專利名稱：靶向抑制羊痘病毒ORF095基因的siRNA序列的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及四個靶向抑制羊痘病毒0RF095基因的siRNA序列，以及這些序列的用途。
背景技術(shù)：
羊痘(Capripox，CP)包括綿羊痘、山羊痘和牛的皮膚疙瘩病，其中前兩者是由綿羊痘病毒(She印pox virus, SPPV)和山羊痘病毒(Goatpox virus, GTPV)分別引起綿羊和山羊發(fā)生的接觸性傳染病。病畜體溫升高，全身出現(xiàn)丘疹或結(jié)節(jié)、水皰、內(nèi)臟病變甚至死亡， 給世界養(yǎng)羊業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其規(guī)定為法定必須報告的動物疫病，我國將其列為一類動物傳染病。羊痘的預(yù)防和控制一直是研究的熱點。0RF095是編碼病毒粒子包裝核心蛋白基因，與猴痘病毒(Monkeypox virus, MYXV)的 M093L 基因(accession no. AF1707^)，以及牛痘病毒(vaccinia virus, VACV) A4L(accession no. M35027)同源。0RF095編碼39kDa的酸性蛋白質(zhì)，是病毒粒子包裝核心蛋白基因在病毒粒子感染后的包裝和解離過程中合成的主要蛋白質(zhì)。因此，選擇0RF095 基因作為RNA干擾的靶標，將會使病毒復(fù)制過程中斷，從而達到抑制病毒增值的作用。但目前世界上很少有基于RNA干擾技術(shù)靶向羊痘病毒的研究的報道，也沒有RNA干擾方法在 0RF095蛋白的研究的報道。與類似方法靶向其他基因?qū)嶒灲Y(jié)果相比發(fā)現(xiàn)，0RF095基因作為 RNA干擾靶向的目的基因，以本發(fā)明設(shè)計合成的序列來抑制羊痘病毒復(fù)制是一個更為理想的選擇。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供四個人工序列，在相關(guān)的實驗中這些序列分別表現(xiàn)出對羊痘病毒 0RF095基因具有抑制作用。本發(fā)明的四個人工序列分別為基因序列siRNA-61 為GTATGACAACAGCCTCAAGTTCAAGAGACTTGAGGCTGTTGTCATACTT (SEQ. NO. 1)。基因序列siRNA-70為GCTTCTACTTCAAGTTTAATTTCAAGAGAATTAAACTTGAAGTAGAAGCTT(SEQ. N0. 2)?；蛐蛄衧iRNA-165 為GATGAATCAATTGGAAGAAAATCAAGAGACTTTTACTAGTCATCATGGCTT(SEQ. N0. 3)基因序列siRNA-296 為GCCATGATGAACTAGTAAAAGTTCAAGAGACTTTTACTAGTTCATCATGGCTT(SEQ. N0. 4)。相關(guān)的實驗表明，本發(fā)明的序列siRNA-61、siRNA-70、siRNA-165和siRNA-296均可以抑制羊痘病毒0RF095基因的表達。相關(guān)的實驗提示本發(fā)明的序列siRNA-61、siRNA-70、siRNA-165和siRNA-296可在制備抗羊痘病毒的疫苗中的應(yīng)用，也可在制備抗羊痘病毒的藥物中的應(yīng)用。
更進一步，本發(fā)明的序列siRNA-61、siRNA-70、siRNA-165 和 siRNA-296 可在培育具有抗羊痘病毒的羊品種中應(yīng)用。例如敲除相關(guān)的基因以培育對羊痘病毒具有自然抵抗能力的羊的新品種。


