA的PCR緩沖液沖洗過濾器，以去除例如雜質(zhì)如代謝產(chǎn)物、調(diào)節(jié)用于隨后的PCR的介質(zhì)和停用過濾器。之后加入由DNTP、引物、聚合酶和緩沖液組成的混合物，并實施PCR常用的熱循環(huán)。在該熱循環(huán)中 DNA擴增(增多)。接著可用過濾器將其洗脫。例如可從含IO5個病菌的10 ml尿中經(jīng)20次循環(huán)分離出在50 μ 1中的IO11個DNA分子。此外，一個實施方案是優(yōu)選的，即其中在步驟幻中擴增的核酸用過濾器的濾液進行沖洗，在微流體系統(tǒng)中混合洗脫液并再送到過濾器。該濾液優(yōu)選與試樣的當(dāng)前流向呈反相流過過濾器，并且混合后的洗脫液以當(dāng)前的流向流過過濾器。通過這一方法步驟可實現(xiàn)擴增核酸的凈化，例如以改進接著的檢測結(jié)果。異硫氰酸胍(GIT)和/或乙醇適合用作濾液。在微流體系統(tǒng)中的混合可借助于磁珠和/或混合器結(jié)構(gòu)例如用洗滌緩沖液進行?；蛘撸怂岬纳V凈化也是可能的。此外，另一種可能是，在下流后將洗脫液提供到一個新鮮的過濾器上。該步驟在某些應(yīng)用中是有用的，例如對DNA的純度有特別要求時使用。如上所述，過濾器可包含散粒料或固定相。在此情況下，優(yōu)選是用過濾器的濾液沖洗在步驟幻中擴增的核酸，在微流體系統(tǒng)中混合洗脫液，并再送到過濾器上。該濾液與當(dāng)前的流向呈反向流過固定相，并且混合后的洗脫液以當(dāng)前的流向流過固定相。因此通過適當(dāng)選擇固定相可實現(xiàn)色譜凈化。本發(fā)明的另一目的是提供一種用于實施本發(fā)明方法的設(shè)備，該設(shè)備呈實驗室芯片系統(tǒng)結(jié)構(gòu)。該設(shè)備可以宏觀試樣體積在μ-TAS系統(tǒng)中實施本發(fā)明方法。因此，雖然是含有高濃度的待濃集的試樣組分的大試樣體積，但也可實現(xiàn)微型化，該微型化可省時和低成本運行。本發(fā)明的其它優(yōu)點和有利的方案通過附圖和實施例闡明，并在下面說明書中描述。要注意的是，這些附圖和實施例僅是描述性質(zhì)，不能認為是以任何方式限制本發(fā)明。


圖1示出本發(fā)明方法的示意流程。圖2示出具有側(cè)向流過的纖維過濾器201的分離系統(tǒng)。圖3示出具有橫向流過的過濾器301的分離系統(tǒng)。圖4示出在實施例中試樣1的實驗結(jié)果-標(biāo)記引物過濾器-PCR IO7細胞25 μ 1。圖5示出在實施例中試樣2的實驗結(jié)果-標(biāo)記引物過濾器-PCR IO7細胞25 μ 1。圖6示出用于算出檢測限的試驗的實驗結(jié)果。圖7示出實施例中圖1-3中的試樣1-3的雜交圖案。
具體實施例方式圖1示出使用分離系統(tǒng)的本發(fā)明方法的示意流程。將生物試樣例如尿(其中含有病菌如大腸桿菌)加入到過濾器上。待擴增的核酸是 DNA，且擴增借助于PCR進行。
在步驟1中，每ml含IO4-IO7個細菌的細菌懸浮液102的宏觀量的試樣體積(10 ml)在最大為0. 5巴壓力下經(jīng)10分鐘(S卩1 ml/min)通過過濾器(在此為二氧化硅纖維墊 101)。大腸桿菌以95%-99 %的分離度滯留在二氧化硅纖維墊上，以使懸浮液103隨后幾乎不再含有細菌102。接著在步驟B中，用100-500 μ 1的PCR緩沖液洗滌過濾器101，以創(chuàng)造PCR的最佳條件。在步驟C中，加入PCR溶液即含dNTP、緩沖液、Taq-聚合酶、引物和 PEG的30 μ 1 PCR主混合物，并開始PCR循環(huán)。在PCR反應(yīng)中，第一變性步驟導(dǎo)致大腸桿菌102溶解。步驟D示出擴增DNA的第一部分凈化，即反向于當(dāng)前流向流下。在微流體系統(tǒng)中借助于由箭頭104表示的混合器混合洗脫液，并再送到過濾器。在最后的步驟E中，流下的DNA按流向再次加到過濾器上。用洗滌緩沖液沖洗后，洗滌緩沖液排入圖中以105表示的廢物容器中，經(jīng)凈化的DNA在50 μ 1雜交緩沖液中洗脫(以箭頭106表示)。接著該 DNA立即用于雜交。圖2示出具有側(cè)向流過的纖維過濾器201的分離系統(tǒng)。箭頭204表示按本發(fā)明方法步驟幻在過濾器上分離時試樣的流向。該分離系統(tǒng)具有試樣和試劑的加入口 205和排出口 206。在該具有側(cè)向流過的纖維過濾器201的分離系統(tǒng)中，將生物試樣如具有感染病毒的細胞的唾液試樣在加入口 205處注射入該分離系統(tǒng)中，然后以流向204流經(jīng)過濾器201 或穿過過濾器201，在此細胞由過濾器201所滯留。該唾液試樣的殘余液經(jīng)排出口 206離開該分離系統(tǒng)。