圖1為載體pEGFP-Nl轉(zhuǎn)染細胞48小時后的表達情況的熒光顯微照片，由圖可見， 通過熒光顯微鏡觀察到綠色熒光蛋白表達量很高。圖2為載體pEGFP-Nl轉(zhuǎn)染細胞48小時后流式細胞儀檢測圖，由圖可見綠色熒光蛋白的表達陽性細胞為35. 56%。圖3為轉(zhuǎn)染在熒光顯微鏡采用綠色熒光暗場下的表達情況，此圖可看出 PEGFP-0RF095在BHK-21細胞中得到了表達，并且通過熒光顯微鏡觀察到0RF095與綠色熒光蛋白融合表達較高。圖4為pEGFP-0RF095轉(zhuǎn)染到細胞48小時后流式細胞儀檢測圖，有圖可見綠色熒光蛋白的表達陽性細胞為14. 78%。圖5為共轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095和對照siRNA_C到細胞48小時后的表達情況熒光顯微鏡檢測圖。其中左圖通過熒光顯微鏡觀察到0RF095與綠色熒光蛋白融合表達量比轉(zhuǎn)染了 siRNA-61，siRNA-70, siRNA-165 和 siRNA-296 組多。 圖6共轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095和對照siRNA_C到細胞48小時后流式細胞儀檢測檢測圖，由圖可見綠色熒光蛋白的表達陽性細胞為14. 65%，表達綠色熒光蛋白的細胞陽性細胞率與圖4相當。圖7共轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095和siRNA-61到細胞48小時后的表達情況熒光顯微鏡檢測圖。通過熒光顯微鏡觀察到0RF095與綠色熒光蛋白融合表達量明顯比沒有轉(zhuǎn)染 siRNA-61組而僅轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095組少。圖8為共轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095和siRNA-61到細胞48小時后的表達情況流式細胞儀檢測圖，右圖可見流式細胞儀檢測到綠色熒光蛋白的表達陽性細胞為1.34%，與siRNA 對照組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-61組的0RF095與綠色熒光蛋白融合表達量下降了 90. 9%。圖9為共轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095和siRNA-70到細胞48小時后的表達情況熒光顯微鏡檢測圖。由圖可見通過熒光顯微鏡觀察到0RF095與綠色熒光蛋白融合表達量遠比僅轉(zhuǎn)染 PEGFP-0RF095 組少。圖10為共轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095和siRNA-70到細胞48小時后的表達情況流式細胞儀檢測圖。由圖可見流式細胞儀檢測到綠色熒光蛋白的表達陽性細胞為0.49%。與siRNA 對照組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-70組的0RF095與綠色熒光蛋白融合表達量下降了 96. 7%。圖11為共轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095和siRNA-165到細胞48小時后的表達情況熒光顯微鏡檢測圖。其中左圖通過熒光顯微鏡觀察到0RF095與綠色熒光蛋白融合表達量遠比沒有 siRNA-165 而僅轉(zhuǎn)染 pEGFP_0RF095 組少。圖12為共轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095和siRNA-165到細胞48小時后的表達情況流式細胞儀檢測圖。由圖可見，流式細胞儀檢測到綠色熒光蛋白的表達陽性細胞為5. 02%。與siRNA 對照組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-165組的0RF095與綠色熒光蛋白融合表達量下降了 66. 0%。圖13為共轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095和siRNA-296到細胞48小時后的表達情況熒光顯微鏡檢測圖。其中左圖通過熒光顯微鏡觀察到0RF095與綠色熒光蛋白融合表達量遠比沒有 siRNA-296 而僅轉(zhuǎn)染 pEGFP_0RF095 組少。圖14為共轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095和siRNA_296到細胞48小時后的表達情況流式細胞儀檢測圖。