由此，感染病毒的細胞被濃集或濃縮。在下一步(未示出)中，添加擴增試齊U，其中包括專用的引物和阻斷過濾器201的物質(zhì)。接著借助于對病毒核酸有特異性的所述專用引物在過濾器201上或過濾器201中擴增釋出的病毒-核酸，其中在第一擴增步驟中實現(xiàn)核酸提取，即細胞溶解。圖3示出具有橫向流過的過濾器301的分離系統(tǒng)。箭頭304表示按本發(fā)明方法的步驟3)在過濾器上分離時試樣的流向。該分離系統(tǒng)具有試樣和試劑的加入口 305和排出口 306。在具有橫向流過的過濾器301的分離系統(tǒng)中，來自BAL試樣的細胞(如金黃色葡萄球菌)經(jīng)加入口 305加到分離系統(tǒng)中。在此該細菌以流向304橫向通過過濾器301或在過濾器301上通過，其中該細菌由過濾器301所滯留。 BAL試樣的殘余液經(jīng)排出口 206離開該分離系統(tǒng)。由此，細菌被濃集或濃縮。在下一步(未示出)中溶解該細菌。加入擴增試劑后，在過濾器301中擴增該細菌的核酸。實驗1
用該實驗可表明是否可棄去單獨的提取步驟或溶解步驟，是否可在過濾器上實施PCR 以及是否可在最后實現(xiàn)成功的雜交。使用反向引物在過濾器上實施PCR，該反向引物在5 ’端由螢光分子花青素3標(biāo)記。該實驗用IO7個大腸桿菌細胞進行，這些細胞在Qiagen QIAamp Mini Spin組件中的半個破碎過濾器上離心(6000轉(zhuǎn)/分，15秒)。之后將該過濾器塊轉(zhuǎn)入PCR容器中， 并加入PCR試液(含BSA)。表1 :PCR 試液
權(quán)利要求
1.用于從生物試樣中濃縮試樣組分和擴增含于試樣組分中的核酸的方法，其包括下列步驟1)備制液態(tài)的生物試樣(102)，2)將該試樣送入具有至少一個過濾器O01)的分離系統(tǒng)中，3)通過在過濾器(201)上分離試樣組分而濃集含于試樣中的試樣組分，4)加入擴增試劑，和5)直接擴增至少一種含于試樣組分中的核酸。
2.權(quán)利要求1的方法，其特征在于，所述擴增在步驟5中通過PCR進行，并包括至少下列分步驟5. 1)過濾器的改性、核酸提取和至少一種核酸的變性，5.2)引物結(jié)合，和5.3)引物延伸。
3.權(quán)利要求2的方法，其特征在于，在步驟5.1)中的過濾器O01)的改性通過在步驟4)中加入阻斷過濾器O01)的聚合物進行，該聚合物選自可溶性的蛋白或白蛋白，優(yōu)選 BSA ；或合成的聚合物，優(yōu)選PEG成PPG。
4.上述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于，在步驟3中側(cè)向流過所述過濾器001)。
5.上述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于，所述過濾器選自-纖維過濾器，優(yōu)選含二氧化硅的纖維過濾器，特別優(yōu)選玻璃纖維過濾器， -膜過濾器，和-離子交換劑，優(yōu)選陰離子交換劑。
6.上述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于，在步驟幻和4)之間進行試樣組分的酶促分解、熱分解、化學(xué)分解和/或機械分解。
7.權(quán)利要求6的方法，其特征在于，在步驟幻的擴增前凈化通過試樣組分的分解所釋出的至少一種核酸。
8.上述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于，接著由過濾器(201)洗脫步驟5)中擴增的核酸。
9.上述權(quán)利要求之一的方法，其特征在于，用過濾器O01)的濾液沖洗步驟幻中擴增的核酸，在微流體系統(tǒng)中混合洗脫液并再送到過濾器，其中所述濾液優(yōu)選與當(dāng)前試樣的流向(204)反向流過過濾器001)，并且混合后的洗脫液以當(dāng)前流向(204)流過過濾器 (201)。
10.用于實施權(quán)利要求1-9之一的方法的設(shè)備，特征在于該設(shè)備呈實驗室芯片系統(tǒng)結(jié)構(gòu)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于從生物試樣中濃縮試樣組分和擴增含于試樣組分中的核酸的方法，其中該核酸在分離試樣組分的同一個過濾器上擴增。
文檔編號C12N15/10GK102453710SQ20111032909
公開日2012年5月16日 申請日期2011年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月27日
發(fā)明者魏勒 J., 道布 M., 羅塔歇爾 P., 明希 S. 申請人:羅伯特·博世有限公司