右圖可見，流式細胞儀檢測到綠色熒光蛋白的表達陽性細胞為4. M%。與siRNA 對照組相比，轉(zhuǎn)染siRNA-296組的0RF095與綠色熒光蛋白融合表達量下降了 69. 32%。圖15為未轉(zhuǎn)染的細胞48小時后的表達情況熒光顯微鏡檢測圖。由圖可見，通過熒光顯微鏡觀察沒有熒光。圖16為未轉(zhuǎn)染的細胞48小時后的表達情況熒光顯微鏡檢測圖，由圖可見，流式細胞儀檢測到綠色熒光蛋白的表達陽性細胞為0. 09%，小于1 %，說明陰性對照成立。圖17為反轉(zhuǎn)錄PCR檢測SiRNA對0RF095基因RNA水平的抑制情況。其中上圖和下圖分別為回收細胞提取RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后以0RF095為模板和以細胞骨架基因β -actin為內(nèi)參基因模板跑PCR的后電泳鑒定圖。其中M為核酸分子質(zhì)量標準DL2000，1為轉(zhuǎn)染pEGFP-Nl 組，無0RF095被擴增；2為僅轉(zhuǎn)染pEGFP-0RF095組，擴增出的條帶最亮；3為siRNA_61抑制pEGFP-0RF095組，相對于對照組可見該組條帶較暗，說明siRNA_61對0RF095具有一定的抑制作用；4為siRNA-70抑制pEGFP-0RF095組，相對于對照組可見該組條帶最暗，說明 siRNA-70對0RF095具有較強的抑制作用；5為siRNA_165抑制pEGFP_0RF095組，相對于對照組可見該組條帶較暗，說明siRNA-165對0RF095具有一定的抑制作用；6為siRNA-296抑制pEGFP-0RF095組，相對于對照組可見該組條帶較暗，說明siRNA-296對0RF095具有一定的抑制作用-J為對照siRNA抑制pEGFP-0RF095組，相對于對照組可見該組條帶變化不明顯，說明對照siRNA對0RF095沒有抑制作用；8為未轉(zhuǎn)染組，改組DNA為模板沒有擴增出目的條帶。圖18為GTPV感染Vero細胞后細胞發(fā)生的病變效應(yīng)。顯微鏡觀察可看到，Vero細胞出現(xiàn)了纖維化，而且貼壁培養(yǎng)的時候也表現(xiàn)單層生長。GTPV的感染使Vero細胞產(chǎn)生了非常明顯的細胞病變，細胞變圓并從細胞培養(yǎng)板上脫落裂解。圖19為轉(zhuǎn)染表達siRNA-61的質(zhì)粒pGPTO/GFP-0RF095_61后，接種山羊痘病毒的細胞病變效應(yīng)。顯微鏡觀察可見，山羊痘病毒的感染使Vero細胞產(chǎn)生了明顯的細胞病變， Vero細胞也出現(xiàn)了纖維化，細胞變圓并從細胞培養(yǎng)板上脫落裂解，但是細胞病變效應(yīng)比僅
接種山羊痘病毒組要輕一些。圖20為轉(zhuǎn)染表達siRNA-70的質(zhì)粒pGPTO/GFP-0RF095_70后，接種山羊痘病毒的細胞病變效應(yīng)。顯微鏡觀察可見，山羊痘病毒的感染使Vero細胞產(chǎn)生了少量的細胞病變， Vero細胞也出現(xiàn)了纖維化，細胞變圓并從細胞培養(yǎng)板上脫落裂解，但是細胞病變效應(yīng)比僅接種山羊痘病毒組要輕很多。圖21為轉(zhuǎn)染表達siRNA-165的質(zhì)粒pGPTO/GFP_0RF095_165后，接種山羊痘病毒的細胞病變效應(yīng)。顯微鏡觀察可見，山羊痘病毒的感染使Vero細胞產(chǎn)生了明顯的細胞病變，Vero細胞也出現(xiàn)了纖維化，細胞變圓并從細胞培養(yǎng)板上脫落裂解，但是細胞病變效應(yīng)比僅接種山羊痘病毒組要輕一些。圖22為轉(zhuǎn)染表達siRNA-296的質(zhì)粒pGPTO/GFP_0RF095_296后，接種山羊痘病毒的細胞病變效應(yīng)。顯微鏡觀察可見，山羊痘病毒的感染使Vero細胞產(chǎn)生了明顯的細胞病變，Vero細胞也出現(xiàn)了纖維化，細胞變圓并從細胞培養(yǎng)板上脫落裂解，但是細胞病變效應(yīng)比
5僅接種山羊痘病毒組也輕一些。圖23為轉(zhuǎn)染表達對照siRNA的質(zhì)粒pGPTO/GFP-0RF095_C后，接種山羊痘病毒的細胞病變效應(yīng)。顯微鏡觀察可見，山羊痘病毒的感染使Vero細胞產(chǎn)生了非常明顯的細胞病變，Vero細胞也出現(xiàn)了嚴重的纖維化，細胞變圓并從細胞培養(yǎng)板上脫落裂解，但是細胞病變效應(yīng)比僅接種山羊痘病毒組相比差不多。圖M為未接種山羊痘病毒的細胞。顯微鏡觀察可見Vero細胞沒有產(chǎn)生了細胞病變，也沒有出現(xiàn)了纖維化只是形成了復(fù)層生長。圖25為了證實所觀察到的抑制效應(yīng)，在病毒感染后的不同時間點采集了細胞培養(yǎng)液，并測定病毒毒檢測結(jié)果。其中1為為轉(zhuǎn)染表達對照siRNA的質(zhì)粒pGPTO/GFP-0RF095-C 后山羊痘病毒感染Vero細胞后病毒滴度達到131825. 7 ;2為轉(zhuǎn)染表達siRNA-61的質(zhì)粒pGPTO/GFP-0RF095-61后，接種山羊痘病毒72小時后的病毒滴度，與對照組相比，細胞的病毒滴度降低了 23. 4倍；3為轉(zhuǎn)染表達siRNA-70的質(zhì)粒pGPTO/GFP-0RF095_70后， 接種山羊痘病毒比僅接種山羊痘病毒的細胞的病毒滴度降低了 471. 3倍；3為轉(zhuǎn)染表達 siRNA-165的質(zhì)粒pGPTO/GFP-0RF095-165后，接種山羊痘病毒72小時后的病毒滴度，比僅接種山羊痘病毒的細胞的病毒滴度降低了 1. 9倍；4為轉(zhuǎn)染表達siRNA-296的質(zhì)粒pGPTO/ GFP-0RF095-296后，接種山羊痘病毒比僅接種山羊痘病毒的細胞的病毒滴度降低了 3.8 倍。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明進行詳細解說.1.序列的制備本發(fā)明設(shè)計的四個序列分別為siRNA-61的基因序列為SEQ. NO. 1 ；siRNA-70的基因序列為SEQ. NO. 2 ；siRNA-165的基因序列為SEQ. NO. 3 ；siRNA-296的基因序列為SEQ. NO. 4。將設(shè)計好的序列發(fā)送至上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司進行5’端修飾合成。2. pEGFP-0RF095表達載體的構(gòu)建使用TaKaRa公司DNA提取試劑盒從細胞毒株中提取DNA，以提取純化的病毒DNA 為模板進行擴增，PCR 反應(yīng)體系為=IOXPCR Buffer (含 Mg2+)5yL，dNTPs 4 μ L, Ilfel U L, 引物F、P各lyL，rTaq酶0. 5yL，補超純水至50yL。反應(yīng)條件為95°C 5min ； 94 °C 30s， 55°C 30s,72°C 30s，30個循環(huán)；72°C IOmin0經(jīng)反應(yīng)獲得的目的基因用膠回收試劑盒回收后，直接連入PM D18-T simple載體并轉(zhuǎn)化Dffia大腸桿菌。經(jīng)藍白斑篩選挑選白斑，小量制備質(zhì)粒，以Biol和BamHI酶切和PCR方法鑒定陽性克隆并送大連寶生物公司測序。用 Biol、BamHI對陽性pMD18-T simple質(zhì)粒進行雙酶切，回收目的片段。用T4DNA連接酶連接到經(jīng))(h0l、BamHI雙酶切、純化、回收的pEGFP-Nl大片段上并轉(zhuǎn)化入Dffia大腸桿菌中，涂布于含有50 μ L/mL卡那霉素的LB培養(yǎng)基平板，置于37°C培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)，經(jīng)藍白斑篩選挑選白斑，小量制備質(zhì)粒，以Biol和BamHI酶切和測序方法鑒定所構(gòu)建表達質(zhì)粒pEGFP_0RF095 序列完全正確且讀碼框無錯誤。3. pEGFP-0RF095 和 4 個 siRNA 分別共轉(zhuǎn)染 BHK21 細胞將鑒定好的pEGFP-0RF095菌落轉(zhuǎn)入IOOml大瓶培養(yǎng)，進行中量質(zhì)粒提取(按說明
6操作)，再次經(jīng)酶切消化鑒定后測OD值，計算出濃度，備轉(zhuǎn)染用。按常規(guī)方法，將細胞以每孔0. 5 X IO5個接種于M孔板，待單層細胞生長至80 % 90% 后，每孔按優(yōu)化好的質(zhì)粒 DNA FuGENE HD Transfection Regent = 0. 8 μ g 3μ 1 的比例進行轉(zhuǎn)染，設(shè)未轉(zhuǎn)染的細胞為空白對照。轉(zhuǎn)染的細胞分別培養(yǎng)對、48和7 后，在熒光顯微鏡下直接檢測EGFP的表達。4.不同方法檢測4個siRNA對0RF095的干擾效果 4. 1熒光顯微鏡初步觀察4個siRNA對0RF095的抑制效果Olympus熒光倒置顯微鏡觀察熒光表達情況。并隨機選擇視野拍照。結(jié)果可見圖 1，3，5，7，9，11，13，15。由圖1，3，5，7，9，11，13，15 (已修改)看出，跟對照相比，共轉(zhuǎn)染4個 siRNA和pEGFP-0RF095的組熒光均明顯少于對照組。說明4個siRNA能夠抑制0RF095的表達。4. 2流式細胞儀檢測干擾效果將轉(zhuǎn)染后48h的細胞棄培養(yǎng)液，PBS液沖洗，用0. 25 %胰酶消化收集細胞，4°C 4000rpm離心5min，棄上清，加入PBS液，用吸管反復(fù)吹打混勻細胞，室溫置30min。流式細胞儀檢測綠色熒光蛋白強度，由軟件分析出細胞熒光陽性率。未做任何轉(zhuǎn)染的細胞作為對照。結(jié)果見圖 2，4，6，8，10，12，14，16。4. 3RT-PCR檢測干擾效果將共轉(zhuǎn)染后48h的細胞提取總RNA反轉(zhuǎn)錄，半定量PCR檢測0RF095蛋白mRNA水平，并以β-actin基因作為內(nèi)參。PCR產(chǎn)物分別取等量經(jīng)IOg 的瓊脂糖凝膠電泳分離。 并在Labworks分析系統(tǒng)上進行圖象處理及灰度分析。結(jié)果見圖17，與陰性對照組相比，4 個siRNA對0RF095蛋白均有一定抑制作用。5表達siRNA的質(zhì)粒構(gòu)建采用上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司的短發(fā)卡RNA質(zhì)粒載體pGPTO/GFP/Neo為骨架， 設(shè)計出能夠表達出 siRNA-61，siRNA-70，siRNA-165 和 siRNA-296 的 pGPU6/GFP-0RF095_61， PGPU6/GFP-0RF095-70, pGPU6/GFP-0RF095_165， pGPU6/GFP-0RF095-296 和對照 pGPU6/ GFP-0RF095-C,經(jīng)電泳和測序鑒定正確。6 表達靶向 0RF095 的 siRNA-61、siRNA-70、siRNA-lsiRNA-65 和 siRNA-296 質(zhì)粒載體體外抑制山羊痘病毒在培養(yǎng)過程中，于不同時間點通過倒置顯微鏡觀察細胞的抗病毒感染能力，在病毒感染之后的不同時間點對細胞培養(yǎng)液采樣，并測定病毒效價。山羊痘病毒毒株毒價測定前，須在Vero細胞上傳代培養(yǎng)3 5代，使得病毒適應(yīng)特定的細胞株。病毒毒價測定操作程序如下(1)將Vero細胞在96孔板上進行培養(yǎng)長滿孔底。(2)用不含血清和不含抗生素DMEM培養(yǎng)液對原始病毒進行十倍系列稀釋。(3)棄掉培養(yǎng)液，每孔加IyL某一稀釋度的病毒液，一個稀釋度3個重復(fù)孔。加好培養(yǎng)液后，將細胞置于37°C、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。(4)培養(yǎng)120小時后，倒置顯微鏡下觀察并記錄每個稀釋度細胞出現(xiàn)CPE的細胞孔數(shù)，采用Reed-Muenoh公式，計算得出病毒的半數(shù)細胞感染劑量(TCID5tl)。由于山羊痘病毒感染周期較長，故選擇在預(yù)先感染山羊痘病毒之后，再轉(zhuǎn)化pGPU6/GFP-shRNA質(zhì)粒。應(yīng)用病毒感染前M小時將細胞置于12孔板。加入ImL適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基孵育過夜。在轉(zhuǎn)染當天細胞應(yīng)該達到約50%密度。轉(zhuǎn)染GTPV方法同前，36小時之后，按常規(guī)方法，待單層細胞生長至80% 90%后，每孔按優(yōu)化好的質(zhì)粒DNA FuGENE HD Transfection Regent = 0. 8 μ g 3 μ L的比例進行轉(zhuǎn)染，設(shè)未轉(zhuǎn)染的細胞為空白對照。6 小時之后，棄去培養(yǎng)基，加入3% FBS的DMEM，于37°C 5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育細胞。在培養(yǎng)過程中，在不同時間點于倒置顯微鏡下觀察細胞的抗病毒感染情況，在病毒感染之后的不同時間點對細胞培養(yǎng)液取樣，測定病毒的毒價。同樣，我們將pGPTO/GFP-0RF095-61，70，165和296對Vero細胞進行了瞬時轉(zhuǎn)染，并在轉(zhuǎn)染之后36小時按常規(guī)方法接種山羊痘病毒，之后在顯微鏡下觀察細胞病變， 結(jié)果見圖 17，18，19，20，21，22，23，24，即與對照組 pGPU6/GFP-0RF095_C 相比，pGPU6/ GFP-0RF095-61，70，165和296轉(zhuǎn)染組細胞病變均減弱；再在不同時間點取培養(yǎng)液進行病毒毒價檢測，結(jié)果見圖25，發(fā)現(xiàn)與對照組pGPU6/GFP-0RF095-C相比，pGPU6/GFP-0RF095_61， 70，165和296轉(zhuǎn)染組的山羊痘病毒滴度均下降。通過上述方法，可證明本發(fā)明所設(shè)計合成的4個SiRNA序列siRNA_61， siRNA-70siRNA-165和siRNA_296對0RF095蛋白具有明顯的抑制作用，并且對山羊痘病毒具有一定的抑制作用。
權(quán)利要求
1.一個靶向抑制羊痘病毒0RF095基因的序列siRNA-61，其特征在于siRNA_61的基因序列為SEQ. NO. 1。
2.一個靶向抑制羊痘病毒0RF095基因的序列siRNA-70，其特征在于siRNA_70的基因序列 SEQ. NO. 2。
3.一個靶向抑制羊痘病毒0RF095基因的序列siRNA-165，其特征在于siRNA_165的基因序列SEQ. NO. 3。
4.一個靶向抑制羊痘病毒0RF095基因的序列siRNA496，其特征在于siRNA_296的基因序列為:SEQ. NO. 4。
5.權(quán)利要求1或2或3或4所述的靶向抑制羊痘病毒0RF095基因的序列在制備抗羊痘病毒的疫苗中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1或2或3或4所述的靶向抑制羊痘病毒0RF095基因的序列在制備抗羊痘病毒的藥物中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1或2或3或4所述的靶向抑制羊痘病毒0RF095基因的序列在培育具有抗羊痘病毒的羊品種中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開四個靶向抑制羊痘病毒ORF095基因的siRNA序列，以及這個序列的用途。本發(fā)明的四個靶向抑制羊痘病毒ORF095基因的序列分別是基因序列為SEQ.NO.1的siRNA-61，基因序列為SEQ.NO.2的siRNA-70，基因序列為SEQ.NO.3的siRNA-165，基因序列為SEQ.NO.4的siRNA-296。本發(fā)明公開的四個靶向抑制羊痘病毒ORF095基因的siRNA序列可在制備抗羊痘病毒的疫苗中的應(yīng)用，也可在制備抗羊痘病毒的藥物中的應(yīng)用，或者在在培育具有抗羊痘病毒的羊品種中的應(yīng)用。
文檔編號C12N15/85GK102417907SQ201110327949
公開日2012年4月18日 申請日期2011年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月26日
發(fā)明者吳國華, 崔立凡, 張強, 才學(xué)鵬, 朱海霞, 李健, 趙志荀, 顏新敏, 高順平